ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DEL

LITORAL
FACULTAD DE INGENIERA MECNICA Y CIENCIAS DE LA
PRODUCCIN
INGENIERA EN ALIMENTOS
BIOQUIMICA ALIMENTARIA
DEBATE ACADMICO
TEMA:
Modelo Michaelis-Menten.- Modelo estacionario

INTEGRANTES
Bajaa lava Karla
Balarezo Jara Tom
Jimnez lvarez Gabriela
Jimnez Gaibor Nicole
Largo Tomal Angie
Rojas Amaya Cristel
Yagual Ormaza Denisse

PROFESORA
M.Sc. Mara Fernanda Morales
FECHA
31 de Julio de 2017

TRMINO
2017-I
HIPOTESIS 1: De acuerdo a la cintica de Michaelis-Menten, la cantidad de producto
generado por unidad de tiempo est influenciado por las variaciones en las concentraciones
tanto de sustrato como de enzima.
PAPER:
Cintica Enzimtica del Bagazo de Caa para la Produccin de Glucosa Utilizando la
Enzima Trichoderma longibrachiatum

RESUMEN:
El paper propuesto estudia la hidrlisis enzimtica del bagazo de caa utilizando la enzima
Trichoderma longibrachiatum. Siguiendo la cintica de velocidad propuesta por Michaelis-
Menten, el cual para el proceso utiliza tres concentraciones distintas tanto del sustrato
bagaso (celulosa) como de la enzima (celulasa) donde posterior a esto estudia la velocidad
de aparicin de producto respecto al tiempo de acuerdo a las variables mencionadas
anteriormente.
Los datos de V0 y S0 obtenidos a concentraciones de 30, 40 y 50 mg/mL de bagazo de caa
con dosificaciones de enzima constante de 0.210, 0.420 y 0.840 mg/mL se usaron para
determinar los valores de Km y Vmax. En donde se present qu a concentracin de
sustrato de 50 mg/mL y de enzima de 0,840 mL se obtuvo la mayor concentracin de
glucosa (0.1902mg/mL).
El valor de Km tiene un valor propio para cada enzima siendo as el parmetro que la
caracteriza, por lo que este valor no tiene una variacin significativa. Km mide la afinidad
de la enzima con el sustrato, as para valore bajos, nos indica que la enzima se une con
fuerza al sustrato, saturndose rpidamente el catalizador con pequeas cantidades de
sustrato. Para este anlisis los valores de Km son muy altos (22.8 mg/mL) lo que indica que
la afinidad entre el bagazo y la enzima es baja por lo tanto las concentraciones de glucosa
obtenida no son muy altas para este estudio. Los valores de Vmax para las diferentes
dosificaciones de enzima fueron de 0.08495, 0.1034 y 0.1176 mg/mLs.
ARGUMENTOS
CINTICA DE MICHAELIS MENTEN

La cintica de Michaelis-Menten es la aproximacin ms simple a la cintica enzimtica;

relaciona la velocidad con que se forma un producto y la concentracin de enzima y
sustrato.
Michaelis y Menten establecieron que el rpido equilibrio entre enzima (E) y sustrato
(S), conlleva a la formacin del complejo enzima-sustrato (ES), que luego resulta en la
formacin de producto (P) y la liberacin de la enzima (E); el producto formado no
puede volver a ser sustrato. El mecanismo propuesto por Michaelis-Menten es por ende
el siguiente:

Esquema. Mecanismo Henri-Michaelis-Menten.

Segn el mecanismo Van Slike, que difiere de la ecuacin de Michaelis-Menten, el
complejo enzima-sustrato que se forma, es irreversible (k2=0), y los productos formados
no vuelven al sustrato, de modo que la velocidad v con que se forma el producto puede
ser expresada de la siguiente manera: = 3 [], siendo este un proceso normal de
primer orden.
En 1925, Briggs y Haldane introdujeron el supuesto de que la velocidad de formacin
del complejo ES es igual a la de su disociacin, siempre que la ecuacin de velocidad no
envuelva la concentracin de enzima libre, a travs de la ecuacin: 1 [][] = 2 +

3 [], por ende la concentracin del complejo ES se expresa como:

2 +3
Si la ecuacin de la constante de Michaelis es: = , entonces la concentracin
1
del complejo ES puede expresarse como:

As mismo, la concentracin total de enzima se obtiene de la suma de la concentracin

enzimtica y la concentracin del complejo ES, es decir: [ ] = [] + [].
De la combinacin de las dos ecuaciones anteriores se tiene que la concentracin del
complejo ES puede expresarse como:

La velocidad entonces puede escribirse como:

Cuando la velocidad es mxima, la concentracin de sustrato es demasiado grande en

relacin a la constante Km, de modo que la fraccin []/[] + [] es uno y la ecuacin
de la velocidad mxima que de la siguiente manera: = 3 [ ]

De esta manera se obtiene la ecuacin de Michaelis-Menten:

Esta ecuacin describe la curva hiperblica de la relacin entre la velocidad inicial v y la

concentracin de sustrato [S]. La constante Km representa la concentracin de sustrato
cuando = 0.5 . La fraccin []/[] + [] es adimensional y expresa la fraccin
de velocidad mxima a una determinada concentracin de sustrato.

Cuando la concentracin de sustrato es mucho menor a la constante Km, la ecuacin se

reduce a la fraccin = [] , y como y son constantes, la velocidad en este

caso sera directamente proporcional a la concentracin de sustrato y la reaccin sera
de primer orden, bajo estas condiciones. Por otro lado, si la concentracin de sustrato
es mucho mayor a la constante Km, entonces = , lo que resulta en una reaccin
de orden cero, independiente del sustrato. Esto implica que la grfica de la velocidad
inicial frente a la concentracin de sustrato cambia de una cintica de primer orden a
una de orden cero.

Si se considera el caso en que la constante k2 es mucho mayor que la constante k3, de

[][]
modo que = 2 /1 , entonces 2 = []
= , lo que significa que la constante
1

iguala a la constante de disociacin del complejo ES, Ks, bajo dichas condiciones. Si
toma una valor muy alto indica una dbil unin de la enzima al sustrato, mientras que
un valor elevado de esta constante, indica lo contrario.

De acuerdo al paper Cintica Enzimtica del Bagazo de Caa para la Produccin de

Glucosa Utilizando la Enzima Trichoderma longibrachiatum la teora propuesta por
Michaelis-Menten muestra lo anteriormente expuesto de manera prctica poniendo en
estudio la variacin de concentraciones tanto de enzima como sustrato donde se
obtuvo:
HIPOTESIS 2:

PAPER:
Estudio de la produccin de jarabes glucosados a partir de maltodextrinas empleando dos
enzimas comerciales

Luz A. BETTN S.; Juan C. QUINTERO D.

Grupo de Bioprocesos, Departamento de Ingeniera Qumica. Universidad de Antioquia.
Medelln, Colombia.

Para mejorar el rendimiento del proceso de la hidrlisis del almidn con alto equivalente
de dextrosa, fueron utilizadas dos enzimas: la enzima Dextrozyme GA (DGA) que pretende
sustituir a la enzima AMG 300L (AMG). El objetivo de esta investigacin se centr en
evaluar los rendimientos y velocidades de conversin de estas enzimas en funcin de
concentraciones de enzima entre 0,188-0,75 AGU/mL y maltodextrinas entre 60-180 g/L y
tambin cuantificar el nivel de mejoramiento en la obtencin de azcares reductores a
partir de maltodextrinas.

La glucoamilasa es una enzima extracelular fngica producida con Aspergillus niger o

Rhizopus sp., que libera unidades de D-glucosa, dicha habilidad de degradacin del almidn
es aplicado en la industria alimentaria; en el proceso de produccin de jarabes de glucosa,
el cual es materia prima en panadera, en la industria de bebidas y en infinidad de procesos
biotecnolgicos como la produccin de fructosa y etanol.

La tradicional enzima amiloglucosidasa AMG 300L es una de las ms usadas para la

sacarificacin de maltodextrinas con conversiones del 90% en 72 horas de tratamiento. Los
modelos matemticos para describir este proceso, se representan con cinticas de tipo
Michaelis Menten.

Para el procedimiento se emplearon las enzimas AMG 300L y dextrozyme GA con 300
AGU/mL y 270 AGU/g respectivamente y de maltodextrinas, un digerido enzimtico de
almidn de maz con un 25% de azcares reductores. Lugo, se evaluaron tres niveles de
concentracin de maltodextrinas (60, 120 y 180 g/L) y tres niveles de concentracin de
enzima (0,1875; 0,375 y 0,75 AGU/mL) y como la concentracin de azcares reductores en
las maltodextrinas es del 25%, las concentraciones reales de sustrato cuando se adicionan
60, 120 y 180 g/L de maltodextrina son: 45, 90 y 135 g/L respectivamente.

La secuencia se realiz de manera alatoria y las reacciones de sacarificacin se llevaron a

cabo a 60C en erlenmeyers de 100 mL con 50 mL de volumen de reaccin en una solucin
buffer de acetato (0,1 M) pH 4,3. Se tomaron muestras del sistema en diferentes tiempos y
se llevaron a un bao de ebullicin por 5 min para inactivar la enzima y detener la reaccin.

La determinacin de azcares reductores se hizo por el mtodo de cido 3,5-

dinitrosaliclico. Luego cada muestra se centrifug a 5000 rpm durante 5 minutos, y a 1 mL
del lquido claro se le adicion 1 mL de solucin de DNS. La mezcla se calent durante 5
minutos hasta ebullicin, se enfri en un bao de hielo y se midi la absorbancia de la
muestra a 540 nm en un espectrofotmetro. El modelo general propuesto para describir la
expresin cintica de velocidad de hidrlisis propuesta es tipo Michaelis- Menten.

CONCLUSIONES

En una reaccin catalizada por una enzima, al principio hay una determinada
concentracin de substrato en el medio de reaccin, pero conforme transcurre la
reaccin, el substrato, por la accin de la enzima, va transformndose en producto, por
lo que va disminuyendo progresivamente su concentracin y, al disminuir la
concentracin de sustrato tambin disminuye la velocidad de reaccin. Por esta razn,
para indicar la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se utiliza el trmino
velocidad inicial (V0) que indica la velocidad al principio de la reaccin, antes de que
disminuya la concentracin de substrato.

En una reaccin enzimtica, cuando la concentracin de substrato es baja, la mayora

de las molculas de la enzima estn libres y, por tanto, si se encuentran con una
molcula de substrato se unirn al mismo formando el complejo enzima-substrato y se
producir la reaccin formndose el producto. Si, continuando en el rango de bajas
concentraciones de substrato, se aumenta la concentracin de substrato en una
determinada proporcin, aumentar casi en la misma proporcin la probabilidad de
encuentro entre una molcula de substrato y una molcula de enzima libre y, por tanto,
aumentar la velocidad de reaccin en la misma proporcin. Luego para bajas
concentraciones de substrato la velocidad del sistema es directamente proporcional a
la concentracin de substrato, la reaccin es de orden 1 (la velocidad es directamente
proporcional a la concentracin de los reactivos).

Los valores de Vmx indican la velocidad de catlisis cuando la enzima se encuentra

saturada de sustrato. Al aumentar la concentracin de enzima resulta un incremento
en la Vmx por lo tanto las tres curvas dependiendo de la enzima son semejantes, pero
a mayor cantidad de sustrato y enzima tenemos curvas ms elevadas, esto se debe a
que la velocidad depende mayormente de la concentracin de sustrato.

La constante de Michaelis-Menten KM, que representa la concentracin de sustrato a

la que el 50% de los sitios activos de la enzima estn ocupados con sustrato, es
aproximadamente una medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato.
Cuanto ms pequeo sea el valor de la KM mayor ser la afinidad de la enzima por el
substrato, por tanto mayor tendencia tendr por unirse al substrato y mayor ser la
efectividad de la enzima.

El haber obtenido una velocidad mxima mayor a concentraciones mayores de enzima

y sustrato no garantiza la efectividad de obtencin de cantidad de producto por unidad
de tiempo, puesto que tambin depende del factor de Km que es propio de cada
enzima, en este caso el Km tuvo un valor alto lo que significa que a pesar de haber
conseguido una velocidad mxima mayor (0.1176mg/mL*s) a dosificaciones altas de
enzima (0.840mg/mL) la afinidad de la enzima por el bagazo para hidrolizarlo es baja lo
que no permite obtener grandes cantidades de producto como se espera en un proceso
cataltico.
Un modelo matemtico tipo Michaelis-Menten con inhibicin permiti simular los datos
experimentales. Estos resultados podran ser usados para el diseo de reactores donde
se lleven a cabo procesos de obtencin enzimtica de jarabes glucosados.

De este trabajo se puede concluir que la enzima DGA es mucho ms eficiente que la
enzima AMG 300L para la sacarificacin de maltodextrinas, dado que con la primera se
alcanzan altas velocidades de conversin con rendimientos superiores al 95%.

Para obtener una alta velocidad de reaccin y produccin de azucares reductores se

necesita una concentracin de sustrato de 130,2 g/L y 0,55 AGU/mL de enzima.

Este trabajo, adems de demostrar las bondades de la enzima DGA, permiti optimizar
el proceso de hidrlisis, identificando los niveles de los factores ms relevantes del
proceso, como son la carga de sustrato y de enzima, entre los cuales existe una relacin
que involucra obtener una alta velocidad de reaccin y una mxima conversin,
minimizando as el efecto de inhibicin identificado en el proceso.

La velocidad de la reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la

enzima a cualquier concentracin de substrato. Por ejemplo, si la concentracin de
enzima es disminuida a la mitad, la velocidad inicial de la reaccin (v0) es reducida
tambin a la mitad de la original.
BIBLIOGRAFIA

Nelson, David; y Michael, Cox. (2006). Lehninger: Principios de Bioqumica. Cuarta

Edicin. Editorial Omega. Barcelona, Espaa. Pginas: 202-212.
Horton, Robert; Laurence, Moran; Gray, Scrimgear; Mark, Perry; y David, Rawn. (2008).
Principios de Bioqumica. Cuarta Edicin. Pearson Educacin. Naucalpn de Jurez,
Mxico. Captulo 5.
Acevedo, Diofanor; Granados, Clemente; y Guerrero, Eliana M. (2014). Cintica
Enzimtica del Bagazo de Caa para la Produccin de Glucosa Utilizando la Enzima
Trichoderma Iongibrachiatum. Cartagena, Bolvar-Colombia. Informacin tecnolgica,
25(5), 65-72. https://dx.doi.org/10.4067/S0718-07642014000500010