GUIA DE LABORATORIO

PRACTICA 8
EXTRACCIN ADN
PROGRAMA DE ENFERMERIA
CURSO INTEGRADO DE PROCESOS BIOLOGICOS

Leidy Diana Ardila Leal

Docente.

INTRODUCCIN

En esta prctica se va a realizar la extraccin de cido desoxirribonucleico (ADN)

La extraccin y purificacin de cidos nucleicos constituye la primera etapa de la
mayora de los estudios de biologa molecular y de todas las tcnicas de
recombinacin de ADN. En este caso vamos a realizar la extraccin de ADN. Los
mtodos de extraccin permiten obtener cidos nucleicos purificados a partir de
diversas fuentes para despus realizar anlisis especficos. La calidad y la pureza
de los cidos nucleicos son dos de los elementos ms importantes. Si se desea
obtener cidos nucleicos muy purificados, que no contengan contaminantes
inhibidores, es preciso aplicar mtodos de extraccin adecuados. Con objeto de
evitar los falsos negativos

OBJETIVO

Extraer el material gentico (ADN) de diferentes tipos de tejidos.

MARCO TEORICO

El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN es un tipo de

cido nucleico, una macromolcula que forma parte de todas las clulas. Contiene
la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los
organismos vivos conocidos y de algunos virus, siendo el responsable de su
transmisin hereditaria.

Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir,

un polinucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades
simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En
el ADN, cada vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado
por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser (A)
adenina, (T) timina, (C) citosina y (G) guanina) y un grupo fosfato que acta como
enganche de cada vagn con el siguiente. Lo que distingue a un vagn
(nucletido) de otro es, entonces, la base nitrogenada, y por ello la secuencia del
ADN se especifica nombrando slo la secuencia de sus bases.

Los cidos nucledos presentan propiedades fsico-qumica importante en relacin

con sus funciones de almacenamiento, transmisin (replicacin) y expresin
(transcripcin y traduccin) de la informacin gentica.

Propiedades en disolucin
Reactividad
Hidrlisis qumica de cidos nucleicos
Hidrlisis acida
Hidrlisis alcalina
Absorcin en el ultravioleta

En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de

nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones
denominadas puentes de hidrgeno.

Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y funcional

de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se
transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cundo y dnde deben
expresarse. La informacin contenida en los genes (gentica) se emplea para
generar ARN y protenas, que son los componentes bsicos de las clulas, los
"ladrillos" que se utilizan para la construccin de los orgnulos celulares, entre
otras funciones.
Dentro de las clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas
cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula se
divida. Los organismos eucariotas (por ejemplo, animales, plantas, y hongos)
almacenan la inmensa mayora de su ADN dentro del ncleo celular y una mnima
parte en los elementos celulares llamados mitocondrias, y en los plastos, en caso
de tenerlos; los organismos procariotas (bacterias y arqueas) lo almacenan en el
citoplasma de la clula, y, por ltimo, los virus ADN lo hacen en el interior de la
cpside de naturaleza proteica. Existen multitud de protenas, como por ejemplo
las histonas y los factores de transcripcin, que se unen al ADN dotndolo de una
estructura tridimensional determinada y regulando su expresin. Los factores de
transcripcin reconocen secuencias reguladoras del ADN y especifican la pauta de
transcripcin de los genes. El material gentico completo de una dotacin
cromosmica se denomina genoma y, con pequeas variaciones, es caracterstico
de cada especie.
MATERIALES

Materiales entregados en la practica Materiales traidos por el estudiante

2 tubos de ensayo Detergente liquido o shampoo
2 vasos de precipitado Coladera o gasa
1 varilla de vidrio Licuadora
1 pipeta Hisopos de madera
Alcohol isopropilico Grupo 1 (Lenteja)
Pipeteador Grupo 2 (Cebolla)
Grupo 3 (3 Higados de pollo)
Grupo 4 (Frijol fresco)
Grupo 5 (Tomate)
Grupo 6 (Fresas)

METODOLOGA

Preparacin del Tampn Salino

Se toma un vaso precipitado de 250 ml, se hace una mezcla y se mantiene en la nevera:

200ml de agua destilada.

2 gramos sal de mesa
5 gramos de bicarbonato sdico

Preparacin de la Muestra

En el vaso de la licuadora, triturar los trozos del tejido vegetal con un poco
de agua; accionar 4 veces las cuchillas a impulsos de 15 segundos. As se
rompern muchas clulas y quedaran expuestas a la accin del detergente.
Agregar a la mezcla obtenida, la preparacin del tampn frio y accionar
nuevamente la licuadora durante 1 minuto.
En un vaso precipitado de 250 ml, tomar la mezcla y filtrar utilizando la
coladera, para obtener el lquido sobrenadante
Al filtrado obtenido se le aade 30 ml de detergente lquido con la pipeta de
10 ml (3 veces) lo mezclamos con la varilla de vidrio evitando ocasionar
emulsin (espuma). Dejndolo reposar de 15 a 20 minutos

Obtencin del DNA alcohol isopropillco

En una gradilla se toman 4 tubos de ensayo aplicando en cada tubo 5mi de la muestra
elaborada.
Agregar 5 ml de alcohol isopropilico enfriado a OC. Se debe dejar escurrir lentamente el
alcohol por la cara interna del recipiente teniendo este inclinado. Dejar actuar el alcohol
isopropilico durante unos 20 minutos.

Durante este tiempo se forman 3 fases; la primera que es la parte inferior del tubo y
corresponde al caldo molecular, la segunda fase en la fase superior y corresponde al
alcohol isopropilico y en la tercera fase la unin del caldo molecular y el alcohol donde se
formara unas fibrillas de color blancuzco que son fibrillas de DNA

Se introduce la punta de una varilla hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y
el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando
los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando
la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de
un copo de algodn mojado.

Interrogante para resolver antes de la prctica

1 Cul es el propsito de la extraccin de ADN?

2. Cul es la importancia del ADN para la vida?
3. Existen cidos nucleicos sintticos? Y de ser as para que se usan

Interrogantes para resolver despus de elaborada la prctica.

1. Cul es propsito de utilizar tampn salino en el procedimiento?

2. Qu finalidad tiene el exponer las clulas a un detergente fuerte?
3. Qu accin tiene el alcohol isopropilico sobre la molcula de DNA?