Tesis Final Obtencion de Aceite de Citronela

DIRECCIN DE POSGRADO
Maestra en Ingeniera en Calidad

MIC
TESIS DE MAESTRA
Obtencin de aceite esencial de citronela (Cymbopogon

winterianus) extrado por arrastre con vapor a escala piloto:
estudio de la influencia de variables en el rendimiento y la
calidad del aceite
AUTOR
Ing. Qca. Roco Teresita Garca
DIRECTOR DE TESIS
Dra. Ester R. Chamorro Centro de Investigacin QUIMOBI
CO-DIRECTOR DE TESIS
Bioq. Esp. Gustavo A. Velasco - Centro de Investigacin
QUIMOBI
LUGAR DE TRABAJO
Centro de Investigacin en Qumica Orgnica Biolgica

(QUIMOBI) Facultad Regional Resistencia
Resistencia, Marzo de 2014

AGRADECIMIENTOS
Gracias a Dios sobre todas las cosas.

A la Universidad Tecnolgica Nacional por beneficiarme con una beca
Bicentenario de Investigacin y Posgrado, por la cual hoy culmino la Maestra en
Ingeniera en Calidad y a mi director de beca Ing. Alfredo Sequeira quien me
impuls en la convocatoria 2010.
Especialmente agradezco a mis directores de tesis la Dra. Mandhy Chamorro,
y el Bioq. Esp. Gustavo Velasco, por los conocimientos transmitidos y sus esfuerzos
y dedicacin en este trabajo.
A mis compaeros y amigos del Centro de Investigacin en Qumica Orgnica
Biolgica (QUIMOBI) de la Facultad Regional Resistencia donde llev a cabo parte
de la investigacin, especialmente a la Ing. Silvia Zambn e Ing. Esp. Mariel
Cceres.
Al Director, Ing. Tortarollo, y al personal de INTA - Estacin Experimental
Agropecuaria Colonia Bentez, por brindarme la materia prima y la informacin
meteorolgica del lugar.
A la Empresa Nuestra Esencia por darme la posibilidad de trabajar en base
a su experiencia y permitirme transferir los conocimientos adquiridos en esta
investigacin.
Finalmente muchas gracias a todas las personas que de alguna manera
hicieron posible la realizacin de esta tesis.
Dedicado a mam
Gracias por tu incondicionalidad
INDICE
1. INTRODUCCION. 1
1.1 Aspectos generales. 1
1.2. Aceites esenciales 2
1.2.1. Definicin.. 2
1.2.2. Caractersticas. 3
1.2.3. Origen 3
1.2.4. Composicin qumica. 3
1.2.5. Especies aromticas: la citronela.. 4
1.2.6. Produccin y calidad de las esencia. 6
1.2.6.1. Variacin gentica y mejora vegetal 7
1.2.6.2. Variacin morfo y ontognica. 7
1.2.6.3. Influencias ambientales 8
1.3. Mtodos de extraccin. 9
1.3.1. Destilacin por arrastre con vapor de agua.. 9
1.3.2. Expresin 10
1.3.3. Extraccin con solventes. 10
1.4. Destilacin por arrastre con vapor.. 11
1.4.1. Escala laboratorio. 12
1.4.2. Escala piloto. 13
1.4.3. Escala industrial. 13
1.5. Identificacin y caracterizacin de aceites esenciales 14
1.6. Diseo de experimentos. 15
1.6.1. Diseo factorial completo 2k 17
1.6.1.1. Planteo del problema 18
1.6.1.2. Identificacin de los factores y dominio experimental.. 18
1.6.1.3. Diseo de la matriz de experimentos. 19
1.6.1.4. Plan de experimentacin y realizacin de los experimentos. 19
1.6.1.5. Interpretacin de los resultados 20
1.6.2. Anlisis de varianza. 20
2. OBJETIVOS. 21
2.1. Objetivo principal. 21
2.2. Objetivos secundarios 21
2.3. Tipo de investigacin. 21
3. MATERIALES Y METODOS.. 23
3.1. Identificacin botnica y condiciones meteorolgicas.. 23
3.2. Destilacin por arrastre con vapor de agua: etapas del proceso 23
3.2.1. Corte del material vegetal. 23
3.2.2. Oreado. 23
3.2.3. Destilacin por arrastre con vapor a escala piloto... 24
3.3. Diseo de experimentos factorial 23 . 25
3.3.1. Planteo del problema 25
3.3.2. Factores y dominio experimental. 25
3.3.3. Matriz de experimentos: diseo factorial completo 23. 27
3.3.4. Plan de experimentacin y realizacin de los experimentos 27
3.3.5. Interpretacin de los resultados 28
3.4. Caracterizacin fisicoqumica del aceite de citronela...... 28
3.4.1. ndice de refraccin 28
3.4.2. Densidad relativa.. 29
3.4.3. Rotacin ptica.. 30
3.4.4. Composicin relativa. 30
3.5. Determinacin del rendimiento. 31
4. RESULTADOS Y DISCUSION 33
4.1. Identificacin botnica de la materia prima. 33
4.2. Condiciones meteorolgicas. 33
4.3. Diseo de experimentos factorial 23.. 36
4.4. Caracterizacin fisicoqumica del aceite de citronela... 44
5. CONCLUSIONES. 47
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFIA... 49
LISTA DE TABLAS
Parmetros fisicoqumicos del aceite esencial de citronela segn

Tabla 1
IRAM SAIPA 18520: 2006 15
Tabla 2 Matriz de experimentos del diseo factorial 23. 19
Tabla 3 Dominio experimental del diseo factorial 23. 26
Matriz de experimentos y plan de experimentacin para el diseo
Tabla 4
factorial 23 27
Promedios por estacin de temperaturas mximas y mnimas a dos
Tabla 5
niveles del suelo 34
Tabla 6 Matriz del plan de experimentos y respuestas obtenidas.. 36
Tabla 7 Ajuste del modelo estadstico, valores p, respuesta %CAL... 38
Tabla 8 Ajuste del modelo estadstico, valores p, respuesta Rto. 38
Tabla 9 Referencias del cromatograma de la Figura 18.. 44
Resultados de la caracterizacin fisicoqumica con valores de
Tabla 10
referencia segn IRAM-SAIPA 18520: 2006. 46
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Molcula del isopreno... 4

Figura 2 Principales terpenoides del aceite esencial de citronela.. 6
Equipo de destilacin por arrastre con vapor de agua a escala
Figura 3
laboratorio.... 12
Fotografa del equipo de destilacin por arrastre con vapor de
Figura 4
agua a escala piloto 25
Dominio experimental para dos factores cuantitativos y uno
Figura 5
cualitativo 27
Promedios mensuales de temperaturas mximas y mnimas a dos
Figura 6
niveles del suelo, registrados en Colonia Bentez.. 34
Promedio mensual de heliofana efectiva, registrada en Colonia
Figura 7
Bentez.. 35
Figura 8 Total mensual de precipitaciones, registradas en Colonia Bentez 35
Figura 9 Grfica de probabilidad normal, respuesta %CAL.. 37
Figura 10 Grfica de probabilidad normal, respuesta Rto.. 37
Figura 11 Grfica de efectos principales, respuesta %CAL.. 39
Figura 12 Grfica de interaccin, respuesta %CAL... 40
Figura 13 Grfica de contorno invierno, respuesta %CAL 41
Figura 14 Grfica de contorno verano, respuesta %CAL.. 41
Figura 15 Grfica de efectos principales, respuesta Rto.. 42
Figura 16 Grfica de contorno invierno, respuesta Rto. 43
Figura 17 Grfica de contorno verano, respuesta Rto... 43
Figura 18 Cromatografa de gases del aceite esencial de citronela.. 45
LISTA DE ABREVIATURAS Y SIMBOLOS
%CAL Porcentaje Relativo de Citronelal

C Grados Celsius
ANOVA Anlisis de Varianza
BPA Buenas Prcticas Agrcolas
BPH Buenas Prcticas de Higiene
BPL Buenas Prcticas de Laboratorio
BPM Buenas Prcticas de Manufactura
CSIC Consejo Superior de Investigaciones Cientficas del Reino de Espaa
d20C/4C Densidad Relativa al Agua a 4C
DEE Diseo de Experimentos
E Estacin Experimental Agropecuaria
EEA Estacin Experimental Agropecuaria
EUA Estados Unidos de Amrica
FDA Food and Drug Administration
FRRe Facultad Regional Resistencia
GC-MS Mass Spectrometry coupled to Gas Chomatography
GRAS Generally Regarded As Safe
ha Hectrea
IBONE Instituto de Botnica del Nordeste
INTA Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria
IRAM Instituto Argentino de Normalizacin y Certificacin
k kilo (prefijo)
Kg kilogramo/s
l litro/s
m Masa
m Metro, mili (prefijo)
Max Mxima/s
min, Min Minuto/s, Mnima
MP Materia Prima
nD20C ndice de Refraccin a 20C
Pt Presin total
Px Tensin de vapor de x
QUIMOBI Qumica Orgnica Biolgica
Rto Rendimiento
SAGPYA Secretara de Agricultura, Ganadera, Pesca y Alimentos
SAIPA Sociedad Argentina para la Investigacin de Productos Aromticos
SENASA Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria
t Tonelada, tiempo
Temp Temperatura
UTN Universidad Tecnolgica Nacional
vol Volumen
tD Rotacin ptica a 20C para la lnea D del Sodio
RESUMEN
Son innumerables los antecedentes de la relacin entre el hombre y las
plantas aromticas. Son los aceites esenciales, mezclas complejas de compuestos
voltiles que se originan en el metabolismo secundario de las plantas, los
responsables de su aroma caracterstico.
En particular, el cultivo de citronela tiene su importancia econmica y est
ampliamente distribuido en las regiones tropicales por sus propiedades aromticas.
Su esencia est compuesta principalmente por citronelal, citronelol y geraniol, que
se utilizan en perfumera, jabonera, preparacin de insecticidas y repelentes. El
citronelal, componente mayoritario, es adems un importante producto de partida
para la sntesis de terpenoides de mayor importancia comercial.
En el presente trabajo se estudi la influencia de las variables cantidad de
materia prima, tiempo de proceso y la estacin del ao en el rendimiento y la
calidad del aceite esencial de citronela (Cymbopogon winterianus) extrado por
arrastre con vapor a escala piloto. Se determin las mejores condiciones de trabajo
para el proceso de obtencin de aceite de citronela, mayor rendimiento y calidad,
medidos como porcentaje de aceite extrado y de citronelal presente en mismo.
El aceite esencial se extrajo por arrastre con vapor de agua a escala piloto, su
composicin relativa se determin por medio de GC-MS y adems se realiz la
caracterizacin fisicoqumica segn las normas IRAM-SAIPA correspondientes. Las
condiciones meteorolgicas de la localidad fueron proporcionadas por el INTA-EEA
Colonia Bentez.
Se realiz un diseo de experimentos factorial a dos niveles para identificar
los efectos que tienen las variables (materia prima, tiempo y estacin) y sus
interacciones en la calidad y rendimiento del aceite de citronela.
El anlisis estadstico de los resultados permiti identificar las condiciones de
proceso para cada estacin que favorecen la obtencin de mayor porcentaje
relativo de citronelal y mayor rendimiento en aceite.
INTRODUCCION
1. INTRODUCCION
1.1. Aspectos generales

Toda la historia del hombre discurre en una ntima relacin con las plantas
aromticas y sus componentes olorosos. Desde que el homo sapiens discrimin el
alimento benfico del txico, el aire limpio del contaminado, reconoci las virtudes
del aroma de una flor o un fruto, comenz a familiarizarse con gustos y olores que
determinaron su hbitat, comportamiento, costumbres, medicinas, placeres, vicios,
recuerdos y deseos. La vida era para l, entre otras cosas, una experiencia que se
generaba desde el olfato y el paladar. Es as que el nio gusta del sabor dulce,
reconoce el olor de su madre y rechaza con el estornudo o la tos el olor o el sabor
extrao (Bandoni, Las Plantas Aromticas, 2003).
Son innumerables los antecedentes de la relacin entre el hombre y las
plantas aromticas. Desde el momento del desarrollo de la escritura en los valles
del Indo, hay referencias del uso de hierbas y especias (Rowe, 2005). Son estas
hierbas aromticas las que poseen los llamados aceites esenciales, mezclas de
compuestos voltiles responsables de sus fragancias y sabores.
Se han encontrado restos de un equipo parecido a los destiladores de
esencias actuales en la cultura Mesopotmica de hace 5.000 aos. Restos
prehistricos de vasijas conteniendo resinas y blsamos vegetales hablan de una
significacin medicinal o tal vez cosmtica otorgada a estos productos. La Biblia y
los presentes de los Reyes Magos al Dios nio nos indican el valor de la mirra y el
incienso en aquellas pocas. En todas las pocas grandes viajeros y expedicionarios
como Alejandro Magno, Marco Polo, Coln, Cook o Vasco da Gama fueron los
descubridores de extraas especias, riqusimas fragancias y preciosas plantas que
ofrecan novedosos aromas y virtudes medicinales y culinarias, como la canela de
China, la pimienta de India o el cacao de Amrica.
Toda esta tradicin ha evolucionado en lo que es hoy la agroindustria de las
plantas aromticas, con sus innumerables aplicaciones y su cada vez mayor
importancia comercial. Pasada ya la poca de oro de la sntesis qumica, cuando
pareca que todo poda lograrse en el laboratorio y la independencia de los
Ing. Qca. Roco Teresita Garca 1

productos naturales se consideraba un hecho, en la actualidad hay una tendencia
por lo natural y ecolgico, por lo que estas plantas resurgen como una alternativa,
ni mejor ni peor que los sintticos, simplemente otra opcin (Bandoni, Las Plantas
Aromticas, 2003).
Teniendo en cuenta que entre lo que el mercado exige y lo que la naturaleza
ofrece, existe una enorme versatilidad en la calidad del producto final, debido a la
compleja relacin que existe entre los cientos de componentes que conforman un
aceite esencial y la influencia del medio en su metabolismo, se considera una
fortaleza no solo la identificacin del material gentico sino tambin el estudio de
las variables que hacen al proceso de extraccin de las esencias (Bandoni &
Dellacasa, 2010).
1.2. Aceites Esenciales
1.2.1. Definicin
Las plantas aromticas se definen como aqullas que pueden generar por
algn proceso fisicoqumico un producto aromtico, entendindose por productos
aromticos a los que tienen un olor o un sabor determinado, sin evaluar su calidad
comercial o esttica (Bandoni, Las Plantas Aromticas, 2003).
Los aceites esenciales son mezclas complejas de compuestos voltiles
producidos por organismos vivos y aislados por medios fsicos (presin y
destilacin) a partir de una planta aromtica entera o parte de ella (Franz & Novak,
2010). Estas mezclas son las responsables del aroma de las plantas y tienen diversas
funciones biolgicas como ser: mensajeros internos, sustancias de defensa contra
los herbvoros o tambin atraer a los insectos polinizadores para su multiplicacin.
(Harrewijn, Van Oosten, & Piron, 2001). En general, los aceites esenciales tienen un
olor agradable, es por eso que se los utiliza en diferentes industrias especialmente
en los perfumes como fragancias y lociones, en los productos alimenticios como
aromatizantes y conservantes y en la farmacutica como principios teraputicos
(Zygadlo & Juliani, 2000).
2
INTRODUCCION
1.2.2. Caractersticas
Los aceites esenciales son inflamables, no txicos, sufren degradacin qumica
en presencia de la luz, el oxgeno, el calor, de cidos y lcalis fuertes, generando
oligmeros de naturaleza indeterminada. Son solubles en los disolventes orgnicos
comunes y casi inmiscibles en disolventes polares. Son aceptados como sustancias
seguras GRAS (Generally Regarded as Safe) por la FDA (Food and Drug
Administration) (Code of Federal Regulation, 2014).
De acuerdo con su consistencia los aceites esenciales pueden ser esencias
fluidas, blsamos y oleorresinas. Las esencias fluidas son lquidos voltiles a
temperatura ambiente. Los blsamos son de consistencia ms espesa, poco
voltiles y propensos a sufrir reacciones de polimerizacin. Las oleorresinas tienen
el aroma de las plantas en forma concentrada y son generalmente lquidos muy
viscosos o sustancias semislidas (Rodrguez lvarez, Alcaraz Melndez, Real, &
Sergio, 2012).
1.2.3. Origen
Segn su origen los aceites esenciales se clasifican como naturales, artificiales
y sintticos. Los naturales se obtienen directamente de la planta y no sufren
modificaciones fsicas ni qumicas posteriores, debido a su rendimiento tan bajo son
muy costosos. Los artificiales se obtienen a travs de procesos de enriquecimiento
de la misma esencia en uno o varios de sus componentes. Los aceites esenciales
sintticos son producidos por procesos de sntesis qumica. Estos son ms
econmicos y por lo tanto son mucho ms utilizados como aromatizantes y
saborizantes (Rodrguez lvarez, Alcaraz Melndez, Real, & Sergio, 2012).
1.2.4. Composicin qumica

Los aceites esenciales son mezclas complejas, constituidas por hidrocarburos
terpnicos oxigenados, terpenos y sesquiterpenos. Se originan en el metabolismo
secundario de las plantas y son los responsables de su aroma caracterstico
(Bandoni, Las Plantas Aromticas, 2003). Los terpenos son compuestos de frmula
general (C5H8)n, que pueden o no llevar oxgeno. Se encuentran repartidos en todo
el reino vegetal y en menor grado, se los pueden encontrar en animales.

El nombre de terpeno se usa, generalmente, para los hidrocarburos de
frmula C10H16 y con los terpenoides se engloban a todos los dems. Los terpenos
y terpenoides son derivados biosintticamente de geranilpirofosfato y
farnesilpirofosfato respectivamente.
Se clasifican segn el nmero de unidades de cinco tomos de carbonos o
grupos C5H8 en: monoterpenos C10H16, sesquiterpenos C15H24, diterpenos C20H32 que
son las resinas de la trementina, triterpenos C30H48 como el escualeno que se
encuentra en el aceite de hgado de especies de tiburn, tetraterpenos C40H64 son
los carotenoides y politerpenos (C5H8)n son gomas de caucho y gutapercha.
Adems los monoterpenos se clasifican segn el nmero de ciclos como:
acclicos, monocclicos, bicclicos, etc. Al mismo tiempo en cada grupo existen
derivados oxigenados, alcoholes, aldehdos y cetonas (Carey, 2003).
La mayor parte de los terpenoides puede considerarse como derivados del 2
metil 1,3- butadieno o isopreno que se observa en la Figura 1.
Figura 1: Molcula de isopreno.
La divisibilidad de las cadenas carbonadas de los terpenos en unidades

isoprnicas se conoce como Regla del Isopreno, formndose generalmente las
uniones entre las unidades de isopreno cabeza-cola. Esta regla fue formulada por
Wallach en el ao 1887 y se cumple en la mayora de los terpenoides.
Existen algunas excepciones en el nmero de tomos de carbono, por
ejemplo las iononas y a la regla del isopreno unin cabeza-cola, por ejemplo el -
caroteno (Morrison & Boyd, 1990).
1.2.5. Especies aromticas: la citronela

Los aceites esenciales se encuentran ampliamente distribuidos en distintas
familias de plantas que incluyen las Labiadas, Laurceas, Mirtceas, Pinceas,
4
INTRODUCCION
Rosceas, Rutceas, Umbelferas, Gramneas, Geraniceas, Burserceas, etc. Se los

puede hallar en diferentes partes de la planta: en la raz del pasto vetiver (Vetiveria
zizanioides), en los tallos como el de la madera Peterib (Cordia trichotoma) e
incienso, en hojas como la de los rboles de eucalipto (Eucalyptus citriodora), la
Citronela (Cymbopogon nardus), Chinchilla (Tagetes minuta) y la hierba de limn
(Cymbopogon citratus), en las flores como lavandas (Lavandula officinalis), en
frutos como el limn, la naranja (Citrus spp.) e incluso en las semillas como en el
caso del ans (Pimpinella anisum) , Cilantro (Coriandrum sativum) y pimienta (Piper
nigrum), entre otros (Guenther, 1960), (Hsn & Buchbauer, 2010).
Las caractersticas morfolgicas de las especies productoras de aceites en el
gnero Cymbopogon son muy similares en sus partes vegetativas. Son gramneas
perennes de macollas compactas, con rizomas cortos y sin tallos areos, con hojas
duras y erectas que en la madurez tienden a doblarse (Len, 2000). Los aceites se
hallan en el mesofilo, como productos de acumulacin, y ocupan bandas de clulas
de varias capas de espesor que pueden ser percibidas en el lado superior de la hoja
por su color ms claro. La acumulacin del aceite es ms activa en las hojas jvenes.
Estas plantas presentan una tendencia a florecer tarda e irregular y producen
semilla normal en raras ocasiones, por esto su propagacin se hace por cepas
cortadas de macollas. Es una hierba de mltiples cosechas, resistente a las
variaciones climticas y las plagas, (Akhila, 2010), (Cassel & Vargas, 2006).
El gnero Cymbopogon tiene su importancia econmica y es ampliamente
cultivada en las regiones tropicales del planeta en funcin de sus propiedades
aromticas, especialmente la citronela (C. winterianum), cuyo aceite est
compuesto en su mayora por monoterpenos ( 80%), y tambin se encuentran
sesquiterpenos (Marco, Innecco, Mattos, Borges, & Nagao, 2007), (Rocha, Ming, &
Marques, 2000). Los principales terpenoides encontrados en el aceite esencial de
citronela son el citronelal, citronelol y geraniol (Figura 2), que se utilizan en
perfumera, jabonera, preparacin de insecticidas y repelentes (Guenther, 1960),
(Nunes, Moura Linck, Loureno da Silva, Figueir, & Elisabetsky, 2010). Su
componente mayoritario, el citronelal, es un importante intermediario o producto
de partida para la sntesis de terpenoides de mayor importancia comercial
(Lenardao, Botteselle, Azambja, & Jacob, 2007).

Figura 2: Principales terpenoides del aceite esencial de citronela.
1.2.6. Produccin y calidad de las esencias

La produccin de aceites esenciales a partir de especies aromticas y
medicinales debe responder, a los requerimientos del mercado donde cada vez se
exige mayor calidad a los productos para poder competir.
El concepto de calidad tiene muchas definiciones e interpretaciones, aunque
todas se refieren a la satisfaccin del cliente. Adems, este concepto se extiende
ms all del producto, debe estar acompaado de un proceso productivo que
implique conservacin de los recursos naturales, sustentabilidad en el tiempo y
cuidado del medio ambiente.
En los productos obtenidos a partir de especies aromticas destinados a la
industria alimenticia, farmacutica, cosmtica, perfumstica, tabacalera u otras,
debe ponerse especial cuidado en todas las etapas, desde la plantacin del cultivo
hasta la colocacin de dicho producto frente al consumidor final.
Para garantizar el cumplimiento de estos requisitos se han redactado con
fines de recomendacin diversos cdigos nacionales y/o internacionales
denominados en general Buenas Prcticas, que segn a qu se refieran
especficamente pueden ser Agrcolas (BPA), de Manufactura (BPM), de Higiene
(BPH) o de Laboratorio (BPL).
En Argentina, la Resolucin 530/2001 dictada por el Servicio Nacional de
Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA), hace referencia a normas relativas a
las Buenas Prcticas de Higiene y Agrcolas para la produccin primaria (cultivo-
cosecha), acondicionamiento, almacenamiento y transporte de productos
aromticos (SAGPYA, 2001).
6
INTRODUCCION
Puesto que el material vegetal es el producto de un proceso

predominantemente biolgico, existen factores que influyen en la produccin y
calidad de la esencia como por ejemplo la seleccin y mejora gentica, la variacin
morfo y ontogentica consecuencia de la variacin intraindividual entre las partes
de la planta y su desarrollo, las condiciones ambientales y la intervencin del
hombre (Ringuelet & Cerimele, 2010).
1.2.6.1. Variacin gentica y mejora vegetal

La variacin fenotpica en los aceites esenciales se detecta muy pronto gracias
a sus propiedades sensoriales. Debido a la alta diversidad qumica es necesaria una
seleccin continua de los quimiotipos deseados para obtener poblaciones
homogneas (Akhila & Rani, 2002).
Los estudios de la gentica y la mejora vegetal se aplican con los objetivos de
homogeneizar el contenido en aceite esencial y su composicin, obtener mayores
rendimientos y resistencia a plagas y enfermedades, as como tambin bajos
requerimientos nutricionales que disminuyen los costos de produccin y
homogeneidad en el cultivo que faciliten los procesos tecnolgicos de cosecha y
post-cosecha (Pank, 2007).
Se encuentran clones de especies conocidas de mentas, citronela y organo,
con mejores calidades de esencia o mejoras en el manejo agronmico y post-
cosecha, para lograr mayor rendimiento (Bandoni, Las Plantas Aromticas, 2003).
Algunos autores colocan a C. winterianus como una especie muy trabajada en
mejoramiento gentico para aumentar los valores de aceite esencial. El
rendimiento de las hojas se encuentra entre 14,7 y 20 t/ha ao. Algunos clones
pueden presentar de 60 a 70% de citronelal, con 0,6 a 0,8% de aceite sobre materia
seca y 60 a 70 t/ha ao de hojas (Panda, 2005).
1.2.6.2. Variacin morfo y ontogentica

En cuanto a las diferencias entre las partes de la planta, la etapa de desarrollo
y los rganos de la misma, la formacin de aceites esenciales es dependiente de
esta fase y se pueden observar cambios notables en el rendimiento en aceite y su
composicin (Franz & Novak, 2010).

Se registran grandes diferencias en el contenido y la composicin del aceite
esencial de las hojas jvenes, maduras y flores. Por lo general, hay un significativo
aumento en la produccin de aceite esencial durante el desarrollo vegetativo, las
hojas jvenes muestran un mayor contenido de aceite esencial, en comparacin
con las hojas viejas. El mayor rendimiento de aceite se alcanza en la fase generativa
entre la formacin de yemas y la floracin completa, o hasta la produccin de
frutos o semillas, por esta razn la mayora de los aceites son producidos a partir de
plantas en floracin. Por ejemplo la composicin del aceite esencial de Tagetes
minuta L. vara segn las diferentes partes de la planta y de su estado de
crecimiento, el aceite de hojas de plantas no florecidas contiene principalmente
dehidrotagetona, mientras que el aceite de hojas de plantas florecidas al igual que
el aceite de flores es rico en -ocimeno y tagetenona (Chamorro, Ballerini,
Sequeira, Velasco, & Zalazar, 2008).
1.2.6.3. Influencias ambientales

La formacin de aceite esencial en las plantas es altamente dependiente de
las condiciones climticas, especialmente de la temperatura, el suministro de agua,
la longitud del da y la heliofana efectiva (helio = sol y fanis = resplandor) que es el
perodo de tiempo, expresado en horas, durante el cual la planta ha recibido
radiacin solar directa.
Las especies tropicales siguen su ciclo de vegetacin segn la estacin seca y
lluviosa, las especies de las zonas templadas reaccionan ms con la duracin del da.
Por ejemplo, la menta peperina necesita un mnimo de duracin del da (horas de
luz) para cambiar de la fase vegetativa a la generativa. Esto es seguido por un
cambio en la composicin de aceite esencial de mentona a acetato de mentol y
mentilo.
En otras especies, en cambio, se puede observar que cuanto ms corta es la
fase de floracin, menor es el tiempo disponible para la formacin del aceite, y por
lo tanto menor es el contenido de aceite. Aunque la composicin del aceite
esencial, no muestra ningn cambio cualitativo debido a factores ecolgicos o
climticos (Franz & Novak, 2010).
8
INTRODUCCION
Otros factores ambientales son las propiedades del suelo y el estrs por el
agua o la temperatura que tienen influencia en la productividad de las especies y de
este modo el rendimiento de aceite, pero tienen poco efecto en la composicin de
aceite esencial. Es aqu donde interviene el hombre mediante la fertilizacin del
suelo, abastecimiento de agua de riego y manejo de plagas (Figueiredo, Barroso,
Pedro, & Scheffer, 1997), (Salamon, 2007).
1.3. Mtodos de extraccin

Hay diversos mtodos de extraccin de aceites esenciales que dependern
del tipo de material vegetal. Los mismos son: destilacin por arrastre con vapor de
agua, expresin y extraccin con solventes slidos, lquidos y supercrticos.
1.3.1. Destilacin por arrastre con vapor de agua

Es una de las tcnicas ms comunes que permite la separacin de sustancias
ligeramente voltiles e inmiscibles en agua por medio de una destilacin a baja
temperatura. Es particularmente til cuando la sustancia hierve a una temperatura
superior a los 100C y se descompone por debajo de su punto de ebullicin o
cuando se quiere separar una cantidad relativamente pequea de una sustancia
que se encuentra mezclada con gran cantidad de slidos o productos alquitranosos
y donde la destilacin, filtracin y extraccin son difciles o impracticables. Se usa
generalmente en el aislamiento de productos naturales y de productos de reaccin
que estn impurificados con productos resinosos (Rodrguez lvarez, Alcaraz
Melndez, Real, & Sergio, 2012), (Schmidt, 2010).
El proceso consiste, en resumen, en una vaporizacin a temperaturas
inferiores a las de ebullicin de cada uno de los componentes voltiles por efecto
de una corriente directa de vapor de agua, el cual ejerce las funciones de calentar la
mezcla hasta su punto de ebullicin y disminuir la temperatura de ebullicin por
adicin de la tensin del vapor que se inyecta a la de los componentes voltiles de
los aceite esenciales. Los vapores que salen del destilador se enfran en un
refrigerante donde regresan a la fase lquida, agua y aceite esencial, y finalmente se
separan en un decantador o vaso florentino.

1.3.2. Expresin
Este mtodo es utilizado para la extraccin de esencias ctricas, a partir de las
cscaras, las cuales son exprimidas mecnicamente para liberar el aceite, que es
recolectado y filtrado. Se aplica debido a que los componentes de los aceites
ctricos se degradan por accin del oxgeno y el calor.
El aceite esencial de los ctricos se encuentra justo debajo de la superficie en
las clulas del epicarpio, tambin llamados flavedo, en el rea de color de la fruta.
Tambin est presente en las clulas del jugo, sin embargo, la cantidad de aceite
presente en el jugo es mucho menor que la cantidad presente en el flavedo; la
composicin tambin difiere.
A lo largo del tiempo han surgido varios mtodos para la extraccin de este
aceite. El mtodo ms antiguo llamado de la esponja, se realizaba a mano con
esponjas marinas que absorban el aceite esencial de los estomas daados al pelar
la fruta y dar vuelta las cscaras. El inconveniente de este mtodo es que tambin
extraa impurezas de las cscaras (cumarinas).
Luego se incorpor tecnologa al proceso, al principio fueron mquinas
ralladoras que extraan la esencia y restos de material vegetal (celulosa, flavonoides
y ceras) lo que disminua la calidad del aceite. En la industria de jugos, ctricos
donde el aceite esencial se obtiene como subproducto, se usan procesos con la
fruta entera o FMC que simultneamente exprimen el jugo y rallan la cscara. El
jugo va por una lnea de proceso mientras que el aceite es arrastrado por una
corriente de agua en otra direccin, finalmente la emulsin de agua y aceite se
centrfuga. Otros procesos utilizan prensas normales o hidrulicas, sobre moldes
porosos donde el aceite fluye por los poros y queda el residuo en forma de torta
(Schmidt, 2010).
1.3.3. Extraccin con solventes

La extraccin con solventes slidos tambin llamada enfleurage o enflorado
se emplea para la obtencin de esencias florales (rosa, jazmn, azahar, etc.).
Consiste en colocar los ptalos de las flores sobre una superficie de grasa que se
satura con el aceite, constituyendo la pomada, de donde luego se extrae el aceite
con alcohol y se separa este por destilacin.
10
INTRODUCCION
La extraccin por solventes lquidos orgnicos se utiliza a escala de

laboratorio, pues a nivel industrial resulta muy costosa por el alto valor comercial
de los solventes y porque se obtienen esencias mezcladas con otras sustancias.
Extrae no solo terpenos, sino tambin toda sustancia que sea soluble en el solvente
utilizado.
La extraccin por fluidos supercrtico es una operacin unitaria que aprovecha
el poder disolvente de fluidos a temperaturas y presiones por encima de sus valores
crticos. Un fluido supercrtico tiene propiedades entre un lquido y un gas y le
proporcionan mayor poder penetrante en el material a extraer. El dixido de
carbono es considerado el solvente supercrtico ideal porque no es txico, ni
inflamable, tiene bajo costo y con una temperatura crtica baja.
El material vegetal, se empaca en una cmara de acero inoxidable y se hace
circular a travs de l un fluido en estado supercrtico. Las esencias se solubilizan y
arrastran mientras que el fluido supercrtico, se elimina por descompresin
progresiva hasta alcanzar la presin y temperatura ambiente (Rodrguez lvarez,
Alcaraz Melndez, Real, & Sergio, 2012), (Schmidt, 2010).
1.4. Destilacin por arrastre con vapor

La extraccin por arrastre con vapor es el proceso para obtener el aceite
esencial de una planta aromtica, mediante el uso del vapor saturado a presin
atmosfrica.
Los aceites esenciales se ubican en los estomas odorferos de la planta por lo
que el vapor de agua tiene que entrar al material vegetal, romper las estomas y
finalmente destilar. La industria aromtica utiliza este mtodo por su menor costo
cuando se lo compara con mtodos avanzados como la extraccin con fluidos
supercrticos (Bandoni, Las Plantas Aromticas, 2003).
La tcnica se basa en la ley de las presiones parciales de Dalton que dice que
en una mezcla de dos lquidos X e Y completamente inmiscibles entre s, cada
lquido ejerce su propia tensin de vapor caracterstico e independiente de la del
otro.

La presin total (Pt) ser:
Pt= Px + Py (a T C)
Px: tensin de vapor de x a T C
Py: tensin de vapor de y a T C
Estas tensiones de vapor son independientes de las cantidades relativas de los
componentes de la mezcla (x e y).
El punto de ebullicin de la mezcla ser aquella temperatura en la que la
tensin de vapor total iguale a la presin de confinamiento. A menos que Px o Py
sean iguales a cero (que no estn presentes), esta temperatura ser ms baja que
los puntos de ebullicin de x e y, y la mezcla destilar a una temperatura constante
en tanto exista por lo menos algo de cada uno de los componentes (Elder, 2010).
1.4.1. Escala laboratorio

Los equipos a esta escala son una miniaturizacin de los equipos piloto,
donde el material vegetal forma un lecho fijo y el vapor de agua es alimentado
continuamente desde un baln con agua a ebullicin, que funciona como un
generador de vapor (Figura 3). Estos equipos poseen la ventaja adicional de trabajar
en un modo similar al de los equipos mayores. Sus limitaciones son la capacidad del
baln y la dependencia del flujo de vapor generado con la potencia de la fuente de
energa, lo que le resta flexibilidad en el control de este parmetro (Rodrguez
lvarez, Alcaraz Melndez, Real, & Sergio, 2012).
Figura 3: Equipo de destilacin por arrastre con vapor de agua

a escala laboratorio.
12
INTRODUCCION
1.4.2. Escala piloto

Estos equipos poseen mayor capacidad. Son construidos en acero comercial,
inoxidable o cobre. Pueden ser de dos tipos: con generador externo o acoplado al
hidrodestilador. Estn conformados de un hidrodestilador cilndrico donde el vapor
de agua es inyectado por la parte inferior del generador o generado en esa seccin.
La materia prima suele estar compactada y almacenada en una cesta para su mejor
carga y descarga. Los condensadores pueden ser de distintos tipos (coraza y varios
tubos internos, serpentn, etc.). El aceite esencial es recogido en un vaso florentino.
Las ventajas son la mayor confiabilidad en los datos experimentales
generados, con respecto a los obtenidos a menores escalas, y que se esperan
conseguir en una planta industrial. Adems son procesos por lotes los cuales son
flexibles, verstiles y permiten operar con pequeos volmenes, realizando pruebas
antes de su transformacin a gran escala.
Como desventajas hay que mencionar que no son fciles de trasladar ni estn
aislados trmicamente. Los equipos piloto suelen usarse con propsitos de
produccin semi-industrial y como centro de ensayos de una planta industrial
(Rodrguez lvarez, Alcaraz Melndez, Real, & Sergio, 2012).
1.4.3. Escala industrial

Estos equipos poseen capacidad mayor a 10 litros. Estn construidos en acero
inoxidable de fcil limpieza. Pueden ser de dos tipos: mviles (remolques-
alambiques) o estticos (hidrodestiladores verticales). Los de remolques, ms
usados en EUA y Europa, responden a la mecanizacin de la agricultura y a la gran
produccin de algunos aceites, as como la bsqueda de minimizar costos de
operacin y aumentar la eficiencia de la obtencin. El uso de equipos verticales
responde a otras necesidades, cosecha atomizada en varias regiones cercanas,
mayor mano de obra disponible, menores niveles de produccin y el inters en
agotar completamente el aceite contenido en la planta, estos equipos suelen
encontrarse en Asia, frica y Latinoamrica (Rodrguez lvarez, Alcaraz Melndez,
Real, & Sergio, 2012).

1.5. Identificacin y caracterizacin de aceites esenciales
Para la identificacin cuali y cuantitativa se utiliza la tcnica acoplada de
Cromatografa de Gases - Espectrometra de Masas (GC-MS). Esta tcnica, gracias al
desarrollo de columnas capilares de alta resolucin, permite analizar mezclas
complejas presentes en aceites esenciales e identificar los componentes, a partir de
los tiempos de retencin, que son caractersticos para cada uno de ellos, y del
espectro de masas de cada componente con el cual se obtiene el peso molecular e
informacin estructural. Asimismo existen bases de datos con los espectros de
masas que sirven de criterio para la asignacin qumica de muchos componentes de
aceites esenciales (Chamorro, Zambn, Morales, Sequeira, & Velasco, 2012).
Los aceites deben cumplir una serie de caractersticas fsicas y qumicas que
dependern de cada aceite en particular. Estas propiedades estn fijadas en las
normas IRAM-SAIPA para cada aceite.
La norma IRAM-SAIPA 18520 Aceite de citronela de Argentina tipo Java
(Cymbopogon winterianus Jowitt) define al aceite de citronela como el producto
obtenido por arrastre con vapor de agua, de las partes areas del Cymbopogon
winterianus Jowitt, obtenido de plantas cultivadas en la Argentina, con
caractersticas organolpticas de lquido lmpido, incoloro o amarillento, de color
caracterstico (IRAM-SAIPA, Norma 18520, 2006).
Los requisitos que debe cumplir son los presentados en la Tabla 1.
14
INTRODUCCION
Tabla 1: Parmetros fisicoqumicos del aceite esencial de citronela segn IRAM-SAIPA 18520: 2006.
Requisitos Unidad Mnimo Mximo Mtodo de ensayo
Densidad a 20C/ 4C - 0,881 0,900 IRAM-SAIPA N 18504: 2002
ndice de refraccin a 20C - 1,4630 1,4750 IRAM-SAIPA N 18505: 2002
Rotacin ptica a 20C Grado -0,5 -6,0 IRAM-SAIPA N 18507: 2002
Alcoholes totales, IRAM-SAIPA N 18513-1:
g/100g 85,0 -
expresados como geraniol 1992 y 6.1
Compuestos carbonlicos, IRAM-SAIPA N 18515: 1984
g/100g 30,0 45,0
expresados como citronelal y 6.2
1 volumen de
muestra debe
Ensayo de solubilidad en disolverse
- IRAM-SAIPA N 18510: 2003
etanol de 80ml/100ml totalmente en 2
volmenes de
etanol
Olor igual al de la
Evaluacin olfatoria - IRAM-SAIPA N 18601: 1970
muestra convenida
1.6. Diseo de experimentos

La experimentacin juega un papel fundamental en todos los campos de la
investigacin y el desarrollo. El objetivo que persigue es obtener informacin
confiable que brinde el conocimiento inicial sobre un nuevo sistema en estudio,
determinar la influencia de los factores sobre la respuesta observada, optimizar las
respuestas y determinar la robustez del sistema (Devore, 2009).
Un aspecto importante de la experimentacin que se debe considerar es que
es normalmente cara y est limitada a los costos en tiempo y recursos. Por lo tanto,
la organizacin ptima de la experimentacin deber contemplar el menor nmero
de experimentos que permita obtener la informacin buscada (Montgomery &
Runger, 2002). Adems, el resultado observado de un experimento, y, tiene un
error experimental: y = n + e, donde n es el resultado verdadero del experimento y
e es una contribucin aleatoria, que vara cada vez que se repite el experimento.
Para la eleccin de los experimentos y la evaluacin de los resultados es
necesario utilizar una metodologa matemtica y estadstica que indique cmo
planificar la secuencia de experimentos a fin de minimizar tanto el costo como la
influencia del error experimental sobre la informacin buscada (Eriksson,
Johansson, Kettaneh-Wold, Wilstrm, & Wold, 2008).

El uso de modelos de probabilidad y mtodos estadsticos para analizar datos
se ha convertido en una prctica comn en todas las disciplinas cientficas. Adems
todas las actividades asociadas con planear y realizar una investigacin tienen
implicaciones estadsticas. Los principios estadsticos son los asociados con la
recoleccin de aquellas observaciones que proporcionen la mayor cantidad de
informacin para el estudio e investigacin de una manera eficiente (Kuehl, 2000).
La tcnica de diseo de experimentos (DEE) es el vnculo entre lo
experimental y el modelado terico. Su objetivo es obtener la mxima informacin
del experimento que est siendo estudiado mediante el diseo estadstico (Walter
& Pronzato, 1990).
Las situaciones en las que se puede aplicar el DEE son numerosas, de forma
general, se aplica a sistemas en los cuales se observa una o ms variables cuyo valor
depende de una o ms variables independientes llamadas factores. Adems, las
respuestas pueden estar influidas por otras variables que no son controladas.
El mtodo tradicional de experimentacin consiste en variar un factor cada
vez. A partir de unas condiciones iniciales se realizan experimentos en los cuales
todos los factores se mantienen constantes excepto el que se est estudiando. De
este modo, la variacin de la respuesta se puede atribuir a la variacin del factor y
por lo tanto, revela el efecto de ese factor. El procedimiento se repite para los otros
factores. El razonamiento para esta forma de actuar es que si se variaran dos o ms
factores entre dos experimentos consecutivos, no sera posible conocer si el cambio
en la respuesta ha sido debido al cambio de un factor, al de otro, o al de todos a la
vez.
La estrategia experimental del mtodo tradicional presenta inconvenientes
importantes cuando existe interaccin entre factores. Existe interaccin entre dos
factores A y B cuando el efecto del factor A es diferente segn qu valor tome el
factor B, y viceversa. Esta situacin se presenta muy a menudo en qumica, fsica,
biologa, etc. Para estos casos este procedimiento no informa sobre como un factor
interacta con los otros o como estas interacciones afectan a la respuesta, con lo
cual slo se obtiene una comprensin limitada de los efectos. Tampoco proporciona
la posicin del ptimo. El experimentador percibe que se ha llegado al ptimo
porque cambiando un factor cada vez la respuesta no mejora, pero se puede
16
INTRODUCCION
encontrar lejos del ptimo real. Aunque se puede reiniciar la experimentacin

partiendo del ptimo encontrado, esta solucin es extremadamente ineficiente
cuando se deben estudiar muchos factores a muchos valores distintos, ya que
requerira demasiados experimentos y demasiado tiempo.
La solucin consiste en variar ms de un factor simultneamente al realizar un
nuevo experimento. Ello permite mejorar la eficiencia del experimentador y
obtener informacin sobre las interacciones. La dificultad se encuentra en disear
una experimentacin reducida, donde estos cambios simultneos se complementen
entre s y permitan obtener la informacin buscada al combinar los resultados de
todos los experimentos.
El DEE proporciona el marco matemtico para cambiar todos los factores
simultneamente, y obtener la informacin buscada con un nmero reducido de
experimentos, es decir, con la mxima eficiencia. El DEE conduce a una planificacin
con menos experimentos que el mtodo tradicional para obtener un conocimiento
equivalente (Box & Hunter, 1989), (Eriksson, Johansson, Kettaneh-Wold, Wilstrm,
& Wold, 2008), (Massart, Vandeginste, Buydens, De Jong, & Lewi, 1997).
1.6.1. Diseo factorial completo 2k

El diseo factorial completo describe los experimentos ms adecuados para
conocer simultneamente qu efecto tienen k factores sobre una respuesta y
descubrir si interaccionan entre ellos. El nmero 2 de la base indica que cada factor
toma solo dos valores.
Estos experimentos estn planeados de forma que se varan simultneamente
varios factores pero se evita que cambien siempre en la misma direccin. Al no
haber factores correlacionados no hay experimentos redundantes. Adems, los
experimentos se complementan de tal modo que la informacin buscada se obtiene
combinando las respuestas de todos ellos. Esto permite obtener la informacin con
el mnimo nmero de experimentos y con la menor incertidumbre posible.
La aplicacin del mtodo puede realizarse en varias etapas, las cuales son:
planteamiento del problema, identificacin de los factores y dominio experimental,
diseo de la matriz de experimentos, plan de experimentacin, realizacin de los

mismos e interpretacin de los resultados (Berti, Monti, & Salmaso, 2002),
(Montgomery D. , 2004).
1.6.1.1. Planteo del problema

Es necesario comprender el problema y definir claramente el objetivo. El DEE
es una herramienta para encontrar respuestas a problemas perfectamente
identificados y especificados. Para obtener una comprensin profunda del sistema y
del problema es necesario recopilar toda la informacin disponible sobre el sistema
en estudio y que pueda ser relevante para la experimentacin que se realizar. En
este punto se debe definir qu respuesta experimental o caracterstica de inters
de un producto se va a observar.
1.6.1.2. Identificacin de los factores y dominio experimental

Para identificar los factores y el dominio experimental de inters es muy
importante listar todos los factores (las variables independientes) que pueden tener
influencia en el proceso y en la respuesta, aunque sean de poca importancia. Se
debe considerar si cada factor especificado se mantendr constante, se variar
controladamente, si es incontrolable pero se pueden conocer sus valores o si es
incontrolable e imposible de medir. Los factores no controlados pueden introducir
variaciones en la respuesta que dificultan el anlisis de los resultados
experimentales.
Para cada factor se debe definir el intervalo de valores que puede tomar
(dominio). La combinacin del dominio de todos los factores configura el dominio
experimental posible. Este contiene los experimentos que, en principio, se podran
realizar.
No siempre cualquier combinacin de valores de factores es posible o
deseable. Pueden existir restricciones experimentales, tcnicas o econmicas por la
cuales el dominio experimental inicial se reduce a un dominio experimental de
inters.
La eleccin de los factores y de su dominio experimental no suele ser fcil, es
el experimentador quien decide donde es interesante estudiar dichos factores. Esta
18
INTRODUCCION
decisin requiere un conocimiento previo del sistema, obtenido de referencias

bibliogrficas, experiencias en el laboratorio, etc.
1.6.1.3. Diseo de la matriz de experimentos

Las series de experimentos se agrupan en diseos denominados matrices de
experimentos. La seleccin de una matriz depender del objetivo. Para el estudio
de los factores, una vez identificados los ms importantes, el siguiente paso es
estudiar cuantitativamente su efecto sobre la respuesta y sus interacciones, para lo
cual se utilizan los diseos factoriales completos a dos niveles 2k.
Para conocer el efecto de un factor es suficiente con hacerlo variar entre dos
valores. Los ms adecuados son los extremos de su dominio experimental entre el
nivel menor (-) y mayor (+). Adems, esta variacin se realiza para cada
combinacin de los dems factores, lo que permitir descubrir si el efecto depende
del valor tomen estos factores. Por ejemplo, para un diseo factorial completo a
dos niveles con tres factores, 23, se tiene la matriz de experimentos que se muestra
a continuacin (Tabla 2).
3
Tabla 2: Matriz de experimentos de diseo factorial 2 .
Matriz de experimentos
N
x1 x2 x3
1 - - -
2 + - -
3 - + -
4 + + -
5 - - +
6 + - +
7 - + +
8 + + +
1.6.1.4. Plan de experimentacin y realizacin de los experimentos

La matriz del plan de experimentacin se obtiene reemplazando los valores (-)
y (+) por los valores reales de las variables. Las respuestas se obtienen al realizar los
experimentos en orden aleatorio, asegurando que los factores no contemplados no
introduzcan confusin y sesgo en los resultados.

1.6.1.5. Interpretacin de los resultados
Para la interpretacin de los resultados hay que considerar si existen efectos
de interaccin significativos, si es as no se puede interpretar individualmente el
valor de cada efecto principal. Caso contrario, la interpretacin de los resultados se
reduce a analizar slo los efectos principales.
Es habitual que los efectos de interaccin sean cada vez menos importantes
cuando ms factores se consideran en la interaccin (Box & Hunter, 1989), (Carlson,
1992), (Massart, Vandeginste, Buydens, De Jong, & Lewi, 1997), (Montgomery D. ,
2004).
1.6.2. Anlisis de varianza

El anlisis de la varianza (ANOVA) es una potente herramienta estadstica, de
gran utilidad tanto en la industria, para el control de procesos, como en el
laboratorio de anlisis, para el control de mtodos analticos.
En los casos donde tenemos dos o ms factores que influyen en una
determinada respuesta, se realizan los experimentos para todas las combinaciones
de los factores estudiados, seguido del ANOVA con lo que se puede deducir si cada
uno de los factores o una interaccin entre ellos tienen influencia significativa en el
resultado (Massart, Vandeginste, Buydens, De Jong, & Lewi, 1997).
Para utilizar el ANOVA de forma satisfactoria deben cumplirse tres requisitos:
los errores deben seguir una distribucin normal, con una media de cero, la
varianza de error debe ser constante para diferentes niveles de un factor y los
errores deben ser independientes unos de otros (Massart, Vandeginste, Buydens,
De Jong, & Lewi, 1997).
Para evaluar estas condiciones se utilizan las grficas de residuos: de
probabilidad normal, histograma, residuos versus valores ajustados y residuos
versus orden de datos (Montgomery D. , 2004).
20
OBJETIVOS
2. OBJETIVOS
2.1. Objetivo principal

Estudiar la influencia de las variables cantidad de materia prima, tiempo de
proceso y la estacin del ao en el rendimiento y la calidad del aceite esencial de
citronela (Cymbopogon winterianus) extrado por arrastre con vapor a escala piloto.
2.2. Objetivos secundarios

Obtener aceite esencial de citronela y caracterizar el aceite obtenido.
Modelar estadsticamente el proceso de obtencin del aceite en base a las
variables estudiadas.
Determinar las mejores condiciones de trabajo para el proceso de obtencin
de aceite de citronela.
2.3. Tipo de investigacin a realizar

El tipo de investigacin es aplicada, donde se explorar un nico caso: la
extraccin por arrastre con vapor de agua del aceite esencial de citronela
(Cymbopogon winterianus) a escala piloto.

MATERIALES
Y
METODOS
3. MATERIALES Y METODOS
3.1. Identificacin botnica y condiciones meteorolgicas

La identificacin y clasificacin taxonmica, se realiz en el Instituto de
Botnica del Nordeste (IBONE).
La Estacin Experimental Agropecuaria (EEA) del INTA de Colonia Bentez
proporcion la informacin referida a las condiciones meteorolgicas de esa
localidad (temperaturas, heliofana efectiva y precipitaciones) para cada da de los
aos 2012 y 2013. A fin de evaluar su influencia sobre el material vegetal
recolectado, se tomaron slo los valores de estos parmetros en los meses de abril
a septiembre para el invierno y de octubre a marzo para el verano.
La temperatura del aire a 1,5 metros se midi con un termmetro de
mercurio, en posicin vertical, graduado hasta la dcima de grados y situado en el
centro de una garita de madera, pintada de blanco y bien ventilada. La temperatura
a 0,05 metros correspondiente al suelo se midi con un geotermmetro cuyo bulbo
se encuentra enterrado en el mismo. La heliofana efectiva se midi con un
heligrafo y las precipitaciones se determinaron con un pluvimetro.
3.2. Destilacin por arrastre con vapor de agua: etapas del proceso
3.2.1. Corte del material vegetal

El material vegetal se obtuvo de un lote de plantacin de citronela de la EEA
Colonia Bentez. El mismo se cort manualmente y se llev al lugar de oreado.
3.2.2. Oreado
El oreado se realiz a temperatura ambiente durante 36 horas, extendiendo
el material vegetal sobre el piso limpio, bajo techo en una galera con suficiente
intercambio de aire.

3.2.3. Destilacin por arrastre con vapor a escala piloto
El aceite se obtuvo en un equipo de destilacin por arrastre con vapor a
escala piloto. El mismo constaba de cuatro cuerpos principales: generador de vapor,
extractor, condensador y separador-decantador (Figura 4).
El generador de vapor era un recipiente cilndrico de acero inoxidable de 15
litros de capacidad que se cerraba hermticamente con una tapa bridada y juntas
de goma para evitar prdidas de vapor. Se conectaba al extractor, tambin
cilndrico, de acero inoxidable y de 20 litros de capacidad, por medio de una unin
lateral que conduca a un distribuidor de vapor en forma de anillo situado en el
fondo de extractor. Una prolongacin curvada en la parte superior del extractor
conectaba el mismo con el condensador de tipo casco y tubos que desagotaba los
condensados en una ampolla de decantacin de 2 litros de capacidad.
El procedimiento para la extraccin consisti en cargar el generador de vapor
con agua de red, cerrarlo hermticamente y suministrarle calor por medio de una
hornalla con conexin a gas en la parte inferior. Se pes el material oreado (1 o 2 Kg
segn el ensayo) directamente en un cesto metlico con una balanza digital, luego
se coloc el cesto en el cuerpo extractor del equipo y se cerr tambin
hermticamente. Se verificaron las conexiones entre el generador de vapor, el
extractor y el condensador y se suministr agua de red al condensador como fluido
refrigerante.
Una vez que se observ salir vapor por la vlvula situada en el fondo del
extractor, se cerr la misma y se dio inicio al tiempo de proceso (45 o 90 minutos
segn el ensayo). El aceite esencial y el vapor se condensaban y recogan en una
ampolla de decantacin de 2 litros de capacidad cargada con solucin saturada de
cloruro de sodio que facilit la separacin de las fases.
Finalizado el tiempo de proceso se interrumpi la generacin de vapor, se
abri la vlvula de pasaje de vapor del fondo del extractor, se retir la ampolla con
el aceite esencial obtenido y cuando el equipo perdi temperatura se abri el
extractor para retirar y reemplazar el material vegetal para un siguiente ensayo.
El aceite se separ del agua con ayuda de la ampolla de decantacin, se sec
con sulfato de sodio anhidro, agregando ste hasta cristalizacin del exceso de
24
MATERIALES Y METODOS
sulfato hidratado, luego se almacen en frascos de vidrio color caramelo que se

guardaron en heladera para su posterior caracterizacin fisicoqumica.
Figura 4: Fotografa del equipo de destilacin por arrastre con vapor de agua a escala piloto.
3.3. Diseo de experimentos factorial 23
3.3.1. Planteo del problema

Se plante el objetivo de conocer si los factores cantidad de materia prima,
tiempo de proceso, estacin del ao y sus interacciones influyen significativamente
en la calidad del aceite esencial de citronela (Cymbopogon winterianus), medida
como porcentaje de composicin relativa de citronelal, y en el rendimiento del
aceite extrado por arrastre con vapor de agua a escala piloto.
3.3.2. Factores y dominio experimental

Se analizaron las causas de variacin en la composicin relativa de citronelal
obtenido por extraccin por arrastre con vapor de agua y se ponderaron las mismas

en base a informacin bibliogrfica, antecedentes del Centro de Investigacin UTN
QUIMOBI, consulta con expertos, criterios de rentabilidad y limitaciones del equipo
donde se lleva a cabo el estudio, se determin el dominio experimental (Tabla 3).
3
Tabla 3: Dominio experimental del diseo factorial 2 .
Dominio experimental
Factores
Nivel - Nivel +
x1: tiempo (min) 45 90
x2: materia prima (Kg) 1 2
x3: estacin Invierno Verano
Los factores x1 (tiempo) y x2 (materia prima) son variables cuantitativas y sus

notaciones habituales se indican con (-) al extremo inferior y (+) al extremo
superior, por lo que sus dominios experimentales se expresan con los valores
mnimos y mximos mientras que el factor x3 (estacin) es una variable atributo
cualitativa y se expresa con los nombres de los valores que toma, ya que en este
caso son irrelevantes los niveles (-) y (+).
El tiempo de extraccin debi ser inferior a 90 minutos para que no se
degrade el aceite esencial por exceso de calentamiento y superior a 45 minutos
para asegurar un rendimiento suficiente. La cantidad de materia prima de 1 y 2 Kg
se eligi teniendo en cuenta la capacidad del equipo a escala piloto donde se
realizaron los ensayos. A mayor cantidad de material vegetal, mayor aceite
obtenido pero hay que asegurar que el mismo no se apelmace en el cesto del
extractor para que el vapor pueda circular a travs de l y lograr un buen arrastre
de esencia. Los perodos del ao que se eligieron para evaluar la influencia de las
condiciones del clima en la calidad del aceite esencial, fueron luego del invierno
(agosto y septiembre) y finalizado el verano (marzo y abril).
La Figura 5 muestra el dominio experimental para dos factores cuantitativos y
uno cualitativo. Cada crculo indica un posible experimento, los experimentos de los
vrtices fueron los utilizados en el diseo factorial completo.
26
Figura 5: Dominio experimental para dos

factores cuantitativos y uno cualitativo.
3.3.3. Matriz de experimentos: diseo factorial completo 23

Para disear el experimento se tomaron los valores de los extremos del
dominio experimental, niveles (-) y (+). Adems esta variacin se realiza para cada
posible combinacin de los valores de los dems factores lo que permite descubrir
si el efecto depende de qu valor toman los mismos. Todas estas combinaciones
estn contempladas en el diseo factorial completo 23 que se muestra en la Tabla 4.
3
Tabla 4: Matriz de experimentos y Plan de experimentacin para el diseo factorial 2 .
Matriz de experimentos Plan de experimentacin
N
x1 x2 x3 MP(Kg) Tiempo (min) Estacin
1 - - - 1 45 Invierno
2 + - - 2 45 Invierno
3 - + - 1 90 Invierno
4 + + - 2 90 Invierno
5 - - + 1 45 Verano
6 + - + 2 45 Verano
7 - + + 1 90 Verano
8 + + + 2 90 Verano
3.3.4. Plan de experimentacin y realizacin de los experimentos

Se utiliz el software MINITAB 15 para disear los experimentos y aleatorizar
el orden de los mismos.

Cada ensayo del diseo se realiz en la planta piloto de la UTN-FRRe con el
equipo de destilacin antes descripto.
3.3.5. Interpretacin de los resultados

Los datos obtenidos se analizaron estadsticamente con MINTAB 15. Este
software utiliza el test de ANOVA para comparar las medias de los datos obtenidos
en cada experimento. Primeramente se supone una hiptesis nula, de igualdad de
medias, y la hiptesis alternativa de que al menos una media es distinta a la de los
dems. Si los promedios son iguales se decide que el factor no influye
significativamente en la variacin de la respuesta. Un resultado es estadsticamente
significativo cuando las variaciones de los promedios son diferentes. Se decide que
un valor tiene efecto significativo en la variable de salida cuando su probabilidad p,
es menor que 0,05 (), lo que significa un error menor al 5% de rechazar la hiptesis
nula siendo esta verdadera.
Para el anlisis de los efectos se utilizaron las grficas de efectos principales y
de interacciones para la respuesta de composicin relativa de citronelal.
3.4. Caracterizacin fisicoqumica del aceite de citronela

La caracterizacin e identificacin cuali - cuantitativa del aceite de citronela
obtenido por arrastre con vapor de agua en los distintos tratamientos del diseo
factorial se llev a cabo mediante la determinacin de las siguientes propiedades:
ndice de refraccin, densidad relativa, rotacin ptica, como as tambin mediante
el estudio de la composicin relativa.
3.4.1. Indice de refraccin (nD 20C)

El ndice de refraccin se realiz segn la Norma IRAM- SAIPA 18505. Para ello
se utiliz un refractmetro de Abbe con control termosttico de temperatura de
trabajo mediante camisa de circulacin de agua entre los prismas. La precisin del
20C
instrumento es 0,0001, para un intervalo dinmico de nD = 1,300 1,700. El
procedimiento se bas en la determinacin del ngulo crtico de reflexin total
entre el aceite y el vidrio Flint del prisma. La observacin del ngulo crtico se
visualiz en el campo de observacin como una separacin ntida entre dos campos
28
(claro y oscuro) centrado en el cruce de dos pelos cruzados. La lectura en la escala

se realiz manteniendo la temperatura a 20C. Para verificar el correcto
funcionamiento del instrumento se realiz previamente la determinacin del ndice
de refraccin del agua destilada (IRAM-SAIPA, Norma 18505, 2002).
3.4.2. Densidad relativa (d20C/4C)

La tcnica de densidad relativa se llev a cabo segn recomendaciones de la
Norma IRAM- SAIPA 18504 mediante un mtodo picnomtrico. Se utiliz a tal fin
una balanza Mettler Modelo AJ150 con precisin de 0,1 miligramos. El
procedimiento consisti en la determinacin de la masa de agua contenida en el
picnmetro a la temperatura de referencia. Para ello se pes el picnmetro
perfectamente limpio y seco y se estabiliz a la temperatura 20C 0,2C. A
continuacin se lo llen con agua destilada, se lo coloc en un bao a 20C 0,2C
hasta su estabilizacin, se lo enras y luego de retirado del bao, se sec
cuidadosamente. Finalmente se pes el picnmetro enrasado con agua. La masa de
agua (mH2O) se determin por diferencia entre la masa del picnmetro con agua y la
masa del picnmetro vaco. Luego se realiz la determinacin de la masa del aceite
utilizando el mismo picnmetro limpio y seco. Se estabiliz la muestra de aceite a
20C 0,2C en un bao, a continuacin se llen el picnmetro con el aceite, se
dej unos minutos en el bao y luego se enras. Se retir del bao, se sec
exteriormente con suma precaucin evitando tocar el picnmetro. La masa de
aceite (maceite) se determin por diferencia entre la masa del picnmetro con aceite
y la masa del picnmetro vaco (IRAM-SAIPA, Norma 18504, 2002).
La densidad relativa del aceite se calcul aplicando la siguiente expresin:
d20C/4C = maceite/ mH2O

Donde,
d20C/4C: densidad del aceite a 20C, relativa a la del agua a 4C.
maceite: masa de aceite en el picnmetro lleno a 20C, en gramos.
mH2O: masa de agua calculada en la calibracin del picnmetro, en gramos.

3.4.3. Rotacin ptica []tD
Para la determinacin de la rotacin ptica se sigui la Norma IRAM-SAIPA
18507, utilizando un polarmetro del disco Tipo WXG-4, rango de medicin 180 y
precisin de 0,05. El procedimiento se bas en la observacin del ngulo de
desviacin de la luz polarizada plana, de longitud de onda 589 nm (lnea D del
Sodio), por el aceite esencial colocado en un portamuestras de 1 dm de longitud a
20C 0,2C. Para ello, la muestra de aceite se estabiliz a la temperatura de 20C
0,2C en un bao, luego se carg en el portamuestras cuidando que no queden
burbujas que interfieran en la trayectoria del haz de luz. La observacin del ngulo
se visualiz en el campo de observacin como el intermedio entre dos campos (un
crculo oscuro con una lnea clara en el centro y el otro crculo claro con la lnea
oscura en el centro) y la lectura se realiz en la escala externa (observado) (IRAM-
SAIPA, Norma 18507, 2002).
La rotacin ptica del aceite se calcul aplicando la siguiente expresin:
[]tD= observado / l * C
Donde,
[]tD: rotacin ptica a 20C para la lnea D del sodio, en grados.
observado: ngulo de rotacin ptica observada, en grados.
l: longitud del tubo portamuestras, en decmetros.
C: concentracin de la muestra, en gramos/mililitros.
3.4.4. Composicin relativa

La composicin relativa del aceite esencial de citronela se obtuvo por
cromatografa gaseosa en un equipo SHIMADZU modelo GC 14B, con una columna
Mega Bore DB-WAX P/N 125-7032 (30m de longitud x 0,53mm de dimetro interno
x 1m) y detector de ionizacin de llama (FID). Se trabaj con 0,2l de muestra y la
programacin de temperatura fue de 60C por 5 minutos, luego un aumento de
10C por minuto hasta alcanzar la temperatura final de 200C, que se mantuvo
durante 10 minutos, la temperatura del FID fue 220C y la del inyector 180C.
La identificacin de los componentes principales del aceite de citronela se
realiz por comparacin con un GC-MS realizado a una muestra del mismo aceite
30
en el Instituto de Qumica Orgnica General, CSIC, Espaa. El equipo utilizado fue

un Cromatgrafo de gases Agilent 7890 con columna de metilsilicona (30m de
longitud x 0,25mm dimetro interno x 0,2m) acoplado a un MS Agilent 5975, con
detector selectivo de masas seguido de un electrodo de ionizacin con modo de
escaneo de voltaje EM 1923 V, rango de barrido de 50-550 uma y muestreador
automtico. La programacin de temperatura fue de 70C por 5 minutos, luego un
incremento de 5C por minuto hasta alcanzar 280C. La biblioteca utilizada fue F.W.
McLafferty, D.B. Stauffe, Wiley/NBS Registry Registro de datos de espectros de
masas Wiley, New York, 1989.
3.5. Determinacin del rendimiento
La determinacin del rendimiento del aceite esencial obtenido se calcul

mediante la siguiente expresin:
Rto = volaceite * d20C/4C / mMP *100
Donde,
R: Rendimiento de aceite, en %.
volaceite: volumen de aceite, en mililitros.
d20C/4C: densidad relativa del aceite a 20C.
mMP: masa de materia prima vegetal, en gramos.
Para los clculos se utiliz la densidad relativa del aceite a 20C promedio de
todos los tratamientos del diseo de experimentos.

RESULTADOS
Y
DISCUSION
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1. Identificacin botnica de la materia prima

La identificacin y clasificacin taxonmica proporcionada por el Instituto de
Botnica del Nordeste (IBONE) fue:
Cymbopogon nardus (L.) Rendle (winterianus)
Localidad: ARGENTINA, Chaco, Dep. 1 de Mayo. Estacin Experimental INTA,
"Reserva Natural Colonia Bentez", 20 km NE de Resistencia.
Fecha de coleccin: 21/11/2012.
N y acrnimo del herbario donde se encuentra depositado: Escobar &
Arribillaga N 3, CTES0043467 (CTES).
4.2. Condiciones meteorolgicas

Los valores promedios de temperaturas mximas y mnimas (expresada en C)
tomadas a dos niveles de altura del suelo se muestran en la Figura 6. En ella se
observa que desde abril a julio de 2012 las temperaturas fueron disminuyendo
hasta alcanzar el mnimo en ese mes, luego aumentaron progresivamente hasta el
mes de diciembre donde se registraron las mximas temperaturas que se
mantuvieron hasta febrero. No se aprecian las temperaturas negativas
correspondientes a las heladas que se registraron en los meses de junio (Temp. Mn.
1,50 m = -2,5 C y Temp. Mn. 0,05 m = -6,7 C) y julio (Temp. Mn. 1,50 m = -0,4 C y
Temp. Mn. 0,05 m = -2,6 C).

Temperaturas
35
30
25
20
C
15
10
5
0
abr may jun jul ago sep oct nov dic ene feb mar
2013
Temp.Max.1,50m Temp.Mn.1,50m Temp.Mn. 0,05m
Figura 6: Promedios mensuales de temperaturas mximas y mnimas a dos niveles

del suelo, registradas en Colonia Bentez.
En la Tabla 5 se muestran los valores promedios por estacin de las

temperaturas, a distintas alturas del suelo.
Tabla 5: Promedios por estacin de temperaturas mximas y mnimas

a dos niveles del suelo.
Elemento Invierno Verano
Temp.Max.1,50m (C) 24,5 30,9
Temp.Mn.1,50m (C) 12,4 19,3
Temp.Mn.0,05m (C) 9,7 14,8
En la Figura 7 de promedio mensual de heliofana efectiva se aprecia que la

radiacin solar durante los meses de invierno promedi las 6,1 horas y en el mes de
junio se registr la mnima de 4,6 horas. Mientras que en los meses de verano este
parmetro promedi 8,5 horas y el mes de enero present el valor mximo de 10, 1
horas.
34
RESULTADOS Y DISCUSION
Heliofana efectiva
12
10
horas 8
0
2013
Figura 7: Promedio mensual de heliofana efectiva, registrada en Colonia Bentez.
Observando la Figura 8 de total de precipitaciones mensuales, es evidente que

en el perodo invernal las mismas fueron menores promediando un total de 58 mm
y registrando un mnimo de 9,8 mm en el mes de julio. En la temporada de verano
las lluvias promediaron en 165 mm y las mximas se registraron en octubre y
marzo con 265,7 y 270,2 mm respectivamente.
Precipitaciones
300
250
200
mm
150
100
50
0
2013
Figura 8: Total mensual de precipitaciones, registradas en Colonia Bentez.

4.3. Diseo de experimentos factorial 23
En la Tabla 6 se observa la matriz del plan de experimentos para el diseo
factorial aplicado, los factores, sus respectivos niveles y las respuestas obtenidas.
Tabla 6: Matriz del plan de experimentos y respuestas obtenidas.

Materia Prima Tiempo Rto
Ensayo Estacin %CAL
(Kg) (min) (%)
1 2 45 invierno 47,6 0,54
2 2 45 verano 43,8 0,81
3 2 90 invierno 47,5 0,63
4 1 90 invierno 41,4 0,76
5 1 45 invierno 45,7 0,67
6 2 90 verano 40,7 0,90
7 1 90 invierno 36,2 0,73
8 1 90 verano 49,5 1,05
9 2 45 verano 46,1 0,85
10 2 90 verano 43,9 0,98
11 1 45 verano 43,0 0,94
12 1 45 invierno 47,9 0,67
13 2 90 invierno 39,8 0,59
14 2 45 invierno 45,6 0,52
15 1 90 verano 50,0 0,99
16 1 45 verano 45,1 1,06
Nota: Composicin relativa de citronelal (%CAL) y Rendimiento (Rto).
Analizando las grficas de probabilidad normal de residuos para las respuestas

%CAL y Rto de las Figuras 9 y 10 respectivamente, se verifica que el modelo se
ajust a los requisitos de implementacin de ANOVA, ya que los residuos se
distribuyen aproximadamente sobre la lnea recta para ambas respuestas del diseo
de experimentos.
36
Grfica de probabilidad normal

(la respuesta es % CAL)
99
95
90
80
70
Porcentaje
60
50
40
30
20
10
1
-5,0 -2,5 0,0 2,5 5,0
Residuo
Figura 9: Grficas de probabilidad normal para respuesta %CAL.
Grfica de probabilidad normal

(la respuesta es Rto)
99
95
90
80
70
Porcentaje
60
50
40
30
20
10
1
-0,08 -0,06 -0,04 -0,02 0,00 0,02 0,04 0,06 0,08
Residuo
Figura 10: Grficas de probabilidad normal para respuesta Rto.
Los resultados del ajuste del modelo para la respuesta %CAL de la Tabla 7,
mostraron que los efectos de los factores principales y algunas interacciones no son

estadsticamente significativos, mientras que las interacciones de los factores
tiempo*Estacin y Materia Prima*tiempo*Estacin s lo son.
Tabla 7: Ajuste del modelo estadstico, valores p, respuesta %CAL.

Trmino Valor p
Materia Prima (MP) 0,733
Tiempo (t) 0,179
Estacin (E) 0,361
Materia Prima * tiempo 0,556
Materia Prima * Estacin 0,071
Tiempo * Estacin 0,031
Materia Prima * tiempo * Estacin 0,037
.
Para el caso de la respuesta Rto de la Tabla 8, los resultados del ajuste del
modelo indicaron que nicamente los efectos principales son estadsticamente
significativos. Siendo adems, la estacin y la materia prima, las ms influyentes ya
que la precisin del software arroj el valor p=0,000.
Tabla 8: Ajuste del modelo estadstico, valores p, respuesta Rto.

Trmino Valor p
Materia Prima (MP) 0,000
Tiempo (t) 0,010
Estacin (E) 0,000
Materia Prima * tiempo 0,296
Materia Prima * Estacin 0,776
Tiempo * Estacin 0,776
Materia Prima * tiempo * Estacin 0,347
Estudio de los efectos:

Analizando la grfica de efectos principales para la respuesta %CAL, Figura 11,
se puede afirmar que los ensayos realizados con 1 Kg de materia prima, 45 minutos
de proceso y en el verano produjeron mayor porcentaje de concentracin relativa
de citronelal en el aceite esencial de citronela.
38
Grfica de efectos principales para % CAL

Medias de datos
Materia Prima tiempo
45,5
45,0
44,5
44,0
43,5
Media
1 2 45 90
Estacin
45,5
45,0
44,5
44,0
43,5
invierno verano
Figura 11: Grfica de efectos principales, respuesta %CAL.
Debido a que en este experimento las interacciones fueron significativas para

la respuesta de %CAL, hay que examinar las mismas ya que afectan la interpretacin
de los efectos principales.
En las grficas de la Figura 12 se observ que los efectos ms significativos se
encontraron en las interacciones de materia prima*estacin y tiempo*estacin ya
que las lneas de las grficas son ms perpendiculares.
Para la interaccin Materia Prima*tiempo es evidente que con 45 minutos de
ensayo la composicin de citronelal en el aceite fue similar para 1 o 2 Kg de materia
prima utilizada. Mientras que con 90 minutos de ensayo la composicin de
citronelal fue mayor para ensayos con 1 Kg.
En la interaccin Materia Prima*Estacin se observa que en invierno se
obtuvo ms citronelal trabajando con 2 Kg de materia prima, siendo que verano la
cantidad de citronelal se benefici en la extraccin con 1 Kg de materia prima.
La interaccin tiempo*Estacin muestra que en invierno se obtuvo mayor
cantidad de citronelal con tratamientos de 45 minutos en vez de 90 minutos y en
verano la composicin de citronelal se vio favorecida a mayores tiempos de
proceso.

Grfica de interaccin para % CAL
Medias de datos
45 90 inv ierno v erano
Materia
46
Prima
1
44 2
M ater ia P r ima
42
tiempo
46
45
90
tiempo 44
42
Estacin
Figura 12: Grfica de interaccin, respuesta %CAL.
Estudios similares se realizaron en plantas de C. winterianus en la India, para

evaluar el contenido y la composicin del aceite esencial en relacin con el perodo
de cosecha y las condiciones del tiempo, los resultados determinaron que se
obtiene un contenido de citronelal mayor en verano (Sastry Kakaraparthi, y otros,
2014).
Tambin, investigaciones realizadas con geranio rosa perfumado
(Pelargonium spp.), con el objeto de evaluar la composicin de terpenoides bajo
variaciones climticas, mostraron que las condiciones del tiempo influyen en la
composicin del aceite esencial de estas plantas, obtenindose mnimas
concentraciones de linalol, geraniol y sus steres y mximas concentraciones de
citronelol y sus steres durante los meses de verano (Rao, Kaul, Mallavarapu, &
Ramesh, 1996).
En la grfica de contorno para la respuesta %CAL de invierno, Figura 13, se
observ que las condiciones de proceso que favorecen la obtencin de un
porcentaje relativo de citronelal > 46 % son: cantidad de materia prima entre 1 y 2
Kg y tiempo de proceso hasta 50 minutos. Para el verano, Figura 14, la de grfica de
contorno indic que se obtiene un porcentaje relativo de citronelal > 47 % cuando
40
la cantidad de materia prima se encuentra entre 1 y 1,3 Kg y el tiempo de proceso

entre 70 y 90 minutos. Pudindose superar el 49 % en la zona de trabajo con 1 kilo
de materia vegetal y 85 a 90 minutos.
Grfica de contorno de % CAL vs. tiempo. Materia Prima. Invierno

90
% CA L
< 40
40 42
42 44
80 44 46
> 46
Valores de retencin
Estacin inv ierno
70
tiempo
60
50
1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0

Materia Prima
Figura 13: Grfica de contorno Invierno, respuesta %CAL.
Grfica de contorno de % CAL vs. tiempo. Materia Prima. Verano

90
% CA L
< 43
43 45
45 47
80 47 49
> 49
Valores de retencin
Estacin v erano
70
tiempo
60
50
1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0

Materia Prima
Figura 14: Grfica de contorno Verano, respuesta %CAL.

Estudiando la Figura 15 de efectos principales para la respuesta Rto, se puede
afirmar que los ensayos realizados con 1 Kg de materia prima, 90 minutos de
proceso y en el verano produjeron mayor rendimiento de aceite esencial de
citronela.
En ensayos similares realizados con Eucalyptus citriodora Hook del Norte de
India, se observa que el rendimiento de aceite vara de 1 a 2,1% a lo largo del ao.
El mismo es alto cuando la temperatura es alta (mnimas temperaturas de 18 a 27C
y mximas de 31 a 40C) y disminuye cuando la temperatura es relativamente baja
(mnimas de 7 a 16C y mximas de 23 a 30C). Adems, durante la temporada de
lluvias, cuando la temperatura y la humedad son elevadas, se observa un
rendimiento de aceite alto entre 1,8 y 2,1% (Manika, Mishra, Kumar, Chanotiya, &
Bagchi, 2012).
Grfica de efectos principales para Rto

Medias de datos
MP tiempo
0,9
0,8
0,7
0,6
Media
1 2 45 90
Estacin
0,9
0,8
0,7
0,6
invierno verano
Figura 15: Grfica de efectos principales, respuesta Rto.
Observando la grfica de contorno de la figura 16, para el Rto de invierno, se

determin que las condiciones de proceso que producen un rendimiento de aceite
esencial > 0,7 % son de 1 a 1,2 Kg de materia prima y tiempos de proceso entre 60 y
90 minutos. Mientras que la Figura 17, de la respuesta en verano, mostr que para
42
obtener rendimientos superiores a 0,95% hay que operar en la zona de materia

vegetal hasta 1,8 Kg y tiempo hasta 90 minutos.
Grfica de contorno de Rendimiento vs. tiempo. Materia Prima. Invierno

90
Rto
< 0,55
0,55 0,60
0,60 0,65
80 0,65 0,70
> 0,70
Valores de retencin
Estacin inv ierno
70
tiempo
60
50
1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0

MP
Figura 16: Grfica de contorno Invierno, respuesta Rto.
Grfica de contorno de Rendimiento vs. tiempo. Materia Prima. Verano

90
Rto
< 0,85
0,85 0,90
0,90 0,95
80 0,95 1,00
> 1,00
Valores de retencin
Estacin v erano
70
tiempo
60
50
1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0

MP
Figura 17: Grfica de contorno Verano, respuesta Rto.

4.4. Caracterizacin fsico-qumica del aceite de citronela
El anlisis por CG del aceite de citronela, Figura 18, revel la presencia de
componentes principales: limoneno, citronelal, citronelol y geraniol. Siendo el
citronelal el de mayor contribucin relativa porcentual. En la Tabla 9 se presentan
los tiempos de retencin en minutos, los porcentajes relativos y la identificacin de
los componentes principales del aceite esencial de citronela. De forma similar se
procedi con todas las muestras (n= 16).
Tabla 9: Referencias del cromatograma de la Figura 18.

Tiempo Cantidad relativa
Identificacin
(min) (%)
1,992 6,76 limoneno
8,055 43,84 citronelal
12,047 8,61 citronelol
12,96 11,41 geraniol
Los resultados de la caracterizacin fisicoqumica del aceite obtenido en cada

ensayo del diseo de experimentos y los rendimientos se presentan en la Tabla 10.
Se observa que los valores de densidad relativa, rotacin ptica e ndice de
refraccin son comparables con los valores de referencia de la Norma IRAM-SAIPA
18520: 2006 Aceite de citronela de Argentina tipo Java (Cymbopogon winterianus
Jowitt).
44
Figura 18: Cromatografa de gases del aceite esencial de citronela.

Nota: los tiempos de retencin 0,393 y 0,648 minutos corresponden a los solventes.

Tabla 10: Resultados de caracterizacin fisicoqumica y rendimientos con valores de referencia
segn IRAM-SAIPA 18520: 2006.
Densidad R. ptica I. Refraccin
Vol.
Ensayo % CAL d 20C4C []tD nD
(ml)
0,881 a 0,900 -0,5 a -6,0 1,4630 a 1,4750
1 47,6 12,1 0,890 -1,73 1,4750
2 43,8 18,1 0,892 -2,75 1,4650
3 47,5 14,0 0,893 -1,25 1,4750
4 41,4 8,5 - - 1,4655
5 45,7 7,5 - - 1,4750
6 40,7 20,2 0,900 -2,08 1,4750
7 36,2 8,2 - - 1,4700
8 49,5 11,7 0,897 -2,58 1,4700
9 46,1 18,9 0,900 -1,02 1,4655
10 43,9 22,0 0,892 -1,33 1,4750
11 43,0 10,5 0,894 -1,23 1,4750
12 47,9 7,5 - - 1,4700
13 39,8 13,1 0,892 -1,63 1,4750
14 45,6 11,6 0,896 -1,55 1,4750
15 50,0 11,1 0,899 -1,47 1,4655
16 45,1 11,8 0,895 -1,60 1,4700
46
CONCLUSIONES
5. CONCLUSIONES
La metodologa del diseo de experimentos seguida de un anlisis ANOVA es

una potente herramienta para generar conocimiento acerca de un sistema o
proceso, tanto en la industria como en el laboratorio de anlisis, ya que la aplicacin
del mtodo cientfico permite obtener conclusiones vlidas y objetivas.
El diseo factorial aplicado en esta tesis permiti identificar los efectos que
tienen las variables (cantidad de materia prima, tiempo de proceso y estacin del
ao) y sus interacciones en la calidad y rendimiento del aceite de citronela, extrado
por arrastre con vapor de agua a escala piloto.
En cuanto a la calidad del aceite esencial, se pudo comprobar que debido a las
interacciones entre las variables, para cada estacin quedan determinadas las
condiciones que favorecen la obtencin de mayor porcentaje relativo de citronelal.
En el invierno, el porcentaje relativo de citronelal supera el 46 % cuando la cantidad
de materia prima vara entre 1 y 2 Kg y el tiempo de proceso llega a 50 minutos;
mientras que en el verano, el porcentaje relativo de citronelal alcanza el 47 %
cuando la cantidad de materia prima se encuentra entre 1 y 1,3 Kg y el tiempo de
proceso entre 70 y 90 minutos. Adems, se puede superar el 49 % de concentracin
relativa de citronelal trabajando con 1 kilo de materia vegetal y 85 a 90 minutos.
Para el rendimiento, fue posible establecer el verano como la estacin que
beneficia el alto porcentaje de esencia obtenida, por sus caractersticas de altas
temperaturas, mayor radiacin solar debido a la longitud del da, abundantes
precipitaciones y material vegetal con hojas de mayor superficie y totalmente
verdes.

REFERENCIAS
BIBLIOGRAFICAS
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Akhila, A. (2010). Essential Oil-Bearing Grasses -The genus Cymbopogon. Florida:

Taylor & Francis Group.
Akhila, A., & Rani, M. (2002). Chemical constituents and essential oil biogenesis in
Vetiveria zizanioides. In M. Maffei, Vetiveria: The genus Vetiveria (pp. 73-
109). Nueva York: Taylor & Francis.
Bandoni, A. (2003). Las Plantas Aromticas. In A. Bandoni, Los Recursos Vegetales

Aromticos en Latinoamrica (p. 13). Buenos Aires: CYTED.
Bandoni, A., & Dellacasa, E. (2010). Importancia de las Plantas Aromticas en el

Contexto Internacional. In E. Dellacasa, Normalizacin de Productos
Naturales Obtenidos de Especies de la Flora Aromtica Latinoamericana (pp.
11-14). Puerto Alegre: EDIPUCRS.
Beneti, S., Rosset, E., Corazza, M., Frizzo, C., Di Luccio, M., & Oliveira, V. (2011).
Fractionation of citronella (C. winterianus) essential oil and concentrated
orange oil phase by batch vacuum distillation. Journal of Food Engineering,
(pp. 348-354).
Berti, G., Monti, M., & Salmaso, L. (2002). Introduzzione alla Metodologia DOE nella
Sperimentazione Meccanica. Italia: Cleup.
Box, G., & Hunter, J. (1989). Estadstica para Experimentadores. Barcelona: Revert
SA.
Carey, F. (2003). Organic Chemistry. EUA: Mc Graw Hill.
Carlson, R. (1992). Desing and Optimization in Organic Synthesis. Paises Bajos:

Elsevier.
Cassel, E., & Vargas, R. (2006). Experiments and Modeling of the Cymbopogon
winterianus. Essential Oil Extraction by Steam Distillation. Sociedad Qumica
de Mxico, (pp. 126-129).
Chamorro, E., Ballerini, G., Sequeira, A., Velasco, G., & Zalazar, F. (2008). Chemical
Composition of Essential Oils from Tagetes Minuta L. Leaves and Flowers.
Journal of the Argentine Chemical Society, (pp. 80-86).
Chamorro, E., Zambn, S., Morales, W., Sequeira, A., & Velasco, G. (2012). Study of
the Chemical Composition of Essential Oils by Gas Chromatography. In B. S.
elikbak, Gas Chromatography in Plant Science, wine Technology,
Toxicology and Some Specific Applications (pp. 15/1-19). InTech.

Code of Federal Regulation. (2014). Food and Drug Administration. EUA:
Government Printing Office.
Devore, J. (2009). Probabilidad y Estadstica para Ingeniera y Ciencias. Mxico:

Cengage Learning.
Elder, H. (2010). Optimizacin de los Procesos Extractivos Aplicados a Especies

Aromticas y Medicinales. In E. Dellacasa, Normalizacin de productos
naturales obtenidos de especies de la Flora Aromtica Latinoamericana (pp.
37-62). Puerto Alegre: EDIPUCRS.
Eriksson, L., Johansson, E., Kettaneh-Wold, N., Wilstrm, C., & Wold, S. (2008).
Desing of Experiments: Principles and Applications. Suecia: Umetrics AB.
Figueiredo, A., Barroso, J., Pedro, L., & Scheffer, J. (1997). Physiological Aspects of
Essential Oil. In C. Franz, A. Mth, & G. Buchbauer, Essential Oils: Basic and
Applied Research (pp. 95-107). Viena: Allured Publishing.
Franz, C., & Novak, J. (2010). Sources of Essential Oils. In K. Hsn Can Baser, & G.
Buchbauer, Handbook of Essential Oils - Science Technology and Applications
(pp. 39-81). Florida: Taylor & Francis Group.
Guenther, E. (1960). The Essential Oils. Toronto: Van Nostrand Company.
Harrewijn, P., Van Oosten, A., & Piron, P. (2001). Natural Terpenoids as Messengers.
EUA: Kluwer Academic Publishers.
Hsn, K., & Buchbauer, G. (2010). Handbook of Essential Oils: Science, Technology
and Applications. EUA: Taylor & Francis Group.
IRAM-SAIPA. (2002). Norma 18504. Productos Aromatizantes. Determinacin de la

Densidad Relativa a 20C. Mtodo de Referencia. Argentina: IRAM.
IRAM-SAIPA. (2002). Norma 18505. Productos Aromatizantes. Determinacin del

ndice de Refraccin. . Argentina: IRAM.
IRAM-SAIPA. (2002). Norma 18507. Productos Aromatizantes. Determinacin de la

Rotacin ptica. . Argentina: IRAM.
IRAM-SAIPA. (2006). Norma 18520. Productos Aromatizantes. Aceites Esenciales.

Aceite de Citronela de Argentina, tipo Java (Cymbopogon winterianus
Jowitt). Argentina: IRAM.
Kuehl, R. (2000). Diseo de Experimentos. Mxico: Thompson Learning.
Lenardao, E., Botteselle, G., Azambja, G., & Jacob, R. (2007). Citronelal as Key
Compound in Organic Synthesis. Tetrahedron,(pp. 6671-6712).
50
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Len, J. (2000). Botnica de Cultivos Tropicales. San Jos: Agroamrica del HCA.
Manika, N., Mishra, P., Kumar, N., Chanotiya, C., & Bagchi, G. (2012). Effect of
season on yield and composition of the essential oil of Eucalyptus citriodora
Hook leaf grown in sub tropical conditions of North India. Medicinal Plants
Research, (pp.2875-2879).
Marco, C., Innecco, R., Mattos, S., Borges, N., & Nagao, E. (2007). Caracteristicas do
oleo essential de capim-citronela em funcao de espacamento, altura e poca
de corte. Revista de Horticultura Brasileira, (pp. 429-432).
Massart, L., Vandeginste, B., Buydens, L., De Jong, S., & Lewi, P. (1997). Handbook of
Chemometrics and Qualimetrics. Amsterdam: Elsevier.
Montgomery, D. (2004). Diseo y Anlisis de Experimentos. EUA: Limusa Wiley.
Montgomery, D., & Runger, G. (2002). Probabilidad y Estadstica Aplicada a la

Ingeniera. Mxico: Mc Graw Hill.
Morrison, R., & Boyd, R. (1990). Qumica Orgnica. Mxico: Fondo Educativo
Interamericano S.A.
Nunes, D., Moura Linck, V., Loureno da Silva, A., Figueir, M., & Elisabetsky, E.
(2010). Psychopharmacology of Essential Oils. In K. Hsn Can Baser, & G.
Buchbauer, Handbook of essential oils : science, technology, and applications
(pp. 297-306). Florida: Taylor & Francis.
Panda, H. (2005). Cultivation and Utilization of Aromatics Plants. New Delhi: Asia
Pacific Business Press Inc.
Pank, F. (2007). Use of breeding to customise characteristics of medicinal and

aromatic plants to postharvest. Stewart Postharvest Review, (pp. 1-4).
Rao, B., Kaul, P., Mallavarapu, G., & Ramesh, S. (1996). Effect of seasonal climatic
changes on biomass yield and terpenoid composition of rose-scented
geranium (Pelargonium species). Biochemical Systematics and Ecology, (pp.
627-635).
Ringuelet, J., & Cerimele, E. (2010). Buenas Prcticas Agrcolas para Cultivos
Aromticos. Su incidencia en la Calidad. In E. Dellacasa, Normalizacin de
Productos Naturales Obtenidos de Especies de la Flora Aromtica
Latinoamericana (pp. 15-36). Puerto Alegre: EDIPUCRS.
Rocha, S., Ming, L., & Marques, M. (2000). Influencia de Cinco Temperaturas de
Secagem no Rendimento eCcomposicao do Oleo Essential de Citronela

Cymbopogon winterianus Jowitt. Revista Brasileira de Plantas Medicinais,
(pp. 73-78).
Rodrguez lvarez, M., Alcaraz Melndez, L., Real, C., & Sergio, M. (2012).
Procedimientos para la Extraccin de Aceites Esenciales en Plantas
Aromticas. Mxico: Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste.
Rowe, D. (2005). Chemistry and Technology of Flavors and Fragances. Oxford:

Blackwell Publishing Ltd.
SAGPYA. (2001). Resolucin 530. Normas de Buenas Prcticas de Higiene y Agrcolas

para la Produccin Primaria (cultivo-cosecha), Acondicionamiento,
Almacenamiento y Transporte de Productos Aromticos. Buenos Aires.
Salamon, I. (2007). Effect of the internal and external factors on yield and
qualitativequantitative characteristics. Acta Horticulturae 749, (pp. 45-64).
Sastry Kakaraparthi, P., Srinivas, K., Kotesh Kumar, J., Niranjana Kumar, A., Rajput,
K., & Maheswara Sarma, U. (2014). Varation in the essential oil content and
composition of citronella (Cymbopogon winterianus Jowit) in relation to time
of harvest and weather conditions. Industrial Crops and Products, (pp. 240-
248).
Schmidt, E. (2010). Production of Essential Oils. In K. Hsn Can Baser, & G.

Buchbauer, Handbook of essential oils : science, technology, and applications
(pp. 83-120). Florida: Taylor & Francis Group.
Tejero Garca, I. (2009). Estadstica Prctica Aplicada a la Calidad: Anlisis de

Varianza y Diseo de Experimentos. Madrid: Cyan.
Walter, E., & Pronzato, L. (1990). Qualitative and Quantitative Experiment Desing
for Phenomenological Models. Francia: Automatica.
Zygadlo, J., & Juliani, H. (2000). Bioactivity of Essential Oils Components. Curr Top
Phytochem, 203-214.
52

Tesis Final Obtencion de Aceite de Citronela

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DIRECCIN DE POSGRADO

Maestra en Ingeniera en Calidad

Obtencin de aceite esencial de citronela (Cymbopogon

Centro de Investigacin en Qumica Orgnica Biolgica

Resistencia, Marzo de 2014

Gracias a Dios sobre todas las cosas.

Parmetros fisicoqumicos del aceite esencial de citronela segn

Figura 1 Molcula del isopreno... 4

%CAL Porcentaje Relativo de Citronelal

1.1. Aspectos generales

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 1

1.2. Aceites Esenciales

1.2.4. Composicin qumica

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 3

Figura 1: Molcula de isopreno.

La divisibilidad de las cadenas carbonadas de los terpenos en unidades

1.2.5. Especies aromticas: la citronela

Rosceas, Rutceas, Umbelferas, Gramneas, Geraniceas, Burserceas, etc. Se los

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 5

1.2.6. Produccin y calidad de las esencias

Puesto que el material vegetal es el producto de un proceso

1.2.6.1. Variacin gentica y mejora vegetal

1.2.6.2. Variacin morfo y ontogentica

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 7

1.2.6.3. Influencias ambientales

1.3. Mtodos de extraccin

1.3.1. Destilacin por arrastre con vapor de agua

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 9

1.3.3. Extraccin con solventes

La extraccin por solventes lquidos orgnicos se utiliza a escala de

1.4. Destilacin por arrastre con vapor

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 11

1.4.1. Escala laboratorio

Figura 3: Equipo de destilacin por arrastre con vapor de agua

1.4.2. Escala piloto

1.4.3. Escala industrial

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 13

1.6. Diseo de experimentos

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 15

encontrar lejos del ptimo real. Aunque se puede reiniciar la experimentacin

1.6.1. Diseo factorial completo 2k

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 17

1.6.1.1. Planteo del problema

1.6.1.2. Identificacin de los factores y dominio experimental

decisin requiere un conocimiento previo del sistema, obtenido de referencias

1.6.1.3. Diseo de la matriz de experimentos

1.6.1.4. Plan de experimentacin y realizacin de los experimentos

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 19

1.6.2. Anlisis de varianza

2.1. Objetivo principal

2.2. Objetivos secundarios

2.3. Tipo de investigacin a realizar

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 21

3.1. Identificacin botnica y condiciones meteorolgicas

3.2.1. Corte del material vegetal

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 23

sulfato hidratado, luego se almacen en frascos de vidrio color caramelo que se

3.3. Diseo de experimentos factorial 23

3.3.1. Planteo del problema

3.3.2. Factores y dominio experimental

Ing. Qca. Roco Teresita Garca 25

Los factores x1 (tiempo) y x2 (materia prima) son variables cuantitativas y sus

Figura 5: Dominio experimental para dos

3.3.3. Matriz de experimentos: diseo factorial completo 23