1. Apa yang dimaksud Aviditi ?

2. Bagaimana pemeriksaan Toxo pada PCR beserta gambarnya?

3. Ceritakan tentang alur pemeriksaan serologi pada toxo !

1. Aviditas (avidity) adalah istilah yang digunakan untuk menggambarkan kekuatan gabungan
dari interaksi ikatan ganda (sebagai kontras dari afinitas, yang menggambarkan kekuatan
ikatan tunggal). Aviditas menggambarkan interaksi antigen-antibodi, di mana ikatan lemah
terbentuk antara antigen dan antibodi. Secara individua mungkin lemah, tetapi ketika hadir pada
saat yang sama, efek keseluruhan mengikat kuat antara antigen dan antibodi. Dalam
biokimia, aviditas mengacu pada akumulasi kekuatan beberapa afinitas individu non-
kovalen interaksi mengikat, seperti antara reseptor protein dan ligan nya (Ligan adalah molekul
sederhana yang dalam senyawa kompleks bertindak sebagai donor
pasangan elektron (basa Lewis). ligan akan memberikan pasangan elektronnya kepada
atom pusat yang menyediakan orbital kosong. interaksi antara ligan dan atom pusat
menghasilkan ikatan koordinasi. jenis-jenis ligan ialah monodentat, bidentat
dan polidentat), dan sering disebut afinitas sebagai fungsional. Dengan demikian, aviditas
berbeda dari afinitas , yang menggambarkan kekuatan interaksi tunggal. Namun, karena peristiwa
mengikat individu meningkatkan kemungkinan interaksi lainnya terjadi (yaitu meningkatkan
konsentrasi lokal dari masing-masing pasangan mengikat dalam dekat dengan situs
mengikat), aviditas tidak harus dianggap sebagai jumlah belaka afinitas penyusunnya tetapi
sebagai gabungan pengaruh dari seluruh afinitas berpartisipasi dalam interaksi
biomolekuler. Sebuah aspek penting tertentu berkaitan dengan fenomena 'aviditas
entropi'. Biomolekul sering membentuk kompleks heterogen atau homogen oligomer dan
multimers atau polimer . Jika protein berkerumun membentuk matriks terorganisir,
seperti clathrin -coat, interaksinya digambarkan sebagai matricity .

Antigen-antibodi interaksi

Aviditas umumnya diterapkan untuk antibodi interaksi di mana beberapa situs antigen mengikat
secara bersamaan berinteraksi dengan target antigen epitop , sering dalam struktur
multimerized. Individual, setiap interaksi mengikat dapat dengan mudah rusak; Namun, ketika
banyak interaksi mengikat yang hadir pada saat yang sama, tidak mengikat transien satu situs
tidak memungkinkan molekul untuk meredakan diri, dan mengikat dari interaksi lemah
kemungkinan akan dipulihkan.

Setiap antibodi memiliki setidaknya dua situs antigen mengikat, karena antibodi yang bivalen
untuk multivalen. Aviditas (afinitas fungsional) adalah kekuatan akumulasi dari beberapa
afinitas. Sebagai contoh IgM dikatakan memiliki afinitas rendah tetapi aviditas tinggi karena
memiliki 10 situs mengikat lemah untuk antigen yang bertentangan dengan 2 kuat situs
mengikat IgG , IgE dan IgD dengan afinitas mengikat tunggal yang lebih tinggi.

Aviditas juga didefinisikan sebagai kekuatan agregat dengan yang campuran molekul IgG
poliklonal mengikat beberapa epitop antigenik protein Secara bertahap matang selama beberapa
bulan, reflektif seleksi antigen-driven sel B memproduksi IgG meningkatkan afinitas. IgG antibodi
yang dihasilkan selama beberapa bulan pertama setelah infeksi primer menunjukkan aviditas
rendah (yaitu, mereka mengikat lemah untuk antigen), sedangkan antibodi yang diproduksi oleh 6
bulan postinfection menunjukkan aviditas tinggi (yaitu, mereka mengikat erat dengan antigen).
Metodologi dasar yang digunakan untuk mengukur aviditas mengkapitalisasi pada mengikat
lemah penerbangan murah aviditas IgG untuk campuran antigen CMV (biasanya virus
lisat). Antigen-terikat rendah aviditas IgG, tapi tidak tinggi-aviditas IgG, memisahkan dari antigen
di hadapan denaturan protein ringan, seperti urea, potasium tiosianat, dan guanidin
klorida. Format tes yang paling umum adalah immunosorbent assay enzim-linked (ELISA)
memanfaatkan urea sebagai agen memisahkan. serum diencerkan pasien ditambahkan ke dua
sumur mikrotiter dilapisi dengan antigen CMV; setelah inkubasi, satu sumur dicuci dengan
mencuci penyangga biasa, sedangkan sumur lainnya dicuci dengan mencuci buffer yang
mengandung urea. ELISA kemudian selesai per prosedur rutin, dan kepadatan optik (OD) nilai
setiap baik diukur. Hasil dinyatakan sebagai indeks aviditas (AI), dihitung dengan rumus AI = (OD
dari urea-dicuci bersih / OD dari sumur dicuci dengan penyangga biasa) 100, dinyatakan
sebagai persentase. Kriteria penafsiran untuk nilai AI harus ditetapkan untuk setiap assay. AI titik
cutoff untuk mendefinisikan aviditas rendah biasanya 35% sampai 50%, sedangkan AI titik cutoff
untuk mendefinisikan aviditas tinggi biasanya 50% sampai 65%. Misalnya, dalam uji yang
digunakan di laboratorium kami, aviditas rendah didefinisikan sebagai nilai AI dari 50% dan
aviditas tinggi sebagai nilai AI dari 60%; nilai AI dari 51% sampai 59% dianggap aviditas
menengah.

Contoh :

CMV IgG pengujian aviditas efektif membedakan infeksi CMV primer dari masa CMV infeksi /
reaktivasi.

Semua 5 laboratorium menemukan bahwa rata-rata AI untuk kelompok utama infeksi secara
signifikan lebih rendah daripada rata-rata AI untuk masa-infeksi dan reaktivasi kelompok
tertentu. Mereka laboratorium mendefinisikan rendah atau tinggi aviditas atas dasar nilai AI
menemukan bahwa> 85% pasien dengan infeksi primer dipamerkan aviditas IgG yang rendah dan
bahwa> 90% pasien dengan infeksi masa lalu atau reaktivasi dihasilkan aviditas tinggi

2. Reaksi rantai polymerase (PCR) merupakan teknik ilmiah dalam biologi molekuler untuk
memperkuat satu atau beberapa salinan potongan DNA dan dapat menghasilkan ribuan sampai
jutaan salinan urutan DNA tertentu (Bartlett & Stirling 2003). PCR sekarang menjadi teknik umum
dan sering diperlukan dalam laboratorium penelitian medis atau biologi untuk berbagai aplikasi,
termasuk cloning untuk sekuensing DNA, filogeni DNA, analisis fungsional gen, diagnosis dan
deteksi penyakit menular (Saiki RK et al. 1988).

PCR memerlukan beberapa komponen dan reagen (Oseph 2001). Komponen-komponen ini
meliput, DNA template yang berisi wilayah DNA (target), Dua primer (reverse dan forward), Taq
polymerase, Deoxynucleoside trifosfat (dNTP), divalen kation (Mg2 +, Mn2 +) (Pavlov 2004).
Perbanyakan DNA dengan menggunakan PCR meliputi beberapa langkah antara lain, denaturasi
atau inisiasi yang dapat optimum dengan adanya pemanasan (Rychlik 1990), anneling atau
penempelan primer, dan proses pemanjangan rantai nukleotida. Perlakuan panas pada proses
denaturasi menyebabkan ikatan hidrogen yang membentuk struktur untai ganda mengalami
kerusakan dan berubah menjadi molekul untai tunggal.
Manifestasi Pemeriksaan Serologis
Penapisan dan diagnosis toksoplasmosis pada ibu hamil umumnya memakai
pemeriksaan serologis. WHO masih menganjurkan Sabin-Feldman dye test sebagai
standar emas pemeriksaan, namun hanya sedikit laboratorium yang menyediakan
fasilitas ini. Saat ini banyak alternatif lain yang menggunakan sampel serum, antara lain
EIA (enzyme immune assay), HA (hemagglutination), IFA (indirect fluorescent antibody
test), dan ISAGA (immunosorbent agglutination assay).5

Tujuan pemeriksaan laboratorium untuk ibu adalah untuk memastikan atau

mengeluarkan risiko infeksi fetus dengan menentukan apakah telah terjadi infeksi pada
ibu hamil dan kapan infeksi tersebut terjadi. Pemeriksaan harus dilakukan pada trimester
pertama. Apabila pemeriksaan laboratorium dapat memastikan tidak ada risiko dalam
kehamilannya yakni memastikan bahwa infeksi telah terjadi jauh sebelum ibu hamil, maka
tidak diperlukan pemeriksaan lanjutan. Bila risiko terhadap fetus ada, maka tindakan
klinik dan pemeriksaan lanjutan harus dilakukan sesuai dengan fasilitas yang ada.

Tabel 1. Strategi pemeriksaan toksoplasmosis pada ibu hamil. 4

Tujuan pemeriksaan Pemeriksaan yang

diperlukan
Bukti ibu terinfeksi IgG assay
Apakah saat ini terinfeksi IgM, IgA assay
Kapan infeksi terjadi (dihubungkan dengan IgG Avidity
kehamilan)

Hasil pemeriksaan serologis dapat menunjukkan tidak adanya infeksi, infeksi akut, atau
subakut dan laten yang dapat diidentifikasi dengan profil serologis toksoplasmosis
(gambar 1). Panduan umum untuk interpretasi hasil pemeriksaan serologis T.gondii tertera
pada tabel 2 .
 Pada praktek sehari-hari, pemeriksaan terhadap toksoplasmosis tidak merupakan
hal yang rutin dilakukan, infeksi sering dicari apabila ibu mengalami keguguran, kematian
janin atau cacat pada janin, setelah itu mereka menduga bahkan menyalahkan
toksoplasmosis sebagai penyebabnya. Pada kasus seperti ini sering didapatkan ibu hamil
dengan IgG positif rendah dan IgM negatif yang pada umumnya menunjukkan ibu telah
terpapar infeksi pada waktu lampau. IgM yang positif dipercaya sebagai marker kejadian
infeksi akut, sementara hasil IgM yang negatif diinterpretasikan sebagai tidak ada infeksi
akut, sehingga dianggap tidak relevan untuk memberi terapi (tabel 2).

lgM
cuto
f
PAPARA Bula

3
Gambar 1. Profil serologis toksoplasmosis primer

Imunoglobulin M (IgM) sebagai petanda infeksi akut, muncul seminggu setelah

individu terinfeksi, naik dengan cepat mencapai puncaknya pada bulan kedua atau ketiga,
dan akan menghilang umumnya kurang dari satu tahun (5-8 bulan; gambar 1, kurva a,b,
dan c)3. Dua minggu setelah munculnya IgM, IgG mulai muncul dan kadarnya terus naik
dalam darah sampai mencapai puncaknya antara bulan ke-5 dan ke-6 dan menurun
perlahan serta menetap dalam tubuh untuk waktu yang lama.

Hasil IgG negatif

- Apabila didapatkan IgG yang negatif dan IgM yang negatif, maka dapat disimpulkan
secara serologis tidak ada bukti infeksi Toksoplasma, ibu hamil diberi penjelasan
untuk tetap menjaga kebersihan dan pengetahuan tentang patofisiologi penyakit
agar tidak terjadi infeksi selama kehamilan.
- Hasil IgG negatif dengan IgM ekuifokal dapat diinterpretasikan sebagai infeksi akut
yang sangat dini atau IgM positif palsu, lakukan pemeriksaan ulangan IgG dan IgM,
bila sama hasilnya kemungkinan tidak ada infeksi.
- Pada IgG negatif dengan IgM positif, harus dipikirkan adanya infeksi akut dini
(sebelum timbul IgG) atau IgM positif palsu. Lakukan pemeriksaan ulang IgG dan
IgM, bila benar infeksi akut, maka keduanya harus menunjukkan peningkatan yang
jelas. Bila hasilnya tetap, kemungkinan hasil IgM-nya positif palsu.
Hasil IgG yang positif

- Bila IgM negatif maka infeksi telah terjadi lebih dari 1 tahun yang lalu.
- Hasil IgM ekuifokal, kemungkinan infeksi sudah lebih dari 1 tahun atau IgM-nya
positif palsu. Ulangi pemeriksaan IgM, bila negatif maka infeksi telah lebih dari satu
tahun yang lalu, bila tetap kemungkinan tidak ada infeksi.
- Bila hasil IgM positif, kemungkinan infeksi sedang berlangsung (kurang dari 1
tahun).

Tabel 2. Interpretasi hasil pemeriksaan serologis toksoplasmosis (laboratorium biasa)

Hasil IgG Hasil IgM Relevansi klinik

Negatif Negatif Belum pernah terinfeksi T.gondii.
Laboratorium serial tiap bulan (setidaknya
trimester 2)
Bila serokonversi, potensial untuk transmisi
infeksi pada janin.

Positif Negatif Pada trimester satu atau ke dua, umumnya

menunjukkan infeksi sudah terjadi sebelum
kehamilan.a

Negatif Positif atau ekuifokal Awal infeksi akut

Atau positif palsu
Ulangi pada lab yang direferensikan (Sabin
Feldman dye test)
Positif Positif atau ekuifokal Infeksi akut atau infeksi kronis, periksa IgG
Avidity

a
Pada trimester III, sulit diinterpretasikan terutama bila status serologis awal kehamilan tidak diketahui, dapat berarti infeksi terjadi
pada awal kehamilan dengan IgM yang tidak terdeteksi. Perlu diulangi.