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Ruiz Kanie
Problema
Perdida de la variabilidad gentica
Sobrexplotacin de bancos naturales
Poblaciones distintas
Poca capacidad de dispersin larval
Objetivos
El presente estudio busc caracterizar genticamente las poblaciones
naturales de Ostrea chilensis en el sur de Chile.
Evaluar el grado de variabilidad gentica entre ellas, otorgando datos
importantes para la conservacin y el manejo de este recurso.
Conocer tcnicas moleculares, para la determinacin de variabilidad
gentica en poblaciones, como lo es el RAPD.
Antecedentes
Genetic differentiation of populations of the oyster Ostrea chilensis in
southern Chile
Jorge E. Toro and Pablo R. Aguila (1997)
Colecta de 60 individuos
El sobrenadante se Centrifugar a 6500G
adultos de Ostrea
supendio en 800 uL de /3min. Resuspender el
chilensis (Islas Chiloe e
etanol 95% a -20C. pellet en 200uL de
Islas Guaitecas)
agua ultradestilada
Desnaturalizacin: 1 ciclo
de 95C x 15sg, 36 ciclos
Amplificacin en
de 94C x 30 sg, 1 ciclo de
Termociclador con un
hibridacin a 33 x 30sg,
programa de:
fase de extensin de 72C
x 1 min.
Luego de 36 ciclos se
ejecuto un programa de
Fue conservado a 4C.
extensin final de 2 min a
72C.
Electroforesis
Fragmentos de
Sumergido en
ADN separados
buffer TBE 0,5X Visualizadas en
por Patrn estndar
+ bromuro de transiluminador
electroforesis en (ladder 100bp)
etidio UV
gel de agarosa
(10mg/mL)
(1,5%)
En cuanto a la poblacin o muestra es diferente de
otros estudios?
S, en el presente paper se trabajo con 60 individuos.
Lara et al. (2003) recolecto hojas de 51 individuos de Psychotria
acuminata, en distintas reas de Costa Rica.
Ward et al.(1992) Fujio et al. (1983) y En Ostrea edulis (18,2% y 40,9%) medido
Hermosilla (2004); obtuvieron: 0,122; por electroforesis enzimatica (Saavedra et
0,145 y al. 1993)
0,230) respectivamente. En
invertebrados marinos
En Ostrea edulis, utilizando marcadores
micro satlites obtuvieron un promedio
entre 10-13,5 % de polimorfismo; debido
Toro & Aguila (1996) obtuvieron : 0.109 y al bajo tamao muestral ( 9 33
0.138. Significante diferencia para poblaciones individuos) (Beaumont et al. 2006)
de O chilensis
Una de sus ventajas es el bajo costo y la rapidez con la que se obtienen los
resultados. Una de las desventajas es que el numero de individuos estudiados
debe ser alto para obtener mejores resultados.
Amplificacin aleatoria de ADN
polimrfico
Es el empleo de un tipo de marcador molecular basado en
la reaccin en cadena de la polimerasa. Los fragmentos de
ADN obtenidos por medio de esta tcnica se amplifican en
regiones aleatorias del genoma ya que los iniciadores o
cebadores de la reaccin son secuencias arbitrarias de ADN
sinttico.
Requiere poco ADN que adems no necesita estar muy
puro
No presupone conocimientos previos sobre la secuencia
Se pueden distinguir rpida y simultneamente muchos
organismos
Amplificacin aleatoria de ADN
polimrfico
Los productos generados tras
la amplificacion pson
separados mediante
electroforesis en gel de
agarosa.
Posteriormente pueden ser
visualizados mediante
fluorescencia de luz UV de
onda corta, tras tincion con
bromuro de etidio.
Las bandas generadas
pueden clonarse y
secuenciarse
permitiendo as su
posterior amplificacin
mediante cebadores
de mayores nmeros
de nucletidos mas
especficos. Se
denominan SACARs
(regiones amplificadas
de secuencia conocida)