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Introduccin a la Ing. Biotecnolgica

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PRACTICA N9
ACTIVIDAD PROTEOLTICA DE EXTRACTOS
ENZIMTICOS DE ORIGEN VEGETAL

1. PROCEDIMIENTO DETALLADO.
Se extrajeron 5 gotitas de Papana protena propia de la papaya, 5 gotitas de
Bromelina protena propia del fruto de la Pia y 5 gotitas de Ficina protena
propia de la cascar de higo verde y tambin se extrajeron 5 gotitas de agua
destilada, las cuales fueron puestas en 4 tubos respectivamente rotulados.

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Figura 2: Muestras
debidamente rotuladas en
tubo I (Papaina), Tubo II
(Bromelina), Tubo III
(Ficina), Tubo IV (agua

Despus preparamos 50 ml de gelatina, y para saber la cantidad en gramos

de gelatina que necesitaremos aplicamos la siguiente relacin:

160g 1500ml
Xg 50ml

(50 ml)(160 g)
X=
1500 ml

X =5,33 gramos de Gelatina para 50 ml de agua

Se mezclaron 5,33 g de Gelatina con 50ml de

Agua (25ml de agua hirviendo + 25ml de agua fra).Y de esta muestra se
pusieron 5ml en cada uno de nuestros tubos I II III IV. Los cuales seran
sometidos a bao de hielo, y llevados posteriormente a la congeladora,
esperar hasta que el tubo IV gelifique.

Figura 3: Obtencin de la
gelatina

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Figura 4: Tubos I II III IV en

bao mara de hielo.

Una vez gelificado el tubo IV, se sacaron de la congeladora y se comprobaron

las actividades proteolticas de las muestras.

ACTIVIDAD % DE
Figura 5: Tubo
MUESTRA PROTEOLTICA
Figura 6: Tubo GELIFICACIN
I, II, III que no
IV
gelificaron debido a las gotas de
completament
2. RESU
Papana , Bromelina y Ficina,
e gelificado
3 PAPANA +++
preparadas +
en la Fig.1 LTAD
OS:
--------------------
2 BROMELINA ++++
--

FICINA --------------------
1 (LTEX)
++++
---

FICINA
4 ++ +++
Gua de Prcticas (FRUTO)
-------------------
5 BLANCO
---
+++
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3. CONCLUSIONES:

La actividad proteoltica de la Ficina (Ltex) es muy fuerte,

ya que degrado casi por completo el colgeno (que est
presente en la gelatina) tanto as que nuestra muestra no
gelifico para nada y hasta se puso media turbia.
Despus le sigue la Bromelina, la cual tampoco hizo
gelificar la gelatina, le sigue la Papana y por ltimo la
Ficina, pero la del fruto que casi gelifico normal, por lo que
podemos decir que su actividad proteoltica es muy baja en
comparacin a las dems.

4. CUESTIONARIO
a. Qu son las proteasas? y Cmo se clasifican?
Son enzimas que rompen los enlaces peptdicos de las
protenas. Usan una molcula de agua para hacerlo y por lo
tanto se clasifican como hidrolasas.
Se encuentra naturalmente en organismos vivos, donde se
usan para la digestin molecular y la reduccin de protenas no
deseadas. Las peptidasas pueden romper ya sea enlaces
peptdicos especficos (Protelisis limitada), dependiendo en la
secuencia de aminocidos de la protena, o pueden reducir un
pptido completo a aminocidos. (Protelisis ilimitada)

La funcin de las peptidasas es inhibida por enzimas inhibidoras de

proteasas. Los inhibidores de proteasas naturales no se deben confundir

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con los inhibidores de proteasas usados en la terapia anti-retroviral.
Algunos virus, incluyendo al VIH, dependen de las proteasas en sus ciclos
reproductivos, es por eso que los inhibidores de proteasas se desarrollan
como mtodos antivirales. Como las peptidasas son en s mismas pptidos,
es natural preguntarse si las peptidasas se pueden degradar. Es un hecho
conocido que muchas peptidasas se desdoblan a s mismas. Esto puede ser
un mtodo importante de regulacin de la actividad de las peptidasas.

Figura 7: Las proteasas facilitan

la liberacin de pptidos en la
digestin proteica.

CLASIFICACIN

Las peptidasas -segn la base de datos MEROPS - se clasifican de acuerdo

a las similitudes de su estructura tridimensional. Estas incluyen los Clan
que contienen todas las peptidasas que se han originado de un mismo
ancestro comn de peptidasas. Si la estructura tridimensional no est
disponible, la clasificacin se hace basndose en el orden de los residuos
catalticos de la cadena peptdica y las secuencias que los flanquean.

Serin peptidasas

Treonin peptidasas

Cistein peptidasas

Aspartil peptidasas

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Metalopeptidasas

Glutamil peptidasas

Mixtas con un tipo cataltico (Serin, Cistein, Treonin)

b. Cules son los parmetros ideales para la actividad

cataltica de las proteasas vegetales?

La diversidad de protenas involucradas en procesos de

crecimiento, desarrollo y
defensa impide la formulacin de un procedimiento de extraccin
universal que permita recuperar todas las protenas de un tejido
vegetal. Sin embargo, la solubilidad de las protenas de plantas,
que est relacionada con la localizacin intracelular, permite
formular diferentes mtodos de extraccin.
Ellos incluyen: 1) extraccin con buffer acuoso, 2) extraccin con
detergentes, 3) precipitacin directa con TCA, 4) precipitacin con
acetona y 5) precipitacin con TCA-acetona (Michaud & Asselin,
1995). Para prevenir la protelisis durante la extraccin se debe
utilizar alguno/s de los procedimientos siguientes: 1) extraer con
buffer que contenga SDS (sodio dodecil sulfato), 2) extraer con
TCA fro al 10 % (p/v), 3) adicionar un cctel de inhibidores de
peptidasas al buffer de extraccin,4) trabajar a baja temperatura
durante perodos cortos
de tiempo, 5) usar buffers de pH por encima o por debajo del
ptimo, 6) adicionar agentes protectores como dimetil sulfxido
(10 %, v/v) o glicerol (25 % v/v) o agentes reductores .

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c. Realiza un comentario sobre las aplicaciones de las

proteasas en la Biotecnologa.

Lnea de Proteasas de tipo serino e inhibidores con aplicaciones

potenciales en la Biomedicina y Biotecnologa .Esta lnea se centra
en la caracterizacin estructural y funcional de proteasas serino y
sus inhibidores, principalmente aislados de organismos marinos,
estudios de la relacin estructura-funcin de las proteasas serino
con sus inhibidores, as como su evaluacin funcional en
diferentes modelos in vitro, de acuerdo a sus potencialidades para
la Biomedicina y/o Biotecnologa.

5. BIBLIOGRAFA

REFERENCIAS ELECTRNICAS

https://es.wikipedia.org/wiki/Peptidasa

http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/2211/2_Pept
idasas_vegetales.pdf?sequence=4

http://fbio.uh.cu/cep/es/ginvest_inhibidores.php

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