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CROMATOGRAFIA Y
ELECTROFORESIS
DR. LUIS MIGUEL CANSECO AVILA
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Historia de la Cromatografa
Cromatografa.
1938 Reichstein:
R i h t i cromatografa
t f lquida
l id o fluida.
fl id
1938 Izmailov
I il y Schraiber:
S h ib capa fina
fi ded
alumina (vidrio).
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1947 Boyd,
Boyd Tompkins
Tompkins, Spedding,
Spedding Rieman,
Rieman y
otros: Cromatografa de intercambio inico.
1956 Lathe
L th y Ruthvan:
R th almidn
l id ((estimacin
ti i
PM).
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CROMATOGRAFIA
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CROMATOGRAFIA
Muy variadas
ffase mvil:
il fluido
fl id (gas,
( l id o fluido
lquido fl id
supercrtico) que arrastra a la muestra a travs
de una fase estacionaria
estacionaria.
Fase estacionaria: slido o un lquido fijado en
un slido
slido.
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CROMATOGRAFIA
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Tipos de cromatografa
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Cromatografa de adsorcin
cromatografa lquido-slido
lq ido slido
cromatografa gas-slido
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Cromatografa de particin
La fase estacionaria de la cromatografa de
particin es un lquido soportado en un slido
inerte.
cromatografa en papel
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Cromatografa de intercambio inico
Cromatografa de exclusin
C
Cromatografa
t f de
d afinidad
fi id d
Anlisis de Protenas
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COMPONENTES.-
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-Cromatografa en el anlisis de
Protenas: Purificacin
Segn la matriz escogida:
Carga
Hidrofobicidad
Tamao
Capacidad de unirse a grupos qumicos
p
particulares.
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Cromatografa de intercambio inico
pH del solvente
fuerza inica (proporcional a la concentracin de
iones)
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I t
Intercambiadores
bi d catinicos
ti i
La matriz carga negativa
Intercambiadores aninicos
La matriz carga positiva
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ELUSION :
Su pH
PUNTO ISOELCTRICO
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C
Cromatografa
t f dde exclusin
l i por ttamao
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C
Cromatografa
t f dde exclusin
l i por ttamao
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Cromatografa de afinidad
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Interacciones biolgicas tpicas
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La matriz.
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ELECTROFORESIS
PROTEINAS.- De que depende la carga?
Forma
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Electroforesis en Geles de
Poliacrilamida (PAGE).
Preparacin del soporte.
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Preparacin
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PAGE en condiciones no
desnaturalizantes
MIGRACION
FORMA
CARGA
Tamao
FUNCION
Actividad enzimtica
Capacidad
p de unin de anticuerpos
p
Unin a receptores
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PAGE en condiciones
desnaturalizantes
No forma, no carga,
T
Tamao
SDS
REDUCTORES : DTT
DTT, B
Beta-Mercapto
t M t
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Electroforesis bidimensional.
bidimensional
Carga
T
Tamao
PI
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Electroenfoque
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Electroforesis de cidos nucleicos
TAMAO
CARGA ?
FORMA
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NATURALEZA DE LOS GELES
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Factores q
que afectan a la movilidad
electrofortica del DNA.
Voltaje
T
Tamao del
d l Poro
P
Forma
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TAMAO
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FORMA
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