Universidad de Santiago de Chile

Facultad de Qumica y Biologa

Pedagoga en Qumica y Biologa
Laboratorio de Microbiologa
2 Semestre 2016

Contaminacin ambiental
Cultivos slidos y lquidos

Vanessa Rojas

Fernanda Rojas

Francisco Gonzlez
Introduccin
Los microorganismos se desarrollan en diferentes hbitats y frecuentemente en poblaciones
mezcladas o junto a otros seres vivos, Sin embargo, la mayor parte de la informacin que poseemos
de los microorganismos se deriva del estudio de cultivos puros de los mismos. Sin duda este hecho
constituye una limitacin, pero es dudoso que sin la prctica del aislamiento y mantenimiento de
lneas clonales la microbiologa hubiera llegado a constituirse como tal [1]

Cuando se desea realizar un estudio de un organismo particular es necesario separarlo de la

poblacin mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean tcnicas de aislamiento que
conduzcan a la obtencin de un cultivo puro. Los dos mtodos de aislamiento fsico de los
microorganismos ms comunes son: por diluciones seriadas y siembra por vertido en placa, y
siembra por agotamiento. Otros mtodos son la utilizacin de medios de cultivos selectivos y
diferenciales basndose en el aprovechamiento de caractersticas particulares de los
microorganismos, tales como la formacin de esporas, el metabolismo anaerobio y/o facultativo, la
capacidad para utilizar sustratos poco comunes, etc. Estos mtodos pueden combinarse
dependiendo de los microorganismos que se puedan encontrar en el ambiente y del
microorganismo que se quiera separar por medio de sus necesidades nutritivas y de su medio
ptimo de crecimiento.

Para la realizar un cultivo microbiano es fundamental disponer de conocimientos bsicos sobre la

desinfeccin y la esterilizacin de materiales y espacios de trabajo. Un desinfectante es una
sustancia o una mezcla de sustancias qumicas utilizadas para matar microorganismos, pero no
necesariamente esporas. Los desinfectantes suelen aplicarse a superficies y objetos inanimados. Por
otro lado, la esterilizacin es el proceso que mata o elimina todas las clases de microorganismos y
esporas. No existen grados de esterilizacin, esta debe ser total.

El tratamiento de esterilizacin en autoclave se lleva a cabo mediante la aplicacin de vapor de agua

saturado a presin, es el medio ms eficaz y fiable para esterilizar materiales de laboratorio. Para la
mayora de los propsitos de laboratorio un ciclo adecuado se realiza a por 15 minutos a 121C [2]

As mismo, el mechero Bunsen tambin brinda las condiciones ptimas para trabajar en un
ambiente estril, todas las manipulaciones en el laboratorio deben realizar en un radio de 15 cm
aprox. de la llama del mechero, puesto que entrega una zona asptica para trabajar. Hay que tener
la precaucin de nunca tomar el material por encima de llama para evitar accidentes ya que la llama
puede alcanzar hasta 1500C [3]

A continuacin, se presentan los resultados obtenidos en la segunda prctica experimental del

laboratorio de Microbiologa, donde se trabaj con diferentes tipos de muestras, entre ellas
muestras ambientales, humanas y tambin con bacterias como Escherichia Coli, para realizar
diversos micro cultivos bacterianos.
Material y mtodo

Placas Petri con medios de cultivo (AL, LB, PDA, MacConkey) Mechero Bunsen, manguera, vaso
Yogurt de la marca Colun y Activia de precipitado, tubos Falcon,
Suero fisiolgico (NaCl 0,85%), Etanol al 70% y Cloro al 10% gradilla, trula, cinta adhesiva,
Bacterias: Salmonella Typhimurium, Staphylococcus Aereus, Escherichia marcador, film plstico y asa
Coli, Bacillus Subtilis y Bacillus Cereus microbiolgica.
I. Siembra con aislamiento de colonias desde una muestra en un medio slido.
Escherichia Coli y Salmonella Se sumergi el asa en la muestra de Escherichia Coli y Salmonella Typhimurium
Typhimurium en medio de y se traspasaron de manera independiente y en zigzag a placas Petri con Agar
cultivo slido LB.
Staphylococcus Aureus Se sumergi el asa en la muestra de Staphylococcus Aureus y se traspas una asada a
en medio de cultivo una placa Petri con Agar MacConkey, formando un espiral hasta llegar al centro de la
slido placa.
Salmonella Typhimurium y Se sumergi el asa en la muestra de Salmonella Typhimurium y se traspas una
Escherichia coli en medio de asada del cultivo formando estras sobre una de las mitades de la superficie del
cultivo slido agar MacConkey. Se repiti el procedimiento para Escherichia Coli en la otra
mitad de la placa.
II. Siembra de una muestra en un medio lquido.
Escherichia coli, Staphylococcus Aureus Se sumergi el asa en muestra de Escherichia Coli y se introdujo en el
y Salmonella Typhimurium en medio de tubo Falcon con el medio de cultivo lquido. Se repiti el proceso para
cultivo lquido Staphylococcus Aureus y Salmonella Typhimurium.
III. Preparacin de placas de yogurt con agar
Bacillus Cereus y Se sumergi la punta del asa en muestra de Bacillus Cereus y se traspas una asada a una
yogurt Colun en placa Petri con agar AL formando estras sobre una de las mitades de la superficie del agar.
medio de cultivo Se repiti el procedimiento para el yogurt Colun en la mitad de la placa. Se repiti el
slido procedimiento para una muestra de yogurt Activia y Bacillus Subtilis.
IV. Contaminacin del aire
Bacterias provenientes del aire Se dispuso en el suelo del laboratorio placas Petri con medio de cultivo slido
en medio de cultivo slido (Agar LB y PDA, respectivamente) por aproximadamente 5 minutos.
V. Contaminacin de superficies
Bacterias provenientes Se frot con la trula la llave del lavamanos del laboratorio y se traspas a una placa
de superficies en Petri formando estras sobre una de las mitades del agar LB. Luego se sumergi la trula
medio de cultivo slido en cloro al 10% y se traspas a la otra mitad de la superficie del agar. Se repiti con
Agar PDA.
VI. Presencia de bacterias en el cuerpo humano
Bacterias provenientes de Se sumergi la trula en suero fisiolgico y luego se frot los dientes y encas
dientes y encas en medio de de colega de laboratorio y se traspas a una placa Petri formando estras en
cultivo slido zigzag sobre la superficie del agar MacConkey. Se repiti el proceso para
bacterias provenientes de ua
 Resultados
1. Siembra con aislamiento de colonias desde una muestra en un medio slido.

Figura 1: Escherichia Coli Figura 2: Staphylococcus aureus Figura 3: Salmonella Typhimurium

en medio de cultivo slido en medio de cultivo slido (Agar en medio de cultivo (Agar LB). Se
(Agar LB). Se observ MacConkey). Se observ observ crecimiento de bacterias
crecimiento de bacterias crecimiento de bacterias en el en donde se realiz la siembra por
donde se realiz la espiral de siembra y se distingue estras. Se distinguen claramente
siembra. claramente zonas de mayor las zonas de mayor y menor
concentracin. concentracin, adems de
identificar algunas aglomeraciones
Figura 4: Salmonella Typhimurium y principalmente en las
Escherichia Coli en medio de cultivo intersecciones.
slido (Agar MacConkey). Se observ
crecimiento de ambas bacterias en el
medio de cultivo.

2. Siembra de una muestra en un medio lquido

Figura 5: Figura 6: Figura 7: Salmonella

Escherichia Coli en Staphylococcus Typhimurium. en
medio de cultivo Aureus en medio medio de cultivo
lquido. Se de cultivo lquido. lquido. Se distingue
distingue turbidez Se distingue turbidez en la
en la muestra. A la turbidez en la muestra. A la
izquierda, tubo muestra. A la izquierda, tubo con
con bacterias, a la izquierda, tubo bacterias, a la
derecha, medio de con bacterias, a la derecha, medio de
cultivo lquido. derecha, medio de cultivo lquido
cultivo lquido.
3. Preparacin de placas de yogurt con agar

Figura 8: Crecimiento en agar (AL) de bacterias Bacillus Cereus a

la izquierda de la placa y bacterias provenientes de yogurt de la
marca Colun a la derecha de la misma. Se identific crecimiento
de bacterias a la izquierda de la placa. Mientras que a la derecha
no se observ.

Figura 9: Crecimiento en agar (AL) de bacterias Bacillus Subtilis a

la izquierda de la placa y bacterias provenientes de yogurt de la
marca Activia a la derecha de la misma. Se distingui crecimiento
de Bacillus Subtilis a la izquierda de la placa por sobre el
crecimiento de bacterias de yogurt.

4. Contaminacin del aire

Figura 10: Crecimiento en LB de Figura 11: Crecimiento en PDA de

bacterias provenientes del aire del bacterias provenientes del aire del
laboratorio, tomadas en el piso del laboratorio, tomadas en el piso del
mismo. No se distingui mismo. Se observ solo una
crecimiento considerable de pequea agrupacin de bacterias.
bacterias (casi nulo crecimiento)

5. Contaminacin de superficies

Figura 12: Crecimiento en agar LB de bacterias provenientes de la llave

mono mando del lavamanos del laboratorio, a la izquierda con cloro al
10% y a la derecha sin cloro. Se observ un crecimiento de bacterias a la
derecha de la placa, mientras que en la zona que se expuso al cloro no se
distingui crecimiento.
 Figura 13: Crecimiento en agar PDA de bacterias provenientes de la
llave mono mando del lavamanos del laboratorio, a la izquierda con
cloro al 10% y a la derecha sin cloro. Se observ un crecimiento de
bacterias a la derecha de la placa, mientras que en la zona que se
expuso al cloro no se distingui crecimiento alguno y/o casi nulo.

6. Presencia de bacterias en el cuerpo humano.

Figura 14: Crecimiento en agar MacConkey de bacterias provenientes de

los dientes y encas de colega de laboratorio. Se observ crecimiento de
bacterias en toda la siembra en forma de estras.

Figura 15: Crecimiento en agar LB de bacterias provenientes de ua, de

colega de laboratorio. Se observ un crecimiento de bacterias en forma
de pequeas aglomeraciones. Estas se emplazaron casi la totalidad solo
a unos de sus lados.

Discusin
Respecto del crecimiento bacteriano en la actividad 1 (siembra con aislamiento de colonias desde
una muestra en un medio slido), se detect el crecimiento de colonias, tanto de Escherichia coli y
Salmonella Typhimurium como Staphylococcus aureus, en los diferentes medios de cultivo. Para que
un cultivo de bacterias crezca, el medio en el cual se desarrolla debe poseer los nutrientes
adecuados para el microorganismo, pH y temperatura apropiada, as como una concentracin
conveniente de oxgeno (en el caso de microorganismos aerobios). En este sentido, el medio de
cultivo LB, resulta apropiado para el crecimiento de Escherichia coli, puesto que es un medio rico en
nutrientes necesarios para su desarrollo (contiene fuentes de carbono, pptidos, vitaminas,
minerales, entre otros).4 El crecimiento observado de Escherichia coli fue relativamente superior
en el medio de agar LB que en el medio de agar MacConkey, siendo este ltimo un medio de cultivo
diferencial para Enterobacteriaceiae y bacilos gramnegativos entricos relacionados, el cual
contiene todos los nutrientes necesarios para su crecimiento, colorante indicador rojo neutro, un
pH apropiado (7,1 aprox), y que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y algunas
gramnegativas con requerimientos excepcionales. Este medio posee lactosa como nica fuente de
carbono y la presencia de bacterias capaces de metabolizar este azcar se evidencia por medio del
viraje en la coloracin del rojo neutro, observndose entonces colonias que presentan diversas
tonalidades de rojo de acuerdo al cambio de pH que su fermentacin produce. De esta manera, la
muestra de Escherichia coli, al ser un bacilo gramnegativo entrico, que puede fermentar lactosa,
acidificando el medio, genero la formacin de colonias levemente rojizas. Por otra parte, la
presencia de Salmonella Typhimurium se observ por la formacin de colonias transparentes, lo
cual concuerda con lo descrito por la literatura.5

En consideracin al crecimiento en placas de leche, puesto que el yogurt es el producto final

obtenido a travs de la accin de bacterias fermentadoras de la leche (Lactobacillus bulgaricus, p.ej),
se esperaba obtener un crecimiento notorio de la colonia de bacterias provenientes tanto del yogurt
marca Colun (Lactobacillus acidophilus) como del perteneciente al producto Activia (
Bifidobacterium animalis spp. lactis DN173 010) de la marca Danone, sin embargo, en este ltimo
se observ un crecimiento superior para Bacillus Cereus y Bacillus Subtilis. Uno de los factores que
podran haber influido en el escaso crecimiento de las colonias de bacterias es la temperatura del
asa utilizada para tomar la muestra de yogurt. El asa podra haberse encontrado a una temperatura
letal para las bacterias al momento de colectar la muestra, sin embargo, este hecho por s solo no
podra ser indicativo del escaso crecimiento bacteriano, ya que las colonias tuvieron un tiempo
superior a 48 horas para desarrollarse, de modo que an si sobrevivan pocas bacterias a la
temperatura del asa tenan tiempo suficiente para elevar el nmero de individuos que conformaban
la colonia. Existe tambin, la posibilidad de que las bacterias presentes en el producto Activia no se
encuentren en las concentraciones indicadas por el fabricante, es decir, el producto podra no
encontrase realmente enriquecido con probioticos, sin embargo no es posible discriminar esto
ltimo basndose solo en los resultados obtenidos (en los cuales adems si se obtuvo un
crecimiento, aunque escaso, de la colonia). (6)(7) En relacin a los medios de cultivo lquido, se pudo
apreciar cierta turbidez en la muestra , lo cual podra ser indicativo de la presencia de colonias de
bacterias en el medio.

Finalmente, respecto de las otras actividades, hasta ahora es sabido que existen alrededor de unas
5.000 especies de bacterias y arqueas descritas, las cuales han sido aisladas a partir de sus habitas
naturales, los cuales incluyen diferentes medios, entres estos aire, suelo, organismos vivos, entre
otros.(8) De esta manera, los resultados obtenidos para los cultivos realizados a partir de muestras
de diferentes sectores del laboratorio as como del cuerpo de uno de los estudiantes concuerda con
lo descrito por la literatura, pudiendo apreciarse el crecimiento de colonias de bacterias. Por
ejemplo, respecto del crecimiento de colonias de bacterias provenientes de la boca de uno de los
estudiantes, en medio MacConkey, se pudo observar que estas no presentaron coloracin alguna,
es decir, las bacterias obtenidas carecan de la capacidad de fermentar lactosa. Cabe destacar que
aquellos sectores en que se aplic cloro (el cual debera haber impedido el crecimiento bacteriano)
igualmente presentaron sectores con crecimiento de colonias lo cual puede deberse a que, aunque
se haya aplicado cloro, la placa y el medio no se mantuvieron en condiciones apropiadamente
estriles, lo que implicara que las bacterias sobrevivientes podran haberse multiplicado hasta
formar colonias en aquellos remanentes en que no existir la presencia de cloro. (5)(8)

Bibliografa
1.- Pars,R, Jurez, A. (2002) Bioqumica de los microorganismos. Editorial REVERT S.A., Barcelona.
(pgina 4)

2.- Organizacin mundial de la Salud (2005) Manual de bioseguridad en el Laboratorio. Tercera

Edicin. Ediciones de la OMS, Ginebra. (pginas 89- 99)

3.- Universidad de Salamanca. Prcticas de microbiologa general. Mechero Bunsen. Espaa.

4.- Bachmann, K. (1978) Biologa para mdicos: conceptos bsicos para las facultades de medicina,
farmacia y biologa. Editorial Revert S.A. Barcelona, Espaa. (pgina 149-150)

5.-Allen, S., Koneman, E., Janda, W., Procop, G. (2008) Diagnostico Microbiolgico. Sexta edicin.
Editorial mdica Panamericana, Argentina (pginas 212-215)

6.-Freeman, S. (2009) Biologa. 3Edicin. Pearson Educacin. Madrid, pg. 537-539.

7.-Cceres, P., Gotteland, M. (2010) Probiotics in Chile: Which are the strains and what are their
effects on human health? Revista Chilena de nutricin, volumen 37, N1. (pgina 98-103)

8.- Madigan, M., Dunlap, P., Clark, D. (2009) Brock. Biologa de los microorganismos. Duodcima
edicin. Pearson Educacin. Madrid.