FLUJO DE LA INFORMACIN

GENTICA

REPLICACIN

Sandra Milena Rondn Lagos. MSc. Ph.D

 CONTENIDO

1. Cmo se copia el material gentico?

2. Elementos requeridos para la replicacin

3. Proceso de replicacin:
3.1 Inicio
3.2 Elongacin
3.3 Terminacin

4. PCR
CUANDO OCURRE LA REPLICACIN DEL ADN?
 DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA

Copia Material Gentico

Lectura Material gentico

DNA Transcripcin

Replicacin RNA FENOTIPO

GENOTIPO
PROTENA
Traduccin
1. COMO SE COPIA EL MATERIAL GENTICO?

3 billones de pares de bases

 2. ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA
REPLICACIN
http://www.youtube.com/watch?v=YqjbmrQcyfM

2.1 Origen de Replicacin

2.2 Nucletidos (dNTP)

2.3 Grupo de enzimas

Helicasas
Girasas (Topoisomerasas)
SSB y/o protenas de replicacin A (RPA)
Primasas
ADN polimerasas
Ligasas
 2.1 ORIGENES DE REPLICACIN

Genoma Humano = 3 mil millones de pb V= 500nt/seg procariotes

* V= 50nt/seg mamfero
 La replicacin siempre comienza en los sitios de origen en cada cromosoma.

Todos los orgenes tienen en comn secuencias conservadas de

aproximadamente doce pares de nucletidos, llamados ARS (autonomus
replication sequence).

http://genomasur.com/lecturas/Guia12a.htm
EUCARIONTES:,MUCHOS,ORGENES,DE,REPLICACIN.,
MLTIPLES,REPLICONES!

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Replicacion/Replicacion.htm - Csar Benito Jimnez, Profesor Titular de Gentica, Departamento de Gentica, U.C.M.
 2.2 NUCLETIDOS

Deoxinucletidos trifosfato (dNTPs)

ATP
GTP
CTP
TTP
 2.3 ENZIMAS

2.3.1 Helicasas:
Rompen los puentes de
hidrgeno que mantienen
unidas las dos cadenas de
la doble hlice.
 2.3 ENZIMAS

2.3.2 Topoisomerasas: Alivian la

tensin de torsin para promover
el avance de la replicacin,
alterando el superenrollamiento del
DNA sin modificar en otros
aspectos su estructura.

Topoisomerasa I: cortan un
hebra del ADN
Topoisomerasas II: cortan la
doble hebra del ADN. Hidrlisis
de una molcula de ATP por Superenrrolamiento en ADN doble hlice circular.

cada corte. Ej: Girasa

procariota.
 3.3 ENZIMAS

2.3.3 Protenas de unin a hebra sencilla (SSB en

procariotas) y protenas de replicacin A (RPA en
eucariotas):
Se une al ADN de hlice sencilla y lo estabiliza retrasando
la regeneracin de la doble hlice. Estabilizan las hebras
sencillas.
 3.3 ENZIMAS

2.3.4 Primasa (ARN

polimerasa) :

En conjunto con otras protenas

forma el primosoma encargado
de iniciar la sntesis del ARN
cebador.

La Primasa, que sintetiza el

Cebador de RNA, forma un
complejo con la DNA
polimerasa alfa eucaritica.
La accin consecutiva de
ambas enzimas conduce a la
formacin de un Cebador RNA -
DNA
 3.3 ENZIMAS

2.3.5 ADN Polimerasas: recrutan los nucletidos libres y los

aparean con el complementario de la hebra parental

Procariotes Pol Pol II Pol III

Eucariotes Pol a, Pol b, Pol g, Pol d, Pol e

n n mit n n
 FUNCIN,DE,LAS,ADN,POLIMERASAS,EUCARITICAS!
!
ADN polimerasa (alpha) sintetiza la hlice retardada

ADN polimerasa (delta) sintetiza la hlice conductora.

SIEMPRE EN DIRECCIN 5 3
2.3.5 ADN Polimerasas!

Sntesis de ADN en direccin 5' a 3

Lectura del molde en direccin 3 a 5'

2.3.5 ADN Polimerasas:!
!!
Actividad 3 exonucleasa (35) de correccin de pruebas
D o s m o l c u l a s
exactamente iguales
Mutaciones
Funcin correctora de
pruebas que retira el
ltimo nucletido que la
polimerasa haya
introducido de forma
incorrecta
Funcin exonucleasa 3' -
5 .
2.3.6 LIGASAS

Sellado y unin de los

sucesivos fragmentos,
enlazando el extremo 3'OH de
un fragmento con el 5'P del
siguiente fragmento.
 Helicasas: rompen los puentes de H y
abren la doble hebra

SSB (single-stranded DNA binding

proteins): estabilizan las hebras
sencillas

Primasas: en conjunto con otras

protenas forma el primosoma
encardado de iniciar la sntesis del
ARN cebador (50nt) .

To p o i s o m e r a s a s : e l i m i n a n l o s
superenrrollamientos
Topoisomerasa I: corta una hebra del
ADN
Topoisomerasa II: corta las dos
hebras del ADN

Ligasas: Unen los fragmentos de

Okasaki

www.designeduniverse.com/. ../Nobel_DNA1.htm
3. PROCESO DE REPLICACIN EN
EUCARIOTAS

3.1 INICIACIN

3.2 ELONGACIN

3.3 TERMINACIN
 3.1 INICIO

G1 S

Secuencia consenso en levaduras

Resto de eucariotas al azar
 PRINCIPIOS EN LA RELACIN ENTRE EL ESTADO DE
REPLICACIN Y LA PROGRESION DEL CICLO
CELULAR

El inicio de la replicacin del DNA obliga a la clula a

emprender una divisin.
Una vez iniciada la replicacin, no puede tener lugar la
consiguiente divisin hasta que se haya completado dicha
replicacin. El final de la replicacin constituye una seal
para la divisin.
El proceso de replicacin se lleva a cabo sin necesidad
de una separacin completa de la cadena progenitora: la
doble hlice se desenrrolla gradualmente y sus dos
hebras se van separando a la par que se produce su
replicacin.
 Unidad de replicacin= Replicn

Apertura de la doble hlice en el

origen de replicacin
Creacin de dos horquillas de
replicacin
Sntesis de cebadores
 ORIGEN DE REPLICACIN

Genoma humano necesita 30,000

orgenes de replicacin.

Levaduras, eucariotas simples, tambin

mltiples orgenes.

Separados desde 50 a 100 Kb

E.coli necesita 1 origen de replicacin

3.2 ELONGACIN

Replisoma: Complejo de enzimas y

factores proteicos responsables de la
replicacin.

A m b a s h e b r a s s o n c o p i a d a s
simultneamente.

Unin fragmentos de Okazaki

3.3 ELONGACIN
Replisoma
Fragmentos de Okazaki
 3.4 PROCESO DE REPLICACIN: TERMINACIN

Cuando las horquillas de

replicacin alcanzan a las
horquillas de los replicones
contiguos.

D e s e n s a m b l a j e d e la
maquinaria de replicacin

Modificacin del material

gentico
3.4 PROCESO DE REPLICACIN: TERMINACIN
REPLICACIN DE TELMEROS

E x t r e m o s d e l o s
cromosomas.
A D N n o c o d i f i c a n t e ,
altamente repetitivas
Repeticiones en tndem
(VNTR): AGGGTT (2000
repeticiones)
Estabilidad estructural de los
cromosomas
I n v o l u c r a d a s e n
enfermedades como el
cncer.
36
REPLICACIN DE TELMEROS
 TELOMERASA,
La Telomerasa aade estas secuencias a los extremos
cromosmicos. La Telomerasa lleva una corta secuencia de
ARN (por ejemplo AACCCC) que sirve de molde para sintetizar
la secuencia repetida de los extremos (TTGGGG).
Transcriptasa inversa
La adicin de estas secuencias cortas que lleva a cabo la
Telomerasa contrarresta la tendencia al acortamiento de los
telmeros durante la replicacin normal.
REPLICACIN DE TELMEROS

Actividad Transcriptasa Inversa

 Jun-Ping Liu, and He Li Reproduction 2010;140:215-222

2010 Society for Reproduction and Fertility

TELMEROS Y ENVEJECIMIENTO CELULAR
 Bidireccional
Semiconservativa
2n 4n
G1 S
G2
 FRECUENCIA DE ERRORES
EN LA REPLICACIN DEL ADN

1 x cada cien millones a mil millones de nuclotidos

incorporados.

FIDELIDAD DE REPLICACIN DEL ADN

Mayor grado por la eficiencia de la ADN polimerasa.
Discrimina en contra de una base desapareada
(reduce de 10-3 a 10-6)
Efecta doble lectura teniendo capacidad de
exonucleasa.(100 mil veces mas exactitud)
REPLICACIN,EN,PROCARIOTAS,
CARACTERSTICAS,DE,LA,REPLICACIN,EN,BACTERIAS:,
NICO,PUNTO,DE,ORIGEN,,REPLICN!

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Replicacion/Replicacion.htm - Csar Benito Jimnez, Profesor Titular de Gentica, Departamento de Gentica, U.C.M.
 El primer acontecimiento que debe ocurrir es la apertura de
la doble cadena en Ori C, creando una burbuja con 2
horquillas de replicacin
Cuando las molculas de ADN circular se replican se observan
lo que se denominan "ojos o burbujas" de replicacin.
La forma que adoptan los intermediarios de la
replicacin se parece a de la letra griega .

Burbuja Forma .
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Replicacion/Replicacion.htm - Csar Benito Jimnez, Profesor Titular de Gentica, Departamento de Gentica, U.C.M.
 4. PCR
Polymerase chain reaction (Reaccin en cadena de la polimerasa)
Objetivo: Amplificacin de fragmentos de ADN

Desnaturalizacin

Anillamiento

Extensin

www.gsa.vt.edu/.../ AS4%20Website/Pics/pics.htm
www.jracademy.com/ ~rennerp/2003/methods.html
55
 56

TALLER
Basados en la noticia How cancer was created by Evolution publicada en
http://www.bbc.com/earth/story/20160601-is-cancer-inevitable:
1. Represente mediante un diagrama de flujo cada una de las
caractersticas de las clulas tumorales establecidas en el artculo

2. Explique las siguientes afirmaciones estableciendo relaciones con

alteraciones a nivel de la replicacin del ADN y posterior proliferacin
descontrolada de las clulas tumorales.
El cncer no slo es extremadamente penetrante, sino tambin cada vez
ms comn.

Una clula cancerosa rompe todas las reglas de divisin controlada que
siguen nuestras otras clulas.
 57

TALLER

Tenemos varios genes "correctivos" que envan instrucciones para

matar cualquier clula daada. "Hay millones de aos de evolucin
en esto", dice Charles Swanton del Instituto Francis Crick en el Reino
Unido. "Es bastante bueno, pero no es perfecto".

"Los tumores no evolucionan de manera lineal", dice Swanton. "Ellos

evolucionan de una manera evolutiva ramificada, lo que significa que
no existen en un tumor dos clulas cancerosas que sean las mismas
o iguales.

Piense en la evolucin que sucede dentro de un tumor de cncer

como un rbol con muchas ramas dice Charles Swanton