Espectroscopa de infrarrojo cercano multipunto para

anlisis simultneos de ingredientes lcteos. Parte A:

caracterizacin
Raquel Cama-Moncunill, un Yash Dixit, un Xavier Cama-Moncunill, un Maria P. Casado-
Gavalda, un Maria Markiewicz-Keszycka, un Patrick J. Cullena, y Carl Sullivana ASchool of
Food Science and Environmental Health, Instituto de Tecnologa de Dubln, Cathal Brugha
St, Dubln 1, Irlanda BSchool de Ingeniera Qumica, UNSW Australia, Sydney, NSW 2052,
Australia

Durante las ltimas dcadas, la espectroscopa infrarroja cercana (NIR) ha sido

ampliamente reconocida como una tcnica bien calificada para la evaluacin de la calidad
de los alimentos. La espectroscopia NIR es rpida, no destructiva y generalmente slo
requiere una preparacin mnima de la muestra. Estas caractersticas hacen que la
tecnologa sea adecuada para aplicaciones on / in-line.1 De hecho, los retos actuales son
adaptar y conectar los sistemas NIR a las lneas de produccin para facilitar el monitoreo
continuo del proceso. El uso de sensores NIR de fibra ptica permite la transmisin de
seales entre el punto de medicin y el espectrofotmetro a grandes distancias,
ofreciendo la posibilidad de realizar mediciones en lnea y en tiempo real con slo el
sensor muy cerca de la lnea de produccin. Adems, los sistemas NIR equipados con
mltiples sensores de fibra ptica facilitan el registro de espectros de diferentes lugares en
la operacin de procesamiento.2 Por lo tanto, una caracterstica de inters es la capacidad
de los sistemas NIR para recoger mltiples espectros simultneamente. La medicin
simultnea proporciona los medios para monitorear los parmetros clave de control de
calidad desde diferentes puntos / etapas de un proceso. En este trabajo se presenta un
sistema NIR multipunto equipado con cuatro sondas de reflectancia NIR. El sistema se
basa en un interfermetro Fabry-Perot, mediante el cual las grabaciones se llevan a cabo
simultneamente en vez de consecutivamente como en los sistemas multipunto "casi
simultneos" que implican el cambio de fibra o el uso de espectrofotmetros mltiples. 2
El objetivo del estudio fue mostrar la fiabilidad del sistema mediante el registro de
espectros de dos diferentes ingredientes lcteos simultneamente, y por lo tanto
demostrar la independencia de cada sonda y la viabilidad de proporcionar informacin
cualitativa de diversas ubicaciones de un proceso de fabricacin.
 Figu
ra 1. Montaje del sistema NIR y de las sondas de fibra ptica.

Muestras e instrumentacin

Los ingredientes lcteos utilizados para la evaluacin del sistema fueron lactosa (d-lactosa
monohidratada, Sigma Aldrich) y casena (de leche bovina, grado tcnico Sigma Aldrich).
Adems, se prepar una mezcla de estos dos a 50% p / p de casena-lactosa. El sistema
NIR multipunto evaluado fue un MultiEye (Innopharma Labs, Irlanda). El espectrofotmetro
se basa en un interfermetro de Fabry-Perot (VTT, Finlandia) y tiene cuatro canales de
medicin unidos a cuatro sondas de fibra NIR. Multi-Eye es un sistema NIR multipunto
simultneo diseado para permitir el registro simultneo de cuatro espectros
independientes en tiempo real y en diferentes ubicaciones de un proceso de fabricacin.
Se utilizaron cuatro sondas de reflectancia de fibra ptica de 2 m de longitud (Ocean
Optics QR400-7-VIS-BX); Cada uno tena un brazo unido al espectrofotmetro y el otro
brazo a la fuente de iluminacin (Ocean Optics HL-2000-HPFHSA). Las sondas contienen
siete fibras; Una sonda central para la deteccin y seis empaquetadas alrededor de la
sonda central utilizada para la iluminacin.

Mediciones NIR

Dado que el objetivo era probar el rendimiento del sistema NIR multipunto para el escaneo
simultneo, el equipo se configur para medir dos muestras a la vez. Como se indica en la
Figura 1, las sondas se dispusieron en grupos de dos de modo que las sondas 1 y 2
exploraron una muestra mientras que las sondas 3 y 4 midieron otra muestra. Las
superficies de las muestras se aplastaron para reducir el efecto sobre las mediciones
causadas por las diferencias de sonda a muestra en la regin medida. Las sondas de fibra
ptica se colocaron a una distancia de 1-2 mm de la superficie de las muestras. Las
mediciones NIR se realizaron en el intervalo de longitudes de onda de 1515 nm a 2295 nm
utilizando un intervalo de exploracin de 5 nm. Sin embargo, slo el tramo de 1515 nm a
2200 nm se utiliz para el anlisis debido al alto ruido observado en el extremo de
longitud de onda larga del Espectros Cada muestra o lote de muestras se escane ocho
veces en diferentes lugares en la (s) superficie (s). Para todas las muestras, se
promediaron estas ocho repeticiones proporcionando un nico espectro por sonda. Todos
los espectros fueron entonces pre-procesados utilizando la transformacin normal de
variables normales (SNV) y posterior suavizado utilizando una funcin cuadrtica Savitzky-
Golay con una ventana de siete.

Medidas de referencia y concurrentes

Se obtuvo un espectro de referencia para cada ingrediente (casena, lactosa y mezcla al

50% p / p). En este caso, la muestra A y la muestra B eran el mismo ingrediente; Por lo
tanto, las cuatro sondas exploraron el mismo producto al mismo tiempo. Los espectros de
referencia fueron el resultado del promedio de los espectros obtenidos por las cuatro
sondas. Despus de la grabacin de los espectros de referencia, se llevaron a cabo
pruebas de registro simultneas explorando dos compuestos diferentes simultneamente.
Como se indica en la Tabla 1, se evaluaron tres lotes de muestras: (1) lactosa-casena, (2)
mezcla de lactosa al 50% y (3) mezcla de casena al 50%. Cada lote consisti en dos
mediciones en las que los grupos de sondas intercambiaban muestras. La primera
medicin y el intercambio se indican como registros a y b, respectivamente (Tabla 1). Para
cada registro se promediaron las mediciones concurrentes para obtener nicamente un
espectro por muestra: muestra A de los datos registrados por las sondas 1 y 2 y la
muestra B de las sondas 3 y 4. Por lo tanto, se obtuvieron un total de dos espectros por
muestra por lote . El anlisis de los datos incluy la evaluacin espectral y el anlisis del
componente principal.

Resultados y discusin

El objetivo principal de este trabajo fue evaluar la fiabilidad de los espectros

concurrentemente registrados a partir de dos muestras diferentes. Para empezar, los
espectros simultneamente registrados se mostraron junto con los respectivos espectros
de referencia para permitir la comparacin. Esto puede verse en la Figura 2, que muestra
los espectros de referencia por s mismos (Figura 2a) y las yuxtaposiciones para cada lote
de muestras (Figura 2b, c y d). Antes de la comparacin, se realiz una bsqueda de las
bandas de absorcin caractersticas de los ingredientes. Como se indica en la Figura 2a,
las principales bandas de absorcin para la lactosa fueron el primer estrechamiento de O-
H de estiramiento de 1515 nm a 1600 nm y la banda de combinacin a 2100 nm; Mientras
que la absorcin de la protena de la casena se produjo a 1980 nm y 2050 nm donde los
enlaces N-H experimentan una combinacin de estiramiento y deformacin.3-5 El espectro
de casena tambin mostr absorcin a 1726 nm que se asocia con la grasa en la
leche.4,5 La presencia De grasa, ya que la casena utilizada era de grado tcnico. Con
respecto a los espectros de la mezcla a 50% p / p, se pueden observar las caractersticas
espectrales principales de ambos compuestos. Las mediciones concurrentes se muestran
en la Figura 2b, c y d correspondientes a los lotes 1, 2 y 3, respectivamente. Cada sub
trama inclua las dos grabaciones realizadas por lote. En las tres parcelas, se pueden
distinguir claramente dos curvas espectrales, cada una relativa a uno de los compuestos
evaluados. Esto ilustr la capacidad del sistema para distinguir simultneamente dos de
estos compuestos basados en su respuesta NIR. La grfica tambin mostr dos
comportamientos asociados con el tipo de muestra: la lactosa produjo curvas espectrales
con ms variabilidad entre ellas mientras que los espectros de casena parecan ser ms
consistentes. La causa de esta variabilidad observada entre los espectros de lactosa
puede ser una baja absorcin de NIR. Cuando los espectros crudos de lactosa y casena se
representaron juntos (no mostrados), se observaron diferencias considerables en las
proporciones de absorcin. Pequeos cambios de absorcin en el espectro bruto pueden
causar variabilidad notable cuando los espectros son pre-procesados usando tcnicas de
estandarizacin. Sin embargo, este fenmeno slo se observa en las bandas de absorcin
OH, por lo que tambin debe ser que podra surgir a partir de cambios en el contenido de
humedad durante el registro de los espectros de la muestra, as como una combinacin de
ambos efectos. Para evaluar an ms la capacidad del sistema para la caracterizacin
simultnea de dos muestras, se aplic el anlisis de componentes principales (PCA). PCA
extrae la varianza explicada en los datos / espectros mediante la generacin de un nuevo
conjunto de variables ortogonales llamadas componentes principales (PC). As, cada
muestra obtiene un valor de puntuacin en cada PC. La visualizacin de un PC frente a
otro PC (grfico de puntuacin) puede revelar patrones tales como agrupaciones, que
indican relaciones entre muestras.6 Los espectros de referencia se emplearon para
desarrollar un modelo PCA, el cual se aplic a los espectros "concurrentes". El objetivo fue
construir un modelo de PCA de referencia cuyo diagrama de puntuacin revel patrones
de referencia que luego podran utilizarse para evaluar las mediciones concurrentes. El
grfico de puntuacin de PC1 frente a PC2 de todos los espectros registrados (espectros
de referencia y "concurrentes") se muestran en la Figura 3a. La parcela muestra tres
grupos, cada uno correspondiente a uno de los compuestos: casena (rojo), lactosa (azul) y
mezcla al 50% (verde). De hecho, PC1 por s mismo ya "clasific" los espectros segn su
composicin. De izquierda a derecha: casena (0% lactosa), mezcla (50% lactosa) y (100%)
lactosa. PC1, por definicin, explica la mayor parte de la varianza observada en los datos
espectrales. Por lo tanto, esto puede ser traducido como la mayor parte de la varianza
observada en los espectros se debe a las diferencias en la composicin de las muestras.
Como era de esperar, se observ una mayor variabilidad dentro del grupo de lactosa,
seguido por el grupo de mezcla y finalmente el grupo de casena. Este resultado coincidi
bien con la evaluacin espectral previa, en la que los espectros de lactosa mostraron ser
ms inconsistentes, especialmente en las bandas de absorcin de OH. Sin embargo, se
puede observar un grupo distintivo en relacin con los espectros de lactosa. La trama
tambin representaba un patrn curvo de las puntuaciones. Este fenmeno puede ser
causado por pre tratamientos espectrales que normalizan los espectros. SNV es una
tcnica de normalizacin que escala los espectros para tener un valor medio de cero e
igual longitud. Este ltimo causa estructuras circulares que pueden sobrevivir despus de
aplicar PCA. Se puede encontrar otra explicacin del efecto de las tcnicas de
normalizacin en las parcelas de puntuacin en otros lugares7. La Figura 3b muestra las
cargas de PC1 y PC2 desarrolladas a partir de los espectros de referencia. La grfica de
carga proporciona informacin sobre qu longitudes de onda contribuyeron ms a cada
PC. En este caso, las bandas de absorcin asociadas con la lactosa (de 1515 nm a 1600
nm y la banda de combinacin a 2100 nm) desempearon un papel importante en PC1;
Mientras que PC2 se asemejaba principalmente a la banda de protenas (de 1980 nm a
2050 nm) algo superpuesta con ambos: el pico del agua a 1980 nm y la combinacin de
lactosa a 2100 nm. Estos resultados confirmaron que el modelo PCA se bas en diferencias
de composicin y, por tanto, la agregacin posterior de las mediciones concurrentes de
acuerdo con su composicin en el grfico de puntuacin demostr la fiabilidad de los
espectros registrados a partir de dos muestras simultneamente.

Figura 2. Espectros pre-procesados de las referencias (a) y las combinaciones para el registro concurrente: (b) lactosa-
casena, (c) mezcla de lactosa al 50% y (d) mezcla de casena al 50%.

Conclusin
El presente trabajo sirvi para evaluar la caracterstica de grabacin concurrente de los
sistemas NIR multipunto basados en un interfermetro de Fabry-Perot; Particularmente
para la caracterizacin simultnea de dos ingredientes lcteos. Por lo tanto, la prueba tuvo
como objetivo principal evaluar la independencia de las sondas y la fiabilidad de los
espectros resultantes del registro simultneo de dos muestras de diferente composicin.
Tanto la independencia de las sondas como la fiabilidad espectral han sido probadas, ya
que tanto las evaluaciones espectrales como las de PCA mostraron claramente curvas /
patrones diferentes para cada una de las muestras registradas simultneamente. En
consecuencia, los sistemas NIR multipunto basados en un interfermetro Fabry-Perot han
demostrado su viabilidad como tcnicas in / online para anlisis cualitativos simultneos y
caracterizacin de ingredientes lcteos.

Expresiones de gratitud

La investigacin que conduce a estos resultados ha recibido financiacin del Sptimo

Programa Marco de la Comunidad Europea (FP7 / 2013-2015) Referencia del Proyecto:
605134.

Figura 3. Resultados de PCA: (a) grfico de puntuacin de PC1 vs PC2 de los espectros de referencia y datos de validacin;
(B) grfico de carga de PC1 y PC2.

Referencias

1. J.U. Porep, D.R. Kammerer y R. Carle,
"Aplicacin en lnea de infrarrojos
cercanos (NIR) Espectroscopia en la
produccin de alimentos ", Tendencias
Food Sci. Technol. 46 (2), Parte A, 211-230
(2015). Doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.
Tifs.2015.10.002
2. R. Cama-Moncunill, M. Markiewicz-
Keszycka,
Y. Dixit, X. Cama - Moncunill, M.P. Casado-
Gavalda, P.J. Cullen y C. Sullivan,
"Espectroscopa NIR multipunto para
Anlisis de la composicin del lactante en
polvo Frmula bajo diversas condiciones
de movimiento ", Talanta 154, 423 (2016).
Doi: http: //dx.doi. Org / 10.1016 /
j.talanta.2016.03.084
3. . Gombs, I. Antal, P. Szab-Rvsz, S.
Marton y I. Ers, "Determinacin
cuantitativa De cristalinidad de la alfa-
lactosa Monohidrato por espectroscopia
de infrarrojo cercano (NIRS) ", Int. J.
Pharmaceut. 256, 25 (2003). Doi:
http://dx.doi.org/10.1016/S0378- 5173
(03) 00059-0
6. T. Rajalahti y O.M. Kvalheim,
"Multivariable Anlisis de datos en
farmacutica: un tutorial Revisin ", Int. J.
Pharmaceut. 417, 280 (2011). Doi:
http://dx.doi.org/10.1016/j.
Ijpharm.2011.02.019

4. B.G. Osborne, T. Fearn, P.H. Hindle y P.T. 7. T. Fearn, C. Riccioli, A. Garrido-Varo y

Hindle, Espectroscopa NIR Prctica con J.E. Guerrero-Ginel, "Sobre la geometra
Aplicaciones en el anlisis de alimentos y de SNV Y MSC ", Chemometr. Intell.
bebidas. Longman Scientific & Technical Laboratorio. Sist. 96, 22 (2009). Doi:
(1993). http://dx.doi.org/10.1016/j.
Quimiolab.2008.11.006
5. N. Nez-Snchez, A.L. Martnez-Marn,
O. Polvillo, V.M. Fernndez-Cabans, J.
Carrizosa, B. Urrutia y J.M. Serradilla,
"Near Espectroscopa infrarroja (NIRS)
para la determinacin Del perfil de cidos
grasos grasos de la leche de las cabras ",
Food Chem. 190, 244 (2016). Doi: http: //
Dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2015.05.0
83
RESUMEN:

Espectroscopa de infrarrojo cercano multipunto para anlisis

simultneos de ingredientes lcteos. Parte A: caracterizacin

La espectroscopa infrarroja cercana (NIR) es reconocida como una tcnica bien calificada
para la evaluacin de la calidad de los alimentos, es rpida, no destructiva y slo requiere
una preparacin mnima de la muestra. Hacindola adecuada para aplicaciones on / in-
line. Actualmente los retos actuales son adaptar y conectar los sistemas NIR a las lneas
de produccin para facilitar el monitoreo continuo del proceso. El uso de sensores NIR de
fibra ptica permite la transmisin de seales entre el punto de medicin y el
espectrofotmetro a grandes distancias, ofreciendo la posibilidad de realizar mediciones
en lnea y en tiempo real con slo el sensor muy cerca de la lnea de produccin. Adems,
estn equipados con mltiples sensores de fibra ptica facilitan el registro de espectros de
diferentes lugares en la operacin de procesamiento. Y como caracterstica de inters es la
capacidad de los sistemas NIR para recoger mltiples espectros simultneamente, este
proporciona los medios para monitorear los parmetros clave de control de calidad desde
diferentes puntos / etapas de un proceso. En este trabajo se presenta un sistema NIR
multipunto equipado con cuatro sondas de reflectancia NIR.
Todo lo anterior mencionado sirvi para evaluar la caracterstica de grabacin concurrente
de los sistemas NIR multipunto basados en un interfermetro de Fabry-Perot; para la
caracterizacin simultnea de dos ingredientes lcteos. Cuyo objetivo principal fue evaluar
la independencia de las sondas y la fiabilidad de los espectros resultantes del registro
simultneo de dos muestras de diferente composicin. Tanto la independencia de las
sondas como la fiabilidad espectral han sido probadas, ya que tanto las evaluaciones
espectrales como las de PCA mostraron claramente curvas / patrones diferentes para cada
una de las muestras registradas simultneamente. En consecuencia, los sistemas NIR
multipunto basados en un interfermetro Fabry-Perot han demostrado su viabilidad como
tcnicas in / online para anlisis cualitativos simultneos y caracterizacin de ingredientes
lcteos.