TRABAJO SEMESTRAL (PROYECTO)

AG-330 PRINCIPIOS DE PROPAGACION DE PLANTAS

Por: Jorge Alberto Ros Rodriguez 19960027

E-mail: 19960027@lamolina.edu.pe

Ttulo: Biotecnologa - micropropagacin de la Ananas

comosus pia familia: Bromeliaceae.

Plan de negocios acorde a la realidad peruana.

RESUMEN

Parte I:

- Necesidades bsicas para la instalacin de

laboratorios dedicados a la micropropagacin de la

pia (Meja Anaya, 1988).

Qu es el cultivo in vitro dentro del cultivo de

tejidos?

Principios, clases de crecimiento, ventajas,

desventajas del cultivo in vitro.

Estados de propagacin, tcnicas usadas.

Planificacin, instalacin y facilidades de un pequeo

laboratorio.
- Utilizacin de tecnologa local y fornea para la

micropropagacin (Meja Anaya, 1988).

Equipos y materiales, su manejo y recomendaciones.

Productos qumicos.

- Investigacin: micropropagacin o cultivos de tejidos

en variedades de pia (Meja Anaya, 1994).

Datos de una investigacin (realizada por Ing. Meja

Anaya).

Parte II:

- Evaluacin del impacto socio-econmico en la

agricultura, agricultores y empresarios que trabajan

con Ananas comosus pia (Komen, 1998).

Necesidades y medidas recomendadas:

- Fuentes de financiamiento para el establecimiento de

sta empresa en relacin a los costos de produccin

(FAO, 1996).

Situacin peruana.

Estudio de costos de produccin.

- Evaluacin de posibilidades y exigencias para la

exportacin de propgulos de Ananas comosus pia

(CODESU, CIID, FAO, 1999).

 Contexto macroeconmico y poltica sectorial.

Institucionalidad, legislacin, mercado.

Potencial de la biotecnologa en el agro.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Komen, J.; C. Falconi y Hernndez (Eds.) 1998.

Transformacin de las prioridades en programas viables,

actas del sembrado de polticas biotecnolgicas

agrcolas para Amrica Latina. La Haya/Mxico D.F.:

Intermediary Biotechnology.

Valoracin, acceso y proteccin de los recursos

genticos de la amazona (Mesa Redonda: 14 al 15 de

Enero de 1999). Pucallpa. Auspician: CODESU, CIID,

Sociedad Peruana de Derecho Ambiental, FAO; World

Resources Institute.

Ing. Rubino Meja Anaya. 1994. Propagacin Comercial

de 312 especies de plantas por cultivo in vitro.

Agrobiotecnologa: fundamentos y aplicaciones. La

Molina.

Roca, W.M., L.A. Moroginski (Ed.) 1991. Cultivo de

tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones

CIAT-Colombia, 969 pp.

 Ing. Rubino Meja Anaya. 1992. Alternativas de

equipamiento de laboratorio de cultivo in vitro y

micropropagacin. Agrobiotecnologa: fundamentos y

aplicaciones. La Molina.

J.M. Becker. 1999. Biotecnologa: Curso de prcticas

de laboratorio. Editorial Acribia S.A. Zaragoza. Espaa.

Pag. 245.

Organizacin de las Naciones Unidas para la

Agricultura y la Alimentacin (FAO). 1996. Tcnicas

convencionales y biotecnolgicas para la propagacin de

plantas de zonas ricas. Editores, Juan Izquierdo,

Oficial Regional de Produccin Vegetal - Oficina

Regional de la FAO para Amrica Latina. Santiago de

Chile. Chile. Pag. 347.

DESARROLLO

Parte I:

I) Necesidades Bsicas para la Instalacin de

Laboratorios dedicados a la Micropropagacin de la Pia.

El trmino cultivo de tejidos vegetales o de plantas

se refiere al cultivo in vitro de cualquier

estructura viva de una planta, sean stas una clula,

un tejido o un rgano, bajo condiciones aspticas.

 El principio de cultivo de tejidos es simple: primer,

es necesario asilar una parte de la planta (explanta);

segundo, proveer a la explanta de un medio ambiente

apropiado (medio de cultivo adecuado y condiciones

fsicas propias de la especie) en el cual puede

expresar su potencial intrnseco o inducido y, tercero,

se realiza el trabajo en condiciones aspticas.

Clases de Crecimiento in vitro

a. Crecimiento organizado se denomina cuando se utilizan

puntos de crecimiento (meristemas apicales) de tallos

y races, yemas florales, pequeos frutos, nudos y

cultivo de embriones. Estas explantas cuando son

cultivadas in vitro continan creciendo con su

estructura.

b. Crecimiento desorganizado se denomina cuando segmentos

de tejido son cultivados in vitro, stos carecen de

estructuras diferenciadas.

Ventajas que Ofrece el Cultivo in vitro para Pia

Propagacin clonal masiva de plantas libres de

enfermedades en corto tiempo.

Evita la erosin gentica.

 Reduce costos de labores agronmicas en el

mantenimiento de grandes colecciones de germoplasma en

el campo.

Los clones pueden ser propagados en cualquier poca

del ao, mientras que por mtodos convencionales,

dependen de condiciones propicias (pocas de siembra,

etc.).

Facilita el intercambio de material gentico e

introduccin cuarentenaria.

Desventajas de cultivo in vitro

a. Requiere de personal especializado: bilogos,

fisilogos, fitomejoradores o fitopatlogos.

b. Requiere de infraestructura y equipamientos

especiales.

c. La adquisicin de productos qumicos es costosa y

difcil especialmente en pases en vas de desarrollo

con pocos recursos econmicos.

d. Difcil de instalar laboratorios in vitro donde no

exista fluido elctrico o se presenten interrupciones

peridicas de ste porque se malogran los cultivos.

Murashige ha establecido para la propagacin in

vitro una secuencia de tres estados de cultivo.

Estado I

Llamado tambin estado de establecimiento, donde parte

de la planta (explanta) es desinfectada y cultivada

aspticamente en un medio de cultivo, producindose el

crecimiento de la plntula o la proliferacin de callos.

Estado II

Estado de multiplicacin o micropropagacin,

caracterizado por el rpido incremento del propgulo

(plntulas). Plntulas obtenidas en este estado pueden ser

recicladas varias veces hasta obtener el nmero de

plntulas requeridas.

Estado III

Estado de maduracin, de endurecimiento o de

preparacin de la plntula para el ambiente natural. En

este estado se induce el enraizamiento de las plntulas, es

decir, la conversin de plntulas, al estado autotrfico.

Tcnicas Usadas en Cultivo in vitro

Cultivo de rganos: vulos, embriones, hojas, yemas,

corona, fragmentos de stos, para estudiar diversos

problemas de tipo fisiolgico en la propagacin vegetativa.

Cultivo de anteras: la capacidad de regenerar plantas

haploides a partir de granos de polen es uno de los grandes

xitos del cultivo de tejidos vegetales. Estas plantas

haploides son utilizadas en programas de mejoramiento.

La ingeniera gentica combinada con cultivo in

vitro es en la actualidad un campo nuevo de investigacin.

PLANIFICACIN, INSTALACIN Y FACILIDADES DE UN PEQUEO

LABORATORIO

La instalacin de laboratorios en pases como el

nuestro, de bajos recursos econmicos, en su gran mayora

se efectan adaptando algn ambiente acorde a las

necesidades del programa.

Tamao del Laboratorio

Para determinar el tamao de un laboratorio se deben

tener en cuenta los siguientes factores:

a. Capacidad de produccin y metas.

b. Espacio disponibe.

c. Recursos financieros.

d. Naturaleza de trabajo (conservacin de germoplasma,

erradicacin de enfermedades, micropropagacin in

vitro, etc., o combinacin de los mismos).

Material de Construccin

El piso y las paredes del laboratorio deben ser de

concreto y completamente enlucido, sin grietas ni hojos

para facilitar un lavado y desinfestacin completa. Es

preferible tener el piso de losetas y las paredes con

maylicas de color blanco si los medios financieros lo

permiten, porque asegura una asepsia ptima.

El laboratorio debe ser completamente aislado

(cerrado), para evitar entrada de polvo y microorganismos

contaminantes del ambiente exterior. Se recomienda tener

tres ambientes o cuartos.

Cuarto de Cultivo

Llamado tambin cuarto de incubacin o mantenimiento.

En este ambiente se colocan los cultivos in vitro, unos

para crecimiento y otros para conservacin, con este

objeto, debe existir dentro del cuarto de cultivo un

pequeo ambiente de temperatura reducida (8C) para

conservacin de germoplasma en condiciones ptimas, pero no

es indispensable si los recursos econmicos no lo permiten.

El cuarto de cultivo debe tener:

Iluminacin

La iluminacin es importante para producir plntulas

verdes. Con esta finalidad, los tubos fluorescentes blancos

(40W) son preferidos como fuente de iluminacin artificial,

aunque es recomendable intercalar con lmparas

incandescentes (25W).

Cuando se instalan tubos fluorescentes blancos junto

con los reactores, stos generan calor y alteran el

crecimiento de las plntulas. Los reactores deben

instalarse distantes de los tubos o en el exterior del

cuarto de cultivo. En zonas fras, donde se requieren de

estufas pequeas, pueden colocarse los reactores dentro del

ambiente. Para aislar el calor entre los pisos del estante

coloque planchas de tecnopor.

Instale los fluorescentes en la parte superior de cada

piso del estante en forma horizontal a 15cm de separacin

entre tubos. Es aconsejable, colocar un sector del estante

con tubos en posicin vertical para cultivos en frascos con

tapa oscura (por ejemplo: frascos de mermelada).

Para la medicin de la luz se utilizan tres sistemas

de unidades:

a. Unidades fotomtricas o de iluminacin (por ejemplo:

Lux=1X).

b. Unidades radiomtricas o energticas (por ejemplo:

Watt/m2=W/m2).
c. Unidades de fotones (por ejemplo:

Einstein/m2/segundo=uE/m2/s).

Los niveles de iluminacin oscilan entre 1000 y 4000

Lux. Esto se logra colocando tubos fluorescentes blancos

(40W) a una altura de 10-20 pulgadas sobre los cultivos.

El fotoperiodo vara entre 12-20 hs, siendo el ms

comn 16hs. Los estados I y II necesitan baja iluminacin

mientras que el estado III, una alta iluminacin.

Temperatura

Se adecuan a temperaturas constantes durante el da y

la noche, siendo la ms comn entre 20-28C (68-82F).

Estantes Metlicos

Los estantes debern ser de metal (anaqueles de

ngulos ranurados) preferible de color blanco.

Cuarto de Transferencia

Llamado tambin rea o ambiente de transferencia, es

exclusivo para cortes de meristemas y micropropagacin.

Debe mantenerse una asepsia total. Para lograrlo puede

estar equipado de luz ultravioleta, aunque sta es daina

para el ser humano y plntulas. Por tal motivo deber

permanecer encendida nicamente durante la noche, o

mientras no se trabaja.
 En este ambiente debern guardarse medios de cultivo,

materiales e instrumentos esterilizados.

Cuarto de Lavado

Este ambiente se utiliza para realizar trabajos de

preparacin de medios de cultivo, lavado de materiales e

instrumentos, desinfeccin de materiales que van a ingresar

al cuarto de transferencia, entrenamiento de personal y

recepcin de visitantes.

Cmara de Termoterapia

Permiten regular automticamente la temperatura,

iluminacin, fotoperiodo y humedad relativa segn los

requerimientos de trabajo.

Sin embargo, una cmara de termoterapia se puede

construir con material disponible de la localidad como el

modelo hecho por el Programa Nacional de Papa, construido

con cemento y ladrillo, con tres resistencias gruesas de

estufa, conectadas a un termostato para regular la

temperatura deseada, un foco de 200W, instalado en el

centro superior del techo, un ventilador pequeo para

uniformizar la temperatura y la humedad, y una ventana de

vidrio transparente para observar el comportamiento de las

plantas, la temperatura y humedad relativa, registrados por

un pequeo termohidrmetro, sin la necesidad de abrir la

puerta.
Depsito de Agua

El laboratorio de cultivo in vitro debe contar con

agua permanente y limpia. Con este objetivo debe

almacenarse el agua en depsitos o tanques de eternit de

200 a 300 litros, sobre el techo o en un lugar elevado. En

la salida del agua incorporar un filtro para eliminar

sustancias extraas.

EQUIPOS

Autoclave

Los autoclaves son esterilizadores a presin de vapor

de agua. En un laboratorio de cultivo in vitro cuando se

no tienen grandes recursos se puede utilizar una olla de

presin para esterilizar medios, soluciones, agua e

instrumentos.

La autoclave porttil vertical consta de un recipiente

de aluminio con tapa similar a una olla de presin de

aproximadamente 35 cm de dimetro y 30 cm de altura. La

tapa es separada y se adhiere por medio de armellas en el

borde superior del recipiente para un sellado hermtico.

Manejo de Autoclave Porttil Vertical

a. Retire la olla interna.

b. Llene agua desionizada o destilada hasta cubrir el

termostato.

c. Coloque la olla interna sobre el soporte de metal.

d. Coloque las vasijas o materiales que se van a

esterilizar.

e. Coloque la tapa introduciendo primero el tubo de

aluminio dentro del canal de la olla interior, que se

encuentra a un costado de sta. Gire la tapa hacia la

derecha hasta coincidir las armellas con sus lugares

de amarre en el borde superior de la olla. La flecha

de la tapa debe coincidir con la raya del borde

superior de la olla. Esto indica una posicin correcta

y un sellado uniforme evitando fuga de presin.

f. Procure nivelar la tapa, de tal manera que la abertura

que existe entre la tapa y la boca de la olla debe ser

la misma en todo el borde.

g. Asegure la tapa con los tornillos de seguridad, ajuste

los tornillos.

h. Encienda el equipo, se prender una luz indicadora

roja.

i. Los primeros 10 a 15 minutos elimine el aire interno

poniendo en posicin vertical el expulsor de aire.

Cuando observe salida del vapor colquela en posicin

 horizontal. Este paso es fundamental para asegurarse

un esterilizado completo.

j. Espere que el manmetro indique 250F que equivale a

121C o 15 libras (1 atmsfera) de presin y gire el

botn del termostato hacia la derecha justo hasta que

se apague la luz roja. Aproximadamente la flecha del

botn queda al centro. Controle el tiempo.

k. Apague el autoclave y espera que el manmetro registre

cero, coloque el expulsador de aire en posicin

vertical para proceder a abrir.

l. Con la mano previamente enjuagados con alcohol 70%

retire cuidadosamente medios o materiales

esterilizados. Colquelos en lugares completamente

aspticos.

Unte con vaselina la resistencia, el termmetro y la

base de la olla cuando deje de usarla por varios das, para

proteccin. Se recomienda no encender el autoclave sin

antes llenar el agua.

Cmara de Transferencia

Llamada tambin cmara asptica se usa sobre un mesn

donde se realizan labores de cultivo in vitro en forma

asptica. Se pueden adquirir de fbrica o fabricarlas de

diversos modelos, como los de cajn cerrado pueden tener

dos huecos en el frente (a veces con mangas) y tienen un

plano inclinado de vidrio.

Utensilios de la Cmara

Pinzas rectas

Bistures (mango N7 y hoja N11).

Mechero de vidrio 120 ml de capacidad.

Vasos pirex con alcohol 96%.

Tijera pequea con punta fina.

Algodn (hidroflico).

Fsforos

Papel platino (18x25F)

Placas petri (90 mm)

Desionizador de Agua

Llamado tambin desmineralizador, desalinizador o

intercambiador de iones. Este equipo se utiliza para

obtener agua qumicamente pura bajo el sistema de

intercambio inico.
 En zonas de considerable lluvia debe almacenarse agua

que drena de los techos para utilizarla como agua

desionizada.

Destilador de Agua

La destilacin es un proceso de evaporacin y

condensacin. Utilice destilador de vidrio y no hecho de

cobre u otro metal, porque las plntula in vitro son poco

tolerantes a residuos de cobre que pueden generarse durante

el proceso de destilacin y por ende encontrarse disueltos

en el medio de cultivo.

El agua potable, apta para el consumo humano, no es lo

adecuadamente pura como para ser usada en el cultivo de

plntulas.

Recomendaciones

a. Cuide que no se agote el agua del matraz o del baln

de vidrio, de lo contrario ste se rompe con el calor

generado por la cocina.

b. Con cido sulfrico 1N o con vinagre de cocina

enjuague el refrigerante cuando ste presente una capa

color blanquecina por acumulacin de carbonatos

despus de cierto tiempo de funcionamiento.

c. Es preferible usar agua desionizada o agua hervida

para destilarla, de lo contrario la ebullicin del

 agua es desuniforme y peligrosa, pudiendo explosionar

el tapn del matraz.

d. No utilices matraz conteniendo carbonatos sin antes

haberlo lavado con cido sulfrico o con vinagre, de

lo contrario el matraz se revienta con la continua

ebullicin.

Balanza

En todo laboratorio debe existir una balanza analtica

y una de torsin. La primera para pesar cantidades pequeas

(miligramos o fracciones de ste) y la segunda para pesar

cantidades mayores (gramos).

La balanza de torsin como Sartorius tiene una

capacidad de peso mximo de 160 g, la divisin de la escala

ptica equivale a 10 mg siendo sta la mayor precisin que

se puede obtener.

Instrumentos de pesada

a. Esptulas de acero y plstico. Las de plstico se usan

cuando se manipulan reactivos corrosivos (NaOC1,

Ca(OC1)2, etc.).

b. Cepillo o brochas para limpiar residuos.

c. Recipientes para pesar, como papel aluminio, etc.

Potencimetro

El modelo 301 Orion Research, es el de uso ms

generalizado en este tipo de laboratorios, y tiene un

manejo sencillo.

Modelo de potencimetro modelo 301 Orion Research

a. Enchufe en el tomacorriente 220 110V. Para 110V

verifique si tiene transformador incorporado, de lo

contrario use uno adicional.

b. Con el botn TEM ajuste la temperatura

aproximadamente a la del laboratorio.

c. Retire el protector del electrodo, lave con agua

destilada y seque con papel suave.

d. Coloque el electrodo en solucin tampn de pH 4 (color

rosado).

e. Ajuste con el botn CALIB hasta que el cuadrante

registre el valor de pH 4.

f. Retire el electrodo de solucin tampn, lave y seque.

g. Coloque el electrodo en solucin tampn de pH 7,

observe el cuadrante automticamente registre el valor

de pH 7.
 h. Retire el electrodo de la solucin tampn, lave y

seque. En caso de no haber alcanzado la lectura de pH

7, repita la calibracin utilizndose soluciones

tampn nuevas, para lo cual se tendr un stock de

dichas soluciones.

i. Coloque el electrodo en la solucin medio nutritivo u

otra solucin que se desea ajustar el pH.

j. Registre la lectura y adicione gotas de HCl 1N o KOH

1N para bajar o subir respectivamente el pH del medio

de cultivo u otra solucin.

k. Retire el electrodo del medio de cultivo, lave y

seque.

l. Coloque el protector al electrodo o mantngalo

sumergido en un frasco con agua destilada, para que no

se reseque.

ll. Desenchufe el aparato.

Instrumentos para calibrar

a. Piseta 120 ml con agua destilada.

b. Frascos de vidrio con tapa para HCl 1N y KOH 1N.

c. Buffer pH 4 y pH 7 para calibrar el equipo.

 d. Pipetas Pasteur con bulbos de jebe para tomar HCl o

KOH. Cada pipeta debe identificarse.

e. Papel suave para secar el electrodo.

f. Frasco de vidrio con agua destilada para mantener

sumergido el electrodo.

g. Caja de madera 25x10 cm para guardar instrumentos.

Estereoscopio

El instrumento se utiliza para la diseccin y excisin

de meristemas ubicados dentro de las yemas.

Recomendaciones para su uso:

a. Mantenga limpio el espejo y los lentes del

estereoscopio. Frote los lentes del ocular y el

objetivo sin presionar, con papel especial para

lentes.

b. Mantenga cubierto con la funda cuando el instrumento

no est en uso.

c. Nunca use el alcohol para limpiar, pues daa aquellas

superficies del instrumento que tienen laca para su

proteccin.
Acondicionador de Aire

Son verdaderos acopiadores de polvo, por lo tanto se

debe usar para su limpieza un aspirador limpiando la unidad

por dentro y fuera.

Desde el punto de vista de las condiciones exteriores,

elija una ventaja que est a la sombra, si es posible. el

calor excesivo del sol, y su incidencia en forma directa

puede afectar el funcionamiento del compresor.

Consideraciones a tomar en cuenta para su utilizacin:

Ubicar el lugar exacto y preciso, preferentemente en

partes altas.

Montar con seguridad.

Sellas adecuadamente los lados con espuma plstica.

Inclina insuficientemente hacia atrs para facilitar

el drenaje del agua acumulada en el compresor.

Colocarlo en lugares ventilados.

Dispensadores de Medios

El modelo de un dispensador Universal Dispensette

para distribuir cantidades exactas y rpido, hecho de un

material resistente al autoclavado.

Agitador Elctrico con Barra Magntica (STIRR)

Util para disolver reactivos, preparar soluciones

stock y para preparar medios de cultivo.

Refrigeradora

Agitador (Sheaker)

Termohidrgrafo

Modelo Polymeter 5001, para controlar la temperatura

y humedad relativa del laboratorio o de la cmara de

termoterapia.

Esterilizador de Instrumentos

MATERIALES

Materiales de vidrio:

Tubos de prueba 12x75, 18x150 y de 25x150 mm.

Beaker (vasos de precipitacin) 50, 250 y de 1000 ml.

Erlenmeyer (matraces) 125, 500 y 1500 ml.

Placas petri de pirex.

Pipetas de 1, 5 y 10 ml.

Embudos
 Frascos color ambar con tapa de 500 y 1000 ml.

Buretas

Probetas

Materiales de Plstico:

Frascos autoclaves para micropropagacin.

Frascos color ambar con tapa 100, 200, 500 y de 1000

ml para soluciones concentradas.

Bidones transparentes con grifo de 5 y 10 litros para

depositar agua destilada y alcohol.

Probetas: 50, 500 y de 1000 ml.

Pisetas de 120 y 500 ml.

Baldes de 15 litros para depositar agua desionizada y

para lavado de materiales.

Pipetas: 1, 5 y de 10 ml.

Otros materiales:

Rollos de papel filtro.

Plumones para vidrio.

Lpiz de cera.
 Parafilm para sellar tapas de frascos.

Bandejas de plstico.

Gradillas de plstico o de metal.

Olla para disolver medio de cultivo en bao maria.

Asientos de madera 50 cm de altura.

Mesa de madera forrado con frmica, 90 cm de altura.

Guardapolvos

Escobillas de tamaos diferentes.

Rollos de papel platina.

III) Investigacion: Micropropagacin o Cultivos de Tejidos

en Variedades de Pia

La pia Ananas comosus (L.) Merr., mayormente se

propaga en Hawaii en forma asexual por corona o por

esquejes de retoos en otras partes del mundo.

Explante

Coronas pequeas de frutos maduros, son removidos

cuidadosamente de todas las hojas.

Tratamiento

Hipoclorito de sodio 0.5% (19% clorox) + 3 gota de

agente humectante (Tween 20/100 ml) por 60 minutos. Despus

de extraer las yemas axilares son desinfectadas en 1% de

clorox por 20 minutos, luego se cultivan en medio 1.

Medio para pia

I IIa IIb III

Sales MS Comp. 1/2 1/2 1/2

Agua de coco (%v/v) 25 25 - -

BA (mgl-1) - - 0.5-1.0 -

Sucrosa (gl-1) 30 30 30 30

Agar 7 7 7 7

PH = 6

Luz. Iluminacin continua a 2.1 Klx.

Temperatura: 26 +/- 2C

Medio alternativo

Ingred. Apice II

MS Completo Completo

ANA (M) 10-7 -

BAP (M) - 10-5

Comentarios

En estadio I, el cultivo se coloca en un agitador a

1/5 rpm, despus de 2 semanas se subcultiva en medio fresco

(IIa) y en 2 meses se observan tallos solitarios con 2-8

hojas, estos son subcultivos en medio (II,b) donde se

obtienen plntulas con 3 tallos laterales dentro de 30

das, posteriormente la multiplicacin se obtiene mediante

separacin de tallos laterales y subcultivar por 4 veces en

medio (II,b), de aqu se transfiere a medio slido (III).

Se estima producir 5000 plntulas en 12 meses a partir de

una sola corona.

Apices de Pia cultivado en medio alternativo,

desarrollan brotes verdes en una semana. Los brotes

producen muchas yemas en medio II.

Una combinacin de ANA y BAP an mejora la

proliferacin de yemas. Tambin se ha observado que la

presencia de mucho primordio foliar en el pice implantado

suprime la proliferacin del brote. La proliferacin de

brotes puede mantenerse en el medio alternativo mediante

subcultivos hechos cada 6 semanas, transfiriendo las

plntulas sobre medio MS bsico con proporcin

relativamente baja de citoquinina y auxina, los brotes

pueden regenerarse en una planta completa.

I) Evaluacin del impacto socio-econmico en la

agricultura, agricultores y empresarios que trabajen

con Ananas comosus "pia".

Necesidades

Per: Productividad / medio ambiente

Poner en prctica estrategias y polticas nacionales en

diversidad biolgica.

Establecer estrategias y polticas en seguridad

biolgica.

Consideracin socioeconmica:

Asegurar la participacin de todos los sectores

sociales en la planificacin del desarrollo de la

agrobiotecnologa.

Poltica o consideracin socioeconmica:

Establecer polticas de proteccin para los sectores

sociales ms vulnerables al introducir de la

agrobiotecnologa.

Medidas recomendadas:

Elaborar herramientas y capacidad apropiadas.

Desarrollar recursos humanos e infraestructura.

 Crear conciencia nacional.

Establecer un Comit Nacional de Bioseguridad.

Identificar a los protagonistas.

Promover un amplio intercambio de informacin

pertinente.

Identificar los cultivos importantes y establecer

prioridades.

Crear un Sistema Nacional de Agrobiotecnologa.

Preparar diagnsticos de la situacin.

Determinar el papel socioeconmico y cultural de los

recursos genticos autctonos.

Delimitar sectores y reas geogrficas protegidos.

Elaborar alternativas de biotecnologa apropiada para el

mejoramiento de los recursos autctonos.

II) Fuentes de financiacin para el establecimiento de

esta empresa en relacin a los costos de produccin.

En este contexto, algunos pases en desarrollo han

optado por mecanismos de apoyo (financiaciero,

institucional) a entidades pblicas y privadas, que les

permitan desarrollar actividades de biotecnologa segn sus

necesidades, a fin de incrementar su competitividad en el

mercado internacional.

El principal objetivo del presente documento es

presentar y discutir la situacin actual del financiamiento

de la biotecnologa agropecuaria en el Per, brindando as

una base temtica a los formuladores de la poltica

sectorial y tecnolgica y a los participantes en las

actividades de investigacin agropecuaria.

El Instituto Nacional de Investigacin Agropecuaria

(INIA), la Universidad Nacional Agraria (UNA) y el Consejo

Nacional de Ciencias y Tecnologa (CONCYTEC), son entidades

pblicas, las compaas cerveceras y Maltera Lima, la

Fundacin Nacional del Algodn (FUNDEAL) y Penta Seeds del

Per (privadas).

En 1995, el gasto en biotecnologa agropecuaria en el

Per fue de alrededor de 0.43 millones de dlares, de los

cuales cerca del 93% corresponde al sector pblico y el 7%

restante al sector privado. A pesar de que en los ltimos

cinco aos el gasto en biotecnologa agropecuaria ha ido

aumentando con una tasa anual promedio del 22%, es

importante destacar que representa slo el 4% del gasto

total en investigacin agropecuaria y el 0.009% del PBI

agropecuario.
 El INIA, principal actor en la investigacin

agropecuaria del pas, aplica la biotecnologa no tanto

para el mejoramiento sino para la micropropagacin de

plantas.
Estudio de Costos de Produccin para Ananas comosus pia
del a familia Bromeliaceae

Dato Operacional Pia

- Explantes $ 147 coronas
- Ciclo de transferencia $ 5
- Total semanas $ 24
- Plantas enraizadas $ 11000
- Horas de transferencia $ 132

Costos de Cultivo de Tejidos

- Jornales $ 475
- Preparacin de medio y limpieza $ 100
- Supervisin y administracin $ 394
Total $ 969
- Costo de medio $ 69
- Recipiente de cultivo amortizado $ 17
- Equipamiento, amortizacin en 5 aos
($ 5000) $ 47
- Implementos de laboratorio
amortizados en 20 aos ($ 50000) $ 103
- Gastos generales $ 66
- Costo del cultivo $ 1271
* Costo por planta $ 0.116

Costo de Invernadero Pia

- Jornales $ 144
- Materiales $ 31
- Carga de sustrato $ 241
Total $ 416
* Costo por planta en invernadero $ 0.038
* Costo total por planta $ 0.154
 Sin embargo, seran necesarias algunas medidas

globales para promover la inversin.

El establecimiento del marco jurdico sobre los

derechos de propiedades de los factores de produccin

(el agua, los bosques y la tierra) que favorecera la

rentabilidad del sector.

La promulgacin de una legislacin especfica sobre

derechos de propiedad intelectual en materia de

biotecnologa sera conveniente para acentuar el

incentivo del sector privado.

La formulacin de una poltica tecnolgica destinada a

promover la inversin privada y con una visin a

mediano y largo plazo.

La determinacin de la estrategia del INIA dentro de

la poltica sectorial y macroeconmica y el

establecimiento de prioridades de actividades,

orientndolas en funcin de la demanda (ya sea del

mercado interno o del externo).

La consolidacin del SINITTA que permitira la

participacin del sector privado en las actividades de

biotecnologa.
III) Evaluacin de posibilidades y exigencias para la

exportacin de propgulos de Ananas comosus pia

Contexto Macroeconmico y Poltica Sectorial

El estado debe asumir la funcin de regulador

eficiente ms que de productor.

Contexto de Poltica Tecnolgica

En el campo de la biotecnologa no hay ningn plan

para desarrollarla a nivel nacional.

Institucionalidad de la Tecnologa Agropecuaria

En 1992, en la Ley Orgnica del Ministerio de

Agricultura, se estableci que el Ministerio promover el

funcionamiento de un Sistema Nacional de Investigacin y

Transferencia y Transferencia de Tecnologa Agraria

(SINITTA) con el fin de integrar a quienes participan en la

generacin y el uso de la tecnologa.

Legislacin Sobre los Derechos de Propiedad Intelectual

Instituto Nacional de Defensa de la Competencia y de

la Propiedad Intelectual (INDECOPI) la autoridad nacional

competente en la materia.
Naturaleza de la Tecnologa y del Mercado

La garanta de continuidad con respecto a la

apropiabilidad de los beneficios. Los beneficios son

apropiables en la medida en que las organizaciones

pueden quedarse con las ganancias de sus innovaciones,

que varan segn la naturaleza de la tecnologa.

El tamao del mercado de los resultados de la

investigacin o de la tecnologa misma.

La inversin pblica podra ser el nico mecanismo

viable, cuando el mercado fuera pequeo. En cambio podra

inducirse al sector privado para que financiara o se

encargara del desarrollo de tecnologas, si el tamao del

mercado esperado fuera lo suficientemente grande,

permitindole recobrar sus costos a travs de la venta de

aqullas.

Potencial de la Biotecnologa en el Agro

Uno de los principales objetivos del Gobierno es

incrementar las exportaciones, por lo que se ha planteado

duplicar las zonas agrcolas en el ao 2000 (lo que

representa un monto equivalente a 1000 millones de

dlares).
 El Per tiene el potencial para desarrollar una

industria de exportacin no tradicional de frutas y

hortalizas.

Actualmente algunos productos, como el esprrago, la

calndula y la cochinilla, tienen xito en el mercado

internacional; sin embargo, existe un grupo de productos

con gran potencial, como las flores ornamentales (en la

costa), la palma africana y las nueces del Brasil (en la

selva) as como los productos andinos como la quinua y la

kiwicha (en la sierra).

A modo de Conclusin y Recomendacin

Han surgido factores positivos en el pas para

incentivar la inversin en la biotecnologa agropecuaria:

la poltica macroeconmica, la reciente legislacin de

proteccin de los derechos de propiedad intelectual, la ley

de tierras -que garantiza la propiedad del recurso- y la

Ley de saneamiento de la industria azucarera. Asimismo, se

debe tener en cuenta el gran potencial de exportacin del

sector agropecuario.
BIBLIOGRAFIA

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tissue culture II. In practice copyright of the

publishers exergetics Ltd., Edington, Wilts. pp 845-

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The function of phytochrome A Plant cell environ. 20,

813-819.
 PRODUCTOS QUIMICOS

Producto Frmula qumica Peso

Molecular
1. Nitrato de amonio NH4NO3 80.04
2. Nitrato de potasio KNO3 101.11
3. Cloruro de calcio 2 hidatado CaCl2.2H2O 147.02
Fuentes de 4. Sulfato de magnesio 7 hidratado MgSO4.7H2O 246.48
macronutrientes
5. Fosfato monobsico de potasio KH2PO4 136.10
6. Sulfato de amonio (NH4)2SO4 132.06
7. Fosfato monobsico de sodio NaH2PO4.H2O 137.07
hidratado
8.Ioduro de potasio KI 166.01
9. Acido brico H3BO3 61.83
10. Sulfato de manganeso 4 hidratado MnSO4.4H2O 233.01
11. Sulfato de manganeso hidratado MnSO4.H2O 169.01
12. Sultado de zinc hidratado ZnSO4.7H2O 237.02
Fuentes de 13. Sultado de zinc hidratado ZnSO4.H2O 179.02
micronutrientes
14. Molibdato de sodio 2 hidratado NaMoO4.2H2O 241.95
15. Sulfato de cobre 5 hidratado CuSO4.5H2O 249.68
16. Cloruro de cobalto 6 hidratado CoCl2.6H2O 257.93
17. Acido etilenediamina tetractico NaC10H14O8N2.2H2O 336.20
(EDTA)
18. Sulfato ferroso 7 hidratado FeSO4.7H2O 278.02
1. Acido giberlico C19H22O6 346.38
2. Acido naftalaneneactico C10H7CH2COOH 186.00
3. 6-bencilaminopurina 225.00
4. D-manitol CH2OH(CHON)4CHOH 182.17
Reguladores de 5. Tiaimna-HC1 C12H18Cl2N4OS.xH2O 337.28
crecimiento,
6. Acido D-pantotnico de calcio C18H32CaN2O10 476.54
vitaimnas y
otros orgnicos 7. Inositol (myo inositol) CHOH(CHON)4CHOH 180.16
8. Acido 3-indolbutrico C6H4NHCH:C(CH2)3COOH 203.24
9. Acido 3-indolactico C6H4NHCH:CCH2COOH 175.19
10. Sucrosa (sacarosa) C12H22O11 342.30
11. Agar HCl 35.45
1. Acido clorhdrico NaOH 40.00
Modificadores de
pH 2. Hidrxido de sodio o hidrxido de KOH 56.00
potasio
1. Hipoclorito de sodio NaOCl 74.40
2. Hipoclorito de calcio Ca(OCl)2 142.98
3. Cloruro de mercurio HgCl2 270.80
4. Acido actico CH3COOH 60.05
5. Alcohol etlico 96% CH3CH2OH 46.00
6. Acido sulfrico H2SO4 98.08
Desinfectantes
7. Petrleo para piso de cuarto de
cultivo
8. Dithane o Benlate
9. Morestan
10. Detergentes comerciales
11. Barras de jabn