Clase 4: Enzimas

Desde 1850, Pasteur reconoce que las fermentaciones en las levaduras son catalizadores
por fermentos. A fines del siglo 19, Buchner hizo fermentaciones de azucares a alcohol in
vitro, es decir en un sistema no viviente.
Las enzimas son catalizadores proteicos (salvo las ribozimas) que se distinguen por su
eficiencia y especificidad, stos son esenciales para la clula, no habra vida si no fuere por la
catlisis. Las enzimas aceleran la velocidad a la cual ocurre una reaccin determinada, esto no
debe confundirse con la espontaneidad de una reaccin, el hecho de que sea exergnica y por
ende espontanea, no tiene relacin con la velocidad a la cual ocurre esa reaccin. Muchas
enzimas para poder funcionar, requieren de un cofactor, ya sea un metal o alguna coenzima. Por
ejemplo, el Cu2+ es un cofactor para la enzima citocromo oxidasa, o el K+ es un cofactor para la
enzima piruvato quinasa. Se piensa que la necesidad de algn cofactor es un vestigio de la
catlisis primitiva durante los inicios de la vida, cuando las reacciones dependan de algn metal
para ser llevada a cabo. Los cofactores metlicos son mucho menos especficos que las
coenzimas (poseen grupos prostticos), stos derivan de las vitaminas, componentes esenciales
para la vida, que no pueden ser sintetizados por el humano por lo que son importantes en la dieta.
Por ejemplo hay algunas coenzimas que sirven como transportadores de ciertos grupos
funcionales o ciertos tomos como la biocitina, que transfiere el CO 2 con la enzima piruvato
carboxilasa para formar un oxalacetato.

Las enzimas se clasifican de acuerdo al tipo de reaccin que catalizan:

1) Oxidoreductasas reacciones de transferencia de electrones (iones de hidronio o tomos

de H)
2) Transferasas reacciones de transferencia de grupos funcionales
3) Hidrolasas reacciones de hidrlisis (transferencia de grupos funcionales a agua)
4) Lisasas reacciones de adicin de dobles enlaces o formacin de dobles enlaces por
medio de la remocin de ciertos grupos.
5) Isomerasas reacciones de transferencia de grupos dentro de molculas para crear
formas isomricas.
6) Ligasas reacciones de formacin de C C, C S, C O y C N por reacciones de
condensacin dependientes de la ruptura de ATP o cofactores similares.

Las enzimas aumentan la velocidad (slo afecta la velocidad y no el equilibrio) a la cual

ocurre una reaccin por ejemplo la ciclofilina cataliza una reaccin 10 5 veces ms rpido o la
ureasa que aumenta la reaccin 1014 veces.

Reaccin enzimtica estndar:

E + S ES EP E + P

La enzima (E) reconoce su sustrato (S) formando un complejo (ES) donde lleva a cabo
una reaccin que transforma el sustrato en producto (P) para despus desasociarse de l y seguir
actuando en otros sustratos, esto caracteriza a los catalizadores su habilidad de poder ser
reutilizado, hay algunos casos especficos en donde la enzima no vuelve a ser utilizada en la
reaccin.

La figura a la izquierda
muestra la energa de la reaccin (G) a
medida que el S pasa a ser P, en este
caso como el nivel energtico del P es
menor que el del S, el G es negativo
y la reaccin es espontnea. La energa
de activacin es la energa requerida
para llevar el S al estado de transicin
() para que la reaccin tome lugar y
es esta energa que disminuye el
catalizador.

La velocidad de reaccin de S P es decir v = kS, est determinada por la energa de

activacin (Ea) mediante la fmula:

Donde k es la constante de Boltzman y h es la constante de Plank. En una reaccin

monomolecular (de un solo sustrato), k es una constante de primer orden y sus unidades son seg -1
(porque v = dS/dt = kS, expresado en trminos de unidades, es M/seg = kM). Si la reaccin es de
dos sustratos, la constante es de segundo orden y sus unidades son seg -1M-1.
La energa de activacin representa la barrera energtica que hay que vencer para llevar
al sustrato al estado de transicin.

El estado de transicin es una forma del

sustrato que se ha activado mediante una
reaccin qumica parcial, a partir del cual el
sustrato puede ir a P o volver a S. Su formacin
es una etapa limitante de la reaccin y su
existencia es transiente. El estado de transicin
no es un intermediario en particular de la
reaccin. Lo que hace la enzima es bajar la G
ofreciendo un cambio alternativo. La figura de la
derecha muestra una disminucin del Ea por
parte del catalizador (Gcat).
 El no es siempre aislable pero si existen anlogos estables que son inhibidores de la
reaccin enzimtica, por ejemplo en el caso de la prolina racemasa, los anlogos planares unen a
la enzima con una afinidad 160 veces mayor que la prolina y as la inhiben.

Reaccin de la prolina racemasa.

Anlogos del :

Las enzimas y los anticuerpos comparten la caracterstica de ser protenas que unen
compuestos en forma especfica. Se ha visto que cuando anlogos de supuestos estados de
transicin de reacciones enzimticas son incubados con anticuerpos, stos ltimos aceleran las
reacciones de descomposicin espontnea de los anlogos en varios rdenes de magnitud. Esto
da origen al concepto de anticuerpo cataltico (abzyme) que es de alto inters en las reas
biomdicas.

Como [P]/[S] = Keq, a menor Keq (como [P]<<[S]), ms positivo ser el G y

menos espontnea ser la reaccin, en cambio a mayor K eq (como [P]>>[S]), ms negativo ser
el G y ms espontnea la reaccin.
 Cmo se explica la disminucin de G++ que permite que el estado de transicin se
alcance ms rpido?

En parte importante, esto sucede por la energa de unin, derivada de la interaccin de la

enzima con el sustrato por medio de las interacciones no covalentes (inicas, enlaces de H, van
der Waals e hidrofbicas). En cada interaccin hay un G, que podra estar ayudando por un
factor entrpico, dependiendo de el o los sustratos. Aunque las enzimas pueden ser activas
faltndoles fragmentos, su gran tamao se explica por la optimizacin de estas interacciones.

Modelo Enzimtico:
La interaccin de la enzima con el
sustrato no es el tpico llave-cerradura"
como lo propuso Emil Fisher a fines del
siglo 19, puesto que de ser as no ocurrira
ningn cambio en el sustrato. Ocurre ms
bien mediante un encaje inducido (la
enzima es complementaria el estado de
transicin) (Koshland 1958). Este modelo
establece que el sitio activo de la enzima
(regin de unin a sustrato) es una disposicin de la enzima que favorece al sustrato a alcanzar
su estado de transicin. Por ejemplo, con la enzima hexoquinasa este modelo se ejemplifica. Al
entrar la glucosa al sitio activo, el OH del C6 desplaza una molcula de agua que normalmente se
encuentra en esa posicin. Este OH del C6 es el que se fosforila con el P del ATP. La xilosa se
une tambin al sitio activo pero como no tiene C6, no desplaza al agua, en este caso, cuando se
agrega ATP, la enzima es engaada y fosforila el agua. La fosforilacin del agua no ocurre si
no se agrega xilosa, lo que demuestra que sta (y por ende la glucosa) provoca un cambio
conformacional que activa a la enzima para que catalice la ruptura del enlace fosfoanhidrido
entre los P y P del ATP.

La energa de unin alcanza para vencer una serie de obstculos como los factores
entrpicos cuando corresponda, ya que la enzima puede disminuir al unirse uno o ms sustratos a
la enzima, tambin la ruptura de interacciones sustrato-solvente (solvatacin), la distorsin que
hay que introducir en el S para pasarlo a P y lo ms importante, la ruptura de los enlaces. Pero
adems de la energa de unin, hay otros factores que permiten bajar la energa de activacin y
alcanzar el estado de transicin:

a) Efecto de proximidad y orientacin: Ms cercano estn los grupos funcionales en una

reaccin, ms rpido ocurrir la reaccin, la cercana favorece la reaccin. Por ejemplo en la
reaccin de un ster con un carbonilo, en una molcula cclica con poca distancia entre s, la
velocidad aumenta 108 veces.

b) Catlisis cido-Base: En la catlisis cida general hay una transferencia transitoria de un

protn desde un cido de Bronsted (especie que cede un H +), bajando la energa libre del
estado de transicin. La catlisis bsica general ocurre cuando una base de Bronsted abstrae
protones. En una reaccin puede haber simultneamente catlisis cida y bsica. Se habla de
una catlisis cido-base especfica cuando participa el agua.
 En la figura (B) el protn entregado por el cido promueve una atraccin de los
electrones del C carbonlico, facilitando el ataque del O del agua. (C) al asociarse el carboxilo a
un H del agua, los electrones se mueven hacia el oxgeno del agua, facilitndose tambin el
ataque al C carbonlico (D) Una enzima puede hacer simultneamente catlisis cida y bsica
pero solo cuando participa el agua.

Residuos del sitio activo que

tpicamente participan en catlisis cido-base:

El pH es un factor importante para las

enzimas que tienen catlisis cido-base dado
que los aminocidos del sitio activo de la
protena tienen un pKa particular. Por ejemplo,
la pepsina, una enzima que se encuentra en el
jugo gstrico funciona a un pH bastante cido
(pH = 1.5), la tripsina en el intestino delgado
(pH = 6.5) y la fosfatasa alcalina en el tejido
seo (pH = 9.0) y estas al estar en pH distintos
no funcionaran.

c) Catlisis Covalente: Hacer intermediarios covalente con el sustrato, esto no sucede con
todas las protenas. Ej: Descarboxilacin de acetoacetato.

El protonado de un C de la lisina
acta como imn de electrones.
Coenzimas tpicas de este tipo de
catlisis son el piridoxal-P y la
tiamina-PP o TPP.
d) Catlisis por iones metlicos: aproximadamente 1/3 de las enzimas requieren un metal,
puede ser metaloenzimas (que en su estructura poseen metales como el Cu, Fe, Zn y Mn,
stas participan en procesos como el transporte de electrones en distintos procesos
metablicos) o pueden ser enzimas activadas por metales (en este caso, los metales son
factores, tales como K, Mg, Ca, etc) Tpicamente participan en reacciones de xido-
reduccin. Por ejemplo, la enolasa (una enzima que
participa en la glicolisis) lleva el 2-fosfoglicerato a
fosfoenolpiruvato, donde participa el Mg.
En esta reaccin la lisina-345 hace catlisis bsica
sacando un protn de la enzima que despus es
estabilizada (el intermediario) por 2 iones de Mg2+, y
facilitan la abstraccin del H+ del C2. El glutamato-211 facilita la eliminacin del OH por medio
de una catlisis cida general.

Cintica Enzimtica:
Es una herramienta til para estudiar mecanismos de accin enzimtica.

En la figura a la izquierda se ilustra lo que sucede a lo largo

de una reaccin, la concentracin del sustrato ir en
descenso mientras que la concentracin del producto
aumenta. Si la reaccin es catalizada por una enzima, va
haber una concentracin inicial de ella [Eo]. Esta reaccin
puede ser divida en dos etapas, una preparatoria, donde el
complejo enzimtico ES se est formando, a medida que la
reaccin sigue, esta concentracin se mantendr
relativamente estable dado que la enzima va estar
continuamente unindose al sustrato y formando el producto
(estado estable, cuando la concentracin [ES]) . Adems
habr cierta fraccin de enzimas que estar libre por una
simple interaccin de masa, es decir, en este caso la enzima
no est saturada y a medida que la reaccin se vaya finalizando, esta concentracin ir en
aumento mientras que la [ES] ir disminuyendo por el hecho de que el sustrato se ir acabando y
la enzima no tendr un lugar donde actuar.

Se establece tambin que la velocidad de una enzima est determinada por la

concentracin del sustrato en el medio. Esta va cambiando en el transcurso del tiempo por la
concentracin de sustrato va ir disminuyendo. En la reaccin se alcanzar el plateau si la
concentracin del sustrato es menor. Una manera de
simplificar el anlisis cintico es mediendo la velocidad
inicial, cuando el sustrato est en exceso sobre la enzima, su
cambio de concentracin en estas condiciones es
despreciable.

Deduccin de la Ecuacin Michaelis-Menten:

Tomando en cuenta la siguiente reaccin:

Donde K1 corresponde a la constante de formacin del complejo enzimtico ES y K -1 es

la constante que corresponde a la descomposicin de ES. Por otro lado, K2 corresponde a la
constante de la formacin del productor (P) a partir de ES y K -2 corresponde la reaccin inversa
de la formacin del producto a partir del complejo enzimtico. Tambin se suponen ciertas
condiciones iniciales; las velocidades inicial, es decir K -2 es despreciable (se trabaja en los
tiempos iniciales de la reaccin, donde las velocidades iniciales son lineales), adems se asume
que [S]>>[E] (tpico de una reaccin enzimtica) y finalmente que la reaccin est en el steady
state, es decir d[ES]/dt = 0.

Con decir que la

formacin de ES
(k1[E][S]) es igual a su
desaparicin uno hace
referencia al proceso de
produccin de producto
(K2[ES]) y la
descomposicin del
complejo enzimtico
(K-1[ES]).
NOTA: La Km es una concentracin por lo que se mide en M o mM.

Pero la velocidad de aparicin de P en las condiciones Michaelianas est dada por:

V = K2[ES]

Pero, tambin, la velocidad mxima de la reaccin se dar cuando [ET] = [ES] (cuando la
enzima est saturada y todas las molculas estn participando en la reaccin), es decir:
Vm = K2[ET]

Por lo tanto:
Al graficar la ecuacin de Michaelis-Menten, da una hiprbola:

A pesar de que se debe cumplir que [S]>>[E], la dependencia de la velocidad inicial en

[S] se da porque la formacin de ES est en equilibrio con su disociacin a E + S. Por lo tanto, se
le adiciona S, que al crecer, desplaza el equilibrio hacia la formacin de ES y aumenta la
velocidad. A partir de esta representacin grfica, se cumplen ciertos casos especiales:

i. Cuando v = Vmax, [S] = Km

La Km es aquella concentracin de sustrato con la que se alcanza la mitad de la velocidad

mxima.
ii. Cuando [S] <<< Km, la velocidad tiene una dependencia lineal con S.
iii. Cuando [S] >>> Km, la velocidad se aproxima asintticamente a
Vmax.

Considerando las condiciones iniciales donde se defini Km = (K -2 + K2)/K1 y si se toma

en cuenta que K2<<K-1 (cuando se forma ES, el ES prefiere volver a E + S que transformarse en
P) entonces Km = K-1/K1, la cual se define como la constante de disociacin de ES o Ks. Y slo
en este caso, cuando K2<<K-1 se establece que la Km da la idea de ser recproco de la afinidad
de la enzima por el sustrato.
Tener una baja Km implica que se necesita una baja concentracin de sustrato para
alcanzar la mitad de la velocidad mxima y es en este caso (cuando K2<<K-1) que uno puede
decir que la enzima estudiada es muy afn. Y cuando una enzima tiene una alta Km, no tiene
mucha afinidad con el sustrato.

A partir de Vm = K2[ET] que corresponde a la velocidad limite de la reaccin cuando la

enzima est saturada, se puede definir esta constante (K2) como la constante cataltica (Kcat), Kcat
= Vm/[ET]. Esta constante tiene unidades de seg -1 y entrega un valor que se interpreta como el
nmero de molculas de S que pasan a P por molcula de enzima y por unidad de tiempo,
tambin se conoce como el nmero de recambio o el turnover number. Por ejemplo, una Kcat de
la enzima fumarasa es de 800s-1, lo que signfica que esta acta 800 veces por segundo.
Este concepto no se debe confundir con la actividad enzimtica (una unidad enzimtica
es la cantidad de enzima que convierte una cierta cantidad de S en P en cierto tiempo) que se
mide en unidades/mL. Tampoco debe confundirse con la actividad especfica (unidades/mg de
protena).
 Pero en rigor, el solo valor de Kcat es una aproximacin a la real eficiencia de una enzima,
porque hay que ver cuntas veces est aumentando la velocidad con respecto a la reaccin no
catalizada. Esta constante puede entregar cuanto acta una enzima, pero no indica cuanto se est
acelerando. Un mismo valor de Kcat para dos enzimas diferentes puede implicar una eficiencia
bastante distinta.

Por tal motivo, se suele usar la razn de Kcat/Km como una mejor referencia de la
eficiencia cataltica de una enzima o constante especifica. Tanto un valor alto de Kcat como una
baja Km (alta afinidad de E por S) contribuyen a aumentar el valor del K cat/Km.
Pero hay an algo ms, Kcat la hemos obtenido con una enzima saturada. Pero si
quisiramos medir la frecuencia con que la enzima transforma al S en P cada vez que interactua
con l, es mejor trabajar en una zona donde los encuentros de E con S sean ms ocasionales. Ello
ocurrir si [S] <<< Km (como ocurre en la clula). En estas condiciones:

El cuociente Ks/Km, o K1K2/(K-1 + K2), ser mximo cuando K2 >>> K-1 (el ES prefiere
ir a P que volverse a E + S), o sea cuando la formacin de P sea mucho ms rpido que la
disociacin de ES a E + S. En este caso, K2/Km = K1, que es la constante de velocidad de la
formacin de ES a partir de E + S (de segundo orden: M -1seg-1). La velocidad de la reaccin va
depender de que tan rpido difunda el sustrato por el medio hasta llegar a su sitio activo.

Se ha establecido que el factor de la difusin para E y un S promedio establece un lmite

superior mximo para K1 de 108 109 M-1 seg-1. Se dice que enzimas que tienen Kcat/Km en este
rango han alcanzado la perfeccin, porque catalizan la reaccin cada vez que encuentran una
molcula de S.

La hiprbola Michaeliana es muy poco precisa para calcular Km y Vmax.

Por lo tanto, es mucho ms til el mtodo de los dobles recprocos, o la ecuacin de

Lineweaver-Burk, la que representa una recta:

A partir de esta recta se puede determinar con

bastante precisin los valores de Vmax y Km.
 Reacciones Con Ms de 1 Sustrato:

Tambin se analizan con criterios de Michaelis-Menten, donde pueden suceder dos cosas:

1) La formacin de ES1S2 por

entrada al azar u ordenada
(formacin de un complejo
enzimtico ternario)

2) La salida de P1 antes de la entrada de S2 (Ping-pong)

Para poder distinguir entre cual de las reacciones est tomando lugar, se realiza a travs de
cintica enzimtica (Lineweaver-Burk) dejando un sustrato S1 constante en exceso y variando el
otro sustrato S2, donde se obtienen rectas que van disminuyendo al aumentar S2, si las rectas
intersectan, hay ES1S2, y si son paralelas, es ping-pong.

Inhibicin Enzimtica:

Se da cuando un compuesto afecta la cintica de una enzima, puede ser de 3 tipos:

1) Competitiva
2) Acompetitiva
3) Mixta o no-competitiva
Competitiva: Sucede cuando el inhibidor (I) se une reversiblemente al sitio del S, por lo que hay
que aumentar [S] para alcanzar la Vm. O sea, no se altera Vm pero si Km. El hecho de estar
aumentando S desplaza a I.

= 1 + [I]/Ki
Ki = [E][I]/[EI]

Al alterar la concentracin del inhibidor, la reaccin enzimtica ir detenindose. La Ki

es la constante de disociacin del inhibidor, lo que da una idea de su eficiencia como tal. Una Ki
chica significa que es un buen inhibidor. Puede ser calculada sacando la pendiente de las
distintas rectas obtenidas a concentraciones del inhibidor diferentes. Al alterar las
concentraciones de I, la interseccin con el eje y no se altera y como ese punto corresponde al
reciproco de la Vmax, se puede ver que el I no altera el Vmax pero si el Km dado que las
pendientes de las rectas son distintas entre s al ir variando I.

Acompetitiva:El I no se une a la enzima, sino que se une a la enzima una vez que este unido a su
sustrato (se une a un sitio diferente del sitio activo), por lo tanto, al aumentar la concentracin de
S, no se llega a Vmax.

= 1 + [I]/Ki
Ki = [ES][I]/[ESI]

En este caso la cintica enzimtica si muestra que se altera el Vmax dado que las rectas
intersectan en distintos puntos al eje y cuando se altera la concentracin de I. Adems se altera la
Km.
Mixta o no-competitiva: En este caso, el I se une a un sitio distinto del sitio activo y lo hace
tanto a la E como al ES.

En este caso se altera tanto el Vmax como el Km. Puesto a que se une tanto a E como a ES,
podemos determinar una Ki y una Ki.

Tabla Resumen:

Se habla de Km o Vmax aparente cuando en una reaccin con ms de un sustrato, estos

parmetros se determinan variando la concentracin de solo de ellos en presencia de un exceso
de los dems. Los valores de Km y Vmax se obtienen solo despus de hacer un anlisis cintico
ms elaborado desarrollado por W.W. Cleland. En general los valores absolutos son semejantes a
los aparentes, por lo que se trabaja con las aparentes.

Otra clasificacin de estas tres inhibiciones es competitiva y mixta, siendo la

acompetitiva un caso especial de la mixta. Por cierto, todo esto se puede complicar. Cuando la E
tiene ms de un S, el I puede ser competitivo para uno u otro si es que tienen distintos sitios de
unin. Tambin puede unirse a ES1 si la entrada es ordenada y ser acompetitivo para S2, etc.
Existen tambin inhibidores suicidas, stos se parece al S y son parcialmente modificadas
a una especie que se une en forma irreversible a la E. Pueden ser muy tiles como agentes
teraputicos.
Regulacin Enzimtica:
Hay distintos tipos de manera en que una enzima es regulada, esto puede ser por medio
del alosterismo, puede haber alguna modificacin covalente de la enzima y ms
excepcionalmente, puede ser por unin a otras protenas y por procesamientos proteolticos.

Enzimas Alostricas: Tpicamente catalizan la reaccin inicial (comprometida) en una

va metablica y son reguladas por inhibicin retroalimentativa por el producto final de la va.
Tambin pueden ser activadas por algn efector. Tanto inhibidores como activadores se unen a
sus respectivos sitios alostricos, distintos al sitio activo. Por lo general tienen una estructura
cuaternaria y los sitios activos y alostricos pueden estar en subunidades diferentes.

La cintica de estas enzimas no es Michaeliana, sino es

sigmoidea. De modo que al aumentar la concentracin de S,
aumenta la velocidad pero no de manera hiperblica, sino de
forma logartmica. Este efecto se conoce como un efecto
homotrpico positivo, donde una molcula de sustrato predispone
la enzima para reciba otro sustrato y eso lo predispone aun ms y
as sucesivamente. En este caso no se habla de una Km sino una
K0.5 que corresponde a la mitad de la Vmax. Este caso se ve en la
hemoglobina en presencia de O2.

Los efectores ejercen efectos heterotrpicos positivos

(activadores) o negativos (inhibidores). Los primeros se acercan
la cintica a una de tipo hiperblico, mientras ms activadores
hay, ms hiperblica se har la curva. Los efectores cambian la
K0.5 pero no el Vmax.

Una manera de explicar el efecto heterotrpico postivo (activador alostrico) es que este
produce un cambio conformacional en su subunidad regulatoria que es transmitida a la
subunidad cataltica, la que adopta una forma ms afn al sustrato.

Efecto heterotrpico positivo: A medida que se

adiciona la molcula X (activador) a la enzima, la
actividad enzimtica aumenta. Va de 10% a 100%.

Efecto heterotrpico negativo: En este caso, la

molcula X (inhibidor) al adicionarse a la enzima,
reduce la actividad de esta enzima.
Regulacin por Modificacin Covalente:modificaciones transitorias

Un caso especial de la regulacin enzimtica es en el caso de la glicgeno fosforilasa, que

presenta una regulacin alostrica y covalente.

La fosforilasa es una enzima

con dos dmeros que en tienen una
serina (a n 14), que se fosforila y
se activa la enzima por medio de un
mecanismo hormonal. La
regulacin alostrica se ve con el
efecto que tiene el AMP, dado que
cuando esta concentracin aumenta,
hay muy poco ATP. Entonces el
efecto del AMP (alostrico) y el
efecto hormonal (covalente) hacen
que esta enzima se fosforile.
Isoenzimas: Estas son enzimas que son codificadas por genes diferentes y que catalizan la
misma reaccin. Esto incluye a las aloenzimas, codificadas por alelos en el mismo genoma.
Como difieren entre s en algunas propiedades (cintica, pI, efectos de activadores/inhibidores,
etc.) generalmente tiene un rol muy regulatorio.
Una izoenzima muy conocida es la hexoquinasa que cataliza la siguiente reaccin:
Glucosa + ATP Glucosa-6-P + ADP
Hay cuatro hexoquinasas: I, II, III y IV. La I est presente en todos los tejidos y la IV,
tambin conocida como glucoquinasa, est presente principalmente en el hgado, el pncreas y el
cerebro. La I tiene un bajo Km y es inhibida por glucosa-6-P. La glucoquinasa (IV) no es
inhibida por la glucosa-6-P y tiene un alto Km. Como la funcin principal no es hacer glicolisis
sino suministrar glucosa a los tejidos, la alta Km de la glucoquinasa asegura que la glucosa no se
va a fosforilar cuando hay demanda de ella por los tejidos. A la vez, en condiciones en que la
concentracin de glucosa es alta y hay menos demanda en los tejidos, la glucoquinasa contina
fosforilando glucosa para que pueda ser usada para la sntesis de glucgeno (gluconeogenesis) en
el hgado.
Las izoenzimas pueden ser tambin tiles en diagnostico clnico, por ejemplo, el lactato
deshidrogenasa (LDH) lleva a cabo la siguiente reaccin:
piruvato + NADH + H+ lactato + NAD+

La LDH tiene 5 cadenas peptdicas de dos diferentes tipos de monmeros: M y H. Las

variantes encontradas en el ser humano son:

Las localizaciones de estas enzimas son distintas al igual que la funcin que posean, dado
que los distintos tejidos tienen funciones diferentes. En el infarto del miocardio, aumenta
principalmente la cantidad de LDH1 srica, una situacin que se mantiene hasta 24 horas
despus del infarto. Por otra parte, se observa un aumento de LDH5 en diversas patologas
hepticas como la cirrosis, hepatitis y otras enfermedades.