Cristhian D. aez, Hctor R. Concha., & Richard A. Martnez.

(2017). Biorremediacion bacteriana.

Produccin de cido ctrico por medio de Aspergillus niger.

Cristhian Delgado aez1

cristhian_delgado@rocketmail.com
Hctor Ral Concha2
hector-concha@hotmail.com
Richard Andrs Martinez1
Richmart1996@gmail.com
Universidad Santiago de Cali.
Facultad de Ciencias Bsicas, Programa de Microbiologa.
Santiago de Cali, Colombia. 2017.

Resumen
Las medidas biocorrectivas o los sistemas de biorremediacin consiste principalmente en el uso de los
microorganismos naturales (levaduras, hongos o bacterias) existentes en el medio para descomponer o
degradar sustancias peligrosas y hidrocarburos en sustancias de carcter menos txico o bien inocuas para
el medio ambiente y la salud humana. El proceso de biorremediacin de hidrocarburos, contaminantes del
suelo, llevado a cabo por bacterias est condicionado por factores biticos y abiticos como los nutrientes,
respiracin, pH, humedad y temperatura propios del microorganismo, los cuales al ser modificados limitan
o favorecen la capacidad metablica de la bacteria y su adaptabilidad con el cambio de posicin de los
cidos grasos de la membrana celular, en este artculo de revisin vamos a ver la importancia que tienen
estas bacterias para la biorremediacin de hidrocarburos y el uso adecuado de esta, tambin diferentes
procesos realizados a partir de las bacterias para la descomposicin de estas materia prima de la actualidad .
Palabras Clave
cido ctrico, Aspergillus, industria,
Abstract

Keywords

Universidad Santiago de Cali / Facultad

de Ciencias Bsicas |1
Cristhian D. aes, Hctor R. Concha., &
Richard A. Martnez, (2017).
 I. INTRODUCCIN
El cido ctrico (2-hidroxi-1,3-propano-
tricarboxilico) es un cido orgnico natural dbil
que se encuentra en muchas frutas y verduras, en
especial ctricos; este compuesto, es producido
mediante la fermentacin, y se utiliza
principalmente en la industria farmacutica, textil y
galvanoplastia. Debido a su sabor, su calidad de
conservante y su capacidad para actuar como
tampon, por esta y otras razones, el cido ctrico se
encuentran en la lista de ingredientes de muchos
alimentos, (Gueguim-Kana et al, 2012a).
Contribuyendo a la formacin de muchos alimentos
como un acidulante, antioxidante y emulsionante,
siendo un compuesto de gran demanda mundial de
consumo de cido ctrico, debido a su baja toxicidad
en comparacin con otros acidulantes
(Vasanthabharathi et al, 2013).
El hongo Aspergillus niger (A. niger), es un
microorganismo el cual produce diversos
compuestos de gran inters para las industrias
farmacuticas y de alimentos (enzimas, acidos
organicos), y es el principal productor de cido
ctrico a nivel industrial por cultivo lquido, debido
a su alto rendimiento de cido ctrico, cuando existe
una alta acumulacin de este en el micelio, el cual
se asocia con una alta concentracin de glucosa y de
oxgeno disuelto en el medio liquido (Wolshek y
col,. 1999).
El cido ctrico tiene una tasa de produccin anual
de cido ctrico estimada de alrededor de 1,4-1,7
millones de toneladas y una tasa de demanda
estimada entre 3,5 y 5 al ao (Husseimy et al 2010).
La produccin de cido ctrico a partir de mtodos
sintticos o qumicos, econmicamente hablando,
no es lo suficientemente bien con los mtodos
biotecnolgicos (Papagianmi (2007), por lo tanto,
una gran proporcin de la demanda mundial de
cido ctrico se santifica a partir de la biotecnologa.
La produccin de cido ctrico mediante A. niger
tiene muchas ventajas sobre el uso de otras cepas,
en el sentido de que aspergillus niger es fcil de
encargare de fermentar una variedad de materia
prima de bajo costo, produciendo un alto
rendimiento terico de ms del 70% (Papagianni,
2007)
II. HISTORIA
El cido ctrico fue descubierto en 1784 por el
qumico Scheele a partir del jugo de limn, usando
el proceso de cal-sulfrico para aislarlo (AUSTIN,
1983). En 1860 se empez a obtener cido ctrico a
partir de frutas de modo industrial, pero la
eficiencia de esta era baja, se necesitaban alrededor
de 30 a 40 toneladas de limones para obtener una
tonelada de cido ctrico, por lo que este compuesto
era muy costoso. El descubrimiento de la capacidad
de produccin de cido a partir de medios
azucarados de algunos hongos filamentosos se
remonta a 1883, gracias a estudios realizados por
Wehlmer, pero no fue hasta 1917 que Currie
demostr que la especies de Aspergillus niger
acumulaban cido ctrico y oxlico como reservas
de energa. Los hermanos Pfizer lograron mejorar el
proceso de produccin de acido ctrico por
fermentacin y purificacin del acido por medio de
A.niger y montarlo a escala industrial, eso se debio
a la escases de formas de importacin y produccin
de limones debido a la guerra.
Durante 1960 se hicieron reportes de especies de
levaduras productoras de acido a partir de
hidrocarburos, con rendimientos cercanos al 100%,
pero debido al aumento del precio del petrleo y sus
derivados, este mtodo de produccin fue
abandonado rpidamente (Rohr, 1983). Poesterores
estudios tambin descubrieron que otras especies de
levaduras y bacterias tenan la capacidad de
acumular acido ctrico usando como sustrato
glucosa (Rohr, 1983), con una mayor ventaja en el
tiempo de produccin, debido a que este lo realiza
en un menor tiempo, pero la eficiencia es mucho
menor a la de A. niger.
 III. Generalidades del cido ctrico
El cido ctrico es un cido tricaboxilico orgnico
de formula simplificada C6H8O7 presente en la
mayora de frutas, sobre todo en citricos; en su
forma purificada es un slido incoloro, traslucido y
blanco que pueden presentarse en forma de
cristales, granulados o polvos, al calentarse al ms
de 175 C se descompone en dixido de carbono y
agua.
Es usado como acidulante, conservante y
antioxidante en la industria. Es cristalizado a partir
de soluciones acuosas formando estructuras
rmbicas con una molecula de agua, la cual se
libera cuando es calentada a ms de 100 C.
El cido ctrico en el periodo 2015 y 2016 en
Colombia exporto a los estados unidos una cantidad
de cido ctrico equivalente 26,6 millones de
dlares, el 71% de la cantidad que usa ese pas, los
otros proveedores son Brazil y Mexico
(ASOCAA, 2016 ); la demanda de cido ctrico
crece aproximadamente un 7% anual en el mundo,
con una produccin de 600.000 toneladas al ao y
un valor de mercado de ms de dos billones de
dlares en 2008. En el mundo gran parte de la
produccion se realizaba en europa, siendo la planta
Pfitzer la mayor productora, ahora la mayor
proctora es china y en menor medida canada,
acaparando alrededor del 40-50% del mercado por
sus bajos precios y alta calidad
Los producores destinanan el 70% de su produccion
a la industria de alimentos y bebidas, 18% a
industrias farmaceuticas y 18% a otros usos
(Kappor, 1982). En la industria de alimentos su
empleo equivale a un 55-65%, el 20 y 25% a acido
fosforico, principalmente en bebidas de cola, y un
5% usado es el acido malico (Sinskey, 1983).
GENERALIZADES DEL Aspergillus niger
El Aspergillus niger es un hongo filamentoso cuya
taxonoma es: Reino Fungi, Hongos Mitospricos
(Divisin Eumycota, Subdivisin Deuteromycotina,
Clase Hyphomycetes). Se caracteriza por las
conidias negras sobre un micelio de color amarillo
plido. Los conidiforos son lisos e hialinos, en
ocasiones con un ligero tono marrn. Las conidias
son globosas y a menudo muy rugosas en su
superficie; miden 4-5 m de dimetro. Suele
hallarse en productos almacenados y tiene
preferencias por alimentos ctricos; causa la
pudricin del rgano de reserva. Entra por las
heridas y se manifiesta en la superficie por una
masa de esporas negras (Mediavilla Molina, 1996).
Este hongo filamentoso es el usado para la
obtencin de cido ctrico mediante un proceso
fermentativo, que tiene un mayor beneficio en
relacin costo de produccin y rendimiento; la cepa
quema usada en la industria por sus requerimientos
y capacidad de produccin es la ATCC 11414.
BIOQUIMICA FERMETANTIVA DEL ACIDO
CITRICO
L produccin industrial de acido ctrico surgi de
los esfuerzos y experimentacin sistemtica de los
trabajos de Currie en 1917, gran parte de esta
experimentacin se hizo de manera emprica por lo
que la bioqumica en ese entonces no era muy clara.
Hoy en dia se conoce que el acido citrico es un
itermediario en el ciclo de acidos tricarcoxilicos o
ciclo de Krebs. Las funciones de este ciclo son
generar energa en la forma de ATP en conjuncin
con la fosforilacion oxiudativa durante el
metabolismo aerobico de carbohidratos;
naturalmente estos intermediarios casi nonestan
presentes por lo que se debe regular de manera
precisa la exprecion de enzimas, especialmente la
acotinaza H2O que continua el ciclo convirtiendo el
acido citrico en Cis- acotinato, por lo que se puede
decir que la produccion de cido ctrico necesita una
operacin defectuosa del ciclo de Krebs (Mariano
Garcia Garibay, 1993).
En una descripcin mas detallada de la
fermentacin citrica, el catabolismo de hexosas
ocurre funfamentalmente por la ruta de la glicolisis
con una pequea contruibucion de la ruta de
penstosas, aunque tambin puede usar otras
azucares para este proceso. El piruvato se
transforma en acetil co-A por medio de la enzima
piruvato deshidrogenasa y la coenzima a con la
ayuda de un NAD+, este se transforma en citrato
cion la salida de la salida de la coenzima A; la
acotinaza usando como cofactor el hierro hierro (II),
tranformando el citrato en Cis-acotinato que
convierte en isocitrato con ayuda de la acotinaza y
hierro (II). Como se haba mencionado
anteriormente se necesita la ruptura del ciclo de
acidos tricarboxilicos entre el citrato y el isocitrato
y evitar la accin de la isocitrato deshidrogenasa, de
tal forma que el ciclo no continue.
La consecuencia de la ruptura de esta ruta
metablica se requiere reacciones adicionales
llamadas anapleroticas o reabastecimiento, donde el
ciclo se reinicia desde un punto medio sin necesidad
de completarlo, en este caso se reinicia desde el
citrato (Mariano Garcia Garibay, 1993); hay tres
reacciones anapleiroticas posibles en el ciclo
interrumpido de Krebs, se realizan con: la piruvato
descarboxilaza que transforma el piruvato a
oxalacetato con ayuda mel ion Magnesio (II) como
coofactor, la fosfoenolpiruvado caboxiquinasa que
tiene una reaccion reversible que transforma el
fosfofenol piruvato a oxalacetato y este a su ves se
convierte en acido citrico; en caso de que la
actividad de la enzima acotinasa convierta acido
citrico en isocitrico, esta se convierte en oxalacetato
por medio de la isocitrato liasa que la transforma en
glyoxilato, esta por medio de la malato sintetasa y la
coenzima A y se convierte en malato que retorna a
oxalacetato.
FACTORES DE CRECIMIENTO Y DE
INHIBICION
El rendimiento comn del cido ctrico con
Aspergillus niger es del 70-90% en un porcentaje de
peso a peso, pero hay diferente factores que reducen
el rendimiento como la produccin de cido
oxlico, que inhibe la accin de la
fosfofructoquinasa que es esencial para la
produccin de la fructosa 1-6 difosfato, ese acido se
controla inhibiendo la enzima que lo produce
manteniendo un pH menor a 4 y 3.5, otro acido que
puede inhibir es el mismo cido ctrico que tambin
inhibe la accin de la fosfofructoquinasa, pero se
controla la accin adicionando pequeas cantidades
de amonio que mantiene activa la enzima.
Se ha demostrado que pequeas cantidades de
hierro, cobre, manganeso y zinc son esenciales para
tener una mayor produccin del acido, pero una
gran cantidad de Mn afecta favorece el crecimiento
de estructuras en forma de pellet, reduciendo el
rendimiento, un alto contenido de hierro favorece la
continuacin del ciclo de Krebs convirtiendo citrato
en isocitrato, un alto contenido de zinc y cobre
resulta toxico para el hongo.
Requerimientos nutricionales
La produccin de cido ctrico es inversamente
proporcional al crecimiento celular, pero una escasa
biomasa provoca que la duracin del proceso sea
mas largo, por lo que se debe controlar los aspectos
nutricionales que necesita el Aspergillus para crear
una correcta relacin de biomasa y produccin. Los
aspectos ms importantes nutricionalmente son el
contenido de carbohidratos y el contenido de
metales: los carbohidratos deben ser de fcil
asimilacin y de fcil transporte a travs de la
membrana. El hongo tiene una gran afinidad por la
sacarosa gracias a la presencia de invertasas
extracelulares en la membrana, estas desdoblan la
sacarosa a hexosas, estas son altamente activas en
las condiciones que se crean en el proceso
fermentativo, esto significa una gran ventaja a nivel
industrial al poder usarse subproductos de la
produccin azucarera como las melazas de caa y
remolacha que tambin tiene como ventaja una
adecuada concentracin de nitrgeno.
El contenido de azucares adecuado para el
Aspergillus niger es entre 140-240 g/L, una menor
cantidad provoca una produccin de acido oxlico
como contaminante y una alta produccin de
biomasa. El contenido de nitrogeno se debe
encontrar entre 0.1 y 0.4 g/L, necesario para inicar
la acumulacin de cido por la activacin de la
enzima fosfructoquinasa, el contenido de nitrgeno
puede ser alto mientras el contenido de fosfatos sea
bajo. El contenido de fosfato recomendado es 0.1 y
0.2%, una concentracin mayor fomenta el
crecimiento celular pero sin produccin de cido,
pero es escencial para la sintesi de ADN (Lucia.G,
2012); el potasio como cofactor de las piruvato
quinasas y las piruvato caboxilasas (Lucia.G,
2012).
Ahora los metales son fundamentales en la
produccin del cido, ya que funcionan como
cofactores de las enzimas necesarias pero deben
encontrase en condiciones adecuadas o reducirn el
rendimiento de la produccin. El metal ms
importante es el hierro como cofactor de la enzima
acotinasa junto con el manganeso y el zinc.
En caso de presentar melazas con alto novel
metlico se debe hacer un pre-tratamiento para
reducir la cantidad, se hace mediante el uso de
agentes quelantes con hexacianoferrato o
ferrocianuro, es recomendable el uso de resinas de
intercambio inico o catinico pero no son rentables
para un proceso a escala industrial.
Aspectos fisicoqumicos
Definido los medios de cultivo ya decuaods los
medios de cultivo, los aspectos fisicoquimicos son
otro factor importante a tener en cuenta. Primero
acondicionar de acuerdo al tipo de cultivo que se
vaya a realizar, ya sea por cultivo en superficie (sin
agitar el medio) o cultivo por profundidad (con
agitacin). La temperatura se debe controlar entre
25 y 30 C, temperaturas mayores provocan una
acumulacin de acido oxlico y gluconico, tambin
para evitar la produccion de este contaminante se
recomienda pH entre 3.5 y 4 en su fase inicial,
iniciado el proceso el pH disminuye a 2.
Otro aspecto a tomar en cuenta es la aireacin, esto
se debe a que el proceso es aerobio y consume
oxgeno, se podra inyectar oxigeno enriquecido
para aumentar ms la produccin, pero el alto costo
no es compensado a la produccin; interrumpir el
suministro de oxgeno provoca que toda la
produccion de acido se interrumpa asi se reanude al
poco tiempo, esto lleva apensar que hay una ruta
alternativa a la de la fosforilacion que el Aspergillus
niger usa (Kubicek, 1980); el aire a usar debe ser
esterilizado y limpiado mediante filtros (NUEZ,
2008).
Otro aspecto relacionado a la planta y pre
tratamiento es el contenido de agua proviene de la
dilucin inicial de las melazas, de esta forma
disminuye la viscosidad y aumenta la actividad de3
agua que puede usar el hongo, adems de facilitar
procesos como la agitacin, filtracin como el
lavado y purificacin.
Proceso industrial
Como se haba mencionado en la los aspectos
fisicoqumico
Proceso de separacin
El proceso de separacin, comienza con la llegada
del licor post-fermentado al filtro rotatorio a vaco
con precapa, el cual separa el micelio del
microrganismo muero, el cual ser almacenado. El
lquido filtrado, compuesto por el licor post-
fermentado sin micelio, es transportado mediante
tubera hacia el tanque de lechada. En el tanque de
lechada, el lquido que se va filtrando en la etapa
anterior, se (se ira mezclando) con una lechada
preparada, se produce una reaccin qumica que
transforma el cido clorhdrico del licor post-
fermentado en citrato clcico, el cual es slido y se
precipita; es necesario un sistema de agitacin que
promueva la mezcla de las sustancias y un serpentn
refrigerante, debido a lo exotrmico de la reaccin.
(La reaccin de la lechada de cal se realiza en
descontinuo).
La masa proveniente de la lechada, es entonces
transportada a un reactor, el cual se calienta hasta
una temperatura cercana a la ebullicin, crendose
un vapor condensante que se hace circular por el
interior del serpentn del reactor.
Una vez calentado el licor, se enva por una tubera
hacia un nuevo filtro de tambor rotatorio al vaco, el
cual separa el citrato clcico en forma de masa y lo
enviara mediante una cinta transportadora hacia el
reactor de descomposicin del citrato. El lquido
filtrado (Licor-post-fermentado sin cido ctrico) es
entonces almacenado.
En el reactor de craqueo, la torta de citrato cancuco
se ira mezclando con una disolucin de acdo
sulfrico, producindose una reaccion quemica que
forma yeso el cual es solido y precipita, dejando
libre la solucin de cido ctrico. Tambin existe un
serpentn de refrigeracin el dispersar el calor
producido durante la reaccin. (La reaccin ser
discontinua).
Tras el craqueo del citrato clcico, la masa
reaccionante es llevada a un filtro de banda de vaco
que seara el sulfato clcico o yeso del lquido que
contiene el acido ctrico. El yeso se lleva a
almacenamiento, mientras que el lquido filtrado
ser conducido por tubera hasta un sistema
combinado de desmineralizacin y carbn activado
que eliminara impurezas que an tiene el producto.
Imagen No.1. Resumen esquemtico de la separacin del
cido ctrico.
Proceso de purificacin.
La fase de purificacin comienza cuando la
disolucin de cido ctrico abandona la columna de
intercambio inico y carbn activado y es
conducida hacia el siguiente equipo, que es un
evaporador de doble efecto de pelcula descendente.
En esta parte del proceso, la disolucion del acido
citrico pierde agua mediante accin de calor
concedido por el vapor condensante, quedando lo
suficientemente concentrado.
Al contrario del proceso anterior de separacin, que
se haca en discontinuo, el sistema se hace en
continuo.
La corriente que sale del vapor, pasa al interior del
equipo de cristalizacin del MMSPR-DTB. En el
interior de este aparato, se crea una sobresaturacin
por vacio, lo que provoca la nucleacin y la
formacin de cristales solidos de acido citrico. Estos
cristales y el licor no cristalizado, salen del
cristalizador hacia la siguiete etapa, en donde una
centrifuga separa los cristales recin formados de
producto del licor y sus impurezas. La corriente
cristalina, es llevada a un secador de lecho fluizado
donde los cristales de cido ctrico pierden el agua
restante, quedando totalmente secos. En esta etapa
se le darn las caractersticas finales al producto
dependiendo delas caractersticas deseadas de
cristalizacin, ya sea grnulos, polvo o escamas.
VIII. REFERENCIAS
ustes, D., Cuervo, D., Vargas, J., (2014).
Biorremediation for Degradation of Total
Hydrocarbons Presents in the Sediments of Fuel
Service Station. Rev. Tec. Ing. Univ. Zulia, Vol.
37. N1, 20-28.
Facultad de Ingeniera Facultad de
Ciencias Bsicas |11