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HEMOGLOBINOMETRIA, HEMATOCRITO E NDICE HEMATOLGICOS

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

a) INTRODUCCION

En los vertebrados las funciones de respiracin; el equilibrio de los fluidos, la excrecin e inclusive
la digestin, estn muy relacionadas con la sangre y los vasos sanguneos que forman parte de un
sistema circulatorio cerrado. La sangre es un fluido orgnico de mucha importancia, no solo por las
mltiples funciones que desempea dentro de un organismo animal, sino tambin, porque es un
valioso medio usado para la valoracin del estado fisiolgico del animal, teniendo en cuenta que no
existe afeccin que deje de comprometer sus caractersticas.

La sangre en los peces, como en todos los vertebrados, consta de plasma fluido y clulas
sanguneas. Las clulas sanguneas pueden dividirse en dos grandes grupos: los glbulos rojos o
Eritrocitos, quienes contiene los pigmentos respiratorios y actan en el transporte del oxgeno y los
glbulos blancos, entre los cuales podemos encontrar neutrfilos a los cuales se le atribuye la accin
fagoctica y generalmente se encuentran en zonas de inflamacin, los monocitos a los que tambin
se les atribuye actividad fagoctica; trombocitos responsables de la coagulacin de la sangre;
eosinofilos y basfilos, que son las clulas infrecuentes en la clula de los peces, pero se suponen
que tienen accin fagoctica; y los linfocitos que son las clulas responsables de las respuesta
inmunitaria de los peces.

El conocer el volumen de los elementos (glbulos rojos y glbulos blancos), el volumen de


hematocrito el cual es el porcentaje del volumen total de sangre compuesto de glbulos rojos. Es
una medicin compuesta por el tamao y nmero de GR y casi siempre es parte de un conteo
sanguneo completo (CSC). Dicho conteo mide el nmero de glbulos rojos (GR), glbulos blancos
(GB), la cantidad total de hemoglobina en la sangre y la fraccin de la sangre compuesta de glbulos
rojos en relacin con el plasma sanguneo (hematocrito).

El contenido de hemoglobina en una especie determinada es de suma importancia en el control de


enfermedades ya que cuando los peces estn enfermos ocurren cambios sustanciales en el
contenido de hemoglobina de la sangre, as como de corpsculos sanguneos blancos y rojos;
adems, los factores ambientales ejercen influencia sobre la frmula de la clulas sanguneas
presentes, alterando adems su forma con el consiguiente comportamiento en el proceso de
transporte, de ah que la velocidad de sedimentacin es una medicin que permite corroborar el buen
funcionamiento vascular del organismo.

b) OBJETIVOS

La presente prctica tiene por objetivo realizar un recuento globular en peces, as como
determinar el volumen de hematocrito en peces y la velocidad de sedimentacin de la
sangre de la especie Oreocrhomis niloticus Tilapia.

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c) MATERIALES Y METODOS

La prctica se desarroll en el laboratorio de Biologa de la Facultad de Ciencias.


Como material biolgico se utiliz sangre de la especie Oreocrhomis niloticus Tilapia
obtenida de la clase anterior, preservado en un frasco de penicilina previamente
heparinizada y guardada a 15 C.
La muestra de sangre extrada se coloc en un tubo de ensayo, luego se les hicieron los
siguientes anlisis:

a) Hemaglobimetra
Se aspir con una pipeta Sal 20 ul de sangre hasta la marca de 20 de la pipeta. Se limpi
parte externa de la pipeta y se coloc la muestra en 5 ml de solucin Drabkin, en un tubo de
ensayo. Se mezcl la sangre repetidamente con el diluyente, y se dej a temperatura
ambiente durante 20 minutos y se determin la densidad ptica en un espectrofotmetro a
una longitud de onda de 540.

Para determinar la cantidad de hemoglobina en sangre se realiz el siguiente


clculo:
Hb (gr/100ml) = Abs. X Factor de calibracin (FC).
Dnde: FC = 59.76

b) Volumen de Hematocrito

Se llen tubo un capilar de hematocrito con sangre hasta partes, sellamos los capilares
con plastilina formando un tapn de aproximadamente de 2-3 mm luego se centrifugo por 5
minutos a 1000 rpm y se ley a la altura de la capa de los eritrocitos (capa inferior), la que
se expresa en porcentaje de la altura de la columna total de sangre (Ht%) en la tablilla
correspondiente.

c) ndices Hematolgicos
Volumen corpuscular medio (V.C.M.)
Corresponde al volumen ocupado por un eritrocito medio en la sangre. Se calcula
de la siguiente manera:

Hematocrito % = V.C.M. (u3)


Recuento eritrocitario (x106/ mm3)

Se expresa en micrones cbicos

Hemoglobina corpuscular media (H.C.M.)


Corresponde al peso de la hemoglobina en un eritrocito medio.
Se calcula de la siguiente manera:

Hb g/ 100 mL
recuento eritrocitario (x 106/ mm3) = H.C.M (ug)

Se expresa en micro microgramos.

Concentracin Corpuscular media de Hemoglobina (C.C.M.H)


Es el porcentaje de eritrocitos ocupados por la hemoglobina. Se calcula de la
siguiente manera:

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Velocidad de eritrosedimentacion

Llenar los capilares de hematocrito con muestras de sangre con anticuagulante.


Pngalo en reposo y en forma vertical por espacio de una hora, al cabo de la cual,
lee al lmite inferior que alcanza la columna clara de plasma en milmetros. El
resultado se expresa en milmetros por hora.

d) RESULTADOS

N Pez Velocidad Hematocrito Absorbancia (Hb) N Glbulos rojos (mm3)


1 1ml 33% 0.218 3.7x1010

a) Hemaglobinmetria:
HB (g./100mL)= abs. x factor de calibracin (FC).
HB = 0.021 x 59.76 = 1,26
b) Hematocrito:
10 % de ematocrito.

c) ndices Hematolgicos:
- volumen corpuscular medio ( V.C.M.)

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e) DISCUSION

Oreocrhomis sp Tilapia, extraordinaria resistencia fisiologa, entre las que se pueden


mencionar su extraordinaria resistencia; incrementar la concentracin de hemoglobina en
ambientes con poca aireacin, su capacidad para resistir variaciones notables de salinidad
y temperatura y para sobrevivir en ambientes con deficiente cantidad de oxigeno (Uribe et
al 1982).
Segn Eckert (1992) y Wilson (1989); mencionan que en los eritrocitos se encuentran los
pigmentos responsables de la capitacin del oxigeno en este caso la hemoglobina (Hb). Esta
especie por vivir en ambientes con baja cantidad de oxigeno o hipxicos en muchos casos
posee una hemoglobina con alta afinidad por el oxgeno para poder utilizar mejor el escaso
del agua, adems como se menciono anteriormente la incrementa aumentando su nmero
de eritrocitos en la sangre. El hematocrito es relacin porcentual que existe entre el volumen
de glbulos rojos y el plasma sanguneo.
Al tomar la muestra de sangre de la tilapia y al colocarla en los capilares se observ que
se separ en dos capas. Una capa superior, por lo general opaca y de color amarillento que
contiene protenas coloidales y muchas sustancias disueltas. Recibe el nombre de plasma y
segn Petracini (2004) menciona que este ocupa el 55% del volumen total de la sangre.
Valenzuela et al (2002) en un trabajo realizado con trucha Oncorhynchus mykiis expuesta
a diferentes tiempos de hipoxia obtuvo que los peces incrementan el nmero de eritrocitos
en la sangre, por otro lado Figueroa y Prez (1984) trabajaron con Bastrachoides manglae
siendo esta una especie de hbitos bentnicos, obtuvo como resultado que el hematocrito
aumenta al bajar la concentracin de oxgeno.
PULSOMED (2004), menciona que en la sangre normal la eritrosedimentacin es casi nula;
por lo tanto el organismo se encuentra ms saludable que los dems. La prueba de
velocidad de eritrosedimentacin puede servir para medir la cantidad de inflamacin
presente en el animal. Sirve tambin para marcar la diferencia entre una afeccin
inflamatoria y una no inflamatoria.

f) CONCLUSION

Tilapia Oreocrhomis sp presenta una gran cantidad de globulos rojos; 0.318 x 106 eritrocitos
x mm, para el organismo 1, y 0.364 x 10 eritrocitos x mm, para el organismo 3.

Los glbulos rojos presentes en los peces son nucleados, cncavos de color amarillo
rojizo.

El conocer el nmero de glbulos rojos, volumen de hematocrito, contenido de


hemoglobina en una especie determinada es de gran importancia en el control de
enfermedades

g) REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Uribe AM, Arreguin EJ, Torres PA y Catro PA. 1982. Los Cromosomas de Dormitator
latifrons (Pisces:Gobiidae). Anales del lnst.de Ciencias del Mar y limnologa. Mxico.
Wilson J. 1989. Fundamentos de la Fisiologia Animal. 10ed. en espaol. Edit.Limusa.
Mxico.
Ecker.1992. Fisiologa Animal. 3 ed. Edit. McGraw-Hill Interamericana. Espaa.
Petracini R. 2004. Sangre. El acuarista.com. Disponible en
URL:http://www.elacuarista.com/secciones/inmuni.htm
PULSOMED (Editorial). 2004. Disponible en
URL:http://www.tuotromedico.com/temas/velocidad_sedimentacion.htm

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