Observacin y diferenciacin de clulas sanguneas

y hemograma
Miguel Criollo 1

1 Departamento de Ciencias de la Vida y la Agricultura, Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE, Sangolqu,
Ecuador

Palabras clave: clulas sanguneas, hemograma, leucocitos, Wright

Key words: blood cells, blood count, leukocytes, Wright

Resumen

Las clulas sanguneas son aquellas que podemos encontrar en la sangre, son de tres tipos: los
glbulos blancos o leucocitos son las clulas del sistema inmunitario, los eritrocitos o glbulos rojos
transportan el oxgeno y las plaquetas se encargan de la coagulacin de la sangre. Las clulas
sanguneas componen el 45 % del plasma sanguneo y son producidas por la mdula sea. El presente
trabajo tuvo como objetivo diferenciar e identificar las clulas del sistema de defensa en sangre
humana a partir de frotis sanguneo con tincin Wright, Giemsa y Eosina e identificar la prueba de
hemlisis con el sistema A, B, D para la tipificacin sangunea de dos muestras. Se observaron en el
microscopio los componentes celulares, identificando neutrfilos, linfocitos, monocitos y basfilos.
Con la prueba de hemlisis se determin que la primera muestra de sangre fue AB+ y la segunda A+.

Abstract

Blood cells are those that we can find in the blood, they are of three types: the white blood cells or
leukocytes are the cells of the immune system, the red blood cells carry the oxygen and the platelets
are responsible for blood clotting. Blood cells make up 45% of the blood plasma and are produced by
the bone marrow. The present work aimed to differentiate and identify the cells of the defense system
in human blood from blood smears with Wright, Giemsa and Eosin staining and to identify the
hemolysis test with the A, B, D system for the blood typing of two Samples. The cellular components
were observed under the microscope, identifying neutrophils, lymphocytes, monocytes and
basophils. With the hemolysis test the first blood sample was determined to be AB + and the second
A +.

Introduccin

La sangre es un lquido biolgico que tiene gran importancia fisiolgica ya que en ella se encuentran
clulas y sustancias importantes para la vida (Loja, Gualan, & Molina, 2012). Entre sus funciones,
destacan: Distribucin de nutrientes, intercambio de gases, transporte de productos de deshecho,
transporte de hormonas, proteccin frente a microorganismos invasores, proteccin frente a
hemorragias (Palacios, 2014). Los componentes celulares son eritrocitos (glbulos rojos), leucocitos
(glbulos blancos) y plaquetas (Montalvo, 2012). Todos estos se originan y desarrollan en la medula
sea por medio del tejido hematopoytico, e ingresan a la sangre cuando estn totalmente maduros
(Cediel et al., 2009).
Los leucocitos son clulas sanguneas verdaderas, puesto que tienen ncleo, al contrario de lo que
sucede con los eritrocitos o las plaquetas. Son las unidades mviles del sistema de proteccin (o
sistema inmune) del cuerpo humano. Una gran parte de ellos madura en la mdula sea
(granulocitos, monocitos y linfocitos B) y el resto en el timo (linfocitos T). Hay 2 grandes tipos de
leucocitos: Granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos), Agranulocitos o mononucleares
(monocitos, con ncleos en forma de rin y los linfocitos, con ncleos grandes y poco citoplasma)
(Palacios, 2014).
La tincin de Wright es una tcnica que se emplea generalmente para la diferenciacin de elementos
celulares de la sangre y es clasificada como una tincin policromtica, dado que puede teir
compuestos cidos o bsicos presentes en una clula. Fue desarrollada por el patlogo James Homer
Wright en 1902 a partir de la modificacin de la ya existente tincin de Romanowsky, utilizada para
diferenciar elementos formes de la sangre (Lpez et al., 2014). La tincin de Giemsa es un mtodo
diferencial de tincin, que se utiliza para distinguir los distintos componentes celulares, atendiendo
a la distinta afinidad hacia unos colorantes u otros. Como el resto de las coloraciones basadas en la
tcnica de Romanowsky, permite diferenciar cualitativa y cuantitativamente los principales
elementos formes de la sangre (Camacho, 2014).
El sistema ABO fue el primer grupo sanguneo descubierto. Landsteiner en 1900 descubri que los
glbulos rojos pueden clasificarse en A, B y O, de acuerdo a la presencia o ausencia de antgenos
reactivos en la superficie de los glbulos rojos. Dichos antgenos son de mucha importancia en
transfusin sangunea, trasplante de tejidos y enfermedad hemoltica del recin nacido (Grispan,
2003). Adems, se utiliza el factor Rh para la clasificacin de los tipos de sangre. Rh es una protena
que puede estar presente en la superficie de la membrana plasmtica. Si una persona presenta este
factor pertenece al grupo Rh positivo, y si no lo hace, pertenece al grupo Rh negativo (Zenteno,
Agundis, Chvez, & Lascurain, 2015).
El presente trabajo tuvo como objetivo diferenciar e identificar las clulas del sistema de defensa en
sangre humana a partir de frotis sanguneo con tincin Wright, Giemsa y Eosina e identificar la
prueba de hemlisis con el sistema A, B, D para la tipificacin sangunea de dos muestras.

Protocolos

Protocolo obtenido de la gua de prcticas de laboratorio de Observacin y diferenciacin de clulas

sanguneas y hemograma, realizado por Torres (2016).

1. Observacin y diferenciacin de clulas sanguneas

1. Toma de sangre, homogenizar la sangre durante 1 minutos y realizar un frotis sanguneo.

2. Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tincin con la sangre hacia arriba.
3. Cubrir completamente el portaobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que
permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glbulos sanguneos. El
colorante deber cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes.
Deber agregarse una cantidad adicional si ste se comienza a evaporar.
4. Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la
coloracin dbil. Esperar la formacin de brillo metlico. Puede usarse de igual manera agua
desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.
5. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensin presente un aspecto rosado al
examinarlo a simple vista.
6. Limpiar el dorso del portaobjetos con un papel humedecido en alcohol para eliminar cualquier
resto de colorante.
7. Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de 100x.
8. Identificar las clulas y anotar los resultados

2. Identificacin de grupo sanguneo y Rh

1. En caso de no contar con una placa marcada, trazar 3 crculos en una placa de vidrio
2. Colocar una gota de sangre en cada circulo
3. Agregar a cada crculo una gota de reactivo distinto de anticuerpo Anti A, B, D
4. Mezclar el contenido de cada crculo con aplicadores de madera distintos
5. Observar la presencia o ausencia de aglutinacin.
La aglutinacin indica la presencia de antgeno para el anticuerpo agregado
 Resultados representativos

En la muestra de sangre venosa se observ mediante un microscopio ptico a monocitos, linfocitos,

neutrfilos y basfilos (Figura 1).

a b

c d

Figura 1. Clulas sanguneas observadas en muestra de sangre venosa. (a) Monocito, observado a 100X por
Tincin Giemsa. (b) Linfocito, observado a 100X por Tincin Giemsa. (c) Neutrfilos segmentados, observados a
100X por Tincin Giemsa. (d) Basfilos, observados a 100X por Tincin Wright

Con las pruebas de hemolisis, se obtuvo para la muestra 1 AB+ y para la muestra 2 A+ (Figura 2).

a Anti-A Anti-B Anti-D

b Anti-A Anti-B Anti-D

Figura 2. Pruebas de Hemolisis. (a) Muestra 1, AB+. (b)Muestra 2, A+

Discusin

Mediante las tinciones propias para clulas sanguneas se pudo diferenciar monocitos, linfocitos,
neutrfilos y basfilos (vase Figura 1). Las tinciones utilizadas en el presente ensayo, tanto Wright
como Giemsa, son de tipo Romanowsky. Esto quiere decir que se utiliza azul de metileno y sus
productos de oxidacin (Azur A, B y C), como colorantes bsicos, y se combina con eosina Y, como
colorante cido (Sigma-Aldrich, 2016). El efecto combinado de los colorantes mencionados produce
el llamado efecto Romanowsky, que confiere una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos
y a los grnulos neutroflicos, mientras que los eritrocitos se tornan de un color rosado (Sigma-
Aldrich, 2016). Esto se debe a la naturaleza cida o bsica de las estructuras celulares, que determina
su afinidad por los componentes de cada colorante; por lo tanto, los cidos nucleicos en el ncleo se
tien con azul de metileno y sus productos de oxidacin, que son bsicos, y la hemoglobina con la
eosina Y que es cida (Gonzles, 2005).
El reconocimiento de un tipo celular especfico del linaje inmunolgico depende de la morfologa de
su ncleo, de la presencia o no de grnulos en su citoplasma, y de sus respectivas coloraciones (Rodak
& Carr, 2015). El mismo criterio se tom para poder identificar las clulas sanguneas segn Torres
(2016), reconociendo as monocitos, linfocitos, neutrfilos y basfilos (vase Figura 1).

Segn Cediel (2009) las clulas sanguneas se originan y desarrollan en la medula sea por medio del
tejido hematopoytico, e ingresan a la sangre cuando estn totalmente maduros. La velocidad con
que se producen las clulas sanguneas se controla en funcin de las necesidades del organismo. Las
clulas sanguneas normales duran un tiempo limitado (que puede ir desde unas pocas horas hasta
unos pocos das para los glbulos blancos, hasta 10 das para las plaquetas y hasta 120 das para los
glbulos rojos) y deben ser reemplazadas constantemente. Ciertos trastornos pueden desencadenar
una produccin adicional de clulas sanguneas. Cuando el contenido de oxgeno en los tejidos del
organismo es bajo o cuando el nmero de glbulos rojos (eritrocitos) disminuye, los riones
producen y liberan eritropoyetina, una hormona que estimula a la mdula sea para producir ms
glbulos rojos. En respuesta a las infecciones, la mdula sea produce y libera ms glbulos blancos
(leucocitos). Tambin tiene la capacidad de producir y liberar ms plaquetas como respuesta a un
sangrado (Montalvo, 2012).

Para determinar un antgeno se puede realizar inmunoanlisis, en donde existen alrterativas

inclusive mejores que permiten cuantificar. Una de las tcnicas ms utilizadas es el
radioinmunoanlisis (RIA), para lo cual se marca al antgeno o anticuerpo con un radioistopo y se
utiliza instrumentos que pueden detectar fenmenos de desintegracin radioactiva. Otra tcnica es
el enzimo-inmunoensayo de absorcin (ELISA), en el que el anticuerpo o antgeno se une de forma
covalente a una enzima y se cuantifica utilizando un espectrofotmetro para determinar la intensidad
con la que la enzima convierte un sustrato transparente en un producto coloreado (Abbas, Lichtman,
& Pillai, 2012). Adems, se pueden identificar algunos antgenos de superficie mediante tcnicas
serolgicas como el sistema ABO y Rh para determinar el tipo de sangre que tiene una persona, el
cual se us en el presente trabajo (Zenteno, Agundis, Chvez, & Lascurain, 2015). Segn Grispan
(2003) la presencia o ausencia de los antgenos A, B y D en la membrana de los eritrocitos
determinar la existencia de los anticuerpos anti-A, anti-B y anti-D respectivamente, ya que si no se
tiene un antgeno determinado se desarrollarn anticuerpos contra el mismo. Como consecuencia de
esto, se produce una aglutinacin de los eritrocitos al realizar una transfusin de sangre no
compatible. Para la muestra 1, se aglutino con el suero Anti-A, Anti-B y Anti-D determinando que es
AB+ y para la muestra 2 se observ hemolisis con el suero Anti-A y Anti-D determinando que es A+
(vase Figura 2).

Conclusiones

Mediante tinciones Wright, Giemsa y un microscopio ptico (100X) se pudo diferenciar los tipos
celulares de linaje inmunolgico (monocito, linfocito, neutrfilo, basfilo) basado en las diferentes
coloraciones de su ncleo y citoplasma.

Se determin, segn la base del sistema ABO, el tipo de sangre de dos muestras aplicando pruebas
antgeno-anticuerpo con la utilizacin de los sueros Anti-A, Anti-B y Anti-D, para la primera muestra
se obtuvo AB+ y para la segunda A+.

Recomendaciones
Se debe procurar trabajar con un portaobjetos limpio para una mejor observacin de las clulas
sanguneas. Para un buen frotis sanguneo, se debe trabajar con suficiente muestra de sangre y con
una tcnica precisa. Es importante respetar los tiempos de tincin en la muestra.
 Referencias

Abbas, A., Lichtman, A., & Pillai, S. (2012). Inmunologa celular y molecular. Espaa: ELSEVIER.

Camacho, D. (13 de Noviembre de 2014). Tincin de Giemsa. Recuperado el 11 de Mayo de 2017, de

https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com/2014/11/13/practica-no11-
tincion-de-giemsa/

Campuzano Maya, G. (2008). Utilidad del extendido de sangre perifrica: los leucocitos. Medicina &
Laboratorio, 14(9-10), 411-455.

Cediel, J., Crdenas, M., Garca, A., Chuaire, L., Payn, C., Villegas, V., & Snchez, C. (2009). Manual de
Histologa . Bogot: Editorial Universidad del Rosario.

Gonzlez Crdenas, V. E. (2005). Tincin de Wright. Obtenido de Universidad de Antioquia:

http://kassandra.udea.edu.co/lms/moodle19/mod/resource/view.php?id=3542

Grispan, S. (2003). Grupos sanguneos ABO y Rh. Hondur, 15-23.

Loja, M. M., Gualan, L., & Molina, K. (2012). Clulas sanguneas. Recuperado el 11 de Mayo de 2017, de
http://repositorio.cedia.org.ec/bitstream/123456789/704/1/Tejidos%20de%20celula%
20sanguinea.pdf

Lpez , L., Hernandez, M., Coln , C., Ortega, S., Cern, G., & Cendejas, F. (2014). Las tinciones bsicas
en el laboratorio de Microbiologa. Investigacin en Discapacidad, 10-18.

Montalvo, C. (2012). Tejido Sanguneo y Hempatopoyesis. Obtenido de

http://histologiaunam.mx/descargas/ensenanza/portal_recursos_linea/apuntes/Tejido-
sanguineo.pdf

Palacios, J. (2014). Sistema Inmune y la sangre. Barcelona: Universidad de Barcelona.

Rodak, B., & Carr, J. H. (2015). Atlas de Hematologa Clnica. Editorial Mdica Panamericana.

Sigma-Aldrich. (2016). Wright Giemsa Stains. Obtenido de Hematology and Histology:

http://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-biology/hematology-and-
histology/wright-stain.html

Torres, M. (2016). Observacin y diferenciacin de clulas sanguneas y hemograma. Sanolqu.

Zenteno, E., Agundis, C., Chvez, R., & Lascurain, R. (2015). Aglutinacin activa: Determinacin de los
Grupos sanguneos ABO . Obtenido de
http://www.facmed.unam.mx/fm/pa/2010/practicas/practicas_inmuno.pdf