Professional Documents
Culture Documents
NIM: A201401013
Pendahuluan : Pemurnian virus sangat penting untuk vaksin de- Velopment dan terapi gen.
Proses hulu untuk Pengembangan vaksin, baru-baru ini mengalami dra- Perkembangan matik,
namun proses hilir belum Berubah secara signifikan, meski penting. Chroma- Tography telah
digunakan untuk pemurnian virus.
Perubahan Perubahan
Buang 75 SampeL 3
media media
Selama 4 hari dengan suhu 28C
panen 75 ml panen 75 ml
1. Prosedure kromatografi standar
SampeL 1 SampeL 2
Kromatografi dilakukan pada BioLogic Duo- Sistem aliran (Bio-Rad
Laboratories, Inc.). Kolom Dipasang pada sistem BioLogic DuoFlow dan dibilas 600
mM sodium phosphate buffer (NaPB) pH 7.2. Itu Kolom kemudian diseimbangkan
dengan NaPB 10 mM pH 7,2. Sepuluh mililiter cairan budaya dari virus dengue tipe 2
Dimasukkan ke kolom dengan NaPB 10 mM pH 7,2, Dan kemudian dielusi dengan
gradien linier sampai 600 mM NaPB pH 7,2 selama 15 menit pada laju alir 1,0 mL /
menit. Kromatografi dipantau dengan absorbansi UV pada 280 dan 260 nm, dan
konduktivitas. Eluate dikumpulkan Dengan fraksi 2 mL, untuk 20 menit pertama (10
fraksi), dan Maka dengan fraksi 1 mL (sisa 20 fraksi). Itu Fraksi dikumpulkan
digunakan untuk evaluasi. Sebagai Kontrol, media kultur dan kultur sel cairTanpa
virus juga dimuatkan ke kolom. Setelah Prosedurnya, kolom itu dicuci dengan air
suling. Ter, disterilkan dengan NaOH 0,5 M selama 5 kolom volume, Dan itu diganti
dengan NaPB 10 mM. Sistem Selanjutnya dicuci dengan air suling
2. Uji Hemaglutinasi (HA)
Darah angsa yang diawetkan dibeli dari Nippon Bio- Tes Laboratories Inc.,
Tokyo, Jepang. Angsa darah merah Sel (GRBC) dicuci 3 kali dengan garam.
GRBCDisuspensikan dalam larutan garam pada konsentrasi akhir 8% sebagai
Suspensi stok. Hal ini selanjutnya diencerkan 1:24 menjadi pra- Pare 0,33% suspensi
kerja GRBC dalam penyesuaian virus Pengencer (VAD) yang mengandung 150 mM
NaCl dan 200 mM Natrium fosfat pada pH 6,2. Setiap fraksi diencerkan 10 kali lipat,
dan 50 L sampel terdilusi diencerkan lebih lanjut Secara serial, 2 kali lipat dengan
BSA 0,4% di BS9 (120 mM NaCl, 50 mM asam borat dan 24 mM natrium hidrat) di
U- Papan sumur 96 (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, AS). Dan
kemudian, 50 L sebesar 0,33% Suspensi GRBC ditambahkan ke masing-masing
sumur, lempeng Dicampur dengan lembut, dan kemudian diinkubasi pada suhu 37 C
selama 30 Min. Titer HA adalah pengenceran virus tertinggi Menunjukkan pola
aglutinasi di bagian bawah baik
Cairan kultur sel C6 / 36 tanpa infeksi virus (Contoh 2; Gambar 1 (b)) dan media kultur itu
sendiri (Contoh 3; Gambar 1 (c)). Setelah 30 menit waktu retensi, media kultur menunjukkan
nilai absorbansi UV yang sama pada 280 dan 260 nm (Gambar 1 (c)). Meskipun absorbansi
pada 260 nm sedikit lebih besar dari pada 280 nm dalam cairan kultur sel tanpa virus
(Gambar 1 (b)); Selanjutnya, kromatogram cairan kultur virus menunjukkan puncak
absorbansi UV kecil pada 260 nm (Gambar 1 (a)). Hal ini menunjukkan bahwa puncak pada
260 nm disebabkan oleh budaya virus
Kesimpulan
Keramik hidroksiapatit adalah media pengemasan ringan untuk bio- Bahan logis dan
bisa diaplikasikan di daerah netral. Kondisi netral menyebabkan pemisahan bio- Bahan logis,
sekaligus menjaga aktivitas biologis. Hasil penelitian ini mengkonfirmasi bahwa jenis virus
dengue 2 Dimurnikan dengan kromatografi hidroksiapatit keramik Namun infektivitas
virusnya. Penelitian ini menunjukkan bahwa pemurnian satu langkah metode untuk virus
dengue tipe 2 oleh hydroxyapa- keramik Kromatografi tite keduanya dapat direproduksi dan
kuat. Ini Metode dapat diterapkan pada spesies virus lainnya, dan Ini mungkin kemudian
ditemukan di berbagai tempat di masa depan