You are on page 1of 46

Universidad Autnoma del Estado de Morelos

Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

INDICE PAGIN
A
INTRODUCCIN 1

.
PRACTICA 1 3

Recoleccin, manejo y conservacin de la materia fecal (HECES)
para el diagnstico de las parasitosis intestinales
.
PRACTICA 2

Anlisis de la materia fecal : Coproparasitoscpico
.
PRACTICA 3 20

Mtodos de concentracin cualitativos de quistes y huevos de la
materia fecal por flotacin.
.
PRACTICA 4 22

Mtodos de concentracin cualitativos de quistes y huevos por
sedimentacin
.
PRACTICTICA 5 26

Mtodos de concentracin cuantitativos para huevos.
.
PRACTICA 6 29

Tcnicas de tincin permanente para muestras fecales
.
PRACTICA 7 32

Exmenes especiales para el diagnostico de parasitosis del aparata
digestivo
.
PRACTICA 8 37

Diagnostico de parasitosis de la sangre y tejidos

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 1/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

LABORATORIO DE PARASITOLOGIA

INTRODUCCIN

Debido a que el tamao relativamente grande de muchos de los animales


parsitos ms comunes los hace visibles a simple vista, el hombre antiguo conoca sin
duda algo de su estructura y de las enfermedades que podan causar. Los parsitos
tales como Ascaris, Enterobius y Taenias fueron conocidas desde antes de Cristo en
Egipto, Grecia y Roma.

La parasitologa comenz a desarrollarse como ciencia a mediados del siglo XIX;


sin embargo, ya con anterioridad, a mediados del siglo XVII, Redi, que fue llamado el
padre de la parasitologa, escribi el primer texto ilustrado sobre la materia. A finales
del siglo XVIII, Gotz escribi el ms amplio texto sobre parsitos del hombre publicado
hasta ese momento.

En la dcada de 1860 se establecieron claramente los ciclos vitales de muchos


parsitos; habiendo los parasitlogos de la poca rastreado varios parsitos a travs de
sus fases de adulto, huevo y larva para llegar nuevamente a adulto. De esta manera
dejaron a un lado la teora de la generacin espontnea.

Los conocimientos bsicos sobre parasitologa no han avanzado


significativamente en el siglo XX. Los ciclos vitales de virtualmente todas las
enfermedades parasitarias han sido bien establecidas y en la mayora de los pases
desarrollados se han implantado medidas preventivas. Esto no deniega el hecho de
que las enfermedades parasitarias dan cuenta todava de inestimables prdidas de
vidas, morbilidad ampliamente diseminada y en muchos pases retrasan el desarrollo
econmico. Debido a los crecientes viajes y la mayor movilidad de individuos en todo el
mundo, es necesario que el personal de cualquier laboratorio adquiera pericia en el
conocimiento de los diversos parsitos que puedan hallarse en los materiales clnicos.

El diagnostico de las enfermedades parasitarias se apoya en gran parte en los


exmenes macro y microscpicas de heces, orina, sangre, esputo y tejidos. La
implementacin y el conocimiento de tcnicas confiables constituyen un paso muy
importante para este proceso.

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 2/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

PRCTICA 1

RECOLECCIN, MANEJO Y CONSERVACIN DE LA MATERIA FECAL PARA EL


DIAGNOSTICO DE LAS PARASITOSISINTESTINALES

Las muestras fecales se examinan para detectar la presencia de protozoarios y


helmintos. Los protozoarios suelen encontrarse en la fase de trofozoito y de quiste;
mientras que los helmintos aparecen en forma de huevos y de larvas, aunque a veces
tambin pueden observarse gusanos adultos enteros o en segmentos. Mientras los
huevos, los trofozoitos y los quistes solo pueden verse al microscopio, la mayora de los
helmintos larvas y adultos pueden verse a simple vista macroscpicamente.

Las muestras tiles para la bsqueda de parsitos intestinales incluyen:

1. Raspado perianal
2. Materia fecal obtenida por defecacin (heces fecales) o por endoscopia de colon
3. Contenido duodenal obtenido por endoscopia o por cpsula de Beat

La materia fecal, aunque se trata de una muestra cuyo manejo resulta en


ocasiones repulsivo, es la ms fcil de obtener y por lo mismo, la que ms
frecuentemente se usa.

Dado que los medicamentos que contienen aceite mineral, bismuto, antibitico,
antimalricos u otras substancias qumicas que pueden comprometer la deteccin de
protozoarias intestinales, el examen de las muestras debe realizarse despus de una
semana al menos de interrumpir la terapia. As mismo, los pacientes que han recibido
un enema de bario.

RECOLECCIN

La recoleccin de las heces debe realizarse evitando la contaminacin con otros


productos; como la tierra, agua del retrete (taza de bao) u orina; para tal fin, se debe
orientar al paciente o a la persona que est al cuidado del mismo. La muestra de
excremento (o matera fecal) debe depositarse en un recipiente pequeo de 100 mL.
Aproximadamente de vidrio o plstico duro que tenga tapa hermtica y de boca ancha;
la cantidad que debe depositarse es de 1 gramo o el equivalente al tamao de una
nuez o un hueso de durazno. Las muestras debern etiquetarse con los datos del
paciente: nombre, edad, sexo y fecha.

Si el tamao de la muestra no es la adecuada preferible solicitar otra al


paciente.

Se debe indicar al paciente que defeque directamente en el recipiente o que lo


haga en un trozo de papel kraft (aluminio) o Manila y que utilice uno a dos
abatelenguas para introducir la muestra en el recipiente.

En caso de lactantes la muestra no debe recogerse del paal, se recomienda


tomarla con cucharita rectal y se deposita en suero fisiolgico para su anlisis
inmediato.

Las muestras deben llevarse al laboratorio tan pronto como sea posible (por
ejemplo media hora) despus de la defecacin, debido a que al poco tiempo de ser

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 3/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

excretados los quistes y trofozoitos comienzan a alterarse o a


desintegrarse y se vuelven irreconocibles.

Los frascos con la muestra de materia fecal se conservarn durante el trayecto


en un ambiente fresco pues con el calor se acelera la fermentacin orgnica. No debe
permitirse la exposicin al sol ni la refrigeracin.

CONSERVACIN

Si no es posible el envi rpido de las muestras al laboratorio, debern tratarse


con conservadores qumicos, los cuales mantienen las muestras durante un tiempo
mayor sin correr el riesgo de que las formas parasitarias se deformen o se destruyan.
Algunas de las ms usadas son los siguientes:

- Solucin de formol 10 %, est indicada para conservar muestras que


contengan huevos de helmintos para los exmenes de preparaciones
hmedas.
-
- Solucin de formol 5%, se utiliza para muestras que contengan quistes de
protozoarios. Cuando se desea conservar muestras a las que se les
desconoce su contenido parasitario, o se prefiere esta solucin.
-
- PVA: alcohol polivinilico, conserva los trofozoito y los quistes para poder
preparar frotis reidos de modo permanente.
-
- MIF: merthiolate yodo- formalina, se utiliza para conservar muestras que se
deben examinar en fresco.
-
- Para usar los conservadores se mezcla un volumen de heces por tres
volmenes de solucin conservadora. Y se mezclan homogneamente; as,
la muestra puede ser proseada posteriormente, tanto como seis meses,
vigilando que se conserve el nivel de la solucin conservadora. 3
-
-
- MATERIAL Y REACTIVOS:
-
Frascos de vidrio o plstico de 100 ml. (p.ej.: gerber).
Abatelenguas (2)
Formol 5% en un frasco con tapn de rosca: 50 ml.
Etiquetas adhesivas
-
- METODO:
-
- 1) Dar al paciente las indicaciones mencionadas para la
recoleccin de la muestra de excremento.
-
- 2) Depositar con un abatelenguas en el frasco de muestreo la
cantidad adecuada de heces fecales (de una a dos cucharadas o al
equivalente al tamao de una nuez o de un hueso de durazno).
-
- 3) Adicionar el equivalente a tres volmenes de solucin
conservadora para cada volumen de heces.

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 4/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
- 4) Tapar el frasco hermticamente.
-
- 5) Etiquetar con los datos del paciente.
-
- 6) Llevar la muestra al laboratorio.
-
- NOTA:
-
- Para muestras liquidas sospechosas de trofozoitos de Entamoeba
histolytica, se recomienda no usar conservadores, o en su defecto utilizar
el de PVA.
-
- CUESTIONARIO:
-
- 1.-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 5/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- PRACTICA 2
-
- ANANLISIS DE LA MATERIA FECAL:
- COPROPARASITOSCOPICO I
-
-
- El anlisis de las heces fecales consiste bsicamente en realizar varios
exmenes para identificar los agentes parasitarios del intestino, los cuales son:
-
- I.- Examen macroscpico (Prctica 2)
-
- II.- Examen microscpico directo o en fresco (Prctica 2)
-
- III.- Mtodos de concentracin cualitativos para quistes y
- Huevos:
-
a) Flotacin (Prctica 3)
b) sedimentacin (Prctica 4)
-
- IV.- Mtodos de concentracin cuantitativos para huevos
- (Prctica 5)
-
- V.- Mtodos de tincin en permanente (Prctica 6)
-
- Es de gran importancia para el mdico o el parasitlogos conocer el fin
para el que cada uno de los anlisis o tcnicas arriba enlistados se han
implementado; por lo que a continuacin se mencionara en trminos generales la
utilidad de cada uno de ellos:
-
- I. EXAMEN MACROSCIPICO. Es el examen visual de la materia fecal el cual
se debe efectuar siempre ya que es til tanto para informar al mdico de hallazgos
significativos como para orientar al parasiclogo hacia que tcnica o metodologa
dirigir su anlisis; de tal modo, el examen nunca se debe omitir , ya que reportara
los siguientes datos:
-
- a) Permite detectar la presencia de sustancias extraas como varios aceites
u otros materiales inaceptables que bien pueden dificultar su procesamiento o
pueden ser un dato significativo para el mdico o investigador.
-
- b) La observacin de sangre o mucina deber reportarse as como
considerar especialmente estas partes de la materia fecal para el examen
microscpico en fresco con soluciones salinas, ya que tales sustancias pueden
provenir de ulceras o abscesos purulentos, donde la concentracin de Entamoeba
histolytica puede ser mayor.
-
- c) Las muestras lquidas debern remitirse inmediatamente al examen
micro para comprobar la presencia de trofozoitos.
-
- II. EXAMEN MICROSCOPICO O EN FRESCO: Para una optima detencin e
identificacin de parsitos en las heces, estas deben examinarse en fresco
directamente de la muestra de materia fecal sin fijadores qumicos. Este examen
se debe efectuar utilizando preparaciones hmedas de materia fecal sin fijadores
entre porta y cubreobjetos en solucin salina isotnica (suero fisiolgico) y solucin
de lugol. Se recomienda tambin realizar preparaciones con azul de metileno

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 6/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

amortiguado (AMA) y preparaciones con tincin permanente,


especialmente para la identificacin de protozoarios intestinales.
-
- III METODOS DE CONCENTRACION CUALITATIVOS PARA QUISTES Y
HUEVOS: Dado que los quistes y huevos de los parsitos se encuentran
frecuentemente en la materia fecal en tan escaso nmero que son difciles de
detectar en las preparaciones directas, siempre se deben llevar a acabo
procedimientos a fin de concentrar estas estructuras. Generalmente se utilizan dos
tipos de mtodos de concentracin:1) flotacin y 2) sedimentacin. Estos
procedimientos tienen por objeto separar los quistes y huevos de exceso de desechos
fecales. Es conveniente recordar que estos mtodos inactivan las formas mviles
de los protozoarios.
-
- IV. METODO DE CONCENTRACION CUANTITATIVOS PARA HUEVOS: Estos
procedimientos son utilizados para hacer una evolucin de la intensidad de ciertas
hermitiasis como: ascariasis, tricodefaliosis, uncinariasis, himenolepiasis,
estrogiloidosis y es quistosomiasis. Algunos de los mtodos ms usuales son: 1)
mtodo de Stoll, 2) mtodo de Ferreira, 3) mtodo kato y 4) mtodo de kato-katz.
-
- V. METODOS DE TINCION PERMANENTE: Si bien las preparaciones en
fresco para el examen microscpico directo facilitan la rpida deteccin de los
parsitos intestinales presentes en muestra de materia fecal, de Entamoeba
histolytica o de otros protozoarios pueden incrementar considerablemente mediante
preparaciones con tincin permanente; estos son de mejor calidad que las
preparaciones en fresco para observar la morfologa detallada de las formas
parasitarias y son muy tiles para estudios futuros o archivos. Generalmente se
utilizan dos tinciones para tales fines: 1) la tincin tricronica de Gomori y 2) la
tincin de hematoxilina ferrica.
- Otro mtodo de tincin permanente de gran utilidad para la identificacin
de ooquistes de Cryptosporidium sp es la tincin de Kinyoun o Zhiel-
Neelsen modificado.
-
- VI. OTRAS TECNICAS: Se han descrito tcnicas para el examen de
muestras fecales, particularmente tiles para la deteccin de parasitosis por
anquilostomas (Ancylostoma duodenale) Strongiloides y
Trichostrongylus. Estas comprenden las tcnicas de cultivo de papel filtro
de Harada-Mori, el mtodo de cultivo de papel filtro/pico, el mtodo de
Baermann para el cultivo de larvas de Strongyloides y la incubacin de
huevos de Schistosoma spp. Pese a que estas tcnicas se hallan ms all
de las necesidades de la mayora de los laboratorios clnicos, puede haber
ocasiones en las que una o ms de ellas pueden llegar a ser tiles.
-
- IDENTIFICACIN Y DIFERENCIACION DE LOS PARASITOS.
-
- Si bien ciertos signos y sntomas clnicos pueden sugerir una enfermedad
parasitaria, el diagnstico final se realiza demostrando la presencia del
organismo causal en muestras correctamente recogidas. Debido a que
muchos microobjetos (artefactos o pseudoparsitos) pueden semejar formas
parasitarias, la identificacin final debe basarse siempre en criterios
morfolgicos bien establecidos. En especial la interpretacin microscpica
no debe reducirse a un acertijo y el diagnstico de laboratorio de una
enfermedad parasitaria no debe darse a conocer hasta tanto no se hayan
demostrado clara y objetivamente los rasgos de identificacin adecuados;
por lo que es conveniente y de gran utilidad disponer de un listado de la

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 7/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

morfologa (quiste, huevos, adultos), tamaos o dimensiones


tanto microscpicos como macroscpicos y de la localizacin
de las especies parsitas del organismo humano.
-
-
- Al final de esta prctica se proporcionan algunos anexos con las
caractersticas morfolgicas de algunos parsitos; pero nunca est de ms
consultar los textos de parasitologa en tanto no se ha adquirido la habilidad
para su identificacin inmediata. A continuacin se da una lista con la
clasificacin de las especies de parsitos de localizacin intestinal.
-
-
-
PARASITOS PATOGENOS DE LA LOCALIZACION:3
- INTESTINAL
-
-
- A) INTESTINO DELGADO:
-
- PROTOZOARIOS HELMINTOS
- Giardia lamba*
Hymenolepis nana
- Isopora belli Hymenolepis diminuta
- Entericytozoon bieneusi
Taenia solium
- Taenia saginata
- Ancylostoma
- duodelale*
- Necator americanus*
- Ascaris lumbricoides
- Fasciolopsis buski
- Strongiloides
- stercoralis
-
Diphyllobotrium latum
- *solamente localizacin en duodeno
- Capillaria
-
-
-
- B) COLON:
-
- PROTOZOARIOS HELMINTOS
- Entamoeba Enterobius vermicularis
-
histolytica Trichuris trichiura
-
-
Balantidium coli Schitosoma sp
- Cryptosporidium sp Angiostrongylus
- Blastocystis cotraricensis
- hominis
-
- (Ver anexo 1 para la identificacin morfolgica)
-
-
- PROTOZOOS NO PATOGENOS PARA EL INTESTINO DEL
- HOMBRE
-
Movimiento por
Profra. Ma. Leticia Garca Gmez pseudpodos:
Pg. 8/46 Entamoeba coli
Endolimax nana
Iodamoeba btschlii
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- Movimientos de flagelos:
- Chilomastix mesnili
- Retortamonas intestinalis
- Enteronomas hominis
-
-
-
-
-
PSEUDOPARASITOS3
-

-
- En el examen macroscpico de las heces, para la busca de
parsitos intestinales, se debe tener presente la existencia de elementos
tales como clulas epiteliales, moco, residuos no digeridos y otros elementos
que contribuyen normalmente a la formacin de las heces. Algunos de ellos
pueden ser confundidos con estructuras parasitarias, por lo que se les
conoce como pseudoparasitos. Son algunos de los parsitos:
-
a) Macroparasitos
-
- Los restos de vegetales pueden simular ejemplares adultos de helmintos; as
los restos parcialmente digeridos de los ctricos, semejan adultos de
Enterobius vermiculares.
-
b) microscpicos
-
Gotas de grasa y levaduras, pueden confundirse con quistes
de protozoos.
-
Pelos vegetales semejan larvas de nematodos.
-
-
Granos de polen teidos con lugol, deben diferenciarse de
los huevos de Taenia, buscando en estos la presencia de los
ganchos de la oncosfera.
-
Partculas de almidn y/o de celulosa simulan entre otros,
huevos de scaris lumbricoides.
-
-
Los macrfagos y las clulas epiteliales deben diferenciarse
de los trofozoitos de amibas, particularmente de los de
Entamoeba histolytica.
-
-
Los macrfagos y las clulas epiteliales deben diferenciarse
de los trofozoitos de amibas, particularmente de los
Entamoeba histolytica.
-
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 9/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 10/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- -
- I. EXMEN MACROSCOPICO -
DE LAS HECES -
- 1.- Tan pronto como se reciba la -
muestra de excremento en el -
laboratorio, observar su -
consistencia (grado de -
humedad) y anotar una de las -
siguientes letras en el -
Recipiente: F (formada), B -
(blanda), S (suelta) o A (Acuosa). -
- Si se observan mucosidades, -
antese la letra M, y si se
observa sangre escrbase Sa. Por
-
ejemplo, una deposicin suelta -
con sangre y mucosidad se - Formada
escribira con las letras S, Sa, M.
la consistencia o grado de -
humedad servir de orientacin
para saber si ser ms probable
-
encontrar los protozoario en fase -
de trofozoito o de quiste. -
- -
- 2.- Si se reciben varias muestras -
al mismo tiempo, hay que -
examinar primero las que - Blanda
contengan sangre y -
mucosidades y a continuacin -
las muestras liquidas. Estas -
muestras son las que con ms -
probabilidad contienen -
trofozoitos amibianos, que -
mueren al poco tiempo de la -
excrecin, por lo que deben -
examinarse durante la primera -
hora que sigue de esta.
- - Suelta
- 3.- Las heces formadas pueden -
examinarse en cualquier -
momento del primer da, pero no -
deben dejarse de un da para -
otro (los quistes pueden -
desintegrarse. -
- -
- - Suelta o
-
- - Liquid
-
-
a
- -
- -
- -
- -
- -

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 11/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- -

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 12/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
- II. EXAMEN MICROSCOPICO DE LAS HECES:
PREPARACIONES EN FRESCO
-
- Un frotis en fresco debe prepararse directamente a partir de material
fecal o de muestras concentradas. Las principales formas de frotis en fresco
o tambin llamadas preparaciones hmedas que deben usarse en cada
examen fecal son las realizadas con solucin salina, con solucin yodada y
con azul de metileno amortiguado:
-
- La preparacin con solucin salina se usa en el examen microscpico se utiliza
principalmente para teir el glucogno y los ncleos de los quistes. Por lo
general, con esta preparacin pueden identificarse los quistes.
-
- La preparacin con azul de metileno amortiguado (AMA) debe hacerse cada vez
que se observen trofozoitos amibianos en una preparacin salina, o cuando se
sospeche su presencia. El AMA tie los trofozoitos amibianos, pero no sus
quistes; tampoco tie los trofozoitos y quistes de flagelados. La coloracin con
AMA solo debe usarse para las muestras frescas, ya que las muestras tratadas
con conservadores qumicos no albergan organismos mviles.
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
Portaobjetos
Cubreobjetos de 22 x 22
Frascos goteros con:
Solucin salina isotnica (NaCl 0.85%)
Yodo de lugol
Azul de metileno amortiguado
Etiquetas adhesivas o marcador de cera
Aplicadores de madera
-
-
- II.1. PREPARACIONES EN FRESCO:
- SOLUCION SALINA Y SOLUCION YODADA
-
1. Con un lpiz de cera o una etiqueta escribir el nombre o el nmero de la
muestra en la parte izquierda del portaobjetos.
-
2. Colocar en el extremo de un portaobjetos limpio una gota de solucin de cloruro
de sodio 0.85% y en otro extremo una gota de lugol.
-
3. Con un aplicador tomar una pequea cantidad de muestra que contenga moco
o sangre.
-
- NOTA:
- Excremento Formado: Tmese la porcin de excremento de modo que
contenga material del exterior y del interior de la muestra.
-
- Excremento con mucosidades: Si hay mucosidades, rotlese un segundo
portaobjeto con el nombre del paciente. Colquese una gota de solucin salina en el
portaobjetos, tmese una pequea porcin de mucosidad y mzclese con la solucin

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 13/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

salina. Si existen trofozoitos, a veces es ms fcil encontrarlos en las


mucosidades que en las partes slidas del excremento.
-
- Excremento suelto y acuoso: Si no hay mucosidad tmese una pequea
porcin del excremento (de cualquier parte) y mzclese con la solucin
salina.
-
4. Deposite la muestra, primero en la gota de solucin salina y hacer una
suspensin y despus en la gota de lugol, realizar el mismo procedimiento.
-
5. Retirar de la suspensin las fibras y fragmentos slidos macroscpicos.
-
6. Cubrir con cubre objetos 22 x 22 y examinar en el microscopio con los objetivos
de 10x y 40x.
-
- II.2. PREPARACIONES EN FRESCO:
-
- AZUL DE METILENO AMORTIGUADO (AMA)
-
- Proceder como en los pasos 1 a 6 en <<preparaciones directa con
solucin salina y solucin yodada>> pero colocando una gota grande de
AMA sobre el portaobjetos en lugar de solucin salina o yodatada. Djense
pasar 5 a 10 minutos antes del examen para que el colorante penetre en los
trofozoitos. No debe dejar de pasar ms de 30 minutos desde la preparacin
del porta objetos pues de lo contrario el AMA dara una tincin excesiva de
los trofozoitos.
-
- II.3 OBSERVACION MICROSCOPICA 3
-
- 1.-Colocar el porta objetos con las preparaciones en la platina del
microscopio y enfocar la preparacin con el objetivo de 10 x (seco dbil).
-
- 2.-Regular la luz del campo visual en el diagrama de debajo de la platina. Los
objetos deben verse con nitidez en el campo. Graduar adecuadamente la
iluminacin del campo.
-
- 3.-Examinar toda la zona del cubre objetos 10 x enfocar el ngulo superior
izquierdo y mover el portaobjetos con movimiento regulares en sentido
horizontal y vertical.
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
- 4.-Cuando se detecten formas sugestivas de parsitos, se cambia al objetivo
de 40x fresco fuerte, aumentando al mismo tiempo la iluminacin abriendo
el diafragma que se encuentra por debajo de la platina. As se podr
observar la morfologa en detalle.
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 14/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- Este es un examen sistemtico. Por este mtodo pondr


localizarse habitualmente todo parasito que est presente. Si la
preparacin nos e examina sistemticamente, cabe la posibilidad de pasar por algn
parasito. Examinar cada campo cuidadosamente, enfocando arriba y abajo, antes de
pasar al campo siguiente.
-
- -
-
-
- II.4. IDENTIFICACION DE PARASITOS.
-
- A) PROTOZOARIOS.
-
-
a) PREPARACIONES CON SOLUCION SALINA
-
- En las preparaciones con solucin salina, pueden observarse los trofozoitos y
los quistes de amibas flagelados. Los quistes aparecen como estructuras refrigerantes
redondas u ovales. Los trofozoitos amibianos pueden ser redondos o irregulares; los
trofozoitos de flagelados suelen ser piriformes (alargados con forma de pera). En las
heces recientes (de no ms de una hora) pueden observarse trofozoitos mviles.
-
- La observacin de la motilidad puede ser muy til para identificar especies,
sobre toso en el caso de flagelados la motilidad caracterstica puede ser muy til para
identificar especies, sobre todo en el caso de flagelados. La motilidad de cada especie
se escribe en el anexo 1-a.
-
- Aunque con el objetivo de 10x pueden detectarse parsitos, ser necesario
cambiar al objetivo de 40 x para determinar de modo fiable di la estructura es un
quiste o un trofozoito. Con ese objetivo pueden observarse la motilidad, las inclusiones
en los trofozoitos. Con este objetivo pueden observarse la motilidad, las inclusiones en
los trofozoitos amibianos (eritrocitos y levaduras), los organismos cromatoides en los
quistes amibianos y la forma y los detalles estructurales de los trofozoitos y quistes de
la flagelacin (discos de succin, surcos en espiral o filamentos).
-
- No se podr ver ningn detalle del ncleo en las preparaciones con solucin
salina. No obstante es necesario regular cuidadosamente la iluminacin del escasez de
luz entorpecer con claridad. Tanto el exceso como la escasez de luz entorpecern la
observacin. Tambin es preciso enfocar hacia arriba o hacia abajo para ver todas las
capas o planos de la muestra. Examine toda la zona del cubreobjetos de modo
sistemtico para reducir la posibilidad de que pase desapercibido algn
microorganismo.
-
- b) PREPARACION CON SOLUCION YODADA.
-
- La preparacin con yodo sirven para observar los quistes de amibas y
flagelos. Pueden detectarse con el objetivo de 10x pero no son tan refrigerantes como
en las preparaciones con solucin salina. Debe usarse el objetivo de 40x para estudiar
las caractersticas de los quistes estos deben medirse para garantizar una
identificacin correcta.
- En la preparacin de yodo, el citoplasma de los quistes se tie de marrn
claro y los ncleos de marrn obscuro. Los quistes inmaduros contienen glucgeno, que
se tie con el color marrn obscuro con el yodo, hecho que nos permite distinguir. Los
quistes amibianos del genero Entamoeba. Son los nicos en los que se puede observar

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 15/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

las disposiciones de la cromatina perifrica y la posicin del carosoma,


los cuales se tien de amarillo claro. En los quistes flagelados teidos con
yodo pueden verse las fibras o filamentos.
-
- Aunque por lo general en estas preparaciones puede identificar la especie a
la que pertenecen los quistes de amibas y flagelados, a veces es imposible una
identificacin definida, en cuyo caso hay que utilizar tinciones permanentes.
-
-
- En el anexo 1-b figuran las caractersticas para la identificacin de quistes.
-
- c) PREPARCION CON AZUL DE METILENO AMORTIGUADO.
-
- Si se observan trofozoitos amibianos o estructuras parecidas debe
prepararse y examinarse una preparacin con AMA. Esta tincin solo es la utilidad para
diferenciar los trofozoitos del genero Entamoeba. Tras 5-10 minutos de tincin, los
trofozoitos generalmente conservan la motilidad, pero pueden enroscarse.
Ocasionalmente quedan algunos trofozoitos sin teir de modo que conviene buscar
parsitos bien coloreados para observacin. El ncleo y las inclusiones (eritrocitos,
levaduras) se tien de color azul obscuro y el citoplasma se tie de azul claro. Se debe
buscar los grnulos perinucleares.
- Las caractersticas para identificar los trofozoitos de las diferentes especies
amibianos en el anexo 1-c.
-
- B) HELMIMTOS.
-
- Los huevos son fciles de detectarse y de identificar en las preparaciones
con solucin salina. No deben teirse (la tincin debe de entorpecer la identificacin)
aunque la mayora de los huevos pequeos deben examinarse en seco con un objetivo
de mayor aumento.
-
- En las preparaciones salinas pueden verse las larvas de Strongyloides
estercolaris. Las larvas de anquilostomas no suelen hallarse en las muestras. Pero tal
vez es necesario distinguir estas dos especies si se examina una muestra antigua.
-
- Las caractersticas que se basa la identificacin de especies de huevos y
larvas se escriben en el anexo 1-d
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 16/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-
-
-
-
-
-
- Trofozoito con 2 o ms flagelos
- CLAVE DE IDENTIFICACIN DE TROFOZOITOS FLAGELADOS EN
EXTENSIONES TEIDAS.
-
-
-
-
-
- CLAVE DE IDENTIFICACIN DE QUISTES 5 oDE
msAMEBAS
flagelos Y FLAGETADOS
2 flagelos, - 4 flagelos
1 ncleo, -
tamao 4-9um -
-
- QUISTE
-
-
-
-
Con filamentos dentro del
Retortamonas quiste4-8
Tamao deum,
flagelado. Tamao 6-20 um Sin filamentos crematina perinuclear
-
Intestinalis - 1 ncleo 1 ncleo,
- 1 citosoma
-
- Trofozoto
5 flagelos, en forma de pera, 4 pares de flagelos, 2 n
-
1 ncleo,rganos parabasalos, tamao 10-20 um
En -forma de limn, Quiste oval Membrana ondulante
Ausencia de de cromtica perinuclear Presencia de crematina perin
- Un ncleo,
EnteromonasPared Gruesa Chilomastix (pocas veces visibles), tamao 8-20 um
-
Tamao 5.9 umhominis mesnill
En forma de pera, -
un ncleo -
tamao 4.7 um -
-
Tamao < 1 um Tamao
Retortamonas - 4 ncleos,
Ncleo grande y excntrico vacuela teida con yodo
Intestinalis -Chilomastix Grandes masas
- de cromatina
1, 2 0 4 ncleos
-
Tricomonas masa de
- Tamao 4.40 um Taamo 10-14um glucgeno.
hominis
- 4 ncleos Cuerpos parabesales
- (generalmente 2) 4 ncleos pilados en un extremo.
-
-
Nota: Tricomonas
- hominis no tiene fase de quiste. Endolimax Giardia
Lodamoeba
nana (quistelamblia
inmaduro)
- Butschli
-
-
- 1, 2 o 4 ncleos masa de gluggeno 4
-
- Enteromonas Giardia
hominis

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 17/46
ANEXO
ANEXO
1 - a1 - b (quiste maduro)
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 18/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

Identificacin
- de parsitos intestinales : helmintos
-
-
- TAMAOS RELATIVOS DE LOS HUEVOS DE HELMINTOS
-
-
90 -
-
-
60
-
-
-
30

150

120

90

60

30

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 19/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa
TROFOSOLIO CON O SIN
- CROMALINA PERINUCLEAR
-
-
-
-
- CON CROMALINA SIN CROMALINA
- PERINUCLEAR PERINUCLEAR
-
-
-
-
-
Citoplasma de grnulos gruesos, bacterias yCitoplasma
levaduras,de
singrnulos linos,
glbulos glbulos rojos sustentos
rojos. Un ncleoo presuntos
en todos los frolozoitos
Dos ncleos en ms del 5
- Sin bacterias.
-
-
-
-
-
- Ncleo con grnulosNcleopontricos
sin grnulos pontricosGran
granmasa de crematin
endosoma
-
-
-
-
-
-
-
-
- Pequeo endosoma grnulos perinucleados dispuestos regularmente
- Entamoeba coll
- Tamao > 15 um
-
-
- Gran
- endosoma irregular Lodamoeba Dientamo
butschlii Fragili
-
Tama
- 5 15 u
-
- Tamao Tamao
- 8 - 15 um 15 . 00 um
-
-
-
-
- COPR Endolimax
Entamoeba hartmanni - nana
-
-
-
-
-
Entamoeba histolytica
-
-
-
- PRACTICA no 3

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 20/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- Mtodos de concentracin cualitativos de quistes y huevos de la


materia fecal por flotacin.
-
- INTRODUCCIN:
-
- El nmero de formas parasitarias en las muestras fecales es con frecuencia
demasiado escaso como para que se puedan observar microscpicamente en fresco o en
directo, adems de que la gran cantidad de desechos, artefactos o pseudoparsitos
dificulta y confunde la identificacin de dichos elementos. As pues, siempre que sea
posible se deben emplear mtodos de concentracin de quistes y huevos principalmente.
Los mtodos ms comnmente utilizados (mismos que ya fueron descritos en la prctica
2) son dos:
-
1. Los que utilizan tcnicas de concentracin por flotacin.
-
2. Los que utilizan tcnicas de concentracin por sedimentacin.
-
- Ambos casos estn dirigidos hacia la recuperacin de huevos y larvas de
helmintos y quistes de protozoos; aunque para el diagnstico de ciertas
parasitosis se recomienda uno de los dos en especial, por ejemplo: para
Fasciola heptica se seala el mtodo de sedimentacin Ritchie.
-
- Estos mtodos no se utilizarn nunca para observar e identificar trofozotos.
-
-
- TECNICAS CUALITATIVAS DE FLOTACIN
-
- Los quistes de protozoarios y los huevos de helmintos de baja densidad, se
pueden hacer flotar en la superficie de una solucin de densidad elevada. La ms
comnmente usada es la solucin de sulfato de zinc, de densidad 1,180. Los parsitos que
flotan en la superficie se pueden recoger en al parte superior de la solucin mediante un
asa o una pipeta capilar, o con un cubreobjetos que se apoya sobre el menisco: lo cual
depender del mtodo que se utilice, siendo los ms frecuentes: mtodo de flotacin con
solucin de sacarosa o mtodo de Sweater, mtodo de Willis y mtodo de Faust.
-
- I MTODO DE FAUST
- (Examen de concentracin por centrifugacin - flotacin)
-
- ESTE MTODO FUE DESCRITO EN 1938 POR Faust y colaboradores, siendo
uno de los ms utilizados hasta la fecha. Es til para hacer una buena concentracin de
quistes, huevos y larvas; es la tcnica ms utilizada por los laboratorios. Es poco eficaz
para huevos pesados como los de Taenia sp. Fasciola heptica u vulos de Ascaris
lumbricoides.
-
-
- MATERIAL Y REACTIVOS:
- Solucin de sulfato de zinc con densidad 1.180
- Lugol parasicolgico.
- Recipiente de vidrio o plstico desechable de 40 ml.
- Tubos de 13 x 100mm.
- Embudos de vidrio de 7.5cm de dimetro.
- Portaobjetos y cubreobjetos.
- Centrfuga.
- Microscopio compuesto.

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 21/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- Gasa cortada en cuadros de 15 cm de lado.


- Asa de alambre calibrada.
-
- MTODO:
-
1. en el ejercicio de 40 ml se depositan con un abatelenguas uno a dos
gramos de materia fecal y se agregan 10 ml aproximadamente de agua
limpia (no del chorro de la llave).
-
2. Se dispone el embudito con la gasa colocada a manera de filtro y se
coloca ste en la boca de un tubo de ensaye y se vaca la suspensin de
heces fecales directamente sobre la gasa, a fin de que el lquido filtrado
se reciba en el tubo.
-
3. Los tubos as preparados, se centrifugan a 2000 rpm. Durante un
minuto.
-
4. Se decanta el sobrenadante y se resuspender el sedimento con agua,
agitando con un aplicador.
-
5. Centrifugar nuevamente y se vuelve a decantar el sobrenadante.
-
6. se agregan 2 a 3 ml. De solucin de sulfato de zinc a los tubos y se
homogeneizar perfectamente, despus se continua adicionando la
misma solucin hasta llenar los tubos hasta 0.5 a 1 cm. Por debajo de
los bordes.
-
7. Se centrifuga a 2000 rpm. Durante un minuto.
-
8. Con el asa limpia o flameada, se recoge la muestra de la pelcula
superficial que se encuentra en el mecanismo durante dos o tres
ocasiones sucesivas y se deposita en un portaobjetos.
-
9. Se coloca una gota de lugol parasicolgico y se homogeneizar en el
ngulo de un cubreobjetos y se pone ste sobre la preparacin.
-
10. Se lleva la preparacin al microscopio y se observa con objetivos de 10x
y 40x.
-
-
- PRECAUCIN:
-
- Se debe verificar la densidad de la solucin de sulfato de zinc
peridicamente o de preferencia prepararla cada tercer da, pues fcilmente se
pierde la densidad alterndose los resultados. Despus de agregar la solucin
de Faust, es necesario tomar inmediatamente la muestra para su lectura, pues
si permanecen los tubos mucho tiempo, las formas parasitarias pueden
degenerarse o sedimentarse. Dado el carcter infectante de la materia fecal,
deben tomarse las precauciones pertinentes.
-
- FORMA DE REPORTAR:
-
- Para reportar los hallazgos parasicolgicos en las prelaciones, primero se
escribe la fase o estadio y enseguida el nombre del parsito, con su nombre

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 22/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

genrico con mayscula y el especfico con minscula, subrayando ambos: por


ejemplo: Quiste de Giardia Lamblia (De esta manera se reportarn todos los
hallazgos de objetos parasitarios observados e identificados en los anlisis
coproparasitoscpicos.
-
-
-
-
- II MTODO DE WILLIS
-
- En 1921 se describe este mtodo basado en la propiedad que tienen las
soluciones de densidad mayor, de hacer flotar objetos menos densos. La
densidad aproximada de la solucin de salmuera es de 1.200, lo que hace que
la mayor parte de los huevos de helmintos floten. Por su sencillez se pude
utilizar en encuestas en el campo; se usa para huevos, quistes y larvas.
-
- MATERIAL Y REACTIVOS:
-
- Solucin sobresaturada de cloruro de sodio (Salmuera)
- Solucin del lugol parasitolgico.
- Recipiente de vidrio o plstico desechable de 40 mL.
- Portaobjetos y cubreobjetos
- Microscopio compuesto
- Abatelenguas.
-
- MTODO:
-
1. se colocan en el recipiente de vidrio, de dos a tres gramos de materia
fecal y se aaden unos 5 mL. de salmuera.
-
2. se va aadiendo ms salmuera y se sigue agitando con el abatelenguas,
hasta que se llene hasta el tope del frasco.
-
3. se coloca un cubreobjetos sobre la boca del recipiente, de tal manera
que quede en contacto con la suspensin y se deja reposar de 15 a 30
minutos.
-
4. se toma el cubreobjetos y se coloca sobre un portaobjetos (si se desea
se le puede poner a la preparacin una gota de lugol).
-
5. se observa en el microscopio con objetivos de 10x y 40x. se reportan
los objetos parasitarios observados e identificados.
-
-
- PRECAUCIONES:
-
- Se debe tener cuidado, al colocar el cubreobjetos en la boca del recipiente,
de que no queden burbujas, pues esto dificulta mucho la observacin. El
carcter infectante de a materia fecal deber de tomarse en consideracin para
tomar las medidas de seguridad correspondiente.
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 23/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- PRACTICA 4
-
-
- COPROPARASITOSCOPIO III
-
-
- Mtodos de concentracin cualitativos de quistes y huevos de la
materia fecal por sedimentacin.
-
-
- Este tipo de anlisis se fundamenta bajo el principio de que la densidad de
los quistes de protozoarios y huevos de helmintos es mayor que la de las
suspensiones de materia fecal en agua o solucin salina, por lo cual tienden a
sedimentarse.
-
- Este proceso se puede acelerar por centrifugacin ligera. Se aade con
frecuencia a la suspensin fecal una mezcla formol-ter para separar los desechos y fijar
las formas parasitarias que puedan estar presentes. Los mtodos ms conocidos y
utilizados son: a) el mtodo de Ritchie y b) el mtodo de Carles-Barthelemy; mismos que
se realizarn durante esta prctica.
-
- I. MTODO DE RITCHIE
-
- Este mtodo fue diseado por Richie en 1948, aunque result ser muy
semejante al de Carles-Barthelemy (1917).
-
- Se usa para huevos (especialmente til para Fasciola Heptica), quistes y
larvas, no importa la densidad que tenga: hace muy buena concentracin de
estas formas parasitarias pues elimina bastantes detritus orgnicos con el ter.
El motivo por el cual se utiliza el formol es para mantener la integridad de las
formas parasitarias que concentra, por sus caractersticas de fijador. La
generalidad de los parasiclogos conoce este mtodo como formol-ter.
-
- Con esta tcnica, las preparaciones quedan muy sucias porque con la
sedimentacin, aparte de concentrarse formas parasitarias, se logran
concentrar otros materiales.
-
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
Solucin salina isotnica
Lugol parasicolgico
Solucin de formaldehido al 10%
Embudos de 5cm de dimetro.
Vaso de precipitados de 50 ml.
Pipeta Pasteur con bulbo.
Portaobjetos y cubreobjetos.
Tubos cnicos para centrifuga de 15ml
Centrfuga con camisas para los tubos cnicos.
Microscopio compuesto.
Gasa cortada en cuadros de 15 cm. De lado
Aplicadores de madera.

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 24/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

Gradilla.
-
-
-
-
- MTODO:
-
1. Con el aplicador o abatelenguas de madera, se colocan 1 a 2 gramos
aproximadamente de material en el vaso de precipitados y se aaden 10ml.
De solucin salina, homogeneizando con el mismo aplicador.
-
2. Se pasa la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo y
recibiendo el contenido en el tubo cnico.
-
3. Se centrifuga 1 a 2,000rpm.
-
4. Se decanta el sobrenadante y se resuspender el sedimento con solucin
salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces que sean
necesarias hasta que el sobrenadante se claro.
-
5. Al ltimo sedimento se le agregan 10 ml. De solucin de formaldehido, se
mezcla y se deja reposar durante 10 minutos.
-
6. Se aaden 5 ml. De ter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se
agitan enrgicamente durante 30 seg.
-
7. Se centrifuga durante 2 min a 1,500 rpm
-
-
8. Despus de centrifugar, se observan cuatro capas: primera, ter en la
superficie; segunda, un tapn de restos fecales; terceros, formaldehido; y
cuarta, sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos
parasitarios.
-
9. Se decantan las tres primeras capas de la mezcla, quedando solo el
sedimento o cuarta capa, a la cual se le agrega una gota de lugol y se agita
por golpeteo.
-
10. Con una pipeta Pasteur con bulbo se extrae una gota del sedimento y se
coloca en un portaobjetos; se cubre con un cubreobjetos evitando la
formacin de burbujas.
-
11. Se observa la preparacin en el microscopio con objetivos 10x y 40x. se
reportan los objetos parasitarios e identificados.
-
- PRECAUCIONES:
-
- El rea de trabajo debe estar libre de mecheros encendidos, pues el ter es
inflamante. Al mezclar y agitar la suspensin, despus de agregar el ter el
tubo debe de destaparse lentamente, para evitar que el contenido salga
bruscamente al exterior. Procurar mantener limpia la zona de trabajo para
evitar posibles infecciones con la materia fecal.
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 25/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-
- II. MTODO DE CARLES-BARTHELEMY
-
- Este mtodo hace una buena concentracin de quistes, huevos y larvas;
una de sus limitaciones es que resulta antieconmico por los reactivos que se
utilizan, por lo que en la actualidad se usa poco.
-
-
- MATERIAL
-
Solucin salina formolada (Carles I)
Solucin ctrica formulada (Carles II)
Lugol parasicolgico
Tubos de 13x100mm
Portaobjetos de 25 x 75mm
Cubreobjetos de 22 x 22mm
Pipeta Pasteur con bulbo
Microscopio
Centrifuga y tubos cnicos
Gasa cortada en cuadros de 15cm de lado
Tapones de caucho
Palillos o aplicaciones de madera
-
- MTODO
-
1. Con un aplicador o un abatelenguas se colocan 1 a 2 gramos de material
fecal en 10ml aproximadamente de solucin Carles I, homogeneizando
con el mismo aplicador.
-
2. Pasar la suspensin a travs de la gasa, colocada a manera de filtro en el
embudo adaptado a un tubo de centrifuga.
-
3. Centrifugar a 1800 rpm. Durante 60 segundos.
-
4. Decantar y agregar al sedimento Carles II, hasta llenar unos dos tercios
del tubo.
-
5. Agitar la fuerza y aadir el ter hasta centmetro y medio del borde.
-
6. Tapar el tubo con un tapn de caucho y agitar fuertemente hasta lograr la
homogeneizacin de las sustancias que contiene.
-
7. Destapar con cuidado el tubo para evitar la proyeccin de la mezcla y
centrifugar durante 30 segundos a 1800 rpm.
-
8. Con un palillo o un aplicador de madera, se rompe el tapn de las haces,
grasas y otros restos, agitando ligeramente con el palillo.
-
9. Se vuelve a centrifugar durante otros 30 seg.
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 26/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

10. Se rompe nuevamente e tapn superior de restos fecales desprendindose


de las paredes del tubo con cuidado, ayudndose con el palillo.
-
11. Se decanta una sola vez, procurando que quede una pequea cantidad de
dos a cuatro gotas lquidas junto con el sedimento.
-
12. Agregar al sedimento una gota de lugol y agitar el tubo ligeramente para
homogeneizar.
-
13. Con la pipeta Pasteur, se toma una gota de la suspensin coloreada del
fondo del tubo y se coloca entre porta y cubreobjetos.
-
14. Se observa en el microscopio con el objetivo 10x y 40x. se reportan las
formas parasitarias observadas e identificadas
-
- PRECAUCIONES:
-
-
- Mientras se est trabajando, no deben existir mecheros encendidos en el
laboratorio porque el ter es inflamable; cuando se agite ste, se debe de tener
mucho cuidado al destapar los tubos, sobre todo cuando stos hayan sido
tapados con tapn de caucho, pues se puede proyectar el contenido al exterior.
El lugar de trabajo deber ser lavado perfectamente para evitar infecciones.
-
-
-
-
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 27/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

PRACTICA 5
-
-
-
- MTODO DE CONCENTRACIN CUANTITATIVOS PARA HUEVOS DE LA
MATERIA FECAL
-
-
-
- Estos mtodos son utilizados para hacer una evaluacin de la intensidad de
ciertas helmintisis como : ascariasis, tricocefalosis, uncinarias, himenolepiasis,
estrongiloidosis y esquistosomiasis intestinal: a continuacin se mencionarn
algunas de las ms usuales.
-
-
- I. EXAMEN CUANTITATIVO DE STOLL
-
- Esta tcnica fue idea y desarrollada por Stoll para cuantificacin de huevos
de uncinarias. Dadas las caractersticas del mtodo es uno de los ms exitosos
en encuestas epidemiolgicas no slo en uncinarisis sino en muchas
helmintisis. Fue publicado en 1923, su fundamento es bsicamente
aritmtico, los clculos son muy simples tomando en consideracin las
diluciones empleadas
-
-
- II. MTODO CUANTITATIVO DE FERREIRA.
-
-
- Es un mto dode concentracin de una suspensin de materia fecal 1:10
adems de ser cuantitativo, Biagi y Cols, describieron este mtodo en Mxico
en 1959, el cul fue puesto en prctica por Ferreira y Abeu, basados
probablemente en el mtodo de Faust. Rene las caractersticas de un CPS de
concentracin y un cuantitativo; sirve para el recuento de larvas y huevos y
hace una buena concentracin de quistes. Sus limitaciones son variables pues
el equipo y material que se usa no se puede conseguir fcilmente en el
comercio. Por otro lado; adems e uso del factor por el que se multiplica para
obtener la cuenta de huevos o larvas por gramos de haces, no ha sido aclarado
en la descripcin de esta tcnica.
-
- III. MTODO DE KATO.
-
- Este es un examen de Frotis grueso que utiliza en lugar de un cubreobjetos
de vidrio un rectngulo de celofn. En 1954 Kato y Miura, describieron la
tcnica del frotis grueso para recuentos de huevos, Martn y Beaver, en 1968,
le hicieron unas modificaciones con las cuales eliminaban artefactos gruesos y
disminuan el aclaracin excesivo. Es til para diagnosticar helmintisis y,
adems, cuantificar el hallazgo de huevos realmente la concentracin de
huevos por gramo de heces pus se trabaja con la materia fecal sin mezcla con
ninguna solucin.
-
- IV. MTODO DE KATO-KATZ
-
- La tcnica de examen de frotis fecales gruesos con celofn ha demostrado
su eficacia en el diagnstico de la esquistosomisis y las helmintisis
intestinales. Este tipo de frotis puede prepararse y consevarse en cajas para

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 28/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

portaobjetos y enviarse posteriormente a grandes distancias para que sean


examinadas en un laboratorio central en caso necesario. La tcnica no sirve
para larvas, quistes o huevos de ciertos parsitos intestinales.
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
Palillos aplicadores de madera
Rejilla de acero inoxidable, nylon o plstico (malla 60-105)
Plantilla de acero inoxidable, plstico o cartn
Portaobjetos; pinzas de diseccin
Celofn, 40-50mm de grosor, tiras de 25 x 30 25 x 35mm
Tarro de fondo plano
Papel higinico
Solucin de glicerol-verde de malaquita (o azul de metileno)
-
-
- METODO:
-
-
- La manipulacin de muestras fecales debe hacerse siempre con absoluta
precaucin, siempre deben llevarse guantes para evitar la contaminacin de los dedos.
-
-
-
1. Sumerja las tiras de celofn de la solucin de glicerol-verde de malaquita (o
azul de metileno) a 50% durante al menos 24 hrs. Antes de usarlas.
-
2. Transferir una pequea parte de la materia fecal a la malla de nylon y con
un aplicador tamizar la cantidad suficiente para cubrir el orificio de la
plantilla de medicin que debe de estar ya colocado sobre un portaobjetos.
-
3. Retirar cuidadosamente la plantilla de modo que el material fecal quede
sobre el portaobjetos y no halla excremento adherido a ella.
-
4. Cubrir la materia fecal del portaobjetos que ha quedado sobre el
portaobjetos con una tira de celofn empapada en glicerol.
-
5. Colocar la preparacin invertida sobre una superficie perfectamente plana y
cubierta con papel de desecho.
-
6. Presionar sobre la superficie de celofn con un tapn de hule para
homogeneizar la materia fecal.
-
7. Si hay un exceso de glicerol en la parte superior del celofn retrese con un
trozo de papel higinico o secante.
-
8. Levantar cuidadosamente el portaobjetos; de lo contrario el celofn puede
desprenderse. Deslizar suavemente el portaobjetos hacia un lado
sujetando el celofn.
-
-
- OBSERVACIONES DE LAS PREPARACIONES:
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 29/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- La preparacin debe conservarse a temperatura ambiente durante al menos 24


hrs. Antes del examen microscpico. Si se coloca el portaobjetos en una incubadora 40,
o bajo una intensa luz fluorescente o incandescente en el laboratorio, o a la luz del sol
puede examinar al cabo de pocos minutos.
-
- Las preparaciones deben examinarse con objetivos seco dbil y seco fuerte.
-
- Para facilitar el examen microscpico, pueden ponerse una o dos gotas de
eosina en solucin salina (1:10) sobre la parte superior de celofn, dejase
durante 3 a 5 minutos, y a continuacin retirar el exceso con un trozo de papel
higinico o secante. Con ello es ms fcil observar los huevos de Schistosoma.
-
- Los huevos de Ascaris y Trichuris pueden verse en cualquier momento.
Los huevos de Ancylostoma son visibles durnate los 30 primeros minutos a
partir de la preparacin. El momento ideal para observar los huevos de
Schistosoma es a las 24 horas de su preparacin.
-
-
- MUESTRAS FECALES ESPESAS O DURAS
-
-
- El principal problema de la tcnica de extensin en capa gruesa es la
imposibilidad de ver los huevos de helmintos en algunos excrementos de consistencia
dura.
-
- En tal caso:
-
- Despus de la preparacin por el normal, esprese 24-48 hrs. Antes de contar
los huevos en los portaobjetos. La preparacin puede tardarse bastante tiempo en
aclararse:
-
-
- REPORTE
-
- El nmero de huevos observando se multiplica por 24 para obtener el
nmero de huevos por gramo de excremento ya que la plantilla de Kato-Katz
puede contener 41.7 mg de heces.
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 30/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

PRACTICA 6
-
-
-
- TECNICAS DE TINCIN PERMANENTE PARA MUESTRA FECALES
-
-
-
- Normalmente no suele recurrirse a los mtodos de tincin permanente para
el diagnstico, porque no son necesarios para la identificacin de huevos o
larvas de gusanos. No obstante, a veces es preciso utilizarlos con los
siguientes fiens:
-
-
a) Identificar los oocistos de Criptosporidium.
b) Identificar de trofozotos de protozoos, en caso de duda.
c) Confirmacin de a especie a la que pertenecen los quistes de protozoos, en
caso de duda.
d) Mantenimiento de un registro permanente.
e) Envo a un laboratorio de referencia para obtener la opinin de un experto.
-
-
- Si bien. Los frotis en fresco para el examen microscpico directo facilitan la
rpida deteccin de los parsitos intestinales presentes en materia fecal, la deteccin de
entamoeba histolytica de otros protozoarios puede acrecentarse considerablemente
mediante preparaciones tenidas en forma permanente.
-
- Generalmente se utilizan dos tinciones permanentes para mostrar la presencia
de protozoarios intestinales:
-
1. Tincin tricrmica de Gomori y
2. Tincin de hematoxilina frrica
-
-
- La tincin tricrmica se recomienda generalmente para los laboratorios clnicos
porque es sencilla y de fcil ejecucin y produce resultados uniformemente buenos con
material fresco o preservado con PVA. La segunda. Es la tcnica tradicional utilizada para
la ms exacta definicin de la morfologa de los parsitos intestinales, solo que el
procedimiento es complicado y debe ser llevado a cabo por una persona experimentada a
fin de lograr los mejores resultados.
- Por lo que respecta a la identificacin de los oocitos de Criptosporidium que
aparecen en las heces fecales, stos pueden concentrarse usando una tcnica modificada
de formol-ter, pero deben identificarse por mtodos de coloracin. El mtodo
recomendado es la tcnica de Kinyoun o Zhiel-Neelsen modificado; otra posibilidad es la
tincin con safranina-azul de metileno.
-
- I. TINCION TRICROMICA
-
- Debido a que el ndice de refraccin de los quistes de los protozoarios y de
algunos huevos de helmintos es casi semejante al del agua, se requiere
tcnicas de tincin para estudiar los detalles de su estructura interna. Las
tinciones permanentes aumentan tambin la deteccin de Entamoeba
histolytica, la amiba patgena ms importante para el hombre. La tincin
tricrmica es un procedimiento rpido que d buenos resultados para fines de
rutina; sta es una modificacin de la tincin de Gomori.

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 31/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-
-
-
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
- Solucin fijadora de Schaudinn
- Colorante tricrmico de Gomori
- Portaobjetos, equipo de tincin, microscopio.
-
- MTODO
-
- Se recomienda teir paralelamente con el material desconocido varios frotis
que contengan organismos parasitarios de propiedades tintoriales conocidas.
-
1. Preparar dos frotis de materia fecal fresca en portaobjetos, utilizando un aplicador
o un pincel desechable. El frotis debe ser lo suficientemente fino como para poder
leer un impreso a travs de l.
-
2. Sumergir inmediatamente los preparados en la solucin fijadora de Schaudinn y
dejarlos como mnimo 30 minutos, aunque es preferibles prolongar la fijacin hasta
el da siguiente.
-
3. Si la muestra es lquida, mezclar varias gotas de sta con 3 a 4 gotas de PVA en un
portaobjetos y dejar secar durante varias horas en una incubadora a 37. C.
eliminar el excedente de la mezcla y preparar frotis en otros portaobjetos y
dejarlos secar por varias horas en incubadora a 37. C.
-
4. Una vez fijados y secos los frotis, colocar los portaobjetos en alcohol etlico al 70%
y dejar 5min.
-
5. Lavar con dos cambios de alcohol al 70% uno durante 5 min. Y otro de 2 a 5 min.
-
6. Lavar con solucin de colorante tricromo durante 10 min.
-
7. Lavar con alcohol etlico al 90% acidificado (cido actico al 1%) no ms de 5
segundos.
-
8. Sumergir una vez en alcohol etlico al 100%.
-
9. Lavar con dos cambios de alcohol etlico al 100% de 2 a 5 min.
-
10. Eliminar el alcohol con dos cambios de xileno o tolueno, de 2 a 5 min. Cada uno.
-
11. Cubrir con medio de montaje y colocar un cubreobjetos de espesor #1.
-
12. Examinar con objetivo de inmersin en aceite para detectar formas parsitarias.
-
-
-
- INTERPRETACIN
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 32/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- El citoplasma de quistes y trofozoitos bien fijados y teidos es azul verdoso,


con tintes de color prpura. La cromatina nuclear, los cuerpos cromatoides y
los glbulos rojos ingeridos aparecen de color rojo o rojo prpura. El material
de fondo es verde.
-
-
- Si la tincin resulta deficiente, cerciorarse de que los frotis no son
demasiado gruesos y que el procedimiento de coloracin fue seguido
exactamente. La fijacin deficiente de los extendidos y la eliminacin
incompleta del cloruro mercrico de la solucin de Schaudinn con alcohol antes
de colorear constituyen dos posibles causas de una tincin deficiente.
-
- II. TINCIN DE ZHIEL NEELSEN MODIFICADO
-
- Los oocistos de Criptosporidium que aparecen en la materia fecal son
esfricos, con un dimetro de 4 a 6 micras que slo pueden identificarse con
mtodos de coloracin como el siguiente:
-
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
Solucin de carbol-fucsina
Formol 10%
Solucin de etanol-cido clorhdrico
Solucion de glicerina-verde de malaquita
Solucin de metanol-cido clorhdrico
Portaobjeto, aplicadores de madera.
Recipientes para tincin
Microscopio, papel de seda, aceite de inmersin.
-
- METODO
-
1. Con un aplicador, hacer sobre un portaobjetos una extensin de material fecal en
capa fina y dejar secar al aire.
2. Fijar en metanol durante 2 a 3 min. Si es posible, continuar fijando con vapores de
formol a fin de reducir la infecciosidad del material.
3. Teir la extensin con carbol-fucsina fra durnate 5 a 10 min.
4. Lavar con etano-cido hasta que ste deje de salir coloreado.
5. Lavar con agua de la llave, usando una piseta.
6. Tratar con verde de malaquita o azul de metileno para la tincin de contraste,
durante 30 seg.
7. Lavar con agua de la llave, usando una piseta.
8. Dejar secar a temperatura ambiente.
9. Examinar la preparacin con objetivo de 40x y confirmar la morfologa con el
objetivo de inmersin.
-
-
- INTERPRETACIN
-
- Los oocistos de Criptosporidium aparecen como esfrulas de color rosa
fuerte cobre un fondo de color verde plido. Se observan distintos grados de
tincin interna, atendiendo a la edad y el estado del oocisto.
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 33/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

PRACTICA 7
-
-
-
- EXMENES ESPECIALES PARA EL DIAGNSTICO DE PARASITOSIS DEL
APARATO DIGESTIVO
-
-
-
- En este grupo de exmenes se encuentran todas aquellas tcnicas que
auxilian para el diagnstico del tubo digestivo, como es el caso de fasciolosis,
en la que auxilian para el diagnstico del tubo digestivo, como es el caso de
fasciolosis, en la que los adultos se encuentran en conductos biliares. Algunos
de los mtodos implementados para este tipo de diagnsticos especiales se
mencionarn a continuacin:
-
-
- I. TAMIZADO
-
- Desde hace muchos aos este proceso se ha utilizado para separar mezclas
formadas por partculas de diferentes tamaos. Es muy utilizado en anlisis
cualitativos y se considera un mtodo mecnico para separacin de mezclas.
Es til para la recuperacin de parsitos macroscpicos o segmentos de stos
en la materia fecal.
-
-
- MATERIAL
-
Solucin salina isotnica
Solucin de alcohol etlico al 70%
Alcohol etlico de 95% 70 partes
Agua destilada 25 partes
-
-
- Mezclar ambas sustancias y guardar en frasco.
-
Cajas de Petri
Microscopio compuesto con lupa o
Microscopio esteroscpico
Tamices de malla de diferente grosor
Abatelenguas
Pinzas de diseccin sin dientes.
-
-
-
- METODO
-
1. Se colocan las tamices, uno sobre otro, en orden decreciente de grosor de
las mallas (la ms gruesa arriba y al final la ms fina).
-
2. Se coloca la materia fecal en el tamiz ms superior, se colocan al chorro del
agua en el fregadero.
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 34/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

3. Con el abatelenguas, se mueven los trozos de materia fecal para que vaya
pasando con ms facilidad por los tamices.
-
4. Despus que ya ha pasado toda la materia fecal, se van revisando cada uno
de los tamices, buscando los parsitos que hallan quedado retenidos en
ellos. Por ejemplo, es factible que en primer tamiz hayan quedado
progltidos y pedazos de estrbilo de T. solium T. saginata, en el segundo
tamiz es posible que hallan quedado adultos de Trichuris trichiura y as
sucesivamente.
-
5. Se toman los parsitos o pedazos de ellos con las pinzas de diseccin, y se
pasan a cajas de Petri que previamente se les ha puesto solucin salina
isotnica.
-
6. Si entre las porciones de cstodos que se obtuvieron, hay trozos muy finos,
se examinan con el estereoscpico para buscar el escles.
-
7. Los parsitos as colectados pueden posteriormente, seguir un proceso de
tincin o aclaracin.
-
-
- PRECAUCIONES: a los pacientes que tengan indicado tratamiento contra
teniasis y tamizado, se le pedir que lleve al laboratorio toda la materia fecal evacuada en
24-48 horas, en un frasco limpio de boca ancha y que no se contamine con orina;
previamente se le habr orientado acerca de la tcnica de recoleccin y conservacin de
la muestra.
-
-
- En caso de manejar tenias, es necesario manejar los progltidos con
absoluta precaucin y despus de terminar el proceso lavarse perfectamente,
inclusive con cepillo las mano, para evitar el riesgo de adquirir cisticercosis en
el caso de que se trate de T. solium.
-
-
-
- MTODO DE GRAHAM
-
- Es le clsico mtodo de raspado perianal para obtencin de huevos de
Eterobius vermicularis. Fue Heller en 1876 quien ide el raspado anal para la obtencin
de oxiuros; ms tarde, en 1941, Gram. introduce su tcnica de raspado, utiliznado para
ello, la cinta de celofn adhesiva. Mazzotti, en 1946 recomienda esta tcnica para la
bsqueda de huevos de Taenia sp. En la prctica, tambin se han encontrado huevos de
Ascaris lumbricoides, T. trichiura, e Hymenolepis nana. Este mtodo es el ms til
y ms efectivo para la bsqueda de huevos de Enterobius Vermicularis.
-
- MATERIAL
-
Portaobjetos de 25 x 75 mm
Microscopio compuesto
Cinta de celofn adhesiva de 12 mm de ancho
Abatelenguas.
-
- METODO

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 35/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
1. Se le dan instrucciones al paciente para que llegue temprano al laboratorio, para la
toma de la muestra; que no se bae ni defeque, para evitar el arrastre mecnico
de los huevos de Enterobius vermicularis.
-
2. Se toma el abatelenguas y en un extremo se coloca la cinta con al parte adhesiva
hacia fuera; se sujeta ambos con los dedos pulgares e ndice.
-
3. Se coloca el paciente en posicin genupectoral, exponiendo el esfnter anal y el
rerin.
-
4. Se coloca el paciente en posicin genupectoral, exponiendo el abatelenguas con la
cinta hacia la izquierda, derecha, arriba y abajo; por ltimo se hace un raspado de
la regin perineal.
-
5. Se separa cuidadosamente la cinta del abatelenguas.
-
6. Se adhiere al portaobjetos, anotando en un extremo del mismo, nombre, edad y
sexo del paciente.
-
7. Se lleva la preparacin al microscopio y se observa con objetivo 10x cambiando al
40x cuando se tenga duda. Se examina sistemticamente toda la preparacin
para la localizacin e identificacin de las formas parasitarias.
-
- CAPSULA DUODENAL
-
-
- Beal y Cols publicaron en 1970, una tcnica para la obtencin de muestras
de contenido duodenal, por medio de una cpsula de gelatina que contiene un
hilo absorbente. Se utiliza para demostrar la presencia de parsitos que se
alojan en duodeno y que en un momento crean dificultades para el diagnstico,
como son Giardia lamblia, Strongyloides stercoralis y Fasciola heptica.
-
-
- MATERIAL
-
Vidrio de reloj o caja de Petri
Pipeta Pasteur
Portaobjetos de 25 x 75 mm
Cubreobjetos de 22 x 22 mm
Microscopio compuesto
Tela adhesiva
Guantes de cirujano, pinzas
Bulbo de goma
Cpsula de Beal (cpsulas de gelatina, tipo farmacutica, con hilo trenzado de
nylon y algodn, de aproximadamente 90cm de longitud para adultos y de 70
cm. Para nios; en su interior conteniendo un fragmento de plomo cubierto de
silicones; el hilo sale por el extremo posterior de la cpsula y cuando est lista
para administrase, el hilo lo tiene doblado en su interior)
-
-
- METODO

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 36/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
1. Se le pedir al paciente que se presente en el laboratorio por la maana y en
ayuno.
-
2. Se toma la cpsula con las pinzas, del extremo del hilo que sobresale.
-
3. Se le dice al paciente que ingiera la cpsula, con jugo o t, mantenindola del
extremo del hilo.
-
4. Cuando ya ha tragado la cpsula, el extremo del hilo se fija en la mejilla con cinta
adhesiva.
-
5. Se le pide al paciente que camine un rato y enseguida que se recueste del lado
derecho.
-
6. Se le deja la cpsula de 30 a 90 minutos.
-
7. Pasando el tiempo sealado; se extrae el hilo, mediante una tensin suave y
sostenida; si estuvo en duodeno, presentar el hilo una coloracin verde
amarillenta.
-
8. Se exprime con los dedos pulgares e ndice, la porcin del hilo impregnada con el
contenido duodenal y se deposita el producto en el vidrio de reloj con una pequea
cantidad de solucin salina.
-
9. Se homogeneiza la muestra y se toma una porcin con la pipeta Pasteur, se coloca
sobre un porta y un cubre.
-
10. Se observa con el microscopio con el objetivo 10x y 40x si es necesario.
-
- Precauciones: Se debe extraer el hilo con cuidado para no provocar nuseas y
vmito.
-
- IV. SONDEO DUODENAL
-
- Por medio de esta maniobra se puede obtener contenido duodenal para la
bsqueda de parsitos cuyo hbitat es el duodeno y sobre todo cuando son
problemas de diagnstico.
-
- Esta maniobra se realiza bsicamente en un hospital. El mdico es el
encargado de hacerla y enviar el producto al laboratorio.
-
- V. METODO DE BAERMAN
- Este es un mtodo para la concentracin de larvas rabditoides y
filariformes. Fue en 1971, cuando Baerman dise el aparato que lleva su
nombre, para recuperar larvas de uncinarias del suelo; en 1922, Cort y Col,
modificaron el mtodo colocando una malla de alambre sobre el embudo y
luego una gasa y usaron agua caliente en lugar de agua a temperatura
ambiente que se describa en la tcnica original.
-
- Es un mtodo muy til y conveniente para hacer una buena concentracin
de larvas, se utiliza en Microbiologa agrcola para obtener larvas de nemtodos
de plantas y de vida libre; en Parasitologa Mdica se utiliza para concentrar

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 37/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

larvas de estrongiloides y uncinarias, as como tambin para las larvas de


Trichinella spiralis.
-
-
- MATERIAL
-
Lugol parasicolgico
Vaso precipitado de 100 ml
Tubos de centrifuga de 13 x 100 mm
Portaobjetos de 25 x 75 mm
Cubreobjetos de 22 x 40 mm
Embudo de vidrio o polietileno de 7.5 cm de diam.
Termmetro graduado de 0 a 100.
Microscopio compuesto.
Centrifuga con camisas para tubos de 13 x 100 mm
Soporte universal con anillo de 8 cm. De dimetro.
Malla de alambre de mosquitero cortada en cuadros de 12 cm. De lado
Un trozo de manguera de caucho de 7 a 10 cm de largo.
Gasa cortada en cuadros de 12 cm. De lado
Abatelenguas
Pinzas de mohr.
-
- METODO
-
1. Se arma dispositivo segn esquema adjunto.
2. Se llena el embudo con agua que previamente se calent a 50. De tal manera que
la malla y gasa se mojen.
3. Se coloca la materia fecal sobre la malla y la gasa.
4. Se deja reposar durante 2 horas, para que las larvas pasen al agua del embudo.
5. Pasadas las dos horas, se abre la pinza, dejando salir el agua y se recibe en el vaso
de precipitado.
6. Con una pipeta Pasteur, se toma una gota del agua y se coloca entre el porta y el
cubre y se examina con el microscopio.
7. Si la muestra est positiva el agua que se encuentra en el vaso de precipitado se
centrifuga durante 5 minutos a 1500rpm. Y se toman los sedimentos y se buscan
las larvas. De encontrarse, son muy mviles, por lo que se recomienda agregar un
agota de lugol parasicolgico para facilitar la observacin.
-
- Precauciones: Se debe de manejarse la muestra con guantes para evitar
posibles infecciones, sobre todo cuando se sospecha que existen larvas filariformes,
que son infectantes. Lavar el lugar de trabajo con abundante agua y jabn para evitar
infecciones.
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 38/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

PRACTICA 8
-
-
- DIAGNOSTICO DE PARASITOS DE LA SANGRE Y LOS TEJIDOS.
-
- Los parsitos se discuten usualmente en forma separada de los que
habitan en el tracto gastrointestinal. Sin embargo, se debe entender que los
parsitos de la sangre y los tejidos, incluyendo nematodos, cstodos y
flagelados, son morfolgicamente similares a sus contrapartes intestinales; as
por ejemplo, plasmodios responsables de la malaria son esporozoarios que
tienen tambin una contraparte intestinal, la Isospora homini, que se pueden
hallar en las heces; pero se piensa que no causa enfermedad primaria en seres
humanos.
-
-
- En general, los ciclos vitales de los parsitos de la sangre y los tejidos son
ms complejos que los de sus contrapartes intestinales. La mayora de los
parsitos de la sangre involucran un vector artpodo, as como tambin un
husped humano, en tanto que muchos de los parsitos que causan infecciones
titulares utilizan diversos insectos para desarrollar los estadios intermedios de
sus ciclos vitales.
-
- Los parsitos que infectan la sangre pueden hallarse intracelularmente, en
los eritrocitos o extracelularmente en el plasma. Los grandes organismos
extracelulares, como las microfilarias y los tripasnosomas pueden verse por
examen microscopio directo de frotis de sangre sin teir. Las formas
parasitarias intracelulares ms pequeas requieren un frotis teido, a fin de
visualizar sus estructuras internas.
-
- Los parsitos de los tejidos pueden ser intracelulares o extracelulares,
segn la especie y la fase del ciclo parasitario o la forma asumida en un caso
determinado.
-
-
- A continuacin se dar un esquema de los parsitos de la sangre y de los
tejidos que infectan a los seres humanos y se mencionarn algunos de los
mtodos de laboratorio que se utilizan con mayor frecuencia.
-
-
I. PARSITO DE LA SANGRE
- B. EXTRACELULARES
-
A. INTRACELULARES
-
- 1. Microfilarias:
- Plasmodium spp
- Babesia spp Wuchereria bancrofti
- Brugia Malawi
- Loa loa
- Mansonella ozzardi
-
- 2. Protozoos:
-
- Tripanosoma cruzi
- Tripanosoma gambiense
- Tripanosoma rhodesiense.

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 39/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-
-
-
-
- II. PARSITO DE LOS TEJIDOS
-
-
A. INTRACELULARES B. ESTRACELULARES
-
-
-
1. Cutaneos: 1. Cutaneos:
-
-
Leishmania tropica Onchocerca volvulus
-
Leishmania braziliensis
-
2. Visceral:
-
2. Visceral:
-
Trichinella spiralis
-
Leishmania donovani Echinococcus granulosus
-
Toxoplasma gondil Cysticercus cellulosae
-
Tripanosoma cruzi Toxocara spp
-
Pneumocystis carinii
-
-
-
- I. DIAGNOSTICO DE MALARIA
-
- El diagnstico se establece mediante la demostracin de los pasmodios en
la sangre; lo cual se logra realizando un frotis de sangre bajo la tcnica de gota
gruesa obtenida momentos antes del acceso fbril. Este mtodo permite la
identificacin morfolgica de las fases evolutivas del ciclo eritrocitico y la
identificacin entre las especies de Plasmodium.
-
- En forma indirecta se puede investigar la presencia de Plasmodium en un
paciente, mediante reacciones sexolgicas como: inmunofluorescencia
indirecta, hemaglutinacin indirecta, ELISA y radioinmunoensayo.
-
- MATERIAL
-
Un ratn infectado con Plasmodium yoelli.
Soporte y charola de tincin para portaobjetos
Colorante Giemsa en frasco gotero
Metal en frasco gotero
Microscopio, portaobjetos y papel seda
Aceite de inmersin
Preparaciones fijas de: Plasmodium vivax, Plasmodium malarie y
plasmodium falciparum.
-
- METODO:
-
- SE DEBERN USAR GUANTES DE CIRUGA AL MOMENTO DE TOMAR LAS
MUESTRAS DE SANGRE PARA HACER LOS FROTIS.
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 40/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

1. En un portaobjetos hacer un frotis (preparacin extensin fina) con sangre de la


cola de un ratn inoculado con plasmodium.
-
-
2. En otro portaobjetos, colocar una gotita de sangre y usando la esquina de un
portaobjetos, extenderla con movimiento rotatorio, a manera de formar una
pequea rea de aproximadamente 1 cm. De dimetro: gota gruesa.
-
3. Colocar el frotis (extensin fina) ligeramente inclinado y dejar escurrir metanol.
-
4. El portaobjetos con la muestra en gota gruesa se lava con agua.
-
5. Dejar secar al aire ambos portaobjetos.
-
6. Preparar una solucin de Giensa al 10 % en agua amortiguada, destilada o
demonizada, de pH 7.2 si se necesita poca cantidad, 3 gotas de colorante por un
ml de agua amortiguada bastarn para conseguir la concentracin correcta de
solucin de Giemsa.
-
7. Verter suavemente el colorante sobre el portaobjetos usado para ello una pipeta o
un gotero. Otra posibilidad es colocar los portaobjetos hacia abajo en un disco de
tincin cncavo e introducirlo con pipeta Pasteur el colorante por debajo del
portaobjetos.
-
8. Dejar actuar el colorante de 5 a 10 minutos.
-
9. Eliminar suavemente el colorante del portaobjetos aadiendo agua limpia gota a
gota sin inclinarlo ya que as quedar un depsito de espuma sobre la preparacin.
-
10. Colocar el portaobjetos en la gradilla o soporte, con la cara de la extensin hacia
abajo, para que escurra y se seque, asegurndose de que la extensin no toque el
soporte.
-
11. Observar al microscopio con objetivo de 100x e identificar los estadios de
trofozoitos, esquizontes y gametocitos.
-
- INTERPRETACIN
-
- Cuando se examinan al microscopio los frtis sanguneos finos, debe
prestarse atencin a los eritrocitos y a los parsitos que hay dentro de ellos;
prestar especial atencin a la presencia del punteado o moteado de Schuffner,
ya que es un signo diferencial para Plasmodium vivax.
-
- En el examen microscpico de las preparaciones teidas con gota gruesa,
los eritrocitos quedan lisados, de modo que el diagnstico se basa en el
aspecto del parsito, los cuales sueles ser ms compactos y densos que en las
extensiones finas. El aspecto que deben presentar las preparaciones es el
siguiente:
-
El fondo debe estar limpio, exento de residuos con un color gris plido moteado
debido a la lisis de los eritrocitos.
Los ncleos de los leucocitos estarn teidos de morado fuerte y vivo.

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 41/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

Los parsitos paldicos estn bien definidos, presentan la cromatina de color rojo
oscuro y el citoplasma de color azul violaceo claro.
-
II. DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS:
- TRIPANOSOMIASIS AMERICANA
-
-
- La enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana es causada por el
flagelado Tripanosoma cruzi, que generalmente es transmitido al humano por las heces
de un artrpodo: Triatoma sp (triatominos). El parsito en el humano, ataca clulas del
sistema reticuloendotelia, particularmente a las del miocardio, esfago o colon.
-
- Si bien en un paciente, los datos clnicos y epidemiolgicos pueden hacer
sospechar de la enfermedad de Chagas, los exmenes parasicolgicos pertinentes
confirmar la presencia del agente causal.
-
- El examen de sangre es la prueba clsica para la deteccin de
tripomastigotes, el cual consiste del examen directo y el frotis fino o grueso
teido con Giemsa.
-
- Tambin es recomendable hacer tcnicas de concentracin de sangre
mediante los mtodos de Stronto Woo (en hematocrito). Adems hay pruebas
inmunolgicas que de manera indirecta apoyan al diagnstico durante la fase
crnica y son tiles en estudios epidemiolgicos. Las ms usadas son:
inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinacin indirecta,
contrainmunoelectroforesis, doble difusin y ELISA.
-
- El xenodiagnstico es el nico diagnostico til para detectar el parsito
durante la ase crnica de la enfermedad. Se basa en la multiplicacin del
Tripanosoma cruzi en el tubo digestivo de triatominos y el examen posterior
de sus heces, durante uno a tres meses.
-
- MATERIAL
-
Ejemplares de Tiatoma sp
Ratn infectado con T. cruzi
Suero fisiolgico en frasco gotero
Pipeta pasteur estriles
Portaobjetos, cubreobjetos
Guantes y cubrebocas
Preparaciones fijas de T. cruzi
Microscopio y aceite de inmersin
Metano el frasco gotero.
-
- 1. EXAMEN DE SANGRE DIRECTO O EN FRESCO
-
-
- Este mtodo constituye la forma ms fcil y barata de revelar la presencia de
parsitos en la sangre, pero es la prueba menos sensible.
-
-
- METODO

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 42/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-
- SE DEBERN USAR GUANTES DE CIRUGA AL MOMENTO DE TOMAR LAS
MUESTRAS DE SANGRE Y AL HACER LOS FROTIS.
-
-
1. Cortar con unas tijeras un fragmento de a porcin distal de la cola de un ratn
inoculado con T. cruzi
-
2. Recoger la primera gota de sangre que aparezca, directamente en el centro de un
portaobjeto.
-
-
3. Aadir una gota de igual tamao de solucin salina fisiolgica Mezclar la sangre y
la solucin utilizando una esquina de un cubreobjetos y cubrir con ste la
preparacin.
-
4. Preparar con otros portaobjetos un frotis de extensin fina y una gota gruesa para l
teido de Giemsa, utilizando para ste ultimo la esquina de un portaobjeto para
extender la gota con movimiento rotatorio, a manera de formar una pequea rea
de un cm. De dimetro: gota gruesa.
-
- Continuar con la preparacin en fresco.
-
5. Examinar a preparacin fresca sistemticamente al microscopio con objetivo de
10x con poca abertura del diafragma. El primer signo de la presencia de
Tripanosomas vivos es un movimiento rpido entre los glbulos rojos.
-
-
- 2.- PREPARACION FINA Y DE GOTA GRUESA CON TINCION DE GIEMSA.
-
- Este mtodo es ms sensible que la extensin hmeda porque se observa
ms cantidad de sangre por campo.
-
- Continuar trabajando con los frotis fino y de gota gruesa.
-
1. Dejar secar a la temperatura ambiente el frotis fino y el de gota gruesa.
-
2. Colocar el frotis fino ligeramente inclinado y dejar escurrir sobre l un poco de
metanol.
-
3. El frotis de gota gruesa se deber lavar con agua dejando escurrir sta
suavemente sobre el frotis ligeramente inclinado.
-
4. Dejar secar al aire ambos frotis
-
5. Colocar ambas preparaciones en posicin invertida e inclinada en una charolita de
tincin y agregar con una pipeta pasteur el colorante de Giemsa, teniendo cuidado
de que el colorante est en contacto con la parte que contiene la sangre, es decir
con la parte posterior del portaobjetos, no sobre la cara anterior.
-
6. Dejar actuar el colorante durante 30 min, agitando dos veces la gota gruesa para
remover la hemoglobina.
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 43/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

7. Retirar los portas de la charolita y ligeramente inclinados, lavarlos suavemente con


agua por tiempo breve.
-
8. Dejar secar al aire ambos portaobjetos.
-
9. Observar a microscopio con el objeto 100x e identificar los tripomastigotes de
Tripanosoma cruzi en los dos frotis.
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 44/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

- REFERENCIAS
-
-
-
-
- 1) KONEMAN; ALLEN; DOWELL; SOMMERS. Diagnstico microbiolgico; Editorial
- Mdica Panamericana; Mxico, 1991.
-
- 2) DE LA CRUZ OTERO, CARMEN; et al. Prcticas de Parasitologa; Mxico,
1992.
-
-
- 3) SALAZAR DE HARO Manual de tcnicas para el diagnstico morfolgico de
las
- parasitosis; Editorial Francisco Mndez; Mxico, 1980.
-
-
- 4) OMS: Laboratorio de Parasitologa; Organizacin Mundial de la Salud; 1990.
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 45/46
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa

-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-

Profra. Ma. Leticia Garca Gmez


Pg. 46/46

You might also like