Cuestionario 3

1. Fundamente los resultados hematolgicos obtenidos y relacinalo con la

anemia hemoltica
La aglutinacin es la base para la clasificacin de los grupos sanguneos.
La aglutinacin puede ser por:
Anemias hemolticas
Eritroblastosis fetal
Fundamentos de las transfusiones
En la membrana del eritrocito contiene gran cantidad de determinantes
antignicos las cuales son productos directos e indirectos de los genes que se
clasifican en:
Grupo A
Grupo B
Grupo AB
Grupo O
En la prctica realizad se observ:
Grupo A
o Su membrana Contiene antgeno A
o El suero contiene Anticuerpo contra B
Grupo B
o Su membrana Contiene antgeno B
o El suero contiene Anticuerpo contra A
Grupo AB
o Su membrana Contiene antgeno A y B
o En su suero no contiene anticuerpos
Grupo O
o Su membrana no Contiene antgeno
o El suero contiene Anticuerpo contra B y contra A
Los casos de incompatibilidad sangunea se producen por las transfusiones
sanguneas, trasplante de rganos y tambin por el intercambio de sangre entre
la madre y el feto en el caso de que posean grupos sanguneos incompatibles,
esto se produce cuando la madre tiene grupo O y el feto posee un grupo A o B,
en este caso los anticuerpos de la madre reconocern los glbulos rojos del feto
como extraos atacndolos.
2. explique las caractersticas de la membrana celular de los hemates
que generan las reacciones antgeno anticuerpo.
La forma del eritrocito est mantenida por protenas de la membrana en
asociacin con el citoesqueleto. La membrana del eritrocito est compuesta por
una bicapa lipdica que contiene dos grupos de protenas importantes desde el
punto de vista funcional:
Protenas Integrales de la Membrana:
Constituyen la mayor parte de las protenas en la bicapa lipdica y que se
agrupan en dos familias: glucoforinas y protena banda 3. Los dominios
extracelulares de estas protenas expresan antgenos de grupo sanguneo
especficos.

o La glucofornia C, desempea un papel importante en la adhesin de la

membrana celular a la red proteica citoesqueltica subyacente.
o La protena banda 3 fija hemoglobina y acta como un sitio de anclaje
adicional para las protenas del citoesqueleto.
Protenas Perifricas de la Membrana:
Estn en la superficie interna de la membrana celular y se organizan en una red
bidimensional de patrn hexagonal que forma una lmina sobre la superficie
citoplasmtica de la hojuela interna en la membrana. Esta red se compone
principalmente de espectrina, actina, protena banda 4.1, aducina, protena
banda 4.9 y tropomiosina.
Los eritrocitos contienen adems, una protena especializada en el transporte de
oxgeno y bixido de carbono, llamada hemoglobina: la hemoglobina se
compone de cuatro cadenas polipeptdicas, cada una de las cuales forma un
complejo con un grupo hemo que contiene hierro.

Mecanismos inmunohemolticos

En las RTHA estn presentes 2 tipos de hemlisis: intravascular y extravascular.

Una de estas suele predominar, lo que est en relacin con el tipo de
inmunoglobulina, la concentracin de Ac y el estado del sistema inmunolgico.

En las reacciones mediadas por IgM predomina la hemlisis intravascular,

debido a la capacidad de estos Ac para activar el complemento hasta la
formacin del complejo de ataque a la membrana (C5-9).La destruccin de los
eritrocitos ocurre directamente en el torrente circulatorio, lo que determina la
presencia de hemoglobinemia y hemoglobinuria. Una proporcin pequea de
clulas no son lisadas por este mecanismo debido a la accin protectora de las
protenas reguladoras del complemento presentes en el plasma y de las
protenas inhibitorias de la membrana celular o porque molculas de IgG se unen
a los Ag. Estas clulas son capturadas por el sistema mononuclear fagoctico a
travs de los receptores para la fraccin Fc de las inmunoglobulinas G y del
componente C3b del complemento, lo que permite su fagocitosis o su
destruccin por citotoxicidad celular dependiente de Ac. La incompatibilidad ABO
es el ejemplo clsico de esta reaccin.

Cuando los aloanticuerpos son de clase IgG predomina la hemlisis

extravascular, ya que estos no activan el complemento o solo lo hacen
parcialmente hasta C3. La destruccin de los eritrocitos recubiertos por
inmunoglobulinas y componentes del complemento ocurre en el hgado y el bazo,
despus de ser capturados por monocitos y macrfagos a travs de sus
receptores para la fraccin Fc de la IgG y del componente C3b del complemento.
Es por eso que no suele acompaarse de hemoglobinemia ni hemoglobinuria,
sino ms bien de aumento de la bilirrubina indirecta. Una proporcin de clulas
sufren hemlisis por el mecanismo de citotoxicidad celular dependiente de Ac.
 3. explique las caractersticas de los anticuerpos incompletos y su relacin
con las anemias hemolticas inmunes.
Anticuerpo incompleto: Es aqul que al unirse al antgeno del eritrocito y debido
a su pequeo tamao, no alcanza a unir a otros eritrocitos y as causar
aglutinacin. Sin embargo, al estar unido impide que el complemento acte.
Los anticuerpos incompletos son aquellos que no aglutinan hemates
suspendidos en solucin salina. En la reaccin de la antiglobulina, los hemates
recubiertos por anticuerpos incompletos, por ejemplo anti Rh de tipo IgG, son
aglutinados por anti IgG, el cual une las molculas de IgG presentes en los
hemates cercanos.
La prueba de Coombs fue descrita por primera vez en 1945 por Robin Coombs.
Es una prueba que busca anticuerpos que estn pegados a la membrana del
glbulo rojo y que acten contra ellos, causando una hemlisis (destruccin
prematura). Algunos anticuerpos (Ac) incompletos (IgG) son incapaces de
aglutinar los glbulos rojos por si solos, pero pueden sensibilizarlos,
adhirindose a su superficie, o fijar el complemento sin llegar a hemolizarlos.
Cuestionario 4
1. Explique detalladamente el fundamento de prueba de antiglobulina
Humana; detalle las fases de la prueba y su importancia en el diagnstico
de anemias hemolticas.
Las experiencias descriptas por Coombs, Mourant y Race en 1945 establecieron
que las Pruebas Antiglobulina Humana resultaban los mejores mtodos para
detectar anticuerpos sensibilizantes pero no directamente aglutinantes.
Originalmente, se haca referencia a antgenos del sistema Rh pero experiencias
posteriores probaron el valor de estas pruebas en la deteccin de anticuerpos en
casi todos los grupos sanguneos de importancia clnica, siendo empleadas
actualmente en los siguientes casos:
Prueba Antiglobulina Indirecta
Screening de suero de donantes y pacientes para anticuerpos irregulares.
Pruebas de compatibilidad previas a la transfusin.
Fenotipo de glbulos rojos. Identificacin y titulacin de anticuerpos
encontrados en suero o eluatos.
Prueba Antiglobulina Directa
Diagnstico de laboratorio de anemia hemoltica y enfermedad hemoltica
del recin nacido.
Investigacin de reacciones dudosas en una transfusin.
Investigacin de enfermedades autoinmunes que involucran la unin de
inmunoglobulinas y/o fracciones del complemento a los glbulos rojos.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El agregado de Suero Anti-humano (poliespecfico) a glbulos rojos cubiertos de
inmunoglobulinas y/o fragmentos de complemento produce una aglutinacin de
los glbulos rojos visible macroscpicamente.
PROCEDIMIENTO
Este reactivo ha sido estandarizado segn los procedimientos detallados a
continuacin; su desempeo en el uso mediante otras tcnicas no puede ser
garantizado.
I- PRUEBA ANTIGLOBULINA INDIRECTA (en solucin salina de fuerza inica
normal)
1) En un tubo de hemlisis colocar 2 gotas del suero a probar.
2) Agregar 1 gota de suspensin de glbulos rojos a probar al 3%, lavado 3 veces
y resuspendidos en PBS. El gotero provisto dispensa un volumen de 50 5 ul.
Es importante que se mantenga la relacin reactiva: clulas en todos los
sistemas de ensayo.
3) Mezclar e incubar a 37o C durante 30-60 minutos.
4) Lavar los glbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad
posible de solucin salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botn
celular seco. Descartar completamente el sobrenadante luego del ltimo
lavado.
5) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecfico) al botn de clulas.
Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
6) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botn celular y observar
macroscpicamente. La observacin puede facilitarse si se emplea una fuente
de luz difusa. Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar
lugar a lecturas negativas de un aglutinado dbil (falso negativo).
7) Los resultados negativos deben confirmarse por adicin de glbulos rojos
sensibilizados con IgG dbiles (Control de Coombs).
II- PRUEBA ANTIGLOBULINA INDIRECTA
El empleo de esta solucin permite reducir el tiempo de incubacin a 15 minutos.
Los glbulos rojos deben lavarse 2 veces con PBS y una vez con LISS.
Finalmente preparar con esta solucin una suspensin de glbulos rojos al 3%.
1) Colocar en un tubo de hemlisis 1 gota de suero a probar.
2) Agregar 1 gota de glbulos rojos a probar al 3% en LISS.
3) Mezclar e incubar a 37 C durante 15 minutos en bao de agua.
4) Lavar los glbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad
posible de solucin salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botn
celular seco. Descartar completamente el sobrenadante luego del ltimo
lavado.
5) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecfico) al botn de clulas.
Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
6) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botn celular y observar
macroscpicamente. La observacin puede facilitarse si se emplea una fuente
de luz difusa. Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar
lugar a lecturas negativas de un aglutinado dbil (falso negativo).
7) Los resultados negativos deben confirmarse por adicin de glbulos rojos
sensibilizados con IgG dbiles (Control de Coombs).
III- PRUEBA ANTIGLOBULINA DIRECTA
Se emplea para demostrar la absorcin in vivo de IgG y/o fracciones del
complemento en la superficie de los glbulos rojos.
1) Preparar una suspensin de glbulos rojos a probar en PBS al 3%.
2) En un tubo de hemlisis colocar 1 gota de esta suspensin.
3) Lavar los glbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad
posible de solucin salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botn
celular seco. Descartar completamente el sobrenadante luego del ltimo
lavado.
4) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecfico) al botn de clulas.
Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
5) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botn celular y observar
macroscpicamente. La observacin puede facilitarse si se emplea una fuente
de luz difusa. Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar
lugar a lecturas negativas de un aglutinado dbil (falso negativo).
6) Los resultados negativos deben confirmarse por adicin de glbulos rojos
sensibilizados con IgG dbiles (Control de Coombs).
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
La observacin de aglutinacin (con cualquiera de las tcnicas empleadas) en
presencia del Suero Anti-humano (poliespecfico) indica la presencia de IgG o
componentes del complemento en la membrana del glbulo rojo; la reaccin es
positiva. Si no se observa aglutinacin, la reaccin es negativa.
2. Explique la importancia del empleo de la albumina bovina en la prueba.
Explique la forma como interviene en la deteccin de anticuerpos
irregulares.
La Albmina Bovina es un reactivo complementario de gran utilidad en tcnicas
inmunohematologicas diversas para potenciar la reaccin entre anticuerpos
clase de IgG y sus antgenos correspondientes. La albmina acta disminuyendo
el potencial zeta y aumentando la constante dielctrica del medio, con lo cual la
fuerza de repulsin entre hemates se reduce facilitando su aglutinacin. Los
anticuerpos del sistema Rh reaccionan muy bien en todos aquellos medios que
contienen Seroalbmina bovina (SAB)
3. Defina a que se denomina anticuerpo irregular o incompleto.
Los anticuerpos irregulares son anticuerpos dirigidos contra algn antgeno del
eritrocito que no est presente en los eritrocitos del receptor que se genera en
respuesta a la exposicin del receptor a esta protena. Los anticuerpos
irregulares o aglutininas irregulares son anticuerpos anti glbulos rojos. Estn
presentes en algunas personas que no tienen el antgeno correspondiente en la
superficie de sus glbulos rojos. Una persona Rh negativa no debera tener
efectos anticuerpos anti - Rh. Su presencia es posible despus de recibir una
transfusin o despus de dar a luz a un hijo Rh positivo. Su bsqueda es
sistemtica en el caso de transfusin de sangre y en mujeres embarazadas Rh-
negativas para poder detectar una incompatibilidad materno- fetal.
Anticuerpos incompletos
Usualmente IgG son capaces de adherirse al antgeno pero son
incapaces de aglutinar GR suspendidos en salina.
Solo aparecen con estimulacin antignica

4. Fundamente y describa el proceso de Test de Coombs Indirecto en la

Prevencin de transfusiones incompatibles.

Fundamento

Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de

un segundo anticuerpo, que es una antiglobulina.
La prueba de Coombs indirecta se utiliza para detectar anticuerpos dirigidos
contra antgenos de hemates, distintos de los antgenos ABO. Se realiza
siempre que se prev una transfusin de sangre. Si se detecta algn anticuerpo,
debe procederse a una prueba de identificacin de anticuerpos para conocer
cul de ellos est presente. Al verificar la compatibilidad entre donante y
receptor, y en el caso de que se detecten anticuerpos, se realiza una prueba de
Coombs indirecta modificada. Es importante que la sangre del donante no
contenga los antgenos frente a los cuales el receptor presenta ya anticuerpos.
Si alguien presenta una reaccin transfusional (inmediata o tarda), el mdico
solicitar las dos pruebas de Coombs (directa e indirecta) para investigar la
causa de la reaccin. Una vez se haya resuelto la situacin, puede solicitarse
nuevamente la prueba indirecta para saber si el paciente ha desarrollado ms
anticuerpos

La prueba de Coombs indirecta busca anticuerpos que estn flotando en la

sangre. Estos anticuerpos podran actuar contra determinados glbulos rojos.
Este examen casi siempre se hace para determinar si usted puede tener una
reaccin a una transfusin de sangre.
Forma en que se realiza la prueba de Coombs

La sangre se extrae tpicamente de una vena, por lo general de la parte interior

del codo o del dorso de la mano. El sitio se limpia con un desinfectante
(antisptico). El mdico envuelve una banda elstica alrededor de la parte
superior del brazo con el fin de aplicar presin en el rea y hacer que la vena se
llene de sangre.

Luego, el mdico introduce suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre

en un frasco hermtico o en un tubo pegado a la aguja. La banda elstica se
retira del brazo. Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la
aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
En bebs o en nios pequeos, se puede utilizar un instrumento puntiagudo
llamado lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en
un tubo pequeo de vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o en una tira
reactiva. Finalmente, se puede colocar un vendaje sobre el rea si hay algn
sangrado.
Cuestionario 5
1. Explique detalladamente el fundamento de la prueba
Fundamento
Esta prueba valora la resistencia de los hemates, sometindolos a soluciones
tamponadas de cloruro sdico en concentraciones decrecientes, en condiciones
de pH y temperatura constantes.
Cuando los eritrocitos entran en contacto con estas soluciones, entra agua a
travs de su membrana y se hinchan, dando lugar a una salida de parte de la Hb
que contienen o a su totalidad, en caso de que se rompan (hemlisis).
Prueba de fragilidad osmtica

A 5 mL de cada solucin (a las diferentes concentraciones de NaCl) se le aade

100 L de la suspensin de eritrocitos al 25 %, se homogeniza la mezcla
invirtiendo los tubos suavemente, se deja reposar durante 30 min a temperatura
ambiente. Luego, se centrifuga a 2 500 rpm durante 5 min, y se desecha el
precipitado.

Se lee la absorbancia del sobrenadante a 540 nm frente al control negativo. Se

toma como control negativo el tubo con solucin de buffer fosfato salino con una
concentracin de NaCl de 0,9 %, dado que reproduce las condiciones
fisiolgicas. Se toma como control positivo un tubo con 0 % de NaCl (agua
destilada), que provoca hemlisis mxima. Se calcula el porcentaje de hemlisis
segn:

2. Interprete la prueba realizada

La prueba de fragilidad osmtica indica la resistencia de los eritrocitos a la
ruptura por accin de la presin osmtica, ejercida sobre la membrana
eritrocitaria, al colocarlos en soluciones salinas hipotnicas; es un indicador de
la razn volumen/superficie celular, importante para el diagnstico diferenciado
y la evolucin de determinados tratamientos.
Los resultados muestran que la resistencia globular mnima (comienzo de la
hemlisis) fue en soluciones de 0,45 % de NaCl y la resistencia globular mxima
(hemlisis completa de los eritrocitos) se produce a 0,32 % de NaCl.
Cuestionario 6
1. Describa el procedimiento
Los cuerpos de Heinz son pequeas inclusiones, redondos y retrctiles, que se
ponen de manifiesto con una solucin de cristal violeta y que se encuentran en
la periferia de los hemates. Estn formados por globina desnaturalizada, que se
produce cuando se destruye la hemoglobina.
Para poder observar cuerpos de Heinz se realiz:
a. Preparar 900 ul de suero fisiolgico
Agregar 100 ul de cristal violeta
b. En otro tubo agregar 100 ul del preparado a
Agregar 100 ul de muestra
c. Incubar a 37 C por 5 minutos
d. Hacer el extendido en una lamina
e. Dejar secar
f. Y observar al microscopio con aceite de inmersin

2. Indique los criterios de control de calidad

3. Determine las diferencias con el contenido de los reticulocitos y otras
inclusiones eritrocitarias.
INCLUSIONES ERITROCITARIAS

Restos de ARN de
clulas inmaduras,
RETICULOCITOS
tienen un aspecto
granulado

Son precipitados de
hemoglobina, son
CUERPOS DE HEINZ granulaciones situadas
en la periferia de los
hemates.

Restos de ADN se
CUERPOS DE
parecen a los cuerpos
HOWELL JOLLY
de Heinz

Acmulos de
CUERPOS DE
hemosiderina en forma
PAPPENHEIMER
de puntitos.

Puntos basfilos
dispersos por el
PUNTEADO eritrocito, se produce
BASFILO por intoxicacin de
plomo, talasemias y en
leucemias.

Restos de membrana
celular que rodean el
ANILLOS DE CABOT GR, se produce en
anemias
megaloblasticas.

Formas parasitarias
INCLUSIONES
que aparecen en el
PARASITARIAS
interior de los eritrocitos
Cuestionario 7
1. Fundamente los resultados de la prueba de antiglobulina directa
La prueba de la antiglobulina o prueba de Coombs, permite la deteccin e
identificacin de globulinas ligadas inmunolgicamente a los hemates. La
adicin del reactivo antiglobulina a los mismos ocasionar su aglutinacin.
Prueba de Coombs Directo
Enfermedad hemoltica del recin nacido
Anemia hemoltica autoinmune
Reaccin hemoltica post-transfusional

2. Indique que anticuerpos se involucran con la enfermedad hemoltica de

recin nacido
Deriva de accin de los anticuerpos maternos anti A o anti B, sobre los eritrocitos
fetales del grupo correspondiente.

3. Describa la patogenia de la enfermedad hemoltica del recin nacido

Fisiopatologa
De las causas ms frecuentes de hemlisis por inmunoglobulinas: anemia
hemoltica autoinmune, reaccin hemoltica transfusional y EHRN, es esta ltima
la ms compleja, ya que implica la produccin de anticuerpos en un individuo
sano (madre) y la destruccin de hemates en otro (feto).
Aunque la circulacin materna y la circulacin fetal transcurren anatmicamente
por separado, estudios mediante citometra de ujo han demostrado la existencia
de pequeas HFM en casi todos los embarazos. As, hemates fetales alcanzan
la circulacin materna y se produce la formacin de aloanticuerpos maternos
frente a antgenos eritrocitarios fetales. Una vez que se produce la
aloinmunizacin, la placenta transporta activamente anticuerpos IgG a la
circulacin fetal; estos se unen especficamente a los hemates fetales, que
sern destruidos por el sistema mononuclear fagoctico (SMF). Sin embargo, no
todos los anticuerpos IgG producen EHRN; en general, producen la enfermedad
aquellos anticuerpos que causan destruccin acelerada de las clulas
incompatibles. Es por tanto improbable que est originada por anticuerpos del
sistema Chido/Rodgers y Knops.
Aunque la incompatibilidad ABO es la ms frecuente, pocos fetos y recin
nacidos estn afectados por la enfermedad hemoltica. Los anticuerpos ms
frecuentemente asociados con enfermedad hemoltica moderada y grave son los
del sistema Rh (especialmente el anti-D, que es 50 veces ms inmunognico
que otros anticuerpos de este sistema, seguido del anti-c) y los del sistema Kell.
En el caso del anti-K, adems de la hemlisis, el anticuerpo produce anemia en
el primer trimestre de la gestacin por inhibicin de la eritropoyesis intramedular.
Esto puede agravar la enfermedad en las fases iniciales de la gestacin.
Ocasionalmente, anticuerpos frente a antgenos de otros sistemas causan
enfermedad hemoltica grave en el feto y neo-nato. En ocasiones la ausencia de
enfermedad en presencia de anticuerpos se debe al insuficiente desarrollo de los
antgenos en los hemates fetales y/o a la neutralizacin del anticuerpo por
antgenos solubles.
El anti-D sigue siendo la causa ms frecuente de morbilidad y mortalidad fetal
por enfermedad hemoltica, a pesar de que su incidencia ha disminuido
sustancialmente tras la introduccin de la prolaxis anti-D
4. Explique brevemente otras anemias hemolticas adquiridas por
isoanticuerpos