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Huayanca Brenda

Ruiz Kanie
Problema
Perdida de la variabilidad gentica
Sobrexplotacin de bancos naturales
Poblaciones distintas
Poca capacidad de dispersin larval
Objetivos
El presente estudio busc caracterizar genticamente las poblaciones
naturales de Ostrea chilensis en el sur de Chile.
Evaluar el grado de variabilidad gentica entre ellas, otorgando datos
importantes para la conservacin y el manejo de este recurso.
Conocer tcnicas moleculares, para la determinacin de variabilidad
gentica en poblaciones, como lo es el RAPD.
Antecedentes
Genetic differentiation of populations of the oyster Ostrea chilensis in
southern Chile
Jorge E. Toro and Pablo R. Aguila (1997)

Detection of Bonamia ostreae in fixed Ostrea edulis tissues by use of


specific PCR assays
Anna K. Flood (2007)

Amplificacin al azar del ADN de 5 poblaciones cubanas de peces


larvvoros del gnero Rivulus
Fernndez Aym, Natividad Hernndez y Fraga Jorge (2003)

Variabilidad Y Diferenciacin Gentica En Cuatro Poblaciones


De La Planta Medicinal Psychotria Acuminata En Costa Rica
Lara Alfonso, Valverde Roberto, Rocha Oscar, Gmez Luis (2003)
Conocimiento
Da a conocer que la estructura gentica de la
ostra chilena en poblaciones naturales del sur
de chile, solo es variada en Melinka y no es
posible identificar una clara conformacin de
stoks de O chilensis.
Se trata de un estudio cuya metodologa es mejor y ms rigurosa. Qu
estudios previos? contiene alguna crtica especfica a la metodologa de
estudios anteriores?
Metodologa: RAPD-PCR y electroforesis

Anlisis con marcadores Electroforesis BO/BOAS


RAPDs
Se logro obtener Solo pudo determinar la Primers de BO/BOAS
parmetros de diversidad gentica pueden ser
diversidad gentica intra entre poblaciones de exitosamente
e interpoblacional. Ostrea chilensis optimizados para la
Adems de permitir la cplificacion de muestras
obtencin de flujo de ADN de Ostrea
gnico a partir de 43 Jorge E. Toro and Pablo edulis
loci RAPD para Ostrea R. Aguila (1997)
chilensis Anna K. Flood (2007)

Toro orgue y Carolina


Gonzales (2009)
Extraccin de ADN

Colecta de 60 individuos
El sobrenadante se Centrifugar a 6500G
adultos de Ostrea
supendio en 800 uL de /3min. Resuspender el
chilensis (Islas Chiloe e
etanol 95% a -20C. pellet en 200uL de
Islas Guaitecas)
agua ultradestilada

Extraer un trozo de manto Centrifugar a 13000G


fijado con etanol 95 /15min a 10C.

Digestin del tejido: 500 ul Adicionar 500 uL de una


buffer de lisis, 50uL de SDS solucin fenol-
al 20%, y 5uL de proteinasa cloroformo-isoamil
K. se incubo : 37/12hr. alcohol (25:24:1)
Amplificacin
1UL de ADN, 7,5uL de
dNTPs, 1,75 de MgCl, 2,5
uL PCR-buffer 10x, 3uL de
Usaron 4 partidores
partidor, 1 unidad de Taq
ADN polimerasa y 9,05 uL
agua ultradestilada.

Desnaturalizacin: 1 ciclo
de 95C x 15sg, 36 ciclos
Amplificacin en
de 94C x 30 sg, 1 ciclo de
Termociclador con un
hibridacin a 33 x 30sg,
programa de:
fase de extensin de 72C
x 1 min.

Luego de 36 ciclos se
ejecuto un programa de
Fue conservado a 4C.
extensin final de 2 min a
72C.
Electroforesis

Fragmentos de
Sumergido en
ADN separados
buffer TBE 0,5X Visualizadas en
por Patrn estndar
+ bromuro de transiluminador
electroforesis en (ladder 100bp)
etidio UV
gel de agarosa
(10mg/mL)
(1,5%)
En cuanto a la poblacin o muestra es diferente de
otros estudios?
S, en el presente paper se trabajo con 60 individuos.
Lara et al. (2003) recolecto hojas de 51 individuos de Psychotria
acuminata, en distintas reas de Costa Rica.

Fernandez-Calienes et al. (2003), amplifico 10 individuos de 5


poblaciones de peces del genero Rivulus; colectados en la regin
occidental de Cuba.

Toro et al (1995) realizaron analisis en electroforesis a partir de 150


individuos de Ostrea chilensis
Resultados
la discusin es realizada comparando
sus resultados con otros?
Diversidad gentica
Polimorfismo gentico alcanzo
interpoblacional para Ostrea
niveles de (55,8 % 72 %)
chilensis es de 0,2846

Ward et al.(1992) Fujio et al. (1983) y En Ostrea edulis (18,2% y 40,9%) medido
Hermosilla (2004); obtuvieron: 0,122; por electroforesis enzimatica (Saavedra et
0,145 y al. 1993)
0,230) respectivamente. En
invertebrados marinos
En Ostrea edulis, utilizando marcadores
micro satlites obtuvieron un promedio
entre 10-13,5 % de polimorfismo; debido
Toro & Aguila (1996) obtuvieron : 0.109 y al bajo tamao muestral ( 9 33
0.138. Significante diferencia para poblaciones individuos) (Beaumont et al. 2006)
de O chilensis

Lara et al (2002) obtuvo un 95 % de loci


polimrficos en Psychotria acuminata por
mtodo RAPD y 83% con el mtodo ISSR
Distancia genticas no
Flujo gnico para O.
presentaron valores
chilensis : (Nm= 1,5877)
significativos (0,113)

Contrapone a lo propuesto por Toro Lara et al (2003) obtuvo


y Chaparro (1990), que de acuerdo distancia genticas de
a las caractersticas de vida de O. comprendidas entre
chilensis sugieren gran potencial (0,136 0,262) en
para diferenciacin gentica. Psychotria acuminata
Conclusiones
Es claro que la intervencin del hombre en la siembra de juveniles de O.
chilensis afecto el flujo gentico interpoblacin, as como los factores
oceanogrficos.

Las poblaciones mas alejadas geogrficamente mostraron mayor diferencia


gentica.

Gracias a todos los resultados obtenidos se caracterizo la estructura gentica-


poblacional de O. chilensis como una poblacin panmictica. Que es una
poblacin formada por individuos cuyo intercambio gentico ocurre al azar.

El mtodo RAPD, es uno de los mas utilizados en estudios de variabilidad


poblacional.

Una de sus ventajas es el bajo costo y la rapidez con la que se obtienen los
resultados. Una de las desventajas es que el numero de individuos estudiados
debe ser alto para obtener mejores resultados.
Amplificacin aleatoria de ADN
polimrfico
Es el empleo de un tipo de marcador molecular basado en
la reaccin en cadena de la polimerasa. Los fragmentos de
ADN obtenidos por medio de esta tcnica se amplifican en
regiones aleatorias del genoma ya que los iniciadores o
cebadores de la reaccin son secuencias arbitrarias de ADN
sinttico.
Requiere poco ADN que adems no necesita estar muy
puro
No presupone conocimientos previos sobre la secuencia
Se pueden distinguir rpida y simultneamente muchos
organismos
Amplificacin aleatoria de ADN
polimrfico
Los productos generados tras
la amplificacion pson
separados mediante
electroforesis en gel de
agarosa.
Posteriormente pueden ser
visualizados mediante
fluorescencia de luz UV de
onda corta, tras tincion con
bromuro de etidio.
Las bandas generadas
pueden clonarse y
secuenciarse
permitiendo as su
posterior amplificacin
mediante cebadores
de mayores nmeros
de nucletidos mas
especficos. Se
denominan SACARs
(regiones amplificadas
de secuencia conocida)

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