Validation des mthodes danalyse quantitative par le profil dexactitude

Interprtation du profil dexactitude

Max Feinberg1

Rsum : partir des donnes collectes pour construire le profil dexactitude, il est possible de
calculer divers critres complmentaires souvent exiges pour les dossiers de validation, comme la
limite de quantification ou lincertitude. Sappuyant sur les concepts dcrits dans dautres articles
consacrs la validation des mthodes : principe et mise en uvre du profil dexactitude cet article
prsente diffrents complments et, en particulier, le mode de calcul de la rptabilit et de la fidlit.

Mots-cls : Validation, profil dexactitude, justesse, fidlit, incertitude, mthodes danalyse

quantitatives

Notations et symboles
Une srie de mesurages i, (i variant de 1 I) contient des niveaux de concentration k (k variant
de 1 K) pour lesquels des rptitions ont t faites j (j variant de 1 J) les indices seront
repris dans lordre i, j, k. Les variables alatoires sont notes en majuscules et les valeurs
quelles prennent en minuscules.

Symbole Description
xijk Valeur de rfrence assigne un talon pour la srie i (1 i I), la rptition j
(1 j J) et le niveau k (1 k K)
ou
Valeur de rfrence assigne un chantillon de validation pour la srie i, la
rptition j et le niveau k.
yijk Mesure de la rponse instrumentale ou exprimentale observe pour un talon ou
un tmoin de validation pour la srie i, la rptition j et le niveau k.
zijk Valeur retrouve dans lchantillon de validation de la srie i, pour la rptition j
et le niveau k, obtenue soit par prdiction inverse laide dun modle
dtalonnage, soit par une mesure directe.
bijk Biais exprimant lerreur de justesse pour un tmoin de validation entre sa valeur
retrouve et sa valeur de rfrence bijk = zijk xijk

1. Calcul des carts-types de rptabilit, fidlit intermdiaire et

reproductibilit
Les calculs sont conduits selon le principe dcrit dans la norme ISO 5725-2 ou de sa version
Afnor NF X 06-041. Ils doivent tre effectus indpendamment niveau par niveau k, sur les
concentrations retrouves par prdiction inverse dans le cas des mthodes indirectes ou sur les
concentrations retrouves dans le cas des mthodes directes. Dans les deux cas, les

1 UR1204 Met@risk - Mthodologie danalyse de risque alimentaire INRA F-75231 Paris cedex 05
01 44 08 16 52 max.feinberg@paris.inra.fr

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Validation des mthodes

concentrations retrouves sont notes zijk. Par convention, lindice i (1 i I) reprsente le

numro de la srie et j (1 j J) celui de la rptition dans la srie. Toutes les sries doivent
avoir le mme nombre de rptitions, cest--dire que J est le mme quelque soit i : on dit
alors que le plan dexprience est quilibr. Pour simplifier les notations, lindice k (1 k
K) du niveau est supprim dans les formules qui suivent.
Calculer pour chaque niveau k :
lcart-type de rptabilit, not sr ;
lcart-type inter-sries, not sB ;
lcart-type de fidlit intermdiaire sFI = sr2 + sB2 .

1.1 Cas dun plan quilibr

La norme ISO 5725 ne prend en compte que les plans dexprience o le nombre de
rptitions I par srie est le mme pour toutes les sries. Le nombre total de rptitions doit
tre gal IJ. Par contre, ce total peut tre diffrent pour chaque niveau.
Calculer la moyenne gnrale dun niveau :
I J

zi =1 j =1
ij

Z= Concentration moyenne du niveau (1)

IJ
Calculer les carts-types de rptabilit, inter-sries et de fidlit intermdiaire en effectuant
lanalyse de la variance (ANOVA) dun modle effet alatoire, selon les principes dcrits de
la norme ISO 5725, savoir une dcomposition de la somme des carrs des carts totale en
deux sommes des carrs dcarts :
I J I J I

( z
i =1 j =1
Z )2 = ( zij Zi )2 + J ( Zi Z )2
ij
i =1 j =1 i =1
(2)

SCEt SCEr SCEB

Cette quation est traditionnellement crite sous une forme abrge, faisant appel trois
sommes de carrs dcarts (SCE).
SCEt = SCEB + SCEr quation gnrale de lanalyse de variance
O chacune des sommes est dfinie comme suit pour faciliter linterprtation :
SCEt Somme totale des carts la moyenne gnrale du niveau
SCEB Somme des carts inter-sries
SCEr Somme des carts intra-srie
Comme le propose la norme ISO 5725, il nest pas ncessaire de dvelopper les trois sommes
de carrs pour effectuer les calculs ; le calcul de SCEB se fait par diffrence. Cette mthode
peut poser des problmes si le rsultat est ngatif : forcer alors la valeur de SCEB 0.
SCEB = SCEt SCEr si SCEB > 0
SCEB = 0 si SCEB 0

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Calculer la variance de rptabilit du niveau, partir des rptitions zij :

SCEr
sr2 = Variance intra-srie (3)
I ( J 1)
Calculer la variance inter-sries note sB, comme suit :
SCEB 2
sr
2
sB = I 1 Variance inter-sries (4)
J
Finalement, calculer lcart-type de fidlit intermdiaire du niveau :

sFI = sB2 + sr2 cart-type de fidlit intermdiaire (5)

Voir le 2.2 Utilisation dun logiciel pour un exemple de calcul sous Excel.

1.2 Cas dun plan dsquilibr

Dans la mesure o on ne prvoit pas de tests de rejet des valeurs atypiques mais quon laisse
lutilisateur la libert de supprimer des valeurs juges atypiques, il est possible de dboucher
sur un plan dexprience dsquilibr. Cette situation ne correspond plus aux
recommandations de la norme ISO 5725. Cependant, un algorithme alternatif est prsent
pour viter des pertes de donnes.
Si le nombre ni de rptitions nest pas le mme pour toutes les sries dun mme niveau,
utiliser la formule (6) au lieu de la (4) pour le calcul la variance inter-sries :
SCEB
( I 1) sr2
sB2 = I 1 (6)
N*
I

n 2
i
N* = N i =1
I
Avec N et N = ni
i =1

Utiliser les formules classiques pour les autres critres de fidlit.

Une autre alternative cette mthode de calcul consiste utiliser un algorithme destimation
des variances utilisant la mthode du maximum de vraisemblance restreint (REML) ; elle
disponible dans la plupart des logiciels statistiques spcialiss, comme R.

2. Conduite des calculs

2.1 Exemple de construction dun profil dexactitude

Diffrents exemples de calcul sont disponibles dans la littrature (Feinberg M., 2009 -
Commission SFSTP 2003, 2006). Lexemple prsent porte sur une mthode de dosage du
nicotinamide (vitamine B3) dans le lait par HPLC avec une dtection fluorimtrique. Cest
une mthode indirecte qui ncessite un talonnage pour raliser la quantification. Les 10
tapes de la procdure se droulent ainsi.

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Validation des mthodes

1. Choix du domaine et des limites dacceptabilit. Le domaine de validation va

de 0,4 4 mg/l. Les limites dacceptabilit sont fixes 10 % autour de la valeur cible et
choisies aprs discussion avec lutilisateur. La proportion est gale 80 % et choisie de
la mme faon.
2. Matriau de validation et fixation des valeurs cible. Le matriau de validation choisi est un
lait UHT qui ne contient pas la vitamine recherche afin de pouvoir fixer les valeurs cible
par dopage avec des ajouts doss.
3. Plan de validation (tableau 1). Le plan de validation est form de I = 3 sries (jours) avec
K = 3 niveaux de concentration et J = 3 rptitions par jour et par niveau, ce qui fait un
total de 3 3 3 = 27 essais. Les concentrations des valeurs de rfrence sont exprimes
en mg/L et les rponses en surfaces de pic. Les niveaux varient de 1 K et sont cods A, B
et C et les sries de 1 I et sont codes, Jour1, Jour 2 et Jour 3.

Tableau 1 : plan de validation (mesures exprimes en units de surface de pic)

Niveau Valeur de Srie Rptition Rptition Rptition
rfrence 1 2 3
Jour 1 22.6 22.1 22.4
A 0.40 Jour 2 23.3 24.1 23.9
Jour 3 23.8 23.6 23.5
Jour 1 135.0 135.1 129.9
B 2.0 Jour 2 137.6 135.2 138.8
Jour 3 136.3 135.1 134.4
Jour 1 275.2 276.9 261.3
C 4.0 Jour 2 268.1 269.7 276.9
Jour 3 271.6 273.3 275.0

4. Plan dtalonnage (tableau 2). Le plan dtalonnage comporte I = 3 sries (jours) pour K
= 2 niveaux de concentration et J = 2 rptitions par jour et par niveau, soit un total de 12
essais. Les deux niveaux sont cods Bas et Haut.

Tableau 2 : plan dtalonnage (mesures exprimes en units de surface de pic)

Niveau Srie Concentration Rptition 1 Rptition 2
Bas Jour 1 0.4 22.7 23.1
Jour 2 0.4 22.9 23.2
Jour 3 0.4 21.9 22.1
Haut Jour 1 4.0 281.6 275.3
Jour 2 4.0 275.3 274.6
Jour 3 4.0 272.0 273.0
5. Estimation des coefficients des modles dtalonnage (tableau 3). Le modle choisi est une
droite du type Y = a0 + a1X + e, o a0est le blanc, a1 la sensibilit et e une erreur alatoire.
La mthode de calcul est la mthode de rgression aux moindres carrs. Un modle est
calcul pour chaque jour.

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Tableau 3 : estimations des paramtres des modles en fonction des sries

Srie Sensibilit a1 Blanc a0
Jour 1 70.986 -5.494
Jour 2 69.972 -4.939
Jour 3 69.583 -5.833

6. Calcul des concentrations prdites inverses et calcul de la justesse (tableau 4). partir des
coefficients du tableau 3 et des mesures des surfaces de pic des chantillons de validation
rassembles au tableau 1, calculer les concentrations prdites inverses de chaque rptition
en prenant soin dutiliser les modles obtenus pour chaque srie.

Tableau 4. Concentrations retrouves par prdiction inverse partir des donnes du plan de
validation (exprimes en mg/l)
Srie Niveau Concentration X Rponse Y Retrouve Z Biais absolu Biais relatif
Jour 1 A 0.40 22.6 0.40 -0.004 -1.06%
Jour 1 A 0.40 22.1 0.39 -0.011 -2.82%
Jour 1 A 0.40 22.4 0.39 -0.007 -1.76%
Jour 2 A 0.40 23.3 0.40 0.004 0.89%
Jour 2 A 0.40 24.1 0.42 0.015 3.75%
Jour 2 A 0.40 23.9 0.41 0.012 3.04%
Jour 3 A 0.40 23.8 0.43 0.026 6.47%
Jour 3 A 0.40 23.6 0.42 0.023 5.75%
Jour 3 A 0.40 23.5 0.42 0.022 5.39%
Jour 1 B 2.00 135.0 1.98 -0.021 -1.04%
Jour 1 B 2.00 135.1 1.98 -0.019 -0.97%
Jour 1 B 2.00 129.9 1.91 -0.093 -4.63%
Jour 2 B 2.00 137.6 2.04 0.037 1.85%
Jour 2 B 2.00 135.2 2.00 0.003 0.14%
Jour 2 B 2.00 138.8 2.05 0.054 2.71%
Jour 3 B 2.00 136.3 2.04 0.043 2.13%
Jour 3 B 2.00 135.1 2.03 0.025 1.27%
Jour 3 B 2.00 134.4 2.02 0.015 0.77%
Jour 1 C 4.00 275.2 3.95 -0.046 -1.14%
Jour 1 C 4.00 276.9 3.98 -0.022 -0.55%
Jour 1 C 4.00 261.3 3.76 -0.242 -6.04%
Jour 2 C 4.00 268.1 3.90 -0.098 -2.45%
Jour 2 C 4.00 269.7 3.92 -0.075 -1.88%
Jour 2 C 4.00 276.9 4.03 0.028 0.70%
Jour 3 C 4.00 271.6 3.99 -0.013 -0.32%
Jour 3 C 4.00 273.3 4.01 0.011 0.29%
Jour 3 C 4.00 275.0 4.04 0.036 0.90%

7. Calculer les biais individuels. On observe que les biais individuels varient entre -6.04% et
6.47% et permettent didentifier les mesures ventuellement atypiques. Aucune donne
atypique na t identifie.

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Validation des mthodes

8. Calcul des donnes de fidlit et des intervalles de tolrance. Calculer les critres de
fidlit, comme dcrit dans le 1et les limites des intervalles de tolrance selon la mthode
dcrite dans Feinberg M. (2010b). Rassembler les valeurs trouves dans un tableau
rcapitulatif organis comme le tableau 5.

Tableau 5 : tableau rcapitulatif des critres de validation et des lments du profil dexactitude
Probabilit tolrance () 80%
Limite d'acceptabilit () 10%
Niveaux Niveau A Niveau B Niveau C
Concentration moyenne thorique 0.4 2.0 4.0
Concentration moyenne retrouve 0.409 2.005 3.953
Fidlit
cart-type de rptabilit (sr) 0.004 0.030 0.081
cart-type inter-sries (sB) 0.015 0.039 0.033
cart-type de fidlit (sFI) 0.016 0.049 0.087
Coefficient de variation de fidlit 3.90% 2.45% 2.21%
Justesse
Biais (%) 2.18% 0.25% -1.17%
Intervalle de tolrance
Nombre de degrs libert 2.197 3.374 6.826
Facteur de couverture (kIT) 1.837 1.599 1.419
cart-type de tolrance (sIT) 0.018 0.055 0.093
Limite intervalle tolrance basse 0.375 1.917 3.821
Limite intervalle tolrance haute 0.442 2.093 4.086
Limite d'acceptabilit basse 0.3600 1.8000 3.6000
Limite d'acceptabilit haute 0.4400 2.2000 4.4000
Profil d'exactitude
Recouvrement % 102.2% 100.2% 98.8%
Limite intervalle tolrance basse en % 93.8% 95.9% 95.5%
Limite intervalle tolrance haute en % 110.6% 104.6% 102.2%
Limite d'acceptabilit basse en % 90.0% 90.0% 90.0%
Limite d'acceptabilit haute en % 110.0% 110.0% 110.0%

9. Construction du profil dexactitude. Construire le graphique correspondant au profil en

slectionnant les valeurs de la ligne Concentration moyenne thorique en abscisse et les
valeurs des 5 lignes sous le titre Profil d'exactitude en ordonnes. On obtient ainsi la
figure 1.
10. Interprtation. On observe que les limites de tolrance 80 % sont comprises entre les
limites dacceptabilit dans un domaine de validit stend de 0,5 mg/l environ 4,0 mg/,.
la mthode est valide dans ce domaine. La limite infrieure (limite de quantification) sera
calcule, si ncessaire, de faon plus exacte comme dcrit dans la section 3. Par ailleurs, on
constate que, dune part la fidlit varie en fonction de la concentration puisque son
coefficient de variation passe de 3,9 2,2 %, dautre part, la justesse varie aussi puisque le
biais de justesse varie de + 2,2 1,2 %. Cette remarque souligne lintrt de procder aux
calculs niveau par niveau. Cependant, ce biais na pas dinfluence importante sur la
validit de la mthode.

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 Validation des mthodes danalyse quantitative par le profil dexactitude

115% Recouvrement % Limite intervalle tolrance basse en %

Limite intervalle tolrance haute en % Limite d'acceptabilit basse en %
Limite d'acceptabilit haute en %

110%

105%
Recouvrement (%)

100%
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5

95%

90%

85% Concentration

Figure 1 : profil dexactitude pour le dosage de la vitamine B3 dans le lait par HPLC

11. Conclusion. On peut donc conclure la capacit de la mthode quantifier exactement le

nicotinamide dans le lait sur le domaine de validit ainsi dfini.

2.2 Utilisation dun logiciel

Les calculs peuvent tre raliss en utilisant diffrents logiciels, comme Excel, OpenOffice ou
R. Excel est une marque commerciale de Microsoft. OpenOffice.org est un projet Open
Source qui dveloppe une suite bureautique libre de droits, compatible avec les autres
standards du march et qui est tlchargeable partir de http://www.openoffice.org/. R est un
environnement de calcul statistique disponible sous la forme dun logiciel libre tlchargeable
partir de http://cran.cict.fr/index.html.
La feuille de calcul suivante permet de calculer les critres de fidlit, de justesse et les
limites de tolrance pour un niveau dans un tableur. Elle est extraite dun fichier modle qui
peut tre tlcharg partir :
http://www.paris.inra.fr/metarisk/downloads/software_programs/excel_templates.
Elle est utilisable sous Excel ou OpenOffice. Les donnes utilises sont celles du niveau A de
lexemple.

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Validation des mthodes

A B C D E F G
1 Niveau A
2 Concentration moyenne thorique 0.4000
3 Sries Rptition 1 Rptition 2 Rptition 3 ni SCEi
4 Jour (Srie) 1 0.396 0.389 0.393 3 0.00003
5 Jour (Srie) 2 0.404 0.415 0.412 3 0.00007
6 Jour (Srie) 3 0.426 0.423 0.422 3 0.00001
7
8 Nombre de sries (I) 3.0000 =NB(B4:B6)
9 Nombre de mesures (IJ) 9.0000 =NB(B4:D6)
10 Nombre de rptitions (J) 3.0000 =SI(F4*B8<>B9;"Calcul impossible";F4)
11 SCE rsiduelle 0.00011 =SOMME(G4:G8)
12 SCE totale 0.00156 =SOMME.CARRES.ECARTS(B4:D6)
13 SCE inter-sries 0.00145 =B12-B11
14 Calcul intermdiaire de sB 0.00024 =((B13/(B8-1))-B15)/B10
15 Variance de rptabilit (sr) 0.00002 =B11/(B9-B8)
16 Variance inter-sries (sB) 0.00024 =SI(B14<0;0;B14)
17 Variance de fidlit (sFI) 0.00025 =SOMME(B15:B16)
18 Fidlit
19 Concentration moyenne retrouve 0.40873 =MOYENNE(B4:D6)
20 Ecart-type de rptabilit (sr) 0.00419 =RACINE(B15)
21 Ecart-type inter-sries (sB) 0.01536 =RACINE(B16)
22 Ecart-type de fidlit (sFI) 0.01592 =RACINE(B17)
23 Justesse
24 Biais (%) 2.18% =B19/B2-1
25 Facteur de couverture de l'intervalle de tolrance
26 Rapport des variances (R) 13.40469 =B16/B15
27 Coefficient B 0.34951 =(B26+1)/(B10*B26+1)
28 Nombre de degrs libert 2.19709 =(B26+1)^2/((B26+1/B10)^2/(B8-1)+(1-1/B10)/B9)
29 Probabilit tolrance (bta) 80%
30 t Student bas 1.88562 =LOI.STUDENT.INVERSE(1-B29;ARRONDI.INF(B28;0))
31 t Student haut 1.63774 =LOI.STUDENT.INVERSE(1-B29;ARRONDI.SUP(B28;0))
32 Facteur de couverture (kIT) 1.83676 =B30-(B30-B31)*(B28-ARRONDI.INF(B28;0))
33 Ecart-type de tolrance (sIT) 0.01828 =B22*RACINE(1+1/(B9*B27))
34 Intervalle de tolrance
35 Limite intervalle tolrance basse 0.37516 =B19-B33*B32
36 Limite intervalle tolrance haute 0.44230 =B19+B33*B32

Afin de faciliter la mise en uvre, les principales formules, telles que saisies, sont indiques
dans la colonne C et se rfrent au contenu de la colonne B.
En ce qui concerne ltalonnage et le calcul des modles, il suffit dutiliser la fonction de
rgression DROITEREG pour trouver les paramtres. Lorganisation de la feuille doit tenir
compte du fait quon calcule un modle par srie.

3. Critres de validation complmentaires

3.1 Limite de quantification

Principe
Sur la figure 1 on note quil existe une concentration partir de laquelle au moins une des
bornes de lintervalle de tolrance coupe une des limites dacceptabilit. Au-dessus de ce
seuil, lanalyste peut garantir que la mthode produira une proportion de rsultats au moins
gale . Selon les rgles de dcision proposes, la mthode est donc valide puisquelle
permet de garantir les objectifs fixs. En revanche, en dessous de ce seuil, il nest plus

Le Cahier des Techniques de lInra

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 Validation des mthodes danalyse quantitative par le profil dexactitude

possible de conclure la validit. Tout naturellement, on peut proposer de dfinir ce seuil

comme la limite de quantification (LQ) de la mthode. Si on se rfre lexemple de la
figure 1, la LQ se situerait entre les niveaux A et B.
Lorsquil est ncessaire davoir une trs bonne estimation de la limite de quantification, il est
judicieux dutiliser un plan de validation avec au minimum K = 4 niveaux. Les deux niveaux
les plus bas (nots ici A et B) doivent alors tre choisis de faon encadrer au plus prs la LQ
suppose. Linterpolation sera alors dautant plus exacte que cet encadrement sera troit.
La LQ peut tre obtenue exactement en calculant labscisse du point dintersection. Mais les
calculs doivent tre raliss sur les valeurs absolues des limites dacceptabilit et de tolrance
car le fait de passer aux valeurs relatives, utilises en pratique pour la reprsentation
graphique du profil, introduit une interpolation hyperbolique. En effet, le calcul des
coordonnes du point dintersection de deux droites est un problme dalgbre bien connu.
Pour calculer la LQ entre deux niveaux nots A et B, les notations suivantes sont utilises :
Z les valeurs absolues lues sur laxe des ordonnes ;
X les valeurs de rfrence fournies par laxe des abscisses ;
xA et xB les abscisses des deux niveaux A et B ;
xAt et xBt les ordonnes sur la limite suprieure (ou infrieure) de lintervalle de tolrance
;
xAa et xBa les ordonnes sur la limite suprieure (ou infrieure) dacceptabilit ;
xLQ labscisse du point dintersection, avec LQ = xLQ.
Les deux droites peuvent tre reprsentes laide dun systme de deux quations, dont la
premire traduit la limite de lintervalle de tolrance (paramtres t0 lordonne lorigine et t1
la pente) et la seconde la limite dacceptabilit (paramtres a0 et a1) :
Z = t0 + t1 X
(7)
Z = a0 + a1 X
On peut noter que :
a0 doit tre gal 0 puisque la limite de lintervalle dacceptabilit passe toujours par le
zro.
Si on cherche lintersection avec la limite suprieure dacceptabilit z At = x A (1 + ) ; il
faudra prendre 1 si on recherche lintersection avec la limite infrieure.
Pour obtenir la pente t1, on utilise une rgle de trois :
z Bt z At
t1 = Pente (8)
xB x A
Pour lordonne lorigine t0, on lobtient partir de la premire quation du systme (7) :
t0 = z At x A t1 Origine (9)
De faon symtrique :
z Ba z Aa
a1 =
xB x A
a0 = z Aa xA a1

Numro spcial 2010

53
Validation des mthodes

Pour rsoudre ce systme dquations, poser :

t0 + t1 X = a0 + a1 X
X (t1 a1 ) = a0 t0
On obtenir ainsi la valeur de xLQ :
a0 t0
xLQ = (10)
t1 a1
Exemple de calcul avec un tableur
Pour illustrer la mthode, on va prendre en compte les rsultats de lexemple obtenus pour les
niveaux A (0,4 mg/l) et B (2,0 mg/l), puisque cest entre ces niveaux que la borne suprieure
de lIT coupe la limite suprieure dacceptabilit. Ce sont les valeurs absolues qui vont servir.
La figure 2 dcrit le mode de calcul sur les valeurs absolues et comment cette opration
correspond une interpolation hyperbolique sur les donnes relatives. Pour illustrer le calcul
dans un tableur, les lignes utiles ont t slectionnes dans le tableau 5.

Ligne Niveau A Niveau B

Concentration moyenne thorique 0,40 2,00
Limite intervalle tolrance haute 0,442 2,093
Limite d'acceptabilit haute 0,440 2,200

La feuille de calcul suivante donne les formules de calcul dans un tableur.

A B C D E
2 Niveau A Niveau B
3 Concentration moyenne thorique 0.40 2.00
4 Limite intervalle tolrance haute 0.442 2.093
5 Limite d'acceptabilit haute 0.440 2.200
6 Formules
7 Droite Pente Origine Pente Origine
8 Intervalle tolrance (U) 1.032 0.030 =(C4-B4)/(C3-B3) =B4-B8*B3
9 Limite d'acceptabilit haute 1.100 0.000 =(C5-B5)/(C3-B3) =B5-B9*B3
10
11 Limite de quantification 0.4337 =(C9-C8)/(B8-B9)

Les formules utilises sont indiques dans les colonnes D et E. Finalement, la LQ vaut 0,434 mg/l.
Bien sr, la limite de quantification dpend des valeurs choisies des limites dacceptabilit et
de la proportion . Si ces deux critres nont pas pu tre fixs lavance par manque de
consignes ou de rglementation, mais si une LQ limite est attendue, par exemple pour un
contrle rglementaire, il est possible de les calculer en retour en se fixant une LQ prtablie.
Ce mode de calcul inverse se dduit directement des formules fournies.

Le Cahier des Techniques de lInra

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 Validation des mthodes danalyse quantitative par le profil dexactitude

Niveau B Niveau A
Z% Niveau B
Z
Niveau A
2.0 110%

109%
1.5
108%
1.0
107%
0.5
106%
LQ X LQ X
0.0 105%
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5

chelle absolue chelle relative

Figure 2 : illustration du mode de calcul de la limite de quantification

3.2 Limite de dtection

La mthode du profil dexactitude ne propose pas dapproche spcifique pour le calcul de la
LD, par contre on peut sappuyer sur les donnes recueillies pour construire le profil
dexactitude en se rfrant diverses approches, dont la liste suivante nest pas exhaustive :
le guide EURACHEM (disponible sur le site www.lne.fr)
la srie des normes ISO 11843
les approches proposes dans lInternational conference on harmonisation (ICH),
savoir :
1 - examen visuel. Applicable aux mthodes non instrumentales ou instrumentales.
2 - rapport signal sur bruit. Cette approche nest possible que lorsquon peut
observer la ligne de base de la mthode. La dtermination du rapport signal sur
bruit est effectue en comparant les signaux obtenus sur des chantillons de faibles
concentrations avec ceux dchantillons blancs. On estime quun rapport entre 3/1
et 2/1 est gnralement satisfaisant pour estimer la limite de dtection.
3.3 Calcul dun facteur de correction
Le calcul dun facteur de correction nest possible que sous deux conditions :
il nexiste pas de contrainte rglementaire qui interdise de corriger les rsultats avant de
les renvoyer au demandeur danalyse. Le demandeur danalyse est alors inform du fait
que le rsultat final est corrig.
lanalyste procde un examen dtaill des mesures collectes lors de ltude de
validation afin de dterminer la nature du biais systmatique afin de choisir un facteur
de correction appropri.
Si on observe un biais systmatique important d un taux de recouvrement moyen infrieur
ou suprieur 100 %, on peut alors proposer dappliquer un facteur de correction sur les
rponses instrumentales, pour corriger ce biais systmatique. Par exemple, si on considre que
le taux de recouvrement moyen dans tout le domaine est 70 %, on peut prendre un facteur
1/0,7 1,4 et lappliquer tous les rsultats.

Numro spcial 2010

55
Validation des mthodes

4.5

4.0
Concentration retrouve Z (mg/L)

3.5

3.0

2.5
Z = 0.52X + 0.02
2.0

1.5

1.0

0.5

0.0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
Valeur de rfrence X (mg/L)

Figure 3 : reprsentation des concentrations retrouves en fonction des valeurs de rfrence permettant
de mettre en vidence un effet de matrice et de calculer une droite moyenne de recouvrement

Une mthode plus exacte consiste reporter sur un graphique les concentrations retrouves en
fonction des valeurs de rfrence. La figure 3 montre comment mettre en vidence un effet de
matrice. On peut alors calculer, sous la forme dune droite de rgression au moindres carrs,
lquation dune droite dont la pente reprsente un taux moyen de recouvrement et lordonne
lorigine un biais systmatique. Elle permet ainsi de dfinir deux facteurs de correction
possibles :
linverse de la pente permet de corriger un taux de recouvrement non satisfaisant. Dans
lexemple on prendra 1/0,52 2.0 ;
lordonne lorigine permet de corriger un biais systmatique, par exemple gnr par
lintgration dun pic mal rsolu en chromatographie. Dans lexemple ce type de biais
nest pas important et ne sera pas pris en compte.
Le facteur de correction choisi sera alors inclus dans le mode opratoire de la mthode, par
exemple, dans la partie relative lexpression du rsultat. Afin de vrifier la pertinence du
facteur de correction choisi, il suffit de recalculer le profil dexactitude avec les donnes
corriges. Cependant, pour assurer lindpendance des mesures, il est prfrable dutiliser
deux chantillons de validation et de raliser lensemble des plans dexprience en parallle.
La figure 4 illustre leffet du facteur de correction 2,0. Lchantillon A dont les mesures nont
pas t corriges produit un profil dexactitude qui mne conclure que la mthode nest pas
valide. En revanche, les mesures faites sur un deuxime chantillon B puis corriges par 2,0,
conduisent la conclusion que la mthode est valide si les rsultats sont corrigs.

Le Cahier des Techniques de lInra

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 Validation des mthodes danalyse quantitative par le profil dexactitude

140%
chantillon B corrig
130%

120%

110%

100%
Recouvrement %

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0

90%

80%

70% chantillon A non corrig

60%

50%

40%

30%
Concentration thorique (mg/L)

Figure 4 : illustration de lintrt du facteur de correction pour valider une mthode

Cette approche est volontairement empirique et ne fait pas appel des tests de signification de
la pente ou de lordonne lorigine.

3.4 Contribution au calcul de lincertitude

Cette section propose une faon destimer une part, souvent importante, de lincertitude-type
compose. Elle est obtenue partir des donnes de validation mais ne remplace pas
lapplication dune procdure exhaustive destimation de lincertitude, telle que dcrite dans
diffrents fascicules de documentation (Afnor, FD X07-021:1999 et FD V03-116:2001). En
particulier, il reste indispensable dtablir la liste des principales sources dincertitude et de
lorganiser sous la forme dun diagramme causes/effets. Le principe de lapproche propose
consiste sappuyer sur le modle dcrit dans le fascicule de documentation ISO/TS 21748.
Ainsi, pour un niveau de concentration donn on va crire que lincertitude-type leve au
carr vaut :
u 2 ( Z ) = u 2 ( D) + sFI2
Avec Z la valeur du mesurande et D le biais absolu moyen. Si on nglige les incertitudes sur
la valeur de rfrence et dautres sources dincertitude ventuelles, on dmontre que (pour
plus de dtails, voir (Feinberg M., 2009) :

2 1
sFI 1 sr2
u ( D) = I
J

Numro spcial 2010

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Validation des mthodes

En rorganisant les calculs, on trouve :

1
u (Z ) = sFI 1 + (11)
IJB
Avec
R +1
B=
J R +1 sB2
et R =
sr2
On remarquera alors que la formule (11) est identique celle de lcart-type de lintervalle de
tolrance fourni dans Feinberg (2010b). On peut ainsi conclure que lcart-type de lintervalle
de tolrance sIT permet destimer les composantes de lincertitude lies, par exemple :
au modle dtalonnage ;
lenvironnement du laboratoire ;
aux oprateurs ;
la manipulation et au stockage des chantillons lors de leur sjour dans le laboratoire, etc.
Cette liste nest pas exhaustive et dpend beaucoup des conditions de fidlit intermdiaire
choisies pour raliser les essais. Cependant, elle ne prend pas en compte lincertitude sur les
valeurs de rfrence qui correspond ce quon appelle la traabilit des mesurages.

Bibliographie
AFNOR Norme NF ISO 5725-2:1994, Exactitude (justesse et fidlit) des rsultats et
mthodes de mesure Partie 2 : Mthode de base pour la dtermination de la rptabilit
et de la reproductibilit d'une mthode de mesure normalise. Afnor, Paris
AFNOR Norme NF X 06-041, Application de la statistique Fidlit des mthodes d'essai
Dtermination de la rptabilit et de la reproductibilit d'une mthode d'essai
normalise par essais inter-laboratoires. Afnor, Paris
AFNOR Norme FD X07-021:1999 Normes fondamentales - Mtrologie et applications de la
statistique - Aide la dmarche pour l'estimation et l'utilisation de l'incertitude des mesures
et des rsultats d'essais, Afnor, Paris
AFNOR Norme FD V03-116:2001 Analyse des produits agricoles et alimentaires - Guide
d'application des donnes mtrologiques, Afnor, Paris
FD ISO/TS 21748 :2004. Lignes directrices relatives l'utilisation d'estimations de la
rptabilit, de la reproductibilit et de la justesse dans l'valuation de l'incertitude de
mesure, ISO, Genve
Feinberg M., (2009) Labo-Stat : Guide de validation des mthodes danalyse Lavoisier
Tec&Doc, Paris
Feinberg M. (2010a) Principes et vocabulaire in Validation des mthodes danalyse
quantitative par le profil dexactitude. Le Cahier des Techniques de lInra, numro
spcial : 13-26

Le Cahier des Techniques de lInra

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 Validation des mthodes danalyse quantitative par le profil dexactitude

Feinberg M. (2010b) Mise en uvre du profil dexactitude in Validation des mthodes

danalyse quantitative par le profil dexactitude. Le Cahier des Techniques de lInra,
numro spcial : 27-44
Commission SFSTP, P. Hubert, J.J. Nguyen-Huu, B. Boulanger, E. Chapuzet, P. Chiap,
N. Cohen, P.A. Compagnon, W. Dew, M. Feinberg, M. Lallier, M. Laurentie, N. Mercier,
G. Muzard, C. Nivet, L. Valat ; Validation des procdures analytiques quantitatives :
Harmonisation des dmarches.
Partie I. : STP Pharma Pratiques (2003) 13:3, 101-138
Partie II. : Statistiques, STP Pharma Pratiques (2006) 16:1, 30-60
Partie III : Exemples d'application, STP Pharma Pratiques (2006) 16:2, 87-121
ISO 11843-2 :2004 Capabilit de dtection. Cas du modle dtalonnage linaire, ISO Genve

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