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TRANSCRICAO E

PROCESSAMENTO DE RNA
Nmero de genes para RNA
RNA ribossmico - rRNA
Os rRNAs correspondem a 85 % do RNA total da clula, e so
encontrados nos ribossomos (local onde ocorre a sntese
proteca).

Os rRNAs se agregam a protenas ribossmicas para


integrarem as partculas ribossomais.
O ribossomo um complexo
constitudo por molculas de
RNA individuais e mais de 50
protenas, arranjados em uma
subunidade pequena e uma
subunidade grande.
As protenas das duas
subunidades diferem, assim
como as molculas de rRNA.
O comprimento das molculas
de RNA, a quantidade de
protenas e, consequentemente,
o tamanho das subunidades
diferem entre procariotos e
eucariotos.
Os rRNAs formam estruturas dobradas, muito semelhantes em diferentes
espcies, embora as sequncias de nucleotdeos possam diferir.
Sntese e processamento do pr rRNA
Os ribossomos de eucariotos contm 4 rRNAs
(18S, 28S, 5.8S e 5S). Os trs primeiros so
transcritos como uma nica unidade de transcrio,
na forma de um pr-rRNA, por ao da RNA
polimerase I.
O DNA que codifica para rRNA tem sido isolado de
vrias espcies de eucariotos e h algumas
semelhanas entre as espces:
As unidades de transcrio de pr-rRNA esto
arranjadas, umas aps a outras, em longas sequncias.
Trs sequncias do pr-rRNA correspondem aos
componentes ribossmicos: 18S, 28S e 5.8S.
A ordem desta sequncia sempre a mesma: l8S, 5.8S
e 28S.
O processamento do pr-rRNA ocorre no nuclolo e
envolve vrios passos, que levam a formao das
subunidades ribossmicas 40S e 60S.
O processamento comea com a associao das
protenas ribossmicas ao pr-rRNA.
O rRNA pequeno (5S) constitudo por 120 nucleotdeos,
codifcado por genes que ficam fora do nuclolo. Ele
sintetizado pela RNA polimerase III que no se encontra
no nuclolo (este rRNA - 5S no sofre nenhum
processamento).
RNA transportador - tRNA

Os tRNAs correspondem a 10% do RNA total


da clula, e so denominados de adaptadores.
Os adaptadores so molculas que carregam
aminocidos que se ligam, de modo especfico
s bases do molde de RNA.
Os tRNAs so adaptadores para os
aminocidos durante a sntese proteca.
Cada tRNA tem uma estrutura especfica que
reconhece uma determinada sequncia no
molde de DNA.
Os tRNA apresentam algumas estruturas
comuns:
Cada molcula de tRNA contm entre 73 a 93
nucleotdeos em uma nica cadeia linear.
H 30-40 tipos de tRNAs em bactrias e, at, 50 em
clulas animais ou vegetais.
No terminal 3' est sempre presente uma sequncia
CCA.
No terminal 5' est sempre presente um nucleotdeo
monofosfato, frequentemente guanina (G).

A maioria das bases do tRNA so ligadas por


pontes de hidrognio. Dobras, em forma de
grampos, da mesma cadeia, aproximam bases
complementares que formam duplas hlices
curtas.
Alguns nucleotdeos no formam pares de bases
e ficam livres para interagir com outras molculas,
durante a sntese proteca.
A conformao adotada pelas molculas de tRNA
a forma de um trevo.
Estudos de difrao de raio X, demonstram que o
trevo se dobra, assumindo uma conformao
terciria estvel,
conferindo a molcula a forma de L.
Sntese e processamento do tRNA

A sntese do tRNA catalizada pela RNA polimerase


III.
A transcrio termina quando a RNA polimerase III
encontra uma sequncia de resduos do nucleotdeo
timina (T).
Os tRNAs so sintetizados como precursores que so
modificados.
O pr-tRNA sofre:
"Splicing" e remoo das sequncias
intercaladas,
Remoo de trs nucleotdeos da extremidade 3'
e adio da sequncia CCA,
O "splicing" das molculas de pr-tRNA
envolve dois passos:
Corte do transcrito primrio para remover o
intron.
Unio das pontes cortadas.
A molcula se dobra, de modo a permitir que a
cadeia seja cortada com preciso, para liberar
o intron.
Aminoacil tRNA sintetase
Aminoacil tRNA sintetase - (abreviao aaRs)
uma enzima que cataliza a ligao do
aminocido especfico ao tRNA: aminoacyl-
tRNA.
a maioria das clulas produzem 20 diferentes
aminoacyl-tRNA sintetases: uma para cada tipo
de aminocido.
Estas enzimas reconhecem suas respectivas
molculas de tRNA interagindo de maneira
complexa com o anticodon dos mesmos.
RNA mensageiro - mRNA
Os mRNAs representam cerca de 4% do RNA celular
total.
O mRNA carrega informaes do DNA para o
ribossomo, local onde ocorre a sntese protica. o
verdadeiro molde da sntese protica.
Os mRNAs tm vrios tamanhos e so constitudos por
diferentes tipos de bases nitrogenadas, em funo da
protena a ser codificada.
Um mRNA especifica uma cadeia linear precisa de
aminocidos em uma protena e tambm sinaliza onde
comear e onde parar a sntese da cadeia polipeptdica.
Relembrando a molcula de RNAmensageiro
Sntese e processamento do mRNA
Os mRNAs so sintetizados pela RNA polimerase
II.
Todos os genes analisados, que so ativamente
transcritos, tem uma sequncia altamente
conservada, chamada de "TATA box", localizada a
25-35 pares de bases antes do incio da transcrio.
Aps a transcrio, vrios grupos metil (grupo radical
alcalino CH3 derivado do metano pela remoo de um tomo de H)
so adicionados a resduos de Adenina (A)
localizados em exons (regies codificadoras). Talvez
a metilao desempenhe um papel de proteo na
poro do transcrito a ser preservado.
O mRNA citoplasmtico derivado de um precursor
denominado hnRNA nuclear (heterogeneous
nuclear RNA) mRNA imaturo.
Os mRNA de eucariotos so
monocistrnicos (codificam apenas para um
polipeptdeo).
O processamento ps-transcrio do
hnRNA para originar o mRNA envolve trs
etapas:
Adio de uma cauda de poli A
extremidade 3'
Formao de um capacete "cap" na
extremidade 5'
"Splicing" para a remoo dos introns
Adio da cauda de poli A

A cauda de poli A adicionada cadeia de


hnRNA pela extremidade 3' do RNA, por uma
enzima chamada poliA polimerase.
Esta enzima adiciona uma cauda de poliA de
200-250 nucleotdeos ao hnRNA.
Esta cauda no codificada no DNA e
especfica do mRNA. A cauda de poli A
lentamente encurtada no citoplasma.
Formao do capacete "cap"

O "cap"consiste de um nucleotdeo 7-
metilguanilato (guanina modificada), unido
por uma ligao 5'- 5' ao nucleotdeo inicial
da cadeia de mRNA (ao invs da ligao
usual 3- 5).
Portanto no h extremidade 5' livre na
cadeia de mRNA e sim duas extremidades
3'-OH livres.
A formao do "cap"ocorre no ncleo.
"Splicing"
O splicing o passo final do processamento do
mRNA.
lntron - parte do transcrito primrio que no est
includa no mRNA, tRNA e rRNA maduro.
Exon - parte do transcrito primrio que chega ao
citoplasma como parte de uma molcula de RNA.
A remoo do intron um processo de alta preciso,
uma vez que o erro de apenas uma base levaria a
leitura errada de toda sequncia seguinte.
Existem algumas sequncias relativamente
conservadas nos limites intron-exon e uma
sequncia rica em pirimidinas dentro de intron.
Para que ocorra o "splicing", necessrio
que uma estrutura se organize em torno do
RNA. Esta estrutura chamada de
"spliceosomo;

O "Splicing" a ltima etapa de


processamento do mRNA que, com o "cap"
na extremidade 5' e a cauda de poli A, na
extremidade 3' vai para o citoplasma, onde,
complexando-se com ribossomos, serve de
molde para a sntese protica.
Diferenas na produo de mRNA
em eucariotos e procariotos
Procariotos Eucariotos
mRNA corresponde mRNA requer
exatamente aos processamento ps-
genes no DNA; transcricional
No ocorre Cada mRNA
processamento do derivado de um gene
mRNA; individual (mRNA
Ocorrncia de mRNA monocistrnico)
policistrnico
RNA de interferncia e micro-RNA
rRNA

miRNA
Interrupo

miRNA
RNA

ncRNA
mRNA Non-coding RNA. RNA transcrito tem papel estrutural,
funcional ou cataltico

snoRNA miRNA
snRNA Outros
tRNA Small nucleolar RNA Micro RNA
rRNA Small nuclear RNA RNAs maiores compondo
Transfer RNA Encontrado no Pequenos fragmentos
Ribosomal RNA RNA que fazem a estrutura da cromatina
Interface entre nuclolo e esta de RNA que esto
Participa da parte do e relacionados
RNAm e envolvido na envolvidos na regulao
sntese de protenas spliceossomo ao imprinting
aminocidos modificao da expresso gnica
do RNAr

siRNA
stRNA
Small interfering RNA
Small temporal RNA.
ativa molculas na
RNA com funo de
interferncia por RNA
regulao do
desenvolvimento biolgico
O que um microRNA (miRNA)?

9pequenas moleculas de RNA encontradas em eucariotos,


reguladoras, escondidos no genoma (regies intergnica e
intrnica);

9Sao sequencias conservadas evolutivamente;

9~22 nucleotdeos;

9descobertos em estudos de regulao do desenvolvimento


de C. elegans em 1993;

9Controlam a expresso a nivel da traducao;


Biogenese do miRNA
9Inicialmente transcrito como um pr-miRNA de 70-100 pb;
9pr-miRNA processado pela Dicer (RNAase III);
9formao de miRNA maduro com 21-22 nt;
9atua negativamente na regulao ps-transcricional pela
formao de um duplex RNA, interrompendo a traduo de
um mRNA pela regio 3-UTR

miRNA Loop

Dicer (RNAase III)

UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGU
(miRNA)
Qual a diferena entre siRNA e miRNA ??
Funo: envolvidos na regulao da expresso gnica

miRNA: micro-RNA
9geralmente complementares a mRNA (imperfeita);
9seqncias so relativamente conservadas entre espcies;
9ligam-se 3UTR: degradao do mRNA ou inibio da
traduo; alteram a estabilidade do mRNA;
9miRNA origina de ssRNA formando uma estrutura
secundria em forma de hairpin;
9expresso constitutiva ou com controle temporal-especfica
e tecido-especfica
9miRNA so altamente
conservados em grupos
filogenticos afastados
(insetos, peixe e humano)
Qual a diferena entre siRNA e miRNA ??

siRNA: RNA de interferncia

9diferena se baseia na origem;


9siRNA mais comum em resposta a RNA estrangeiro
(geralmente viral);
9geralmente 100% complementar;
9tipicamente induz a degradao do mRNA
siRNA:
Mecanismo de ao
http://www.youtube.com/watch?v=h1kayIVEfcY&feature=related

http://www.nature.com/focus/rnai/animations/index.html

http://www.nature.com/ng/supplements/micrornas/video.html

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