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Facultad de Medicina
Laboratorio de Parasitologa
INDICE PAGIN
A
INTRODUCCIN 1
.
PRACTICA 1 3
Recoleccin, manejo y conservacin de la materia fecal (HECES)
para el diagnstico de las parasitosis intestinales
.
PRACTICA 2
Anlisis de la materia fecal : Coproparasitoscpico
.
PRACTICA 3 20
Mtodos de concentracin cualitativos de quistes y huevos de la
materia fecal por flotacin.
.
PRACTICA 4 22
Mtodos de concentracin cualitativos de quistes y huevos por
sedimentacin
.
PRACTICTICA 5 26
Mtodos de concentracin cuantitativos para huevos.
.
PRACTICA 6 29
Tcnicas de tincin permanente para muestras fecales
.
PRACTICA 7 32
Exmenes especiales para el diagnostico de parasitosis del aparata
digestivo
.
PRACTICA 8 37
Diagnostico de parasitosis de la sangre y tejidos
LABORATORIO DE PARASITOLOGIA
INTRODUCCIN
PRCTICA 1
1. Raspado perianal
2. Materia fecal obtenida por defecacin (heces fecales) o por endoscopia de colon
3. Contenido duodenal obtenido por endoscopia o por cpsula de Beat
Dado que los medicamentos que contienen aceite mineral, bismuto, antibitico,
antimalricos u otras substancias qumicas que pueden comprometer la deteccin de
protozoarias intestinales, el examen de las muestras debe realizarse despus de una
semana al menos de interrumpir la terapia. As mismo, los pacientes que han recibido
un enema de bario.
RECOLECCIN
Las muestras deben llevarse al laboratorio tan pronto como sea posible (por
ejemplo media hora) despus de la defecacin, debido a que al poco tiempo de ser
CONSERVACIN
-
- 4) Tapar el frasco hermticamente.
-
- 5) Etiquetar con los datos del paciente.
-
- 6) Llevar la muestra al laboratorio.
-
- NOTA:
-
- Para muestras liquidas sospechosas de trofozoitos de Entamoeba
histolytica, se recomienda no usar conservadores, o en su defecto utilizar
el de PVA.
-
- CUESTIONARIO:
-
- 1.-
-
-
- PRACTICA 2
-
- ANANLISIS DE LA MATERIA FECAL:
- COPROPARASITOSCOPICO I
-
-
- El anlisis de las heces fecales consiste bsicamente en realizar varios
exmenes para identificar los agentes parasitarios del intestino, los cuales son:
-
- I.- Examen macroscpico (Prctica 2)
-
- II.- Examen microscpico directo o en fresco (Prctica 2)
-
- III.- Mtodos de concentracin cualitativos para quistes y
- Huevos:
-
a) Flotacin (Prctica 3)
b) sedimentacin (Prctica 4)
-
- IV.- Mtodos de concentracin cuantitativos para huevos
- (Prctica 5)
-
- V.- Mtodos de tincin en permanente (Prctica 6)
-
- Es de gran importancia para el mdico o el parasitlogos conocer el fin
para el que cada uno de los anlisis o tcnicas arriba enlistados se han
implementado; por lo que a continuacin se mencionara en trminos generales la
utilidad de cada uno de ellos:
-
- I. EXAMEN MACROSCIPICO. Es el examen visual de la materia fecal el cual
se debe efectuar siempre ya que es til tanto para informar al mdico de hallazgos
significativos como para orientar al parasiclogo hacia que tcnica o metodologa
dirigir su anlisis; de tal modo, el examen nunca se debe omitir , ya que reportara
los siguientes datos:
-
- a) Permite detectar la presencia de sustancias extraas como varios aceites
u otros materiales inaceptables que bien pueden dificultar su procesamiento o
pueden ser un dato significativo para el mdico o investigador.
-
- b) La observacin de sangre o mucina deber reportarse as como
considerar especialmente estas partes de la materia fecal para el examen
microscpico en fresco con soluciones salinas, ya que tales sustancias pueden
provenir de ulceras o abscesos purulentos, donde la concentracin de Entamoeba
histolytica puede ser mayor.
-
- c) Las muestras lquidas debern remitirse inmediatamente al examen
micro para comprobar la presencia de trofozoitos.
-
- II. EXAMEN MICROSCOPICO O EN FRESCO: Para una optima detencin e
identificacin de parsitos en las heces, estas deben examinarse en fresco
directamente de la muestra de materia fecal sin fijadores qumicos. Este examen
se debe efectuar utilizando preparaciones hmedas de materia fecal sin fijadores
entre porta y cubreobjetos en solucin salina isotnica (suero fisiolgico) y solucin
de lugol. Se recomienda tambin realizar preparaciones con azul de metileno
- Movimientos de flagelos:
- Chilomastix mesnili
- Retortamonas intestinalis
- Enteronomas hominis
-
-
-
-
-
PSEUDOPARASITOS3
-
-
- En el examen macroscpico de las heces, para la busca de
parsitos intestinales, se debe tener presente la existencia de elementos
tales como clulas epiteliales, moco, residuos no digeridos y otros elementos
que contribuyen normalmente a la formacin de las heces. Algunos de ellos
pueden ser confundidos con estructuras parasitarias, por lo que se les
conoce como pseudoparasitos. Son algunos de los parsitos:
-
a) Macroparasitos
-
- Los restos de vegetales pueden simular ejemplares adultos de helmintos; as
los restos parcialmente digeridos de los ctricos, semejan adultos de
Enterobius vermiculares.
-
b) microscpicos
-
Gotas de grasa y levaduras, pueden confundirse con quistes
de protozoos.
-
Pelos vegetales semejan larvas de nematodos.
-
-
Granos de polen teidos con lugol, deben diferenciarse de
los huevos de Taenia, buscando en estos la presencia de los
ganchos de la oncosfera.
-
Partculas de almidn y/o de celulosa simulan entre otros,
huevos de scaris lumbricoides.
-
-
Los macrfagos y las clulas epiteliales deben diferenciarse
de los trofozoitos de amibas, particularmente de los de
Entamoeba histolytica.
-
-
Los macrfagos y las clulas epiteliales deben diferenciarse
de los trofozoitos de amibas, particularmente de los
Entamoeba histolytica.
-
-
-
-
-
-
-
- -
- I. EXMEN MACROSCOPICO -
DE LAS HECES -
- 1.- Tan pronto como se reciba la -
muestra de excremento en el -
laboratorio, observar su -
consistencia (grado de -
humedad) y anotar una de las -
siguientes letras en el -
Recipiente: F (formada), B -
(blanda), S (suelta) o A (Acuosa). -
- Si se observan mucosidades, -
antese la letra M, y si se
observa sangre escrbase Sa. Por
-
ejemplo, una deposicin suelta -
con sangre y mucosidad se - Formada
escribira con las letras S, Sa, M.
la consistencia o grado de -
humedad servir de orientacin
para saber si ser ms probable
-
encontrar los protozoario en fase -
de trofozoito o de quiste. -
- -
- 2.- Si se reciben varias muestras -
al mismo tiempo, hay que -
examinar primero las que - Blanda
contengan sangre y -
mucosidades y a continuacin -
las muestras liquidas. Estas -
muestras son las que con ms -
probabilidad contienen -
trofozoitos amibianos, que -
mueren al poco tiempo de la -
excrecin, por lo que deben -
examinarse durante la primera -
hora que sigue de esta.
- - Suelta
- 3.- Las heces formadas pueden -
examinarse en cualquier -
momento del primer da, pero no -
deben dejarse de un da para -
otro (los quistes pueden -
desintegrarse. -
- -
- - Suelta o
-
- - Liquid
-
-
a
- -
- -
- -
- -
- -
- -
-
- II. EXAMEN MICROSCOPICO DE LAS HECES:
PREPARACIONES EN FRESCO
-
- Un frotis en fresco debe prepararse directamente a partir de material
fecal o de muestras concentradas. Las principales formas de frotis en fresco
o tambin llamadas preparaciones hmedas que deben usarse en cada
examen fecal son las realizadas con solucin salina, con solucin yodada y
con azul de metileno amortiguado:
-
- La preparacin con solucin salina se usa en el examen microscpico se utiliza
principalmente para teir el glucogno y los ncleos de los quistes. Por lo
general, con esta preparacin pueden identificarse los quistes.
-
- La preparacin con azul de metileno amortiguado (AMA) debe hacerse cada vez
que se observen trofozoitos amibianos en una preparacin salina, o cuando se
sospeche su presencia. El AMA tie los trofozoitos amibianos, pero no sus
quistes; tampoco tie los trofozoitos y quistes de flagelados. La coloracin con
AMA solo debe usarse para las muestras frescas, ya que las muestras tratadas
con conservadores qumicos no albergan organismos mviles.
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
Portaobjetos
Cubreobjetos de 22 x 22
Frascos goteros con:
Solucin salina isotnica (NaCl 0.85%)
Yodo de lugol
Azul de metileno amortiguado
Etiquetas adhesivas o marcador de cera
Aplicadores de madera
-
-
- II.1. PREPARACIONES EN FRESCO:
- SOLUCION SALINA Y SOLUCION YODADA
-
1. Con un lpiz de cera o una etiqueta escribir el nombre o el nmero de la
muestra en la parte izquierda del portaobjetos.
-
2. Colocar en el extremo de un portaobjetos limpio una gota de solucin de cloruro
de sodio 0.85% y en otro extremo una gota de lugol.
-
3. Con un aplicador tomar una pequea cantidad de muestra que contenga moco
o sangre.
-
- NOTA:
- Excremento Formado: Tmese la porcin de excremento de modo que
contenga material del exterior y del interior de la muestra.
-
- Excremento con mucosidades: Si hay mucosidades, rotlese un segundo
portaobjeto con el nombre del paciente. Colquese una gota de solucin salina en el
portaobjetos, tmese una pequea porcin de mucosidad y mzclese con la solucin
-
-
-
-
-
-
-
- Trofozoito con 2 o ms flagelos
- CLAVE DE IDENTIFICACIN DE TROFOZOITOS FLAGELADOS EN
EXTENSIONES TEIDAS.
-
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-
-
-
- CLAVE DE IDENTIFICACIN DE QUISTES 5 oDE
msAMEBAS
flagelos Y FLAGETADOS
2 flagelos, - 4 flagelos
1 ncleo, -
tamao 4-9um -
-
- QUISTE
-
-
-
-
Con filamentos dentro del
Retortamonas quiste4-8
Tamao deum,
flagelado. Tamao 6-20 um Sin filamentos crematina perinuclear
-
Intestinalis - 1 ncleo 1 ncleo,
- 1 citosoma
-
- Trofozoto
5 flagelos, en forma de pera, 4 pares de flagelos, 2 n
-
1 ncleo,rganos parabasalos, tamao 10-20 um
En -forma de limn, Quiste oval Membrana ondulante
Ausencia de de cromtica perinuclear Presencia de crematina perin
- Un ncleo,
EnteromonasPared Gruesa Chilomastix (pocas veces visibles), tamao 8-20 um
-
Tamao 5.9 umhominis mesnill
En forma de pera, -
un ncleo -
tamao 4.7 um -
-
Tamao < 1 um Tamao
Retortamonas - 4 ncleos,
Ncleo grande y excntrico vacuela teida con yodo
Intestinalis -Chilomastix Grandes masas
- de cromatina
1, 2 0 4 ncleos
-
Tricomonas masa de
- Tamao 4.40 um Taamo 10-14um glucgeno.
hominis
- 4 ncleos Cuerpos parabesales
- (generalmente 2) 4 ncleos pilados en un extremo.
-
-
Nota: Tricomonas
- hominis no tiene fase de quiste. Endolimax Giardia
Lodamoeba
nana (quistelamblia
inmaduro)
- Butschli
-
-
- 1, 2 o 4 ncleos masa de gluggeno 4
-
- Enteromonas Giardia
hominis
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Identificacin
- de parsitos intestinales : helmintos
-
-
- TAMAOS RELATIVOS DE LOS HUEVOS DE HELMINTOS
-
-
90 -
-
-
60
-
-
-
30
150
120
90
60
30
- PRACTICA 4
-
-
- COPROPARASITOSCOPIO III
-
-
- Mtodos de concentracin cualitativos de quistes y huevos de la
materia fecal por sedimentacin.
-
-
- Este tipo de anlisis se fundamenta bajo el principio de que la densidad de
los quistes de protozoarios y huevos de helmintos es mayor que la de las
suspensiones de materia fecal en agua o solucin salina, por lo cual tienden a
sedimentarse.
-
- Este proceso se puede acelerar por centrifugacin ligera. Se aade con
frecuencia a la suspensin fecal una mezcla formol-ter para separar los desechos y fijar
las formas parasitarias que puedan estar presentes. Los mtodos ms conocidos y
utilizados son: a) el mtodo de Ritchie y b) el mtodo de Carles-Barthelemy; mismos que
se realizarn durante esta prctica.
-
- I. MTODO DE RITCHIE
-
- Este mtodo fue diseado por Richie en 1948, aunque result ser muy
semejante al de Carles-Barthelemy (1917).
-
- Se usa para huevos (especialmente til para Fasciola Heptica), quistes y
larvas, no importa la densidad que tenga: hace muy buena concentracin de
estas formas parasitarias pues elimina bastantes detritus orgnicos con el ter.
El motivo por el cual se utiliza el formol es para mantener la integridad de las
formas parasitarias que concentra, por sus caractersticas de fijador. La
generalidad de los parasiclogos conoce este mtodo como formol-ter.
-
- Con esta tcnica, las preparaciones quedan muy sucias porque con la
sedimentacin, aparte de concentrarse formas parasitarias, se logran
concentrar otros materiales.
-
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
Solucin salina isotnica
Lugol parasicolgico
Solucin de formaldehido al 10%
Embudos de 5cm de dimetro.
Vaso de precipitados de 50 ml.
Pipeta Pasteur con bulbo.
Portaobjetos y cubreobjetos.
Tubos cnicos para centrifuga de 15ml
Centrfuga con camisas para los tubos cnicos.
Microscopio compuesto.
Gasa cortada en cuadros de 15 cm. De lado
Aplicadores de madera.
Gradilla.
-
-
-
-
- MTODO:
-
1. Con el aplicador o abatelenguas de madera, se colocan 1 a 2 gramos
aproximadamente de material en el vaso de precipitados y se aaden 10ml.
De solucin salina, homogeneizando con el mismo aplicador.
-
2. Se pasa la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo y
recibiendo el contenido en el tubo cnico.
-
3. Se centrifuga 1 a 2,000rpm.
-
4. Se decanta el sobrenadante y se resuspender el sedimento con solucin
salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces que sean
necesarias hasta que el sobrenadante se claro.
-
5. Al ltimo sedimento se le agregan 10 ml. De solucin de formaldehido, se
mezcla y se deja reposar durante 10 minutos.
-
6. Se aaden 5 ml. De ter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se
agitan enrgicamente durante 30 seg.
-
7. Se centrifuga durante 2 min a 1,500 rpm
-
-
8. Despus de centrifugar, se observan cuatro capas: primera, ter en la
superficie; segunda, un tapn de restos fecales; terceros, formaldehido; y
cuarta, sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos
parasitarios.
-
9. Se decantan las tres primeras capas de la mezcla, quedando solo el
sedimento o cuarta capa, a la cual se le agrega una gota de lugol y se agita
por golpeteo.
-
10. Con una pipeta Pasteur con bulbo se extrae una gota del sedimento y se
coloca en un portaobjetos; se cubre con un cubreobjetos evitando la
formacin de burbujas.
-
11. Se observa la preparacin en el microscopio con objetivos 10x y 40x. se
reportan los objetos parasitarios e identificados.
-
- PRECAUCIONES:
-
- El rea de trabajo debe estar libre de mecheros encendidos, pues el ter es
inflamante. Al mezclar y agitar la suspensin, despus de agregar el ter el
tubo debe de destaparse lentamente, para evitar que el contenido salga
bruscamente al exterior. Procurar mantener limpia la zona de trabajo para
evitar posibles infecciones con la materia fecal.
-
-
-
- II. MTODO DE CARLES-BARTHELEMY
-
- Este mtodo hace una buena concentracin de quistes, huevos y larvas;
una de sus limitaciones es que resulta antieconmico por los reactivos que se
utilizan, por lo que en la actualidad se usa poco.
-
-
- MATERIAL
-
Solucin salina formolada (Carles I)
Solucin ctrica formulada (Carles II)
Lugol parasicolgico
Tubos de 13x100mm
Portaobjetos de 25 x 75mm
Cubreobjetos de 22 x 22mm
Pipeta Pasteur con bulbo
Microscopio
Centrifuga y tubos cnicos
Gasa cortada en cuadros de 15cm de lado
Tapones de caucho
Palillos o aplicaciones de madera
-
- MTODO
-
1. Con un aplicador o un abatelenguas se colocan 1 a 2 gramos de material
fecal en 10ml aproximadamente de solucin Carles I, homogeneizando
con el mismo aplicador.
-
2. Pasar la suspensin a travs de la gasa, colocada a manera de filtro en el
embudo adaptado a un tubo de centrifuga.
-
3. Centrifugar a 1800 rpm. Durante 60 segundos.
-
4. Decantar y agregar al sedimento Carles II, hasta llenar unos dos tercios
del tubo.
-
5. Agitar la fuerza y aadir el ter hasta centmetro y medio del borde.
-
6. Tapar el tubo con un tapn de caucho y agitar fuertemente hasta lograr la
homogeneizacin de las sustancias que contiene.
-
7. Destapar con cuidado el tubo para evitar la proyeccin de la mezcla y
centrifugar durante 30 segundos a 1800 rpm.
-
8. Con un palillo o un aplicador de madera, se rompe el tapn de las haces,
grasas y otros restos, agitando ligeramente con el palillo.
-
9. Se vuelve a centrifugar durante otros 30 seg.
-
PRACTICA 5
-
-
-
- MTODO DE CONCENTRACIN CUANTITATIVOS PARA HUEVOS DE LA
MATERIA FECAL
-
-
-
- Estos mtodos son utilizados para hacer una evaluacin de la intensidad de
ciertas helmintisis como : ascariasis, tricocefalosis, uncinarias, himenolepiasis,
estrongiloidosis y esquistosomiasis intestinal: a continuacin se mencionarn
algunas de las ms usuales.
-
-
- I. EXAMEN CUANTITATIVO DE STOLL
-
- Esta tcnica fue idea y desarrollada por Stoll para cuantificacin de huevos
de uncinarias. Dadas las caractersticas del mtodo es uno de los ms exitosos
en encuestas epidemiolgicas no slo en uncinarisis sino en muchas
helmintisis. Fue publicado en 1923, su fundamento es bsicamente
aritmtico, los clculos son muy simples tomando en consideracin las
diluciones empleadas
-
-
- II. MTODO CUANTITATIVO DE FERREIRA.
-
-
- Es un mto dode concentracin de una suspensin de materia fecal 1:10
adems de ser cuantitativo, Biagi y Cols, describieron este mtodo en Mxico
en 1959, el cul fue puesto en prctica por Ferreira y Abeu, basados
probablemente en el mtodo de Faust. Rene las caractersticas de un CPS de
concentracin y un cuantitativo; sirve para el recuento de larvas y huevos y
hace una buena concentracin de quistes. Sus limitaciones son variables pues
el equipo y material que se usa no se puede conseguir fcilmente en el
comercio. Por otro lado; adems e uso del factor por el que se multiplica para
obtener la cuenta de huevos o larvas por gramos de haces, no ha sido aclarado
en la descripcin de esta tcnica.
-
- III. MTODO DE KATO.
-
- Este es un examen de Frotis grueso que utiliza en lugar de un cubreobjetos
de vidrio un rectngulo de celofn. En 1954 Kato y Miura, describieron la
tcnica del frotis grueso para recuentos de huevos, Martn y Beaver, en 1968,
le hicieron unas modificaciones con las cuales eliminaban artefactos gruesos y
disminuan el aclaracin excesivo. Es til para diagnosticar helmintisis y,
adems, cuantificar el hallazgo de huevos realmente la concentracin de
huevos por gramo de heces pus se trabaja con la materia fecal sin mezcla con
ninguna solucin.
-
- IV. MTODO DE KATO-KATZ
-
- La tcnica de examen de frotis fecales gruesos con celofn ha demostrado
su eficacia en el diagnstico de la esquistosomisis y las helmintisis
intestinales. Este tipo de frotis puede prepararse y consevarse en cajas para
PRACTICA 6
-
-
-
- TECNICAS DE TINCIN PERMANENTE PARA MUESTRA FECALES
-
-
-
- Normalmente no suele recurrirse a los mtodos de tincin permanente para
el diagnstico, porque no son necesarios para la identificacin de huevos o
larvas de gusanos. No obstante, a veces es preciso utilizarlos con los
siguientes fiens:
-
-
a) Identificar los oocistos de Criptosporidium.
b) Identificar de trofozotos de protozoos, en caso de duda.
c) Confirmacin de a especie a la que pertenecen los quistes de protozoos, en
caso de duda.
d) Mantenimiento de un registro permanente.
e) Envo a un laboratorio de referencia para obtener la opinin de un experto.
-
-
- Si bien. Los frotis en fresco para el examen microscpico directo facilitan la
rpida deteccin de los parsitos intestinales presentes en materia fecal, la deteccin de
entamoeba histolytica de otros protozoarios puede acrecentarse considerablemente
mediante preparaciones tenidas en forma permanente.
-
- Generalmente se utilizan dos tinciones permanentes para mostrar la presencia
de protozoarios intestinales:
-
1. Tincin tricrmica de Gomori y
2. Tincin de hematoxilina frrica
-
-
- La tincin tricrmica se recomienda generalmente para los laboratorios clnicos
porque es sencilla y de fcil ejecucin y produce resultados uniformemente buenos con
material fresco o preservado con PVA. La segunda. Es la tcnica tradicional utilizada para
la ms exacta definicin de la morfologa de los parsitos intestinales, solo que el
procedimiento es complicado y debe ser llevado a cabo por una persona experimentada a
fin de lograr los mejores resultados.
- Por lo que respecta a la identificacin de los oocitos de Criptosporidium que
aparecen en las heces fecales, stos pueden concentrarse usando una tcnica modificada
de formol-ter, pero deben identificarse por mtodos de coloracin. El mtodo
recomendado es la tcnica de Kinyoun o Zhiel-Neelsen modificado; otra posibilidad es la
tincin con safranina-azul de metileno.
-
- I. TINCION TRICROMICA
-
- Debido a que el ndice de refraccin de los quistes de los protozoarios y de
algunos huevos de helmintos es casi semejante al del agua, se requiere
tcnicas de tincin para estudiar los detalles de su estructura interna. Las
tinciones permanentes aumentan tambin la deteccin de Entamoeba
histolytica, la amiba patgena ms importante para el hombre. La tincin
tricrmica es un procedimiento rpido que d buenos resultados para fines de
rutina; sta es una modificacin de la tincin de Gomori.
-
-
-
-
-
- MATERIAL Y REACTIVOS
-
- Solucin fijadora de Schaudinn
- Colorante tricrmico de Gomori
- Portaobjetos, equipo de tincin, microscopio.
-
- MTODO
-
- Se recomienda teir paralelamente con el material desconocido varios frotis
que contengan organismos parasitarios de propiedades tintoriales conocidas.
-
1. Preparar dos frotis de materia fecal fresca en portaobjetos, utilizando un aplicador
o un pincel desechable. El frotis debe ser lo suficientemente fino como para poder
leer un impreso a travs de l.
-
2. Sumergir inmediatamente los preparados en la solucin fijadora de Schaudinn y
dejarlos como mnimo 30 minutos, aunque es preferibles prolongar la fijacin hasta
el da siguiente.
-
3. Si la muestra es lquida, mezclar varias gotas de sta con 3 a 4 gotas de PVA en un
portaobjetos y dejar secar durante varias horas en una incubadora a 37. C.
eliminar el excedente de la mezcla y preparar frotis en otros portaobjetos y
dejarlos secar por varias horas en incubadora a 37. C.
-
4. Una vez fijados y secos los frotis, colocar los portaobjetos en alcohol etlico al 70%
y dejar 5min.
-
5. Lavar con dos cambios de alcohol al 70% uno durante 5 min. Y otro de 2 a 5 min.
-
6. Lavar con solucin de colorante tricromo durante 10 min.
-
7. Lavar con alcohol etlico al 90% acidificado (cido actico al 1%) no ms de 5
segundos.
-
8. Sumergir una vez en alcohol etlico al 100%.
-
9. Lavar con dos cambios de alcohol etlico al 100% de 2 a 5 min.
-
10. Eliminar el alcohol con dos cambios de xileno o tolueno, de 2 a 5 min. Cada uno.
-
11. Cubrir con medio de montaje y colocar un cubreobjetos de espesor #1.
-
12. Examinar con objetivo de inmersin en aceite para detectar formas parsitarias.
-
-
-
- INTERPRETACIN
-
PRACTICA 7
-
-
-
- EXMENES ESPECIALES PARA EL DIAGNSTICO DE PARASITOSIS DEL
APARATO DIGESTIVO
-
-
-
- En este grupo de exmenes se encuentran todas aquellas tcnicas que
auxilian para el diagnstico del tubo digestivo, como es el caso de fasciolosis,
en la que auxilian para el diagnstico del tubo digestivo, como es el caso de
fasciolosis, en la que los adultos se encuentran en conductos biliares. Algunos
de los mtodos implementados para este tipo de diagnsticos especiales se
mencionarn a continuacin:
-
-
- I. TAMIZADO
-
- Desde hace muchos aos este proceso se ha utilizado para separar mezclas
formadas por partculas de diferentes tamaos. Es muy utilizado en anlisis
cualitativos y se considera un mtodo mecnico para separacin de mezclas.
Es til para la recuperacin de parsitos macroscpicos o segmentos de stos
en la materia fecal.
-
-
- MATERIAL
-
Solucin salina isotnica
Solucin de alcohol etlico al 70%
Alcohol etlico de 95% 70 partes
Agua destilada 25 partes
-
-
- Mezclar ambas sustancias y guardar en frasco.
-
Cajas de Petri
Microscopio compuesto con lupa o
Microscopio esteroscpico
Tamices de malla de diferente grosor
Abatelenguas
Pinzas de diseccin sin dientes.
-
-
-
- METODO
-
1. Se colocan las tamices, uno sobre otro, en orden decreciente de grosor de
las mallas (la ms gruesa arriba y al final la ms fina).
-
2. Se coloca la materia fecal en el tamiz ms superior, se colocan al chorro del
agua en el fregadero.
-
3. Con el abatelenguas, se mueven los trozos de materia fecal para que vaya
pasando con ms facilidad por los tamices.
-
4. Despus que ya ha pasado toda la materia fecal, se van revisando cada uno
de los tamices, buscando los parsitos que hallan quedado retenidos en
ellos. Por ejemplo, es factible que en primer tamiz hayan quedado
progltidos y pedazos de estrbilo de T. solium T. saginata, en el segundo
tamiz es posible que hallan quedado adultos de Trichuris trichiura y as
sucesivamente.
-
5. Se toman los parsitos o pedazos de ellos con las pinzas de diseccin, y se
pasan a cajas de Petri que previamente se les ha puesto solucin salina
isotnica.
-
6. Si entre las porciones de cstodos que se obtuvieron, hay trozos muy finos,
se examinan con el estereoscpico para buscar el escles.
-
7. Los parsitos as colectados pueden posteriormente, seguir un proceso de
tincin o aclaracin.
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- PRECAUCIONES: a los pacientes que tengan indicado tratamiento contra
teniasis y tamizado, se le pedir que lleve al laboratorio toda la materia fecal evacuada en
24-48 horas, en un frasco limpio de boca ancha y que no se contamine con orina;
previamente se le habr orientado acerca de la tcnica de recoleccin y conservacin de
la muestra.
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- En caso de manejar tenias, es necesario manejar los progltidos con
absoluta precaucin y despus de terminar el proceso lavarse perfectamente,
inclusive con cepillo las mano, para evitar el riesgo de adquirir cisticercosis en
el caso de que se trate de T. solium.
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- MTODO DE GRAHAM
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- Es le clsico mtodo de raspado perianal para obtencin de huevos de
Eterobius vermicularis. Fue Heller en 1876 quien ide el raspado anal para la obtencin
de oxiuros; ms tarde, en 1941, Gram. introduce su tcnica de raspado, utiliznado para
ello, la cinta de celofn adhesiva. Mazzotti, en 1946 recomienda esta tcnica para la
bsqueda de huevos de Taenia sp. En la prctica, tambin se han encontrado huevos de
Ascaris lumbricoides, T. trichiura, e Hymenolepis nana. Este mtodo es el ms til
y ms efectivo para la bsqueda de huevos de Enterobius Vermicularis.
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- MATERIAL
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Portaobjetos de 25 x 75 mm
Microscopio compuesto
Cinta de celofn adhesiva de 12 mm de ancho
Abatelenguas.
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- METODO
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1. Se le dan instrucciones al paciente para que llegue temprano al laboratorio, para la
toma de la muestra; que no se bae ni defeque, para evitar el arrastre mecnico
de los huevos de Enterobius vermicularis.
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2. Se toma el abatelenguas y en un extremo se coloca la cinta con al parte adhesiva
hacia fuera; se sujeta ambos con los dedos pulgares e ndice.
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3. Se coloca el paciente en posicin genupectoral, exponiendo el esfnter anal y el
rerin.
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4. Se coloca el paciente en posicin genupectoral, exponiendo el abatelenguas con la
cinta hacia la izquierda, derecha, arriba y abajo; por ltimo se hace un raspado de
la regin perineal.
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5. Se separa cuidadosamente la cinta del abatelenguas.
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6. Se adhiere al portaobjetos, anotando en un extremo del mismo, nombre, edad y
sexo del paciente.
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7. Se lleva la preparacin al microscopio y se observa con objetivo 10x cambiando al
40x cuando se tenga duda. Se examina sistemticamente toda la preparacin
para la localizacin e identificacin de las formas parasitarias.
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- CAPSULA DUODENAL
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- Beal y Cols publicaron en 1970, una tcnica para la obtencin de muestras
de contenido duodenal, por medio de una cpsula de gelatina que contiene un
hilo absorbente. Se utiliza para demostrar la presencia de parsitos que se
alojan en duodeno y que en un momento crean dificultades para el diagnstico,
como son Giardia lamblia, Strongyloides stercoralis y Fasciola heptica.
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- MATERIAL
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Vidrio de reloj o caja de Petri
Pipeta Pasteur
Portaobjetos de 25 x 75 mm
Cubreobjetos de 22 x 22 mm
Microscopio compuesto
Tela adhesiva
Guantes de cirujano, pinzas
Bulbo de goma
Cpsula de Beal (cpsulas de gelatina, tipo farmacutica, con hilo trenzado de
nylon y algodn, de aproximadamente 90cm de longitud para adultos y de 70
cm. Para nios; en su interior conteniendo un fragmento de plomo cubierto de
silicones; el hilo sale por el extremo posterior de la cpsula y cuando est lista
para administrase, el hilo lo tiene doblado en su interior)
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- METODO
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1. Se le pedir al paciente que se presente en el laboratorio por la maana y en
ayuno.
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2. Se toma la cpsula con las pinzas, del extremo del hilo que sobresale.
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3. Se le dice al paciente que ingiera la cpsula, con jugo o t, mantenindola del
extremo del hilo.
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4. Cuando ya ha tragado la cpsula, el extremo del hilo se fija en la mejilla con cinta
adhesiva.
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5. Se le pide al paciente que camine un rato y enseguida que se recueste del lado
derecho.
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6. Se le deja la cpsula de 30 a 90 minutos.
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7. Pasando el tiempo sealado; se extrae el hilo, mediante una tensin suave y
sostenida; si estuvo en duodeno, presentar el hilo una coloracin verde
amarillenta.
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8. Se exprime con los dedos pulgares e ndice, la porcin del hilo impregnada con el
contenido duodenal y se deposita el producto en el vidrio de reloj con una pequea
cantidad de solucin salina.
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9. Se homogeneiza la muestra y se toma una porcin con la pipeta Pasteur, se coloca
sobre un porta y un cubre.
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10. Se observa con el microscopio con el objetivo 10x y 40x si es necesario.
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- Precauciones: Se debe extraer el hilo con cuidado para no provocar nuseas y
vmito.
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- IV. SONDEO DUODENAL
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- Por medio de esta maniobra se puede obtener contenido duodenal para la
bsqueda de parsitos cuyo hbitat es el duodeno y sobre todo cuando son
problemas de diagnstico.
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- Esta maniobra se realiza bsicamente en un hospital. El mdico es el
encargado de hacerla y enviar el producto al laboratorio.
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- V. METODO DE BAERMAN
- Este es un mtodo para la concentracin de larvas rabditoides y
filariformes. Fue en 1971, cuando Baerman dise el aparato que lleva su
nombre, para recuperar larvas de uncinarias del suelo; en 1922, Cort y Col,
modificaron el mtodo colocando una malla de alambre sobre el embudo y
luego una gasa y usaron agua caliente en lugar de agua a temperatura
ambiente que se describa en la tcnica original.
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- Es un mtodo muy til y conveniente para hacer una buena concentracin
de larvas, se utiliza en Microbiologa agrcola para obtener larvas de nemtodos
de plantas y de vida libre; en Parasitologa Mdica se utiliza para concentrar
PRACTICA 8
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- DIAGNOSTICO DE PARASITOS DE LA SANGRE Y LOS TEJIDOS.
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- Los parsitos se discuten usualmente en forma separada de los que
habitan en el tracto gastrointestinal. Sin embargo, se debe entender que los
parsitos de la sangre y los tejidos, incluyendo nematodos, cstodos y
flagelados, son morfolgicamente similares a sus contrapartes intestinales; as
por ejemplo, plasmodios responsables de la malaria son esporozoarios que
tienen tambin una contraparte intestinal, la Isospora homini, que se pueden
hallar en las heces; pero se piensa que no causa enfermedad primaria en seres
humanos.
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- En general, los ciclos vitales de los parsitos de la sangre y los tejidos son
ms complejos que los de sus contrapartes intestinales. La mayora de los
parsitos de la sangre involucran un vector artpodo, as como tambin un
husped humano, en tanto que muchos de los parsitos que causan infecciones
titulares utilizan diversos insectos para desarrollar los estadios intermedios de
sus ciclos vitales.
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- Los parsitos que infectan la sangre pueden hallarse intracelularmente, en
los eritrocitos o extracelularmente en el plasma. Los grandes organismos
extracelulares, como las microfilarias y los tripasnosomas pueden verse por
examen microscopio directo de frotis de sangre sin teir. Las formas
parasitarias intracelulares ms pequeas requieren un frotis teido, a fin de
visualizar sus estructuras internas.
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- Los parsitos de los tejidos pueden ser intracelulares o extracelulares,
segn la especie y la fase del ciclo parasitario o la forma asumida en un caso
determinado.
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- A continuacin se dar un esquema de los parsitos de la sangre y de los
tejidos que infectan a los seres humanos y se mencionarn algunos de los
mtodos de laboratorio que se utilizan con mayor frecuencia.
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I. PARSITO DE LA SANGRE
- B. EXTRACELULARES
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A. INTRACELULARES
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- 1. Microfilarias:
- Plasmodium spp
- Babesia spp Wuchereria bancrofti
- Brugia Malawi
- Loa loa
- Mansonella ozzardi
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- 2. Protozoos:
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- Tripanosoma cruzi
- Tripanosoma gambiense
- Tripanosoma rhodesiense.
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- II. PARSITO DE LOS TEJIDOS
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A. INTRACELULARES B. ESTRACELULARES
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1. Cutaneos: 1. Cutaneos:
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Leishmania tropica Onchocerca volvulus
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Leishmania braziliensis
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2. Visceral:
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2. Visceral:
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Trichinella spiralis
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Leishmania donovani Echinococcus granulosus
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Toxoplasma gondil Cysticercus cellulosae
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Tripanosoma cruzi Toxocara spp
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Pneumocystis carinii
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- I. DIAGNOSTICO DE MALARIA
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- El diagnstico se establece mediante la demostracin de los pasmodios en
la sangre; lo cual se logra realizando un frotis de sangre bajo la tcnica de gota
gruesa obtenida momentos antes del acceso fbril. Este mtodo permite la
identificacin morfolgica de las fases evolutivas del ciclo eritrocitico y la
identificacin entre las especies de Plasmodium.
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- En forma indirecta se puede investigar la presencia de Plasmodium en un
paciente, mediante reacciones sexolgicas como: inmunofluorescencia
indirecta, hemaglutinacin indirecta, ELISA y radioinmunoensayo.
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- MATERIAL
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Un ratn infectado con Plasmodium yoelli.
Soporte y charola de tincin para portaobjetos
Colorante Giemsa en frasco gotero
Metal en frasco gotero
Microscopio, portaobjetos y papel seda
Aceite de inmersin
Preparaciones fijas de: Plasmodium vivax, Plasmodium malarie y
plasmodium falciparum.
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- METODO:
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- SE DEBERN USAR GUANTES DE CIRUGA AL MOMENTO DE TOMAR LAS
MUESTRAS DE SANGRE PARA HACER LOS FROTIS.
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Los parsitos paldicos estn bien definidos, presentan la cromatina de color rojo
oscuro y el citoplasma de color azul violaceo claro.
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II. DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS:
- TRIPANOSOMIASIS AMERICANA
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- La enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana es causada por el
flagelado Tripanosoma cruzi, que generalmente es transmitido al humano por las heces
de un artrpodo: Triatoma sp (triatominos). El parsito en el humano, ataca clulas del
sistema reticuloendotelia, particularmente a las del miocardio, esfago o colon.
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- Si bien en un paciente, los datos clnicos y epidemiolgicos pueden hacer
sospechar de la enfermedad de Chagas, los exmenes parasicolgicos pertinentes
confirmar la presencia del agente causal.
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- El examen de sangre es la prueba clsica para la deteccin de
tripomastigotes, el cual consiste del examen directo y el frotis fino o grueso
teido con Giemsa.
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- Tambin es recomendable hacer tcnicas de concentracin de sangre
mediante los mtodos de Stronto Woo (en hematocrito). Adems hay pruebas
inmunolgicas que de manera indirecta apoyan al diagnstico durante la fase
crnica y son tiles en estudios epidemiolgicos. Las ms usadas son:
inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinacin indirecta,
contrainmunoelectroforesis, doble difusin y ELISA.
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- El xenodiagnstico es el nico diagnostico til para detectar el parsito
durante la ase crnica de la enfermedad. Se basa en la multiplicacin del
Tripanosoma cruzi en el tubo digestivo de triatominos y el examen posterior
de sus heces, durante uno a tres meses.
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- MATERIAL
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Ejemplares de Tiatoma sp
Ratn infectado con T. cruzi
Suero fisiolgico en frasco gotero
Pipeta pasteur estriles
Portaobjetos, cubreobjetos
Guantes y cubrebocas
Preparaciones fijas de T. cruzi
Microscopio y aceite de inmersin
Metano el frasco gotero.
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- 1. EXAMEN DE SANGRE DIRECTO O EN FRESCO
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- Este mtodo constituye la forma ms fcil y barata de revelar la presencia de
parsitos en la sangre, pero es la prueba menos sensible.
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- METODO
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- SE DEBERN USAR GUANTES DE CIRUGA AL MOMENTO DE TOMAR LAS
MUESTRAS DE SANGRE Y AL HACER LOS FROTIS.
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1. Cortar con unas tijeras un fragmento de a porcin distal de la cola de un ratn
inoculado con T. cruzi
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2. Recoger la primera gota de sangre que aparezca, directamente en el centro de un
portaobjeto.
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3. Aadir una gota de igual tamao de solucin salina fisiolgica Mezclar la sangre y
la solucin utilizando una esquina de un cubreobjetos y cubrir con ste la
preparacin.
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4. Preparar con otros portaobjetos un frotis de extensin fina y una gota gruesa para l
teido de Giemsa, utilizando para ste ultimo la esquina de un portaobjeto para
extender la gota con movimiento rotatorio, a manera de formar una pequea rea
de un cm. De dimetro: gota gruesa.
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- Continuar con la preparacin en fresco.
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5. Examinar a preparacin fresca sistemticamente al microscopio con objetivo de
10x con poca abertura del diafragma. El primer signo de la presencia de
Tripanosomas vivos es un movimiento rpido entre los glbulos rojos.
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- 2.- PREPARACION FINA Y DE GOTA GRUESA CON TINCION DE GIEMSA.
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- Este mtodo es ms sensible que la extensin hmeda porque se observa
ms cantidad de sangre por campo.
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- Continuar trabajando con los frotis fino y de gota gruesa.
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1. Dejar secar a la temperatura ambiente el frotis fino y el de gota gruesa.
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2. Colocar el frotis fino ligeramente inclinado y dejar escurrir sobre l un poco de
metanol.
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3. El frotis de gota gruesa se deber lavar con agua dejando escurrir sta
suavemente sobre el frotis ligeramente inclinado.
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4. Dejar secar al aire ambos frotis
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5. Colocar ambas preparaciones en posicin invertida e inclinada en una charolita de
tincin y agregar con una pipeta pasteur el colorante de Giemsa, teniendo cuidado
de que el colorante est en contacto con la parte que contiene la sangre, es decir
con la parte posterior del portaobjetos, no sobre la cara anterior.
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6. Dejar actuar el colorante durante 30 min, agitando dos veces la gota gruesa para
remover la hemoglobina.
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- REFERENCIAS
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-
- 1) KONEMAN; ALLEN; DOWELL; SOMMERS. Diagnstico microbiolgico; Editorial
- Mdica Panamericana; Mxico, 1991.
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- 2) DE LA CRUZ OTERO, CARMEN; et al. Prcticas de Parasitologa; Mxico,
1992.
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-
- 3) SALAZAR DE HARO Manual de tcnicas para el diagnstico morfolgico de
las
- parasitosis; Editorial Francisco Mndez; Mxico, 1980.
-
-
- 4) OMS: Laboratorio de Parasitologa; Organizacin Mundial de la Salud; 1990.
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