Enzimas No Laboratorio Clinico

ENZIMAS NO LABORATRIO
CLNICO
APLICAES DIAGNSTICAS
Prof. Homero Jackson de Jesus Lopes

Assessor Tcnico-Cientfico da Gold Analisa Diagnstica Ltda
Belo Horizonte MG
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NDICE
Pgina
Introduo 2
Atividade Enzimtica:
1.Determinao da Atividade Enzimtica 2
2.Metodologia empregadas para a determinao das atividades 2-4
enzimticas
Principais Causas de Erro nas Determinaes Enzimticas:
1.Erros na coleta da amostra 5
2. Erros na conservao da amostra 5
3. Tabela 1: Perda mdia da atividade enzimtica durante a conservao 6
do soro
4. Erros nas determinaes da atividade enzimtica
6
5. Erros na avaliao dos resultados
7
Tabela 2: Principais Enzimas de Interesse Clnico 8
Enzimas nas Doenas Pancreticas
1. Amilase 9-10
2. Lipase 11
Enzimas nas Doenas Hepticas:
1.Alanina Aminotransferase (ALT) 12-13
2. Aspartato Aminotransferase (AST) 13-15
3. Fosfatase Alcalina (ALP) 15-16
4. Gama Glutamiltransferase (Gama GT) 16-17
5.Colinesterase (CHE) 17-18
Enzimas nas Doenas Cardacas:
1 .Creatinina Cinase (CK) 18-20
2 .Desidrogenase Lctica (LDH) 20-22
3. Aspartato Aminotransferase (AST) 22
Marcadores Bioqumicos do Infarto do Miocrdio:
1.Marcadores Clssicos 23-24
2. Novos Marcadores 24-25
Enzimas em Doenas da Prstata:
1.Fosfatase cida 25-27
2. Antgeno Prosttico Especfico (PSA) 27-28
Bibliografia 28
1
INTRODUO
As enzimas so catalisadores proteicos responsveis pela maioria das reaes qumicas do
organismo, sendo encontradas em todos os tecidos. De uma maneira geral, a concentrao
de enzimas no soro baixa, podendo aumentar significativamente aps uma leso celular
orgnica. Na maioria dos estados patolgicos em que ocorre elevao da concentrao de
enzimas, a causa o aumento da permeabilidade da membrana por uma leso ou necrose
celular com as enzimas difundindo-se para os capilares e atingindo a corrente circulatria.
Ocasionalmente, os nveis aumentados de enzimas no soro so provocados por aumento na
sntese enzimtica intracelular com consequente difuso dessas enzimas para a circulao
sangunea.
A determinao de enzimas no Laboratrio Clnico tem uma grande aplicao para o
diagnstico, prognstico e acompanhamento da terapia de diversas patologias,
especialmente no caso das doenas hepticas, cardacas, sseas, musculares e
pancreticas. Em alguns processos patolgicos, as determinaes enzimticas contribuem
significativamente para estabelecer a causa, localizao e grau de extenso da leso, para
fazer o controle do tratamento e ainda para determinar a cura. Assim sendo, as dosagens
enzimticas so extremamente importantes para a compreenso e controle de inmeras
doenas. Na atualidade, cerca de 10 enzimas so dosadas nos laboratrios clnicos,
compreendendo, aproximadamente, 20 a 25% do total de exames realizados.
Os objetivos deste manual so:
estudar a atividade enzimtica, sua determinao e unidades empregadas.
descrever as principais causas de erro nas determinaes enzimticas.
descrever as caractersticas das principais enzimas dosadas no laboratrio clnico e
suas aplicaes no diagnstico de patologias.
apresentar os mtodos de dosagem mais empregados para essas enzimas e os
respectivos valores de referncia.
ATIVIDADE ENZIMTICA
Neste manual no iremos aprofundar no estudo das propriedades, modo de ao e cintica
enzimtica, que podem ser melhor estudadas nos livros de bioqumica e em textos
especficos sobre enzimologia.
Quando uma enzima age sobre um substrato, a primeira fase compreende a formao do
complexo enzima-substrato (ES). A enzima liga-se ao substrato em um local especfico,
atravs do seu stio ativo. Durante algum tempo, a enzima age sobre o substrato formando o
produto e sendo liberada intacta para poder unir-se a outra molcula de substrato. A ao
enzimtica pode ser assim esquematizada:
Enzima + Substrato Complexo E-S Produto + Enzima
A velocidade de uma reao enzimtica depende de uma variedade de fatores como:
concentrao da enzima, concentrao do substrato, temperatura da reao, pH do meio,
fora inica e presena de ativadores e inibidores. H enzimas que necessitam da ao de
um coenzima (cofator) para poderem atuar sobre o substrato. Geralmente, os coenzimas so
molculas pequenas, no proteicas, termo-estveis, derivados principalmente de vitaminas
B1 e B6, dos nucleotdeos NADH e NADPH, etc. As reaes enzimticas requerendo NADH e
NADPH como coenzimas so bastante empregadas em anlises clnicas.
Determinao da Atividade Enzimtica

De uma maneira geral, as enzimas so medidas atravs de suas atividades catalticas e os
resultados de tais determinaes so expressos em termos da quantidade de atividade
presente em determinado volume ou massa da amostra. A unidade de atividade a medida
da velocidade em que a reao se realiza, por exemplo, a quantidade de substrato
consumido ou a quantidade de produto formado em uma unidade de tempo.
De acordo com a Comisso de Enzimas (EC) da Unio Internacional de Bioqumica (IUB),
uma unidade de uma enzima - Unidade Internacional (U) - a quantidade de enzima que
catalisa a transformao de 1 micromol de substrato por minuto, nas condies padro por
ela recomendadas. Portanto, a atividade cataltica no se refere quantidade ou ao peso da
enzima, porque ainda no possvel purificar a grande maioria das enzimas. A atividade
especfica entendida como sendo a atividade por unidade de peso da protena.
2
Nos lquidos biolgicos, as atividades catalticas so, em geral, referidas para 1mL ou para 1
litro. Por essa razo so expressas em mU/mL ou U/L, que numericamente so iguais
(mU/mL = U/L). Atualmente, deve-se usar a designao internacional, ou seja, U/L ou
simplesmente U.
1 Unidade Internacional (U) = 1 micromol/minuto/litro = mol/min/L
Mais recentemente, a Unio Internacional de Bioqumica (IUB) e a Unio Internacional de

Qumica Pura e Aplicada (IUPAC) tm recomendado que a atividade cataltica deve ser
expressa em mol/s, dando nova unidade o nome de Katal. Assim a dosagem enzimtica
deveria ser expressa em katal por litro (kat/L). A justificativa baseada no Sistema
Internacional (SI) de Medidas que preconiza o mol como unidade do substrato transformado
e o segundo como unidade de tempo. Entretanto, essa recomendao no tem sido adotada
universalmente.
1 kat = 1 mol/segundo/litro = 1 mol/s/L
Na prtica, utiliza-se o microkat (kat = 10-6 kat) ou o nanokat (nkat = 10-9 kat)
Transformao de Unidade Internacional (U) em Unidade Cataltica (Kat)

1 U = 1 mol/min/L e 1 Kat = 1 mol/s/L 1 mol = 10-6 mol e 1 min = 60 s
Assim: 1 U = 10-6 mol/60s = 0,01667 x 10-6 mol/s = 16,67 x 10-9 mol/s = 16,67 nmol/s
= 16,67 nKat
1 U = 16,67 nKat 1 nKat = 0,06 U
Anteriormente, quando se desenvolvia uma metodologia para as dosagens enzimticas, as

unidades eram definidas de acordo com o idealizador do mtodo baseado nas condies
experimentais, sem obedecer a um critrio pr-estabelecido. Essas unidades esto em
desuso hoje e devem ser transformadas, quando possvel, em Unidade Internacional (U) ou
em Unidade Cataltica (Kat).
Metodologias empregadas para a determinao

das atividades enzimticas
1-Metodos que analisam o consumo do substrato
Incluem os mtodos que determinam a quantidade de substrato no consumido atravs de
uma reao adequada. Como exemplo dessa metodologia temos a dosagem da amilase pelo
Mtodo de Caraway em que o substrato de amido empregado no sistema hidrolisado pela
amilase, havendo formao de glicose, maltose, dextrinas. A poro do amido no
hidrolisado na reao ser complexado pela adio da soluo de iodo, originando uma
colorao azul, que analisada fotometricamente em comparao com um controle de
substrato.
Amilase
Amido
gli cos e + maltose + dextrinas + amido ( substrato no hidrolisado )
Amido no hidrolisado + iodo complexo coloidal azul
2-Metodos que analisam o produto formado

Incluem os mtodos que determinam a quantidade de produto formado atravs de uma
reao apropriada. Como exemplos dessa metodologia, dois tipos de sistema so utilizados
no laboratrio clnico:
Mtodos em que o produto formado na reao j um composto corado
Dosagem da fosfatase alcalina pelo mtodo do paranitrofenol em que o substrato de p-
nitrofenilfosfato hidrolisado pela fosfatase alcalina, liberando p-nitrofenol (amarelo), que
analisado fotometricamente atravs da medida da velocidade da reao (A/min).
Fosfatase Alcalina
p Nitrofenilfosfato
p Nitrofenol ( amarelo ) + Fosfato inorgnico
Outros exemplos desse tipo de sistema so as dosagens da gamaglutamil transferase (GGT)

pelo mtodo de Szass, da amilase pelo mtodo do cloronitrofenol, etc.
3
Mtodos em que o produto formado tem que ser transformado em composto corado
Dosagem da fosfatase alcalina pelo mtodo de Roy em que o substrato de timolftalena
monofosfato hidrolisado pela enzima, liberando a timolftalena que aps a adio de um
tampo alcalino, adquire colorao azul. O composto azul formado comparado
fotometricamente com um padro de timolftalena.
FosfataseAlcalina
Timolftalena monofosfato Timolftalena + Fosfato Inorgnico
Timolftalena + Tampo Alcalino Colorao Azul
Outros exemplos desse tipo de sistema so as dosagens da fosfatase cida pelo mtodo de
Roy, das transaminases pelo mtodo de Reitman-Frankel, etc.
3- Mtodos que analisam a variao de absoro do coenzima que participa da reao

enzimtica
So metodologias baseadas no princpio de que as formas reduzidas dos coenzimas NADH
e NADPH absorvem energia na faixa ultravioleta do espectro eletromagntico radiante,
enquanto que as formas oxidadas NAD+ e NADP+ no apresentam essa absoro. Deste
modo, o sistema de dosagem acompanha a transformao da forma oxidada para a reduzida
ou vice-versa do coenzima participante da reao. Como a reao qumica envolvida
estequiomtrica, para cada mol de substrato consumido um mol de coenzima ser oxidado
ou reduzido. Assim, a diminuio ou o aumento da absorbncia medido por minuto (A/min)
diretamente proporcional atividade da enzima. Muitos so os sistemas de dosagens
enzimticas que empregam esse princpio e dentre eles temos as dosagens da LDH-UV, CK-
UV, AST-UV, ALT-UV, etc.
Ex: Dosagem da desidrogenase lctica (LDH) pelo mtodo do ultravioleta:

+ LDH
cido Lctico + NAD cido Pirvico + NADH + H +
O substrato de cido lctico transformado (oxidado) em cido pirvico, enquanto que o

coenzima NAD+ reduzido para NADH. O sistema mede o aumento da absoro no
ultravioleta (A/min) quando o NAD+ se transforma em NADH.
A dosagem da LDH pode tambm ser realizada empregando como substrato o cido pirvico
em que o sistema mede a diminuio da absoro no ultravioleta (A/min) quando o NADH
se transforma em NAD+. O cido pirvico transformado (reduzido) em cido lctico,
enquanto o coenzima NADH oxidado para NAD+.
LDH
cido Pirvico + NADH + H + cido Lctico + NAD +
4-Mtodos Otimizados: so mtodos propostos pela Associao Alem para a Qumica

Clnica com o objetivo de se obter resultados comparveis nas determinaes enzimticas.
Apresentam uma sensibilidade elevada e excelente reprodutibilidade. As condies da
reao como temperatura, tipo e concentrao do tampo, pH das solues, concentrao
do substrato, concentrao do coenzima, presena de cofatores e efetores so todas
padronizadas.
5-Outros mtodos que podem ser utilizados nas dosagens enzimticas

Diversas metodologias baseadas em imunoensaios como radioimunoensaio,
enzimaimunoensaio, fluorescncia, luminescncia, quimioluminescncia, eletroforese,
contraimunoeletroforese e eletrofocalizao podem tambm ser aplicados na determinao
das enzimas e isoenzimas.
4
PRINCIPAIS CAUSAS DE ERRO NAS DETERMINAES ENZIMTICAS
A partir da coleta da amostra biolgica at a liberao do resultado final de uma dosagem
enzimtica, vrios erros podem ser inseridos. Em vista disso, muito importante o
conhecimento das causas de erro e das maneiras de evit-los a fim de assegurar a qualidade
do resultado.
Os principais erros nas dosagens enzimticas so:
Erros na coleta da amostra

Para a obteno de resultado confivel em uma determinao de qualquer enzima,
necessrio que a coleta, manuseio, armazenamento e transporte da amostra biolgica sejam
feitos de acordo com as recomendaes especficas para cada dosagem, uma vez que so
vrios os fatores que podem alterar as atividades enzimticas:
1. Uso de Anticoagulantes
O soro o material de escolha para as dosagens enzimticas no sangue.
O uso de anticoagulantes pode provocar erros de inibio. Exs: 1) oxalato, citrato e EDTA
inibem a amilase; 2) o oxalato inibe as transaminases; 3) citrato e oxalato inibem a GT; 4) a
heparina inibe a LDH.
2. Hemlise
No se deve utilizar uma amostra hemolisada para as dosagens enzimticas porque a lise
das hemcias contaminar o soro ou plasma com elementos intracelulares que podero
causar alterao nas atividades enzimticas. Exs: 1) liberao de fosfatase cida e LDH que
existem em altas concentraes nas hemcias; 1) inibio da lipase pela hemoglobina.
3. Estase Venosa
Uma estase venosa demorada (garroteamento demorado e/ou muito apertado) provoca
hipxia, falta de oxignio, aumentando a permeabilidade das membranas celulares com
liberao do contedo celular para o soro ou plasma. Ex: liberao de transaminases, LDH,
fosfatase cida.
4. Coagulao
A separao do soro ou plasma deve ser feita o mais rpido possvel porque a coagulao
provoca desintegrao de hemcias e plaquetas, podendo contaminar a amostra com suas
enzimas.
5. Lipemia
Soro ou plasma muito turvos (lipemia intensa) podem provocar turbidez na reao
enzimtica, e consequentemente, um erro fotomtrico.
Erros na conservao da amostra

As dosagens enzimticas devem ser realizadas o mais breve possvel para evitar perdas da
atividade. Quando for necessrio uma conservao, ela deve ser feita por um perodo de
tempo curto, e geralmente, a 4C. A TABELA 1 mostra a perda mdia da atividade de
algumas enzimas quando o soro conservado a 4 e a 25C. O congelamento da amostra
deve ser evitado porque a cristalizao da gua do soro causa uma alterao irreversvel
das ligaes de hidrognio das enzimas, e consequentemente, a sua desnaturao.
Enquanto algumas enzimas como a fosfatase alcalina e a GT so relativamente estveis no
soro, outras como a fosfatase cida perdem a atividade em poucas horas, devido
alcalinizao do soro pela perda de CO2 . Em vista disto, o soro para a dosagem da
fosfatase cida deve ser acidificado logo aps a coleta, adicionando-se a cada mL de soro
0,02 mL (20L) de tampo acetato 5 M pH 5,0 ou 0,01 mL (10L) de cido actico 20% v/v.
O envelhecimento do soro causa tambm protelise com perda de estruturas tercirias e
bloqueamento dos grupos -SH das enzimas, com consequente perda da atividade.
5
TABELA 1
PERDA MDIA DA ATIVIDADE ENZIMTICA DURANTE A CONSERVAO DO SORO
Enzimas Temperatura 1 dia 2 dias 3 dias 5 dias 7 dias
1-AST/GOT 4C 2% 5% 8% 10% 12%
25C 2% 6% 10% 11% 13%
2-ALT/GPT 4C 2% 5% 10% 14% 20%
25C 8% 12% 17% 19% 39%
3-Amilase 4C 0 0 0 0 0
25C 0 0 0 0 0
4-Lipase 4C 0 0 0 0 0
25C 0 0 0 0 0
5-CK* 4C 0 0 2% - 2%
25C 2% - 7% - 19%
6-CHE 4C 0 0 0 0 0
25C 0 0 0 0 0
7-F. cida** 4C 0 0 0 0 0
25C 0 0 0 0 0
8-F. Alcalina 4C 0 0 0 0 0
25C 0 2% 3% 6% 10%
9--GT 4C 0 0 0 0 0
25C 0 0 0 0 0
10-LDH 4C 0 4% 8% 9% 12%
25C 0 1% 2% 10% 15%
11--HBDH 4C 0 0 0 3% 5%
25C 0 0 0 0 5%
12-GLDH 4C 0 2% 5% 13% 26%
25C 10% 12% 15% 24% 30%
13-Aldolase 4C 0 0 0 8% 12%
25C 0 0 0 15% 20%
14-LAP 4C 0 0 0 0 0
25C 0 0 0 0 0
* Somente com reativao por N-acetil-cistena (NAC)

** Somente em soro acidificado (pH = 5,5-6,0)
Referncia: Schmidt, E. e Schmidt, F.W.: Kleine Enzym-Fibel, Boehringer Mannheim GmbH, 1966 e
1976.
Erros nas determinaes da atividade enzimtica

Em toda determinao enzimtica muito importante ter conhecimento dos fatores que
afetam a velocidade da reao, a saber:
1. Tempo de reao estipulado pela metodologia: o tempo timo da reao
caracterstico para cada ensaio e deve ser rigorosamente obedecido pelo analista.
2. pH timo da reao: cada enzima apresenta um pH timo para a sua ao cataltica, o

qual facilita a interao qumica entre a enzima e o substrato para a formao do
complexo E-S. As reaes enzimticas tm que ser realizadas sob rigoroso controle do
pH estabelecido pela metodologia
3. Temperatura da reao: a formao do complexo E-S exige uma quantidade de energia

em forma de calor para se completar. A temperatura tima para a maioria das enzimas
oscila em torno de 37C. O analista deve obedecer a temperatura estipulada na
metodologia.
4. Concentrao do substrato: nas reaes enzimticas, a velocidade da reao aumenta
6
com o aumento da concentrao de substrato, at um certo ponto em que toda a enzima
presente encontra-se combinada com o substrato, na forma do complexo E-S. Neste
ponto, temos a velocidade mxima da reao (Vmax) e a quantidade de substrato
presente no influi mais sobre ela. Em enzimologia deve-se trabalhar nessas condies,
isto , em reaes de ordem zero.
5. Concentrao da enzima: dentro de certos limites, a velocidade da reao enzimtica

proporcional concentrao da enzima. Estando a enzima em altas concentraes h
perda da linearidade do mtodo e a reao enzimtica ir se processar fora das
condies ideais. Quando a enzima encontra-se em alta concentrao (ex. ALT na
hepatite virtica aguda) haver uma transformao rpida do substrato, em tempo
inferior ao estabelecido pela metodologia. Nesta situao, o substrato ser totalmente
consumido e ainda ficar enzima sem se complexar por falta de substrato. Este fato deve
ser observado pelo analista atravs da linearidade indicada para o mtodo. Se, aps a
reao enzimtica, for notada uma ultrapassagem da linearidade metodolgica deve-se
fazer nova dosagem utilizando o material biolgico diludo para que seja mantida a
condio de reao de ordem zero.
6. Estabilidade dos reagentes: nunca trabalhar com reagentes apresentando vencimento

de validade e sempre obedecer os cuidados para a conservao dos mesmos
7. Pipetagem: o analista deve ser bastante rigoroso com a pipetagem dos reagentes e
amostras biolgicas.
8. Limpeza da vidraria: na anlise, sempre trabalhar com material rigorosamente limpo.
Erros na avaliao dos resultados

Como a meta de todo Laboratrio Clnico fornecer resultados corretos e confiveis, nas
determinaes enzimticas necessrio tambm fazer o controle da qualidade das anlises.
Para assegurar a preciso e exatido nas dosagens enzimticas necessrio que o analista
tenha conhecimento da cintica, dos fatores interferentes e das causas de erro.
Um programa de controle da qualidade das dosagens enzimticas deve incluir:
1. Ensaios com reao de cintica de ordem zero.
2. Estudos de proporcionalidade com aumento do volume de amostra.
3. Uso de soro controle de referncia dos programas nacionais de controle de
qualidade ou adquirido no comrcio ou ainda pool de soro preparado no prprio
laboratrio.
4. Dosagens em replicatas para avaliar a preciso dos ensaios.
7
PRINCIPAIS ENZIMAS DE INTERESSE CLNICO
As principais enzimas determinadas no Laboratrio Clnico com finalidades diagnsticas so
apresentadas na TABELA 2, incluindo nomes e siglas comumente utilizadas, nmero de
cdigo da Comisso de Enzimas (EC) e objetivos diagnsticos.
TABELA 2
NOMES E SIGLAS EMPREGADAS CDIGO OBJETIVOS
EC N DIAGNSTICOS
1-Amilase (AMS ) 3.2.1.1 Pancreatite aguda
2-Aldolase (ALD) 4.1.2.13 Doenas musculares
3-Alanina aminotransferase (ALT), 2.6.1.2 Doenas hepticas
Transaminase glutmico-pirvica
(TGP/GPT)
4-Aspartato aminotransferase (AST), 2.6.1.1 Infarto do miocrdio,
Transaminase glutmico-oxalactica
doenas hepticas e
(TGO/GOT)
doenas musculares
5-Colinesterase(CHE), 3.1.1.8 Exposio a inseticidas
organofosforados
Pseudocolinesterase(sCHE)
6-CreatinaCINASE(CK), 2.7.3.2 Infarto do miocrdio e
Creatina-fosfotransferase (CPK) doenas musculares
7-Desidrogenase lctica (LDH), 1.1.1.27 Infarto do miocrdio,
Lactato desidrogenase (LD) doenas hepticas e
doenas musculares
8-Fosfatase cida (ACP/FAC/PACP) 3.1.3.2 Cncer de prstata com
metstase
9-Fosfatase alcalina (ALP/FALC) 3.1.3.1 Doenas hepticas e
doenas sseas
10--Glutamiltransferase (GGT), 2.3.2.2 Doenas hepticas
(colestase)
-Glutamil transpeptidase (GGTP)
11-5Nucleotidase (5NT) 3.1.3.5 Doenas hepticas
12-Lipase (LPS) 3.1.1.3 Pancreatite aguda
IUB = UNIO INTERNACIONAL DE BIOQUMICA

EC = COMISSO DE ENZIMAS
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ENZIMAS NAS DOENAS PANCRETICAS
1. AMILASE
Sigla utilizada: AMS
Nome sistemtico (IUB): -1,4-Glucan-glucano hidrolase
Nome comum: Amilase
pH timo: 7,0 0,1
A amilase uma enzima hidrolase normalmente secretada pelas clulas acinares do
pncreas para o ducto pancretico e deste para o duodeno. No intestino, a amilase hidrolisa
os carbohidratos em seus componentes, os acares. Havendo uma leso das clulas
acinares como na pancreatite, ou ocorrendo uma obstruo no fluxo do ducto pancretico
como no carcinoma pancretico, a amilase fluir para o sistema linftico intrapancretico e
peritoneo e, por drenagem, atingir os vasos sanguneos em concentrao elevada. A
amilase alcanar um aumento anormal dentro de 12 a 24 horas aps o incio da doena,
sendo rapidamente clareada pelos rins, atingindo os nveis normais em 48 a 72 horas.
Nos casos de pancreatite persistente, obstruo dos ductos pancreticos e pseudocisto
pancretico, os nveis de amilase no soro estaro persistentemente aumentados.
Muito embora a amilase seja um teste sensvel para diagnstico de doenas pancreticas,
ela no especfica. Outras doenas no pancreticas podem elevar os nveis de amilase no
soro como na perfurao do intestino, na lcera pptica penetrante para o pncreas, na
obstruo duodenal e nas parotidites (caxumba) devido amilase salivar.
A cetoacidose diabtica e a gravidez ectpica so tambm associadas com nveis altos de
amilase no soro.
Nos casos de doenas crnicas do pncreas como na pancreatite crnica, geralmente os
nveis de amilase no so altos devido destruio das clulas acinares responsveis pela
produo da enzima.
Como os rins clareiam rapidamente a amilase sangunea, as doenas pancreticas
provocaro um consequente aumento da amilase urinria. Enquanto os nveis de amilase
srica regridem rapidamente para os valores de referncia (1 a 2 dias), os nveis de amilase
na urina permanecem elevados por mais tempo (5 a 7 dias) aps o incio dos sintomas. Este
dado muito importante para o diagnstico de pancreatite em pacientes cujos sintomas
permanecem por 3 dias ou mais.
A determinao da amilase na urina, assim como a dosagem no soro, tambm no
especfica para as doenas pancreticas. Outras doenas, tais como parotidite (caxumba),
colecistite, perfurao de intestino, lcera pptica penetrante, gravidez ectpica e infarto
renal podem apresentar amilase urinria elevada. Contudo, nas pancreatites a taxa de
amilase na urina estar sempre elevada. Entretanto, para um diagnstico mais seguro de
pancreatite importante, juntamente com a dosagem da amilase srica e urinria, determinar
a Relao entre o Clareamento da Amilase e o Clareamento da Creatinina. Quando a
Relao Clareamento Amilase/Clareamento Creatinina igual a 5% ou mais, o diagnstico
de pancreatite pode ser feito com segurana. Quando a Relao menor do que 5% em um
paciente apresentando nveis elevados de amilase no soro e na urina , indica uma condio
patolgica no pancretica (macroamilasemia, perfurao de intestino, etc).
Relao Clareamento de Amilase /Clareamento de Creatinina

Determinar a atividade da amilase e a concentrao da creatinina nas amostras de soro e
urina, e aplicar os resultados na seguinte frmula:
AmU ( U / L ) x CrS ( mg / dL )
Re lao% x 100
AmS ( U / L ) x CrU ( mg / dL )
AmU = Amilase na Urina (Em U/L ou U/dL) AmS = Amilase no Soro (Em U/L ou U/dL)
CrS = Creatinina no Soro (Em mg/dL) CrU = Creatinina na Urina (Em mg/dL)
Valores elevados
As patologias que mais comumente apresentam valores altos de amilase so: pancreatite
aguda primria, pancreatite crnica recidivante, lcera pptica perfurada, perfurao de
intestino, parotidite (caxumba), cetoacidose diabtica, obstruo duodenal, colecistite aguda,
gravidez ectpica e insuficincia renal.
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Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido com heparina. No usar plasma colhido com citrato,
EDTA ou oxalato porque produzem resultados falsamente elevados.
A atividade enzimtica estvel 7 dias entre 15-25C e 2 meses entre 2-8C.
No usar amostras com sinais de contaminao bacteriana.
Urina. A amostra a ser utilizada na dosagem pode ser uma urina colhida no intervalo de 2
horas, ou de 24 horas, ou ento, de acordo com a solicitao mdica. Quando se determina
a amilase na amostra de uma mico, deve-se tambm determinar a creatinina na mesma
amostra. O resultado dever ser reportado como Relao Amilase/Creatinina (U/g), com o
objetivo de compensar as variaes da atividade da amilase em amostras obtidas em cada
mico. As amostras de urina devem ser armazenadas entre 2-8C. No adicionar
preservativo.
A dosagem de amilase pode tambm ser feita em amostras de lquidos asctico, duodenal ou
pleural.
Relao Amilase/Creatinina na Amostra de Urina
Amilase ( U / L ) x 100
Re lao Amilase / Creatinina ( U / g ) =
Creatinina ( mg / dL )
Fatores interferentes
Drogas que podem provocar um aumento na amilase srica e urinria so: cido
aminosaliclico, analgsicos narcticos, anticoncepcionais orais, aspirina, azatioprina,
corticosteroides, etanol, furosemida, glicocorticoides, metildopa, meios de contraste contendo
iodo, e predinisona.
Drogas que podem diminuir os nveis de amilase no soro e na urina so: citratos, glicose e
oxalatos.
Mtodos de Dosagem
1. Metodologia Amiloclstica Cintica de Tempo Fixo (Mtodo de Caraway mod.)
ANALISA Cat. 211
Fundamento Qumico
A amilase hidrolisa o amido liberando molculas de acares e dextrina, e com a adio de
iodo ocorre a formao de cor azul com o amido no hidrolisado. A atividade da amilase
inversamente proporcional intensidade de cor azul e calculada em comparao com um
controle de substrato.
Valores de Referncia
Soro: 60 a 160 U/dL
Urina: 50 a 140 U/h
2. Metodologia Cintica Colorimtrica (Mtodo do Cloronitrofenol )

ANALISA Cat. 225
Fundamento qumico
A -amilase hidrolisa o substrato 2-cloro-4-nitrofenil--D-maltotriose (CNPG3), liberando 2-
cloro-4-nitrofenol (CNP) e formando 2-cloro-4-nitrofenil--D-maltoside (CNPG2), maltotriose
(G3) e glicose (G). A velocidade de formao do 2-cloro-4-nitrofenol medida
fotometricamente em 405 nm, possibilitando uma determinao direta da atividade da
amilase na amostra analisada.
Soro: 25 a 125 U/L
Urina: at 30 U/h
Relao Amilase Urinria/Creatinina Urinria: at 400 U/g
Relao Depurao Amilase /Depurao Creatinina: 1,0 a 4,0%
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2. LIPASE
Sigla utilizada: LPS
Nome sistemtico (IUB): Triacilglicerol acilhidrolase
Nome comum: Lipase
pH timo: 3,5 a 7,0
A lipase uma enzima secretada pelo pncreas para o duodeno para hidrlise dos
triglicrides em seus constituintes, os cidos graxos. A lipase excretada por filtrao
atravs dos glomrulos renais. Aps a filtrao, a maior parte da enzima reabsorvida pelos
tbulos proximais dos rins e catabolizada em outro local. Assim como a amilase, a lipase
aparece na corrente sangunea aps uma leso das clulas acinares pancreticas.
A determinao da lipase srica considerada por muitos como um teste muito sensvel e
especfico para a pancreatite aguda, especialmente quando se emprega mtodos que
utilizam um cofator da lipase denominado colipase. O consenso na literatura, de um modo
geral, de que a dosagem da lipase provavelmente um teste cerca de 10% menos
sensvel do que a amilase srica, porm cerca de 20 a 30% mais especfico.
Na pancreatite aguda, os nveis de lipase normalmente acompanham os da amilase. Os
nveis de lipase geralmente aumentam um pouco mais tarde do que os da amilase,
comeando dentro de 3-6 horas, atingindo o pico em 24-48 horas e, na maioria dos casos,
retornam para a faixa de referncia em 7-10 dias.
Os valores de lipase na pancreatite podem alcanar de 5-10 vezes o limite superior de
referncia, enquanto que nas outras doenas os nveis de lipase so sempre inferiores a 3
vezes os valores de referncia.
Como a excreo da lipase feita atravs dos rins, na insuficincia renal de uma maneira
geral os nveis de lipase so altos. Infarto intestinal, colangite aguda e obstruo do intestino
delgado so outras doenas que podem apresentar nveis altos de lipase srica.
Valores elevados
As patologias que mais comumente apresentam valores elevados de lipase so: pancreatite
aguda primria, pancreatite crnica recidivante, colecistite aguda, insuficincia renal,
obstruo intestinal e infarto intestinal.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro.
A atividade enzimtica estvel 7 dias entre 15-25C e 3 semanas entre 2-8C.
Drogas que podem provocar um aumento na lipase srica so: betanecol, colinrgicos,
codena, indometacina, meperidina, metacolina, e morfina.
Os ons clcio podem diminuir os nveis de lipase no soro e na urina.
Mtodos de Dosagem
H dois mtodos gerais para a dosagem da lipase: titulomtrico e turbidimtrico. Nos 2
mtodos, o substrato utilizado um triglicerdeo (triolena) ou uma mistura de triglicerdeos
(leo de oliva). Este substrato hidrolisado para diglicerdeos, monoglicerdeos e cidos
graxos livres.
1. Mtodo Titulomtrico
Fundamento Qumico
Os cidos graxos formados na hidrlise do substrato se dissociam em ons hidrognio que
so titulados diretamente.
2. Mtodo Turbidimtrico Cintico no Ultravioleta: o mtodo mais empregado na rotina
laboratorial.
Fundamento Qumico
O substrato de emulso de triolena tamponado e estabilizado, na presena de ativadores e
de colipase hidrolisado pela lipase. Mede-se a velocidade da reao de hidrlise que
proporcional atividade da lipase na amostra. A velocidade da reao determinada atravs
da diminuio da turbidez da emulso (substrato) no ultravioleta.
Soro: at 200 U/L (25 ou 30C)
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ENZIMAS NAS DOENAS HEPTICAS
1. ALANINA AMINOTRANSFERASE
Siglas: ALT - GPT - TGP
Nome sistemtico (IUB)/Nome comum: Alanina aminotransferase
Nome antigo: Transaminase glutmico-pirvica
pH timo: 7,4
A alanina aminotransferase (ALT) ou transaminase glutmico-pirvica (GPT/TGP) uma
enzima encontrada predominantemente no fgado, em concentrao moderada nos rins e
em menores quantidades no corao e nos msculos esquelticos. Na clula heptica, a
ALT localiza-se no citoplasma (90%) e na mitocndria (10%). Qualquer leso (injria) tissular
ou doena afetando o parnquima heptico liberar uma maior quantidade da enzima para a
corrente sangunea, elevando os nveis sricos da ALT. Em geral, as causas mais comuns
de elevao dos valores de ALT no sangue ocorrem por disfuno heptica. Desta maneira,
a ALT alm de ser sensvel tambm bastante especfica para o diagnstico de doena
hepatocelular.
Convm ressaltar que uma leso tecidual nos rins, corao e nos msculos esquelticos
tambm provocam uma maior liberao de ALT para a corrente sangunea, elevando seus
nveis sricos. Assim, diante de um quadro clnico de miosite ou de uma rabdomilise grave,
os valores de ALT podem elevar-se tanto quanto na hepatite virtica aguda.
Na hepatite virtica, na mononucleose infecciosa e na leso hepatocelular induzida por
drogas o grau e a frequncia da elevao dos nveis de ALT so praticamente os mesmos da
AST. J nos casos de cirrose ativa, hepatopatia alcolica aguda, congesto heptica
passiva, obstruo dos ductos biliares extra-hepticos e tumor metasttico do fgado, os
nveis de ALT encontram-se frequentemente menos elevados do que os da AST.
A Relao AST/ALT (ndice DeRitis) tem sido empregado algumas vezes para auxiliar no
diagnstico diferencial das hepatopatias. Na hepatite virtica aguda, a Relao AST/ALT
sempre menor do que 1, enquanto que nas outras doenas hepatocelulares (cirrose,
hepatites crnicas,etc) sempre maior que 1.
Valores elevados
Os valores elevados de ALT so mais comumente verificados nas seguintes patologias:
hepatites, cirrose, necrose heptica, colestase, isquemia heptica, tumor heptico, drogas
hepatotxicas, ictercia obstrutiva, miosite e pancreatite.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido em EDTA ou heparina. No utilizar amostras
hemolisadas.
A atividade enzimtica na amostra estvel por 4 dias entre 2 e 8C e por 2 semanas
quando conservada a 10C negativos.
Injees intramusculares anteriores ao teste podem elevar os nveis de ALT.
Algumas drogas que podem elevar os nveis de ALT so: anticoncepcionais orais,
acetaminofen, allopurinol, cido aminosaliclico, cido nalidxico, ampicilina, azatioprina,
carbamazepina, clofibrato, cefalosporinas, codena, clordiazepxido, clorpropamida,
cloxacilina, dicumarol, fenilbutazona, fenotiazinas, fenitona, indometacina, isoniazida,
metildopa, nitrofurantona, oxacilinas, procainamida, propoxifeno, propanolol, quinidina,
salicilatos, tetraciclinas e verapamil.
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Mtodos de Dosagem
1. Metodologia Cintica no Ultravioleta Otimizada GOLD ANALISA Cat. 122
Fundamento Qumico
A alanina aminotransferase (ALT/GPT/TGP) catalisa a transferncia do grupo amina da
alanina para o cetoglutarato com formao de glutamato e piruvato. O piruvato reduzido a
lactato por ao da lactato desidrogenase (LDH), enquanto que a coenzima NADH oxidada
a NAD+. A atividade enzimtica da ALT na amostra calculada com base na reduo da
absorbncia em 340 ou 365 nm, quando o NADH se transforma em NAD+.
Soro ou plasma
At 41 U/L na temperatura de 37C
2. Metodologia Cintica Colorimtrica de Tempo Fixo (Mtodo de Reitman e Frankel)

ANALISA Cat. 253
Fundamento Qumico
A alanina aminotransferase (ALT/GPT/TGP) catalisa a transferncia do grupo amina da
alanina para o cetoglutarato com formao de glutamato e piruvato. O piruvato formado
reage com a 2-4-dinitrofenilhidrazina formando a hidrazona que adquire colorao mxima
pela adio de hidrxido de sdio. A intensidade de colorao proporcional atividade
enzimtica da amostra.
Soro ou plasma: 4 a 32 Unidades/mL.
Converso de Unidade Reitmam-Frankel (U/mL) para Unidade Internacional (U/L)
Unidades Reitman-Frankel U/mL X 0,482 = U/L
2. ASPARTATO AMINOTRANSFERASE
Siglas utilizadas: AST - GOT - TGO
Nome sistemtico (IUB)/Nome comum: Aspartato aminotransferase
Nome antigo: Transaminase glutmico-oxalactica
pH timo: 7,4
A aspartato aminotransferase (AST) ou transaminase glutmico-oxalactica (GOT/TGO)
uma enzima encontrada em concentrao muito alta no msculo cardaco, no fgado,
msculos esquelticos e em menor concentrao nos rins e pncreas. Nas clulas hepticas,
a AST localiza-se no citoplasma (40%) e na mitocndria (60%). Qualquer leso tissular ou
doena afetando o parnquima heptico liberar uma maior quantidade da enzima para a
corrente sangunea, elevando os nveis sricos da AST. Sempre que ocorrer uma leso
hepatocelular de qualquer etiologia haver uma grande liberao da enzima AST para a
corrente sangunea, elevando seus nveis sricos.
Na hepatite virtica aguda, os nveis de AST encontram-se quase sempre elevados em mais
de 10 vezes o limite superior da faixa de referncia e em alguns casos ultrapassam a 20
vezes esse limite superior de normalidade. Entretanto, dentro de uma a duas semanas, os
valores de AST diminuem bastante podendo cair para a faixa normal ou apresentar ligeiro
aumento.
Nos casos de obstruo extra-heptica, as elevaes de AST no so comuns, mas podem
ocorrer quando h leso parenquimatosa secundria aguda. Na cirrose, as alteraes da
AST e seus respectivos nveis vo depender da ocorrncia e do grau de leso hepatocelular
ativa presente. Geralmente, na cirrose inativa os valores de AST no se alteram. Na cirrose
alcolica ativa, os valores de AST se elevam moderadamente.
Na hepatite virtica crnica ativa, os nveis de AST tambm encontram-se elevados
moderadamente. Vrias doenas comuns apresentam elevao pequena ou moderada de
AST, e entre elas podemos citar: mononucleose infecciosa, hepatite aguda na fase de
remisso ou recuperao, hepatite crnica, disfuno heptica induzida por drogas, tumor
heptico metasttico, congesto heptica passiva, cirrose ativa ou hepatopatia alcolica,
obstruo extra-heptica prolongada do ducto biliar, fgado gorduroso e citomegalovirus.
Na maioria das vezes, a dosagem de AST realizada juntamente com a ALT e a Relao
AST/ALT pode ser determinada para auxiliar no diagnstico diferencial das doenas.
13
Assim, a Relao AST/ALT sempre maior do que 1 em pacientes com cirrose alcolica,
hepatites crnicas, congesto heptica e tumor metasttico do fgado. Geralmente, essa
relao menor do que 1 nos casos de hepatite virtica aguda e mononucleose infecciosa.
Nos casos de leso do miocrdio, a AST juntamente com a dosagem da creatina quinase
(CK) e da desidrogenase lctica (LDH) muito til para o diagnstico e acompanhamento do
infarto do miocrdio (IM). Os nveis de AST aumentam dentro de 6 a 10 horas aps o infarto,
atingindo um valor mximo em 12 a 48 horas, voltando aos nveis normais em 3 a 4 dias, se
no ocorrer novo infarto. Portanto, as determinaes em srie da AST como da CK, so
muito teis para a avaliao do infarto do miocrdio. No entanto, a AST muito menos
especfica do que a CK-MB para o diagnstico do infarto do miocrdio.
Nos casos de pericardite, angina e cardite reumtica no h aumento dos nveis de AST.
Valores elevados
Os valores elevados de AST so mais comumente encontrados nas seguintes patologias:
hepatites, cirrose heptica, necrose heptica, metstase heptica, drogas hepatotxicas,
processo infiltrativo heptico (tumor), infarto do miocrdio, operaes cardacas, angioplastia
e cateterizao cardaca, pancreatite aguda, trauma muscular esqueltico, queimaduras
graves, anemia hemoltica aguda, distrofia muscular progressiva, mononucleose infecciosa
com hepatite, doenas musculares primrias (miopatia, miosite), doena renal aguda e
convulses recentes.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido em EDTA ou heparina. No utilizar amostras
hemolisadas.
A atividade enzimtica na amostra estvel por 4 dias entre 2 e 8C e por 2 semanas a 10C
negativos.
Injees intramusculares anteriores ao teste podem elevar os nveis de AST.
Exerccios podem provocar aumentos nos nveis de AST.
Algumas drogas que podem elevar os nveis de AST so: anticoncepcionais orais,
antihipertensivos, agentes colinrgicos, anticoagulantes tipo-cumarina, drogas hepatotxicas,
eritromicina, isoniazida, metildopa, opiceos, preparaes digitlicas, salicilatos e verapamil.
Mtodos de Dosagem
1. Metodologia Cintica no Ultravioleta Otimizada GOLD ANALISA Cat. 121
Fundamento Qumico
A aspartato aminotransferase (AST/GOT/TGO) catalisa a transferncia do grupo amina do
aspartato para o cetoglutarato com formao de glutamato e oxaloacetato. O oxaloacetato
reduzido a malato por ao da malato desidrogenase (MDH), enquanto que a coenzima
NADH oxidada a NAD+. A atividade enzimtica da AST na amostra calculada com base
na reduo da absorbncia em 340 ou 365 nm, quando o NADH se transforma em NAD+.
Soro ou plasma:
Soro ou plasma
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2. Metodologia Cintica Colorimtrica de Tempo Fixo (Mtodo de Reitman e Frankel)
ANALISA Cat. 252
Fundamento Qumico
A aspartato aminotransferase (AST/GOT/TGO) catalisa a transferncia do grupo amina do
aspartato para o cetoglutarato com formao de glutamato e oxaloacetato. O oxaloacetato
formado reage com a 2-4-dinitrofenilhidrazina formando a hidrazona que adquire colorao
mxima pela adio de hidrxido de sdio. A intensidade de colorao proporcional
atividade enzimtica da amostra.
Soro ou plasma: 4 a 36 Unidades/mL.
Converso de Unidade Reitmam-Frankel (U/mL) para Unidade Internacional (U/L):
Unidades Reitman-Frankel U/mL X 0,482 = U/L
3.FOSFATASE ALCALINA
Siglas utilizadas: ALP - FALC
Nome sistemtico (IUB): Fosfohidrolase monoster ortofosfrica
Nome comum: Fosfatase alcalina
pH timo: 8,5 a 10,3
A fosfatase alcalina compreende um grupo de enzimas fosfohidrolases que apresentam
atividade mxima em pH alcalino, prximo de 10. A enzima encontrada em vrios tecidos,
com maiores concentraes no fgado, no epitlio do trato biliar e no osso. A mucosa
intestinal e a placenta contm tambm a fosfatase alcalina. A fosfatase alcalina apresenta
vrias isoenzimas, sendo que cada uma das fontes produtoras contm uma isoenzima
especfica. O fracionamento das isoenzimas da ALP til para diferenciar doenas sseas
de doenas hepticas. As isoenzimas so melhor estudadas pelo teste de estabilidade ao
calor e pelo fracionamento eletrofortico. A isoenzima de origem heptica (ALP1) termo-
estvel, enquanto que frao ssea (ALP2) inativada pelo calor.
A determinao laboratorial da fosfatase alcalina (ALP) se aplica muito bem para o
diagnstico de doenas do fgado e dos ossos.
No fgado, a ALP secretada pelos hepatcitos (clulas de Kupffer) e pelas clulas da
mucosa do trato biliar. Geralmente, qualquer hepatopatia ativa pode aumentar os valores da
ALP, mas as maiores elevaes nos nveis da enzima ocorrem nos casos de obstruo do
trato biliar. Desse modo, a fosfatase alcalina estar muito aumentada nas obstrues biliares
intra ou extra-hepticas e tambm na cirrose.
Nos casos de tumores hepticos, hepatites e drogas hepatotxicas as elevaes da enzima
so menores.
Nos ossos, os osteoblastos respondem pela secreo da fosfatase alcalina e qualquer
aumento na atividade osteoblstica corresponder elevao nos nveis da enzima no soro.
Por essa razo, no crescimento sseo normal da infncia e adolescncia, na fase de
consolidao de fraturas, na doena de Paget, no hiperparatireoidismo, na osteomalcia, no
raquitismo e no carcinoma osteoblstico com metstase h aumento nos nveis sricos da
fosfatase alcalina.
Valores elevados
Cirrose, obstruo biliar intra e extra-heptica, tumor primrio ou metasttico do fgado,
tumor metasttico do osso, recuperao de fraturas sseas, doena de Paget,
hiperparatireoidismo, fases de crescimento normal dos ossos.
Valores Diminudos
Hipotireoidismo, hipofosfatemia, desnutrio, doena celaca.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido com heparina.
A atividade enzimtica estvel por 7 dias entre 2-8C e por vrios meses a 20C negativos.
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Os nveis de ALP podem estar aumentados aps uma ingesto recente de alimentos, sendo
obrigatrio portanto, o jejum para a coleta do sangue.
As drogas que podem provocar um aumento da ALP so: cido nicotnico, allopurinol,
antibiticos, azatioprina, colchicina, fluoretos, indometacina, isoniazida, metildopa,
metotrexato, probenicide, tetraciclinas e verapamil.
As drogas que podem provocar uma diminuio da ALP so: arsenicais, cianetos, fluoretos,
nitrofurantona, oxalatos e sais de zinco.
Mtodos de Dosagem
Por causa da diversidade de substratos disponveis, na literatura h registros de uma grande
variedade de mtodos que podem ser empregados para a dosagem da fosfatase alcalina.
Atualmente, os mtodos mais indicados so os que usam como substrato o para-
nitrofenilfosfato.
1. Metodologia Cintica Colorimtrica (Mtodo do Paranitrofenol) GOLD ANALISA

Cat. 126
Fundamento Qumico
Em pH alcalino, a fosfatase alcalina (FALC) catalisa em meio alcalino a transferncia do
grupo fosfato do p-nitrofenilfosfato para o 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP), liberando o
para-nitrofenol (amarelo). A atividade cataltica determinada a partir da velocidade de
formao do p-nitrofenol, medida em 405 nm.
Valores de Referncia para Soro ou Plasma:
25C 30C 37C
Adultos (U/L) 13 - 56 21 - 94 26 - 117
Crianas (U/L) 13 - 121 21 - 203 26 - 252
2. Metodologia Cintica Colorimtrica de Tempo Fixo (Mtodo de Roy mod.)

ANALISA Cat. 240
Fundamento Qumico
A fosfatase alcalina do soro hidrolisa o substrato de timolftalena monofosfato, liberando
timolftalena e fosfato inorgnico. Pela adio de lcali, a ao enzimtica inibida e a
timolftalena adquire cor azul, cuja absorbncia medida fotometricamente. O produto final
da reao se constitui de uma mistura de cor azul e a cor prpria do substrato.
Soro ou plasma
Adultos: 13 a 43 U/L.
Crianas at 12 anos: 56 a 156 U/L
4. GAMAGLUTAMIL TRANSFERASE
(GAMAGLUTAMIL TRANSPEPTIDASE)
Siglas utilizadas: GGT - -GT - GGTP - -GTP
Nome sistemtico: -Glutamil transferase
Nome comum: -Glutamil transpeptidase
pH timo: 8,0 a 8,5
A GGT uma enzima localizada predominantemente nos hepatcitos, em menor
concentrao nos rins e, em concentrao bem menor no epitlio do trato biliar, no intestino,
corao, pncreas, bao e crebro. A principal funo dessa enzima catalisar a
transferncia de amino cidos e peptdeos atravs das membranas celulares.
Os recm-nascidos apresentam valores altos de GGT que decaem para valores do adulto,
em torno de 4 meses de vida. J foi constatado, atravs de estudos, que os indivduos
obesos apresentam nveis de GGT mais altos do que as pessoas no obesas.
As doenas hepticas ativas compreendem as causas mais comuns de elevao da GGT.
Os nveis de GGT so afetados tanto pela leso hepatocelular aguda quanto pela obstruo
do trato biliar. Desse modo, a determinao da GGT empregada no diagnstico das
doenas hepticas e muito especfica para indicar uma colestase. Nesses quadros clnicos,
os nveis de GGT acompanham os da fosfatase alcalina (ALP), porm a GGT mais sensvel
e tambm no se eleva nas doenas sseas como a fosfatase alcalina. Um paciente
apresentando GGT normal com ALP alta indica uma doena ssea, enquanto uma GGT alta
com ALP alto indica uma doena heptica.
16
Devido leso heptica concomitante, a GGT encontra-se tambm aumentada nos casos
de tumor heptico e de mononucleose infecciosa.
Outro aspecto clnico importante da GGT a sua utilizao para detectar a ingesto de
lcool, uma vez que ela pode aumentar mesmo aps pequenas doses de bebida. De acordo
com a literatura, cerca de 75% dos bebedores inveterados e alcolatras crnicos apresentam
nveis altos de GGT. Atualmente, a dosagem da GGT recomendada como mtodo de
triagem para o alcoolismo.
Valores elevados
Valores elevados de -GT so mais comumente encontrados nas seguintes patologias:
hepatite, cirrose, necrose heptica, tumor heptico, colestase, drogas hepatotxicas,
ingesto alcolica, ictercia, pancreatite, isquemia heptica, infarto do miocrdio (4-10 dias
aps) e insuficincia cardaca congestiva.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido com heparina ou com EDTA. Anticoagulantes
contendo citrato, fluoreto ou oxalato inibem a atividade da GGT.
A atividade enzimtica estvel por 7 dias entre 2-8C e por vrios meses a 10C negativos.
Os valores da GGT podem estar diminudos na fase final da gravidez.
As drogas que podem aumentar os nveis da GGT so: lcool, fenobarbital e fenitona
(Dilantina).
As drogas que podem diminuir os nveis da GGT so: anticoncepcionais orais, citrato,
clofibrato, fluoreto e oxalato.
Mtodo de Dosagem
Metodologia Cintica Colorimtrica (Mtodo de Szass mod.) GOLD ANALISA Cat. 161
Fundamento Qumico
A -glutamiltransferase (GGT) catalisa a transferncia do grupamento glutamil da -glutamil-
3-carboxi-4-anilida para a glicilglicina, formando -glutamilglicilglicina e 3-carboxi-4-
nitroanilina, que tem elevada absorbncia em 405 nm.
A quantidade de liberada diretamente proporcional atividade da GGT na amostra.
A atividade cataltica da GGT determinada a partir da velocidade de formao da 3-carboxi-
4-nitroanilina.
Valores de Referncia para soro ou plasma:
25C 30C 37C
Mulheres 5 - 20 U/L 8 - 31 U/L 10 - 40 U/L
Homens 7 - 30 U/L 12 - 46 U/L 15 - 60 U/L
5. COLINESTERASE
Siglas utilizadas: CHE - CHS
Nome sistemtico (IUB): Acil colina acil-hidrolase
Nome comum: Colinesterase/Pseudocolinesterase
pH timo: 7,8 - 8,6
A colinesterase uma enzima com a funo de catalisar a hidrlise da acetilcolina e outras
colinas, regulando a transmisso do impulso nervoso na sinapse do nervo e na juno
neuromuscular. Dois tipos de colinesterase so determinadas: acetilcolinesterase
(colinesterase verdadeira) e pseudocolinesterase. Enquanto a acetilcolinesterase (acetil
colina hidrolase) encontrada nas hemcias e terminaes de nervos colinrgicos, a
pseudocolinesterase (butirilcolinesterase) encontra-se no plasma, fgado, msculo liso e
adipcitos. A colinesterase verdadeira tem afinidade pela acetilcolina, enquanto a
pseudocolinesterase caracteriza-se por catalisar a hidrlise da butirilcolina.
Valores diminudos de CHE so encontrados nas doenas hepticas crnicas, devido
diminuio da sntese enzimtica do fgado.
Na hepatite aguda e na hepatite crnica de longa durao h uma diminuio de 30 a 40%
da atividade enzimtica.
Na cirrose avanada e no carcinoma heptico, a diminuio da sntese enzimtica atinge
valores de 50 a 70%. Por essa razo, a CHE considerada uma enzima indicadora de
sntese heptica.
17
Valores diminudos de CHE so tambm verificados nos envenenamentos por inseticidas
organofosforados, os quais atuam como inibidores da enzima.
Valores diminudos
Valores diminudos de CHE so encontrados nas seguintes situaes: no envenenamento
por inseticidas organofosforados, doena hepatocelular, desnutrio e em pessoas com
deficincia congnita de enzimas.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido com heparina ou com EDTA. Anticoagulantes
contendo citrato, fluoreto ou oxalato inibem a atividade da CHE.
A atividade enzimtica estvel por 7 dias entre 2-8C.
Os valores da CHE podem estar diminudos durante a gravidez.
As drogas que podem diminuir os nveis da CHE so: anticoncepcionais orais, atropina,
cafena, codena, estrgenos, fenotiazinas, sulfato de morfina, teofilina, quinidina e vit. K.
Mtodo de Dosagem
Metodologia Cintica Colorimtrica
Fundamento Qumico
A CHE srica ou plasmtica catalisa a hidrlise dos steres de colina, como o S-butirilcolina
em pH 7,7. A tiocolina liberada reage com o cido 5,5-ditiobis-2-nitrobenzoico (DTNB)
formando um composto de cor amarela diretamente proporcional atividade enzimtica, que
medido fotometricamente em 405 nm.
Valores de Referncia para Soro ou plasma:
25C 30C 37C
3200 - 9000 U/L 3962 - 11142 U/L 4970 - 13977 U/L
ENZIMAS NAS DOENAS CARDACAS
1. CREATINOQUINASE (CK)
(ADENOSINA TRIFOSFATO: CREATINA N-FOSFOTRANSFERASE
Siglas utilizadas: CK - CPK
Nome sistemtico (IUB): ATP Creatino N-fosfotransferase
Nome comum: Creatinoquinase
pH timo: 6,8 no sentido da formao de ATP com o substrato de creatinofosfato e 9,0 no
sentido da fosforilao da creatina com o substrato de creatina.
A Creatinoquinase (CK/CPK) encontrada no msculo cardaco, na musculatura esqueltica
e no crebro. Deste modo, qualquer leso nas clulas desses rgos provocar um aumento
nos nveis sricos de CK. De acordo com a literatura, a enzima encontra-se aumentada
numa faixa de 65-100% dos pacientes com infarto agudo do miocrdio. No infarto do
miocrdio, a CK comporta-se de modo semelhante AST, porm as doenas
hepatocelulares que produzem elevaes da AST no exercem nenhum efeito sobre a CK.
Os valores de CK no soro podem estar alterados em vrias condies clnicas associadas a
leso muscular aguda ou a esforo muscular intenso. Portanto, os nveis de CK encontram-
se normalmente altos na miosite, distrofia muscular, traumatismo muscular, aps exerccio
moderadamente intenso, aps cirurgia e no delirium tremens ou nas convulses.
Nveis altos de CK podem ser encontrados nos casos de alcoolismo acentuado, devido ao
efeito do lcool sobre os msculos.
A CK encontra-se tambm quase sempre elevada aps injees intramusculares.
Em relao ao diagnstico do infarto do miocrdio, a dosagem da CK total apresenta alguns
inconvenientes a saber:
- falta de especificidade, devido a elevaes falso-positivas em consequncia de leso dos
msculos esquelticos, principalmente nas injees intramusculares.
- perodo de tempo relativamente curto em que a enzima permanece alta aps o incio do
infarto.
18
Isoenzimas da Creatinoquinase (CK)
A CK total pode ser separada em 3 fraes principais, denominadas de CK-BB (CK1), CK-MB
(CK2) e CK-MM (CK3). Atualmente, os laboratrios j podem dispor de mtodos adequados
para a determinao das isoenzimas da CK.
1. Isoenzima CK-BB
encontrada predominantemente no crebro e no pulmo, sendo que uma elevao dos
seus nveis no comum.
A CK-BB pode estar elevada em algumas condies como aps embolia pulmonar e em
alguns pacientes com carcinoma de prstata e pulmo. J nos casos de distrbios cerebrais,
nos quais teoricamente deveria ser liberada a isoenzima CK-BB, o comum tem sido
encontrar no soro a isoenzima CK-MM.
2. Isoenzima CK-MM
Compreende mais de 95% da CK dos msculos esquelticos e cerca de 70-75% da enzima
do miocrdio. Considerando que a quantidade de msculo esqueltico do corpo muito
superior do miocrdio, consequentemente a elevao dos nveis de CK-MM no soro ser
devido a uma leso ou hipxia do msculo esqueltico, incluindo exerccio intenso,
convulses, traumatismo, inflamao, distrofia muscular ou injeo intramuscular. Podem ser
observados aumentos tambm da frao MM de CK nos casos de hipotireoidismo e
hipocalemia atingindo os msculos.
3. Isoenzima CK-MB
uma frao hbrida composta de cadeias M e B, que encontrada predominantemente no
msculo cardaco. A sua determinao bastante especfica para o diagnstico do infarto do
miocrdio. A CK-MB aumenta dentro de 3-6 horas aps ocorrncia do infarto, atingindo um
valor mximo em 12-24 horas e retornando ao normal em 24-48 horas, caso no ocorra um
novo infarto nesse perodo. Existe uma correlao grosseira entre o grau de elevao da
enzima e a extenso do infarto.
Valores elevados de CK Total

Infarto agudo do miocrdio, distrofia muscular, delirium tremens, infarto pulmonar, doena
vascular cerebral aguda, convulses, alcoolismo crnico, poliomiosite, choque eltrico,
hipocalemia, dermatomiosite e trauma do sistema nervoso central.
Valores elevados da Isoenzima CK-BB

Infarto pulmonar, leso cerebral, acidente vascular cerebral, choque, embolia pulmonar,
hemorragia subaracnide e cncer no crebro.
Valores elevados da Isoenzima CK-MM

Distrofia muscular, miosite, convulses recentes, cirurgia recente, hipotireoidismo,
hipocalemia, injees intramusculares, e delirium tremens.
Valores elevados da Isoenzima CK-MB

Infarto agudo do miocrdio, defibrilao cardaca, isquemia cardaca, miocardite, cirurgia de
aneurisma cardaco, distrofia muscular e rabdomilise.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido com EDTA ou heparina. Evitar exposio luz solar
intensa. A atividade enzimtica estvel por 24 horas entre 15 - 25C e 7 dias entre 2 - 8C.
No usar amostras hemolisadas.
Injees intramusculares , exerccios intensos ou moderados e cirurgia recente podem elevar
os nveis de creatina cinase (CK).
Drogas que podem provocar um aumento da CK no soro so: ampicilina, anfotericina B,
lcool, alguns anestsicos, aspirina, captropil, colchicina, clofibrato, dexametasona
(decadron), furosemida (lasix), lovostatin, ltio, lidocana, morfina, propanolol e succinilcolina.
19
Mtodo de Dosagem da CK Total
Metodologia Cintica no Ultravioleta GOLD ANALISA Cat. 158
Fundamento Qumico
A CK catalisa a reao entre creatina fosfato e adenosina difosfato (ADP) formando creatina
e adenosina trifosfato (ATP). A glicose fosforilada pelo ATP sob a ao da hexoquinase
(HK) formando glicose-6-fosfato, que oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) pela glicose-6-
fosfato-desidrogenase (G-6-PDH) na presena de NAD+. Uma quantidade equimolar de
NAD+ reduzida a NADH, ocorrendo um aumento da absorbncia em 340 ou 365 nm,
proporcional atividade da CK na amostra.
25C 30C 37C
Mulheres 10 - 70 U/L 15 - 110 U/L 24 - 170 U/L
Homens 10 - 80 U/L 15 - 125 U/L 24 - 195 U/L
Mtodo de Dosagem da Isoenzima CK-MB

Metodologia Cintica no Ultravioleta GOLD ANALISA Cat. 190
Fundamento Qumico
As subunidades M da creatinoquinase (CK) so inibidas por um anticorpo especfico que no
afeta as subunidades B. A concentrao cataltica de CK-B, que corresponde metade da
atividade da CK-MB, determinada pelas reaes acopladas da hexoquinase (HK) e glicose-
6-fosfato desidrogenase (G6P-DH). Uma quantidade equimolecular de NADP+ reduzida
para NADPH, havendo um aumento da absorbncia em 340 nm proporcional atividade
cataltica de CK.
Temperatura 25C 30C 37C
Valores At 10 U/L At 15 U/L At 24 U/L
2. DESIDROGENASE LCTICA
(LACTATO DESIDROGENASE)
Siglas utilizadas: LDH - LD
Nome sistemtico (IUB): L-Lactato NAD-xido-redutase
Nome comum: Lactato desidrogenase/Desidrogenase lctica
pH timo: 8,8 a 9,8 no sentido da formao de cido pirvico com o substrato de cido ltico
e 7,4 a 7,8 no sentido da formao de cido ltico com o substrato de cido pirvico.
A desidrogenase lctica (LDH) encontrada em vrios tecidos como corao, hemcias,
fgado, msculo esqueltico, rim, crebro, pulmes e tecido linfide. Desse modo, os valores
de LDH total estaro altos em uma variedade de situaes clnicas. Devido sua distribuio
diversificada pelos tecidos, a dosagem da LDH total no um indicador especfico nem de
doenas hepticas nem de doenas cardacas. Porm, quando determinada conjuntamente
com outras enzimas, ou quando fracionada em isoenzimas, torna-se bastante til para o
diagnstico dessas patologias.
Valores elevados de LDH total so observados em uma variedade de condies clnicas.
Os nveis mais altos so encontrados em pacientes com anemia megaloblstica, em
carcinomas e no choque grave. Elevaes moderadas ocorrem em pacientes com infarto do
miocrdio, infarto pulmonar, anemia hemoltica, leucemia, mononucleose infecciosa e nos
pacientes com distrofia muscular progressiva. Alteraes pequenas da LDH total so
encontradas em pacientes com hepatite aguda, nas ictercias obstrutivas e na cirrose.
Valores elevados so tambm encontrados no delirium tremens.
Isoenzimas da LDH
A origem principal da fraes de LDH a seguinte:
LDH1: corao, hemcias e rins.
LDH2: corao e sistema retculo endotelial.
LDH3: pulmes e outros tecidos.
LDH4: placenta e pncreas.
LDH5: fgado e msculos esquelticos.
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So vrios os mtodos que podem ser utilizados para o fracionamento da LDH, porm a
eletroforese e o teste do calor so os mais empregados. O aquecimento a 60C por 30
minutos inativa 3 fraes, deixando intactas as fraes 1 e 2, de origem cardaca que so
termo-estveis.
Pela eletroforese, o perfil mostra que as fraes LDH1 e LDH2 (cardacas) so mais rpidas
frente ao nodo (polo positivo), enquanto que a LDH5 (heptica) a mais lenta,
permanecendo prxima ao ponto de aplicao. Existem ainda mtodos imunolgicos
especficos para a dosagem da LDH1.
A determinao laboratorial da desidrogenase hidroxibutrica (HBDH) tambm utilizada
para substituir a dosagem da LDH1, pois os seus valores se equivalem clinicamente.
Aplicao Clnica do Fracionamento da LDH

1. Infarto Agudo do Miocrdio: h elevao moderada da LDH1 e pequena da LDH2 nas
primeiras horas aps o infarto, atingindo o pico em 48-72 horas, retornando aos nveis de
referncia dentro de 10-14 dias. Uma relao LDH1/LDH2 maior do que 1 uma
informao bastante indicativa de infarto do miocrdio.
2. Doenas Hepticas: ocorre aumento das fraes LDH4 (moderado) e LDH5 (acentuado)
nas hepatites agudas, ictercias obstrutivas e cirrose.
3. Doenas do Sistema Nervoso Central: nas meningites e tumores malgnos h aumento
nas fraes LDH2 e LDH3.
4. Doenas Malgnas: havendo metstase, verifica-se aumento das fraes LDH2, LDH3 e
LDH4.
5. Distrofia Muscular: elevao de LDH1, LDH2 e LDH3.
6. Anemia Megaloblstica: aumento acentuado de LDH1.
7. Anemia Aplstica: todas as fraes se elevam devido destruio das hemcias e
leuccitos.
Valores elevados de LDH total

As causas mais comuns de elevao da LDH total so: infarto do miocrdio, infarto
pulmonar, hepatite, cirrose, ictercias obstrutivas, distrofia muscular, anemias, doenas do
parnquima renal, tumores, acidente vascular cerebral.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro que deve ser separado at 1 hora aps a colheita. O analito estvel por
4 dias entre 15-25C. Refrigerao e/ou congelamento da amostra podem desnaturar
determinadas isoenzimas.
No usar amostras hemolisadas.
Lquor. O analito estvel por 6 horas entre 15-25C. A amostra deve ser centrifugada.
A hemlise pode provocar um aumento falso-positivo nos nveis da LDH.
As drogas que podem causar um aumento da LDH so: lcool, anestsicos, aspirina,
clofibrato, fluoretos, mitrimicina, narcticos e procainamida.
O cido ascrbico pode provocar uma diminuio no valor da LDH.
Mtodos de Dosagem da LDH Total

Existem mtodos colorimtricos, fluorimtricos e espectrofotomtricos para a dosagem da
LDH total.
1. Metodologia Cintica no Ultravioleta (Mtodo Piruvato-Lactato)
GOLD ANALISA Cat. 157
Fundamento Qumico
Nas condies do ensaio, a desidrogenase lctica (LDH) catalisa a converso do piruvato
para lactato, enquanto o NADH oxidado para NAD+. Determina-se o decrscimo da
absorbncia em 340 nm, que proporcional atividade de LDH na amostra analisada.
Temperatura 25C 30C 37C
Valores 105 210 U/L 140 - 280 U/L 207 - 414 U/L
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2. Metodologia Cintica Colorimtrica de Tempo Fixo (Mtodo Lactato-Piruvato) -
ANALISA Cat. 237
Fundamento Qumico
A desidrogenase lctica (LDH) catalisa a oxidao do lactato para piruvato. Na mesma
reao, o NAD+ reduzido a NADH + H+ que, em uma reao acoplada, reduz
estequiometricamente o INT (cloreto de iodofenil-nitrofenil tetrazolio) a formazan, com o PMS
(metasulfato de fenazina) agindo como um transportador intermedirio de eltron. A
absorbncia do formazan de cor vermelha formado, medida em 500 nm, diretamente
proporcional atividade de LDH na amostra.
Soro: 80 a 240 U/L
Lquor: 5 a 33 U/L
Mtodos de Dosagem das Isoenzimas da LDH

A eletroforese em acetato de celulose ou em agarose so os melhores processos para se
fazer o fracionamento e quantificao das fraes da LDH.
A isoenzima LDH1 pode ser determinada diretamente atravs de tcnicas imunoqumicas,
usando anticorpos especficos para a LDH1.
Pode-se fazer tambm uma quantificao aproximada da LDH1, usando o princpio da
termoestabilidade. Enquanto a frao LDH1 resiste a uma desnaturao a 65C por 30
minutos, as outras isoenzimas so destrudas nessas condies. O processo compreende a
dosagem da LDH total antes e aps submeter a amostra a 65C por 30 minutos.
O valor de LDH1 pode tambm ser estimado por meio da dosagem da desidrogenase
hidroxibutrica (HBDH), j que sua atividade reconhecida representar a LDH1.
1.Metodologia Eletrofortica em Acetato de Celulose - ANALISA Cat. 237
Fundamento Qumico
As isoenzimas so separadas por eletroforese e a revelao e quantificao processada
atravs do substrato (lactato + NAD+) e do reagente de cor (INT + PMS), com leitura
fotomtrica em 500 nm.
Valores de Referncia das Isoenzimas no soro ou plasma
LDH1 17 - 27%
LDH2 27 - 37%
LDH3 18 - 25%
LDH4 3 - 8%
LDH5 0 - 5%
2. Dosagem da HBDH
A dosagem da HBDH pode ser empregada para substituir a determinao da isoenzima
cardaca (LDH1). Na verdade, a HBDH compreende a LDH total que colocada para atuar
sobre um substrato de cido -cetobutrico em lugar do substrato de cido lctico ou pirvico.
Nessas condies, a medida da atividade da HBDH determina indiretamente a atividade da
LDH1 (cardaca).
Fundamento Qumico
Em reao catalisada pela -HBDH (desidrogenase hidroxibutrica), o cido -cetobutrico
reduzido a cido -hidroxibutrico enquanto o NADH oxidado a NAD+. A velocidade da
reao medida atravs do decrscimo da absorbncia do NADH no ultravioleta.
Valores de Referncia: 60 a 140 U/L (Soro)
3. ASPARTATO AMINOTRANSFERASE (AST) - Ver pgina 13 - 15
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MARCADORES BIOQUMICOS DO INFARTO AGUDO DO
MIOCRDIO
As doenas cardiovasculares constituem um grave problema de sade pblica, pois
correspondem a cerca de 50% de todas as mortes ocorridas no mundo e 1/3 desses bitos
ocorre na faixa etria de 35 a 65 anos de idade. Elas tm ainda uma alta correlao com o
grau de desenvolvimento do pas e a sua prevalncia maior nos pases industrializados.
Dentre as doenas cardiovasculares, a Doena Arterial Coronariana (DAC) ou Doena
Coronariana Isqumica (DCI) que provoca o Infarto Agudo do Miocrdio (IAM), considerado a
principal causa de morte nos pases industrializados, atingindo principalmente a populao
economicamente ativa e de melhor nvel scio-econmico.
De acordo com a Organizao Mundial de Sade (OMS), ocorrem no mundo cerca de 7,2
milhes de bitos por ano devido DAC.
Em 1996, somente nos EUA 9,2 milhes de pessoas apresentaram sintomas relacionados
com essa patologia e, incontestavelmente, o Infarto Agudo do Miocrdio (IAM) a sua maior
consequncia.
No Brasil, segundo o Ministrio da Sade, evidente um aumento significativo no nmero de
casos de DAC nas ltimas 5 dcadas.
Dessa maneira, extremamente importante que o diagnstico da DAC seja estabelecido o
mais cedo possvel para o definio de uma terapia adequada e melhoria da sobrevida dos
pacientes.
Em relao aos marcadores bioqumicos do IAM, tem-se observado na literatura uma
evoluo constante procurando sempre valorizar mais aqueles marcadores de maior
especificidade e maior sensibilidade.
Nos estudos sobre os marcadores deve-se conhecer os stios fisiolgicos de cada um para
evitar falsas interpretaes diagnsticas, principalmente quando um marcador originrio de
diferentes rgos. importante ainda, conhecer o menor tempo para o marcador se elevar
na corrente sangunea e o tempo que o mesmo leva para retornar aos valores de referncia.
Esse intervalo denominado de janela diagnstica. tambm importante saber o tempo
que o marcador atinge o valor mximo no sangue.
Para um melhor entendimento, pode-se classificar os marcadores bioqumicos da DAC em:
MARCADORES CLSSICOS
1.AST/GOT (Aspartato Aminotransferase/Transaminase Glutmico-Oxalactica)
A determinao de AST/GOT como marcador de IAM foi descrita no incio da dcada de 50.
Posteriormente, foi sendo substituda gradualmente pela CK, que um marcador mais
precoce e mais especfico. Nos dias de hoje, a dosagem da AST/GOT como marcador de
IAM, praticamente no mais empregada.
2.LDH (Desidrogenase Lctica/Lactato Desidrogenase)

A dosagem de LDH na rotina do laboratrio clnico teve incio na dcada de 70. Em
comparao com a AST/GOT, a LDH tem a vantagem de ser mais sensvel.
Por ser composta de 5 sub-unidades (isoenzimas), a LDH necessita que se faa o
fracionamento para a dosagem da frao cardaca LDH1 e, caso o paciente tenha leses no
parnquima renal ou doena hemoltica, pode-se obter resultados falso positivos para o IAM
devido ao efeito cumulativo que leses nesses rgos apresentam. Alm do mais, a LDH
apresenta uma janela diagnstica tardia, se confrontada com os novos marcadores.
Assim como a AST/GOT, ultimamente a dosagem da LDH tem sido preterida como marcador
bioqumico de IAM.
3.CK/CPK (Creatino Cinase/Adenosina Trifosfato: Creatina N-Fosfotransferase)

Dentre os marcadores clssicos do IAM, a dosagem de CK-MB a mais indicada.
recomendvel a solicitao de dosagem de CK-MB juntamente com CK Total com o
objetivo de poder identificar fraes sricas atpicas.
A CK um dmero composto de 2 sub-unidades, cada uma com um PM de 40.000.
As sub-unidades M (msculo) e as B (crebro) so produtos de 2 gens estruturais distintos.
Desse modo, 3 pares diferentes de sub-unidades podem existir: CK-BB (CK1), CK-MB (CK2)
e CK-MM (CK3) e atualmente, os laboratrios j dispem de mtodos adequados para a
determinao das isoenzimas da CK.
23
A CK1 predominante no crebro, prstata, intestino, pulmo, bexiga, tireide, tero e
placenta, enquanto que a CK3 predomina nos msculos esquelticos e cardaco. A CK2
(CKMB) est presente no msculo cardaco (25 a 46% da atividade de CK) e nos msculos
esquelticos (< 5%). As 3 isoenzimas encontram-se no citosol das clulas ou associadas a
estruturas miofibrilares.
Alm dessas 3 isoenzimas citoslicas CK-BB (CK1), CK-MB (CK2) e CK-MM (CK3), existem
ainda 2 isoformas mitocondriais (CK-Mt) e tambm 2 isoformas macromoleculares
denominadas de Macrocinases
A CK-Mt, de origem mitocondrial, difere das outras imunologicamente e na mobilidade
eletrofortica. No corao, a CK-Mt corresponde a 15% da atividade da CK Total.
As fraes macromoleculares so denominadas de macro CK dos tipos 1 e 2, sendo que o
tipo 1 a CK1 associada a IgG, ou CK3 a IgA; e o tipo 2 a CK-Mt oligomrica.
Por ser encontrada no msculo cardaco, na musculatura esqueltica e no crebro, um
aumento nos nveis sricos de CK pode indicar uma leso nas clulas desses orgos.
Portanto, uma elevao de CK Total pode ocorrer tanto no IAM como em outras patologias.
De acordo com a literatura, a CK encontra-se aumentada numa faixa de 65-100% dos
pacientes com infarto agudo do miocrdio. No infarto do miocrdio, a CK comporta-se de
modo semelhante AST, porm as doenas hepatocelulares que produzem elevaes da
AST no exercem nenhum efeito sobre a CK.
Como marcador de IAM, o ideal a dosagem da frao CK-MB (CK2) pela sua especificidade
e sensibilidade.
So vrias as metodologias para a dosagem da CK-MB (CK2), destacando-se dentre elas as
seguintes:
Imunoinibio
a metodologia mais empregada para a dosagem da CK-MB (CK2). Consiste na inibio
das unidades M com um anticorpo anti M e dosagem posterior da frao B da MB
circulante, uma vez que a frao BB predomina no crebro, sendo contida pelas meninges
desde que estejam ntegras.
A solicitao de dosagem de CK Total juntamente com a de CK-MB (CK2) uma prtica
recomendvel com o objetivo de poder identificar ou suspeitar da presena de fraes
sricas atpicas. Nesses casos, os valores de CK Total e de CK-MB (CK2) so prximos.
Este fato pode ser minimizado quando se emprega a dosagem de CK-MB (CK2) por
Quimioluminescncia (MASSA).
Quimioluminescncia (MASSA)
Esta metodologia emprega um anticorpo monoclonal especfico para a frao MB, no
sofrendo a interferncia das fraes atpicas quando circulantes.
Eletroforese
uma metodologia bastante sensvel e especfica, principalmente, quando se usa a
eletroforese de alta voltagem (1450 v) que possibilita inclusive o subfracionamento da CK-
MB em CK-MB1 e CK-MB2, tornando o diagnstico mais precoce (2 horas aps os
sintomas). Por ser uma tcnica de alto custo, ainda est restrita pesquisa.
Cromatografia em Coluna
NOVOS MARCADORES
1.TROPONINAS
As troponinas so protenas presentes nas clulas musculares do aparelho miofibrilar do
sarcmetro, isto o ncleo bsico da parte contrtil da fibra muscular cardaca.
A troponina T e, em particular a troponina I so marcadores cardioespecficos da leso
cardaca. A principal desvantagem que as aalteraes no soro no so detectadas nas
primeiras horas aps o incio dos sintomas (de 6 a 18 horas). Esses marcadores surgem em
paralelo com a dosagem de massa da CK-MB.
As troponinas so compostas de mltiplas sub-unidades:
Troponina T (TnT) que uma sub-unidade ligada miosina (Tropomiosina).
Troponina I (TnI) uma sub-unidade inibidora de actina (Actinomiosina).
Troponina C (TnC) a sub-unidade ligada ao clcio e regula a contrao.
Troponinas TnTc e TnIc, formas denominadas cardioespecficas, diferindo dos seus
homnimos da musculatura esqueltica pela sequncia de aminocidos em diversos
locus.
24
A determinao da TnIc tem sofrido restries devido falta de padronizao dos anticorpos
e tambm por causa das reaes cruzadas que ocorrem com as formas complexadas com a
TnC. H tambm problemas com a capacidade de fosforilao, oxidao e reduo que lhe
impem uma falsa negatividade, bem como uma falsa positividade em pacientes renais
crnicos que ocorre tambm com a TnTc. Esses problemas tm sido minimizados com a
determinao da TnTc empregando metodologias com ensaios de 2 gerao.
Como marcador do IAM, as troponinas tm caractersticas de:
Apresentar alta sensibilidade e especificidade na deteco ou excluso de Infarto do
Miocrdio.
Servir para avaliar o risco em pacientes com Angina de Peito Instvel (deteco de
Microinfartes)
Possibilitar o diagnstico tardio de Infarto do Miocrdio at uma semana aps o inco da
dor.
Auxiliar na triagem dos pacientes com dores no peito.
Monitorizao no invasiva de teraputica tromboltica.
Monitorizao de leso cardaca durante e aps Cirurgia Geral.
2.MIOGLOBINA
uma hemoprotena de PM 17.600 daltons, localizada no citoplasma celular, que est
presente tanto na musculatura esqueltica quanto na cardaca.
um dos marcadores mais precoces para o diagnstico do IAM, mas devido sua
inespecificidade tem sido preterida, servindo apenas como diagnstico de excluso, ou em
casos confirmados de IAM serve para avaliar o sucesso da reperfuso quando se usa
terputica tromboflica. Quando determinada junto com a Anidrase Carbnica III, os valores
altos de mioglobina podem ser teis quando se suspeita de IAM.
A mioglobina pode ser detectada no soro dentro de 2 a 5 horas do incio do infarto, atinge o
pico por volta das 12 horas e cai para dentro do seu intervalo de referncia em 24 horas.
Resultados falso positivos surgem em consequncia de leso do msculo esqueltico, e
ocorrem tambm na insuficincia renal devido a uma incapacidade de excretar esta molcula
na urina.
3.MIOSINA DE CADEIA LEVE

o mais recente marcador para o diagnstico do IAM, porm ainda no se tem uma
avaliao muito acentuada de sua utilidade.
ENZIMAS EM DOENAS DA PRSTATA
FOSFATASE CIDA
(FOSFATASE CIDA PROSTTICA)
Siglas utilizadas: ACP - FAC (Fosfatase cida) - PAP (Fosfatase cida prosttica)
Nome sistemtico (IUB): Fosfohidrolase monoster ortofosfrica
Nome comum: Fosafatase cida
pH timo: 4,8 a 6,0
A denominao Fosfatase cida (FA) compreende um grupo de fosfatases que hidrolisam
substratos de steres do cido fosfrico em pH abaixo de 7,0. Estas fosfatases so um grupo
de isoenzimas similares ou relacionadas entre si e cada uma no uma espcie particular de
enzima.
A fosfatase cida encontrada em muitos tecidos como prstata, hemcias, plaquetas,
fgado e medula ssea. Como a glndula prosttica responsvel pelos nveis mais altos
dessa enzima, a principal finalidade de sua determinao laboratorial auxiliar no
diagnstico de carcinoma da prstata e monitorar a eficcia do respectivo tratamento.
Devido importncia do aumento da atividade da FA no diagnstico e monitorizao do
cncer da prstata, importante verificar, nos casos de aumentos pouco significativos, se a
elevao ou no devida isoenzima prosttica.
Valores elevados da enzima so encontrados em pacientes com cncer de prstata com
metstase alm da cpsula, especialmente nos ossos. Havendo sucesso no tratamento por
cirurgia, os nveis de fosfatase cida decrescem em alguns dias. Quando o tratamento
empregado a estrogenoterapia, os nveis da enzima decairo em algumas semanas.
Quando ocorrer um novo aumento da enzima aps a terapia significa um prognstico ruim
para o paciente.
25
Vrias isoenzimas da fosfatase cida podem ser fracionadas por eletroforese, sendo a
isoenzima prosttica (Fosfatase cida Prosttica - PAP) a de maior importncia clnica. Para
o diagnstico do cncer de prstata, a determinao da fosfatase cida prosttica (PAP)
mais especfica do que a fosfatase cida total, porm menos especfica do que a
determinao do antgeno prosttico especfico (PSA).
Valores Elevados
Valores elevados de fosfatase cida so mais comumente encontrados nas seguintes
patologias: cncer de prstata, manipulao recente da prstata, hipertrofa benigna da
prstata, metstases sseas de cncer no prosttico.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro ou plasma colhido com heparina. Evitar a hemlise.
A atividade enzimtica sensvel ao efeito da temperatura e pH. Portanto, separar o soro ou
plasma at 30 minutos aps a colheita e acidificar cada 1,0 mL da amostra com 0,01 mL (10
L) de cido actico 20% (V/V) ou com 0,02 mL (20 L) de tampo acetato 5M pH 5,0.
A atividade enzimtica da amostra acidificada estvel por 2 dias entre 2-8 C e por 1
semana a 10C negativos.
Devido estimulao prosttica, os valores de fosfatase cida podem estar elevados em
pacientes aps o exame de toque retal ou aps instrumentao da prstata (citoscopia).
As drogas que podem elevar os nveis da fosfatase cida so: clofibrato (Atromid S) e
andrgenos em mulheres.
As drogas que podem provocar uma diminuio da fosfatase cida so: fluoretos, fosfatos,
oxalatos e lcool.
Mtodos de Dosagem
Vrios so os mtodos que podem ser empregados para a dosagem da fosfatase cida,
sendo que aqueles utilizando a timolftalena monofosfato como substrato apresentam uma
boa especifidade para a isoenzima prosttica.
Vrios inibidores das isoenzimas tm sido utilizados na dosagem da isoenzima prosttica
(PAP), sendo que o tartarato o mais comumente usado porque inibe praticamente toda a
atividade enzimtica da frao prosttica. Os ons cobre e o formaldedo tm sido utilizados
para inibir as fosfatase cidas no prostticas, principalmente a hemtica. Do ponto de vista
prtico pode-se prevenir a interferncia da enzima da hemcia realizando uma colheita da
amostra em condies tcnicas adequadas para prevenir a hemlise, providenciando a
separao imediata, com acidificao e refrigerao do soro para estabilizar a atividade
enzimtica.
Os inibidores aumentam o trabalho operacional porque requerem, para cada amostra, dois
ensaios da atividade enzimtica sendo um deles com a presena do inibidor. Uma alternativa
a utilizao de substratos mais sensveis atividade da isoenzima prosttica como ocorre
com o a naftil fosfato e a timolftaleina monofosfato. Do ponto de vista prtico estes substratos
no so hidrolisados pelas isoenzimas eritrocitrias e plaquetrias, porque somente uma
frao muito pequena e desprezvel da atividade encontrada ser devida s fosfatases de
origem hemtica ou plaquetria.
1. Metodologia Cintica Colorimtrica de Tempo Fixo (Roy mod.) ANALISA Cat. 239
O produto da Analisa, Fosfatase cida- Cat 239, utiliza um substrato de timolftaleina
monofosfato que, apesar do sistema medir a fosfatase cida total, os resultados quando
elevados, podem ser considerados como sendo correspondentes frao prosttica, porque
a sensibilidade do substrato s outras fraes consideravelmente diminuda e os valores
encontrados para a atividade das fosfatases no prostticas so to reduzidos que no tm
significado clnico.
Fundamento Qumico
A fosfatase cida hidrolisa o substrato de timolftalena monofosfato, liberando timolftalena e
fosfato inorgnico. Pela adio de lcali, a ao enzimtica inibida e a timolftalena
convertida na sua forma azul, cuja absorbncia medida fotometricamente. O produto final
da reao se constitui de uma mistura de cor azul e a cor prpria do substrato.
Soro ou plasma: 0,15 a 0,56 U/L.
26
2. Metodologia Cintica Colorimtrica para dosagem da Fosfatase cida Total e
Prosttica (FAC TOTAL e PROSTTICA) GOLD ANALISA Cat. 139
Fundamento Qumico
A fosfatase cida (FAC) catalisa em meio cido a hidrlise do -naftilfosfato. O -naftol
produzido reage com um sal de diaznio (Fast Red TR) formando um cromgeno. A
atividade cataltica determinada a partir da velocidade de formao do referido cromgeno
medido em 405 nm. O tartarato usado no mtodo como inibidor especfico da frao
prosttica da fosfatase cida. A fosfatase cida prosttica calculada pela diferena
entre a fosfatase cida total e a frao inibida pelo cido tartrico (no prosttica).
Fosfatase cida total at 10 U/L
Fosfatase cida prosttica: at 3,5 U/L
ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO

Sigla utilizada: PSA = Prostate-specific antigen
Nome oficial: Semenogelase
Nomes alternativos: gama-seminoprotena, seminina e antgeno p30.
O antgeno prosttico especfico (PSA), isolado e identificado por Wang e cols.em 1979,
uma glicoprotena monomrica com peso molecular de 34.000, produzido somente pelo
tecido prosttico seja normal, hiperplasiado ou maligno.
Em termos de g%, o tecido prosttico canceroso produz cerca de 10 vezes mais PSA do que
o tecido normal.
O PSA secretado no lquido seminal, tem uma atividade similar da tripsina e
quimiotripsina, com a funo de liquefazer o cogulo.
Por ser produzido exclusivamente pela prstata, h uma tendncia de valorizao da
dosagem do PSA como um marcador de Adenocarcinoma Prosttico (ACP).
O PSA considerado um timo marcador tumoral na triagem do cncer de prstata, mas no
incio, seu uso servia apenas para indicar a massa tumoral e progresso da doena.
Em vrios estudos tem-se verificado que a associao de um PSA monoclonal maior que 4,0
ng/mL com um toque retal anormal um mtodo altamente sensvel e especfico na
deteco do cncer de prstata.
Como no encontrado em nenhum outro tecido, o PSA estar elevado na hipertrofia
benigna da prstata (HPB), no adenocarcinoma de prstata (ACP), na prostatite aguda ou
crnica, no infarto de prstata e aps o manuseio prosttico.
Assim sendo, a determinao dos nveis sricos de PSA no laboratrio clnico vem se
constituindo no mais significativo avano para o diagnstico e acompanhamento do
adenocarcinoma prosttico (ACP).
Em sntese, a dosagem do PSA no soro tem sido empregada:
1. Como um eficiente marcador tumoral do adenocarcinoma prosttico (ACP).
2. Para monitorar a teraputica de pacientes portadores de neoplasia prosttica. Se aps
uma prostatectomia radical constatar-se PSA no soro, indica presena de resduos de
tecido prosttico ou metstases. Consequentemente, aumentos gradativos dos nveis
sricos de PSA revelam a recorrncia da doena.
3. Em programas de screening de ACP em populaes selecionadas de homens,
assintomticos e com idade superior a 50 anos, permitindo o diagnstico precoce, a nvel
populacional.
Entretanto, o simples aumento na taxa de PSA Total srico no permite uma concluso
diagnstica, visto que, alm do ACP, outras patologias bengnas da prstata como a
hiperplasia benigna da prstata (HBP) e prostatite podem elevar o PSA Total.
Mais recentemente foi demonstrado que o PSA encontra-se no soro nas seguintes formas:
1. 10% na forma livre.
2. de 90% ligado a inibidores de protease tais como a alfa1-antiquimiotripsina (ACT-PSA).
3. O PSA Total representa a somatria das duas formas 1 e 2.
A meia vida do PSA complexado de cerca de 2 a 3 dias, sendo que esta lenta eliminao
se deve ao fato da molcula ser grande e de difcil filtrao glomerular. J a frao livre tem
uma meia vida de cerca de 2 horas, pois compatvel com a filtrao glomerular.
Com os avanos metodolgicos recentes, constatou-se que os pacientes com patologias
prostticas bengnas (HBP e prostatite) apresentam uma proporo maior da forma livre do
PSA em relao ao PSA Total, enquanto que em pacientes com ACP h maiores propores
da forma complexada do PSA.
27
Com base nesse conhecimento, vrios estudos demonstraram que os portadores de ACP
apresentam uma relao PSA Livre/PSA Total inferior a 20%, enquanto que nos pacientes
com HBP essa relao igual ou superior a 20%.
Amostra biolgica
Sangue. Usar soro. Evitar a hemlise.
Evitar manipulao prosttica 48 horas antes do exame. Jejum de 8 horas.
Mtodos de Dosagem
Enzima Imunoensaio(EIA)
Ensaio Imunoradiomtrico (IRMA)
Ensaio Imunofluorimtrico (IFMA)
Metodologia Imunofluorimtrica
Os valores de referncia variam de acordo com a metodologia empregada.
Mtodo Fluorimtrico Duplo:
PSA Total: at 5,20 ng/mL
PSA Livre: at 0,88 ng/mL
Relao Percentual: abaixo de 20% provvel ACP
Acima de 20% provvel HBP
Ateno: A relao percentual s vlida quando o valor de PSA Total for acima de 4,0
ng/mL
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28

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ENZIMAS NO LABORATRIO

Prof. Homero Jackson de Jesus Lopes

Determinao da Atividade Enzimtica

Mais recentemente, a Unio Internacional de Bioqumica (IUB) e a Unio Internacional de

Transformao de Unidade Internacional (U) em Unidade Cataltica (Kat)

Anteriormente, quando se desenvolvia uma metodologia para as dosagens enzimticas, as

Metodologias empregadas para a determinao

2-Metodos que analisam o produto formado

Outros exemplos desse tipo de sistema so as dosagens da gamaglutamil transferase (GGT)

Timolftalena + Tampo Alcalino Colorao Azul

3- Mtodos que analisam a variao de absoro do coenzima que participa da reao

Ex: Dosagem da desidrogenase lctica (LDH) pelo mtodo do ultravioleta:

O substrato de cido lctico transformado (oxidado) em cido pirvico, enquanto que o

4-Mtodos Otimizados: so mtodos propostos pela Associao Alem para a Qumica

5-Outros mtodos que podem ser utilizados nas dosagens enzimticas

Erros na coleta da amostra

Erros na conservao da amostra

* Somente com reativao por N-acetil-cistena (NAC)

Erros nas determinaes da atividade enzimtica

2. pH timo da reao: cada enzima apresenta um pH timo para a sua ao cataltica, o

3. Temperatura da reao: a formao do complexo E-S exige uma quantidade de energia

4. Concentrao do substrato: nas reaes enzimticas, a velocidade da reao aumenta

5. Concentrao da enzima: dentro de certos limites, a velocidade da reao enzimtica

6. Estabilidade dos reagentes: nunca trabalhar com reagentes apresentando vencimento

8. Limpeza da vidraria: na anlise, sempre trabalhar com material rigorosamente limpo.

Erros na avaliao dos resultados

IUB = UNIO INTERNACIONAL DE BIOQUMICA

Relao Clareamento de Amilase /Clareamento de Creatinina

2. Metodologia Cintica Colorimtrica (Mtodo do Cloronitrofenol )

2. Metodologia Cintica Colorimtrica de Tempo Fixo (Mtodo de Reitman e Frankel)

1. Metodologia Cintica Colorimtrica (Mtodo do Paranitrofenol) GOLD ANALISA

2. Metodologia Cintica Colorimtrica de Tempo Fixo (Mtodo de Roy mod.)

ENZIMAS NAS DOENAS CARDACAS

Valores elevados de CK Total

Valores elevados da Isoenzima CK-BB

Valores elevados da Isoenzima CK-MM

Valores elevados da Isoenzima CK-MB

Mtodo de Dosagem da Isoenzima CK-MB

Aplicao Clnica do Fracionamento da LDH

Valores elevados de LDH total

Mtodos de Dosagem da LDH Total

Mtodos de Dosagem das Isoenzimas da LDH

3. ASPARTATO AMINOTRANSFERASE (AST) - Ver pgina 13 - 15

2.LDH (Desidrogenase Lctica/Lactato Desidrogenase)

3.CK/CPK (Creatino Cinase/Adenosina Trifosfato: Creatina N-Fosfotransferase)

3.MIOSINA DE CADEIA LEVE

ENZIMAS EM DOENAS DA PRSTATA

ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO

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