Az L-[[metil-11C]]metionin hatanyag-tartalm

radiogygyszer minsgellenrzse

Oktatsi segdanyag
a Radioaktv gygyszerek ellltsa s minsgellenrzse (TKML0435)
gyakorlathoz radiokmikus szakirny vegysz MSc hallgatk szmra

sszelltotta:
Dr. Jszai Istvn

Debreceni Egyetem
Nukleris Medicina Intzet
Radiokmiai Kzpont

Debrecen
2014
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

Tartalomjegyzk

1. A gyakorlat clja ................................................................................................................3

2. Elmleti ttekints ..............................................................................................................3
2.1. Pozitronemisszis tomogrfia (PET) ................................................................................3
2.2. L-[metil-11C]metionin ......................................................................................................4
2.2.1. ltalnos informci.....................................................................................................4
2.2.2. Elllts ......................................................................................................................5
2.2.3. Minsgellenrzs ........................................................................................................7
2.3. Nagyhatkonysg folyadkkromatogrfia.....................................................................11
2.4. Gzkromatogrfia..........................................................................................................13
2.5. Flvezet detektoros gamma-spektrometria ...................................................................17
3. A gyakorlaton alkalmazott HPLC rendszer lersa ...........................................................18
4. A gyakorlaton alkalmazott Clarus 500 GC gzkromatogrf lersa ..................................20
5. A gyakorlaton alkalmazott Canberra gamma spektromter sszetevi ..............................22
6. A gyakorlaton elvgzend feladatok ..................................................................................24
7. Krdsek nll felkszlshez .........................................................................................24
8. Felhasznlt s ajnlott irodalom .......................................................................................24

2
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

1. A gyakorlat clja

Az L-[metil-11C]metionin tartalm radiogygyszer rszleges minsgellenrzse. Az

injekcis ksztmny enantiomer tisztasgnak vizsglata radio-HPLC mdszerrel. A
ksztmny etanol tartalmnak meghatrozsa gzkromatogrfis eljrssal. A gygyszer
minta radionuklidos azonostsa s tisztasg vizsglata gamma spektromter segtsgvel.

2. Elmleti ttekints
2.1. Pozitronemisszis tomogrfia (PET)
A PET az egyik legmodernebb funkcionlis kpalkot eljrs a gygyszatban. Mtti
beavatkozst nem ignyl (non-invazv) eljrs, melynek segtsgvel hromdimenzis kpet
nyerhetnk a test egy adott terletrl. A CT-vel kombinlt PET berendezs jelenti ma a
kpalkot diagnosztika egyik legfejlettebb technikjt. A PET s ms hagyomnyos
kpalkot eljrsok (pl. fMRI, SPECT) sajtossga, hogy nem az anatmiai viszonyokat,
hanem a szervek, szvetek klnbz funkcionlis jellemzjt (pl. vrramls, anyagcsere)
jelentik meg egy adott pillanatban. Mivel a betegsg kialakulsa elszr a szervek, szvetek
funkcionlis jellemziben okoz elvltozst, s ezt ltalban msodlagosan ksri az anatmiai
megvltozs, gy rthet, hogy a funkcionlis kpalkot eljrsok jval hamarabb, mg az
anatmiai elvltozsok kialakulsa eltt kpesek jelezni a betegsget, azaz a betegsg nagyon
korai stdiumban nyjtanak hasznos informcit.
A pozitronemisszis tomogrfia mkdse azon alapul, hogy pozitront sugrz izotpokkal
jellt molekulk segtsvel kpes a szervezet biokmiai folyamatait brzolni. Ma mr a
PET-kamert CT-kszlkkel egybe is tudjk pteni, gy teremtve meg a lehetsgt annak,
hogy a PET-tel nyert funkcionlis kpek s a CT morfolgiai informcikat azonos anatmiai
szeletekben, egymsra tudjk vetteni. A PET/CT kombincis technolgia forradalmi
vltozsokat hozott az onkolgiai, kardiolgiai s neurolgiai diagnosztikban. Az eljrs
lnyege, hogy a vizsglt szervbe pozitron kibocstssal boml radioaktv izotpot tartalmaz
molekult juttatnak (a leggyakrabban hasznlt izotpok: 18F, 15O, 13N, 11C). A klnbz
radiofarmakonokkal klnbz funkcik mkdse mrhet fel, attl fggen, hogy az illet
molekula a szervezeten bell milyen folyamatokban vesz rszt. Elmletileg az l szervezet
anyagcserjben rsztvev brmilyen szerves molekula jellhet PET izotppal, s a mdszer
segtsgvel szinte mindegyik biokmiai, lettani folyamat lekpezhet, illetve aktivitsa
mrhet. A leggyakrabban hasznlt radiofarmakon a [18F]FDG, ami a fokozott glkz-
metabolizmus sejtekben (agy, szvizomzat, rosszindulat tumorok, aktivlt granulocitk s
limfocitk) halmozdik fel, s mivel nem metabolizldik, ezrt ugyanebben a formban a
vesn keresztl a vizeletbe vlasztdik ki (ellenttben a glkzzal).
A szervezetbe juttatott marker szveti eloszlst a PET kamera (egy gyr alak detektor)
segtsgvel lehet detektlni a pozitron-kibocstst ksr gamma sugrzs szlelsn
keresztl. A vizsglat sorn nyert adatokbl szmtgp segtsgvel trtnik a kpek
rekonstrulsa. A vizsglattal elsdlegesen a test hossztengelyre merleges szeletek
nyerhetk (a CT-hez hasonlan), akr az egsz testrl. Ksbb a szeletekbl tetszleges
irny, akr hromdimenzis kpek llthatk el. A bejuttatott radiofarmakon szveti
eloszlsa a klnbz (fiziolgis, illetve kros) funkcionlis llapotokban egymstl jelents
mrtkben eltr, gy ennek alapjn a kros folyamatok felismerhetk s lokalizlhatk. A PET
izotpok jellemzje, hogy fizikai felezsi idejk nagyon rvid (2-110 perc), 90 perccel a

3
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

beadst kveten az injektlt aktivits 40%-a mr tvozott a vizelettel, gy alkalmazsuk a

beteg szmra kisebb sugrterhelssel jr. Emellett nagy htrnya az eljrsnak, hogy a
hasznlt radioaktv izotpok olyan gyorsan elbomlanak, hogy kzvetlenl a vizsglat eltt, a
helysznen kell ket ellltani, ami jelentsen nveli a berendezs rt. [1]
Tipikus PET/CT kamera PET felvtel az emberi agyrl

2.2. L-[metil-11C]metionin
2.2.1. ltalnos informci
Kmiai nv: L-[metil-11C]metionin
Struktra:

Molekulakplet: C5H11NO2S
Molekulatmeg: 148,21 g/mol

A [18F] radionuklid fizikai jellemzi:

felezsi id: 20,4 perc
a bomls pozitron kibocstsval (p+=97%) vagy elektronbefogssal (ec=3%) megy
vgbe
A -sugrzs energija: 511 keV (p+-rszecske energija: 635 keV)

4
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

2.2.2. Elllts
A Nukleris Medicina Intzet Radiokmiai Kzpontjban rutinszeren gyrtott
L-[metil-11C]metionin ellltsi, tiszttsi lpseit, illetve a minsgellenrzst az albbiak
tartalmazzk.
11
C radionuklid ellltsa
A 11C radionuklid a GE PETtrace tpus ciklotron segtsgvel kaphat nitrogn (6.0)/ oxign
(0,2%, 5.0) gzkeverk protonokkal trtn besugrzsval. A 11C izotp a 14N(p,)11C
magreakciban keletkezik. A gzkeverkben lv oxign azt biztostja, hogy a keletkez 11C
11
CO2 formban lljon el a besugrzs vgn. Az elllts paramtereit az albbi tblzat
tartalmazza.

Mveleti paramterek:

Ciklotron PETTRACE 2132402

Nyalb energia 16,4 MeV

Nyalbram 30-60 A

Besugrzsi id 20-40 perc

A besugrzand nitrogn/oxign gz trfogata s 70 ml 10 bar

nyomsa

A cltrgy specifikcija:
paramter GE C-11

Target trfogata 70 cm3

Targettest anyaga alumnium

Targetablak Havar flia (25 m)

sszettele

A hatanyag szintzise s tiszttsa

A besugrzott target gzbl a MeI szintzis rendszer [11C]metiljodidot llt el teljesen
automatikusan. Az automatikus program a szintzist az albbi fontosabb lpseknek
megfelelen hajtja vgre:
- A targetbl kiraml gz 11CO2 tartalmt molekulris szr kti meg.
- A megkttt 11CO2 hidrogn gz hozzkeverse utn nikkel kataliztor jelenltben
360 oC-on 11CH4-n alakul.

5
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

- A kvetkez lpsben a 11CH4 egy 720oC hmrsklet kemencben elemi jddal

reagl s [11C]metiljodid keletkezik, amely egy msik molekulris szrn (Porapak N)
ktdik meg. (A metn tbbszr thalad a jdos oszlopon a jobb konverzi rdekben)
- A folyamat vgn a MeI szintzis panel a molekulris szr hevtsvel felszabadtja a
[11C]metiljodidot, ami bekerl a metionin panel 2,5 ml-es fecskendjbe, amelyben a
2 mg prekurzor (L-homocisztein) 1 ml abszolt etanolos oldata s 20 mg
alumnium- oxidra felvitt klium-fluorid kataliztor van.
- A [11C]metiljodid tbuborkol a prekurzor oldaton 2 perc alatt, majd tovbbi 1 perc
vrakozs utn ezt az oldatot a 12 ml fiziolgis soldatot tartalmaz 20 ml-es
fecskendbe juttatjuk t.
- Innen a tisztt oszlopokon t a termket gyjt vegednybe juttatjuk.

GE PETtrace
N2 + 0,2% O2 Besugrzs ciklotron
14
N(p+,)11C 11CO

11
GE MeI Microlab
CO2 elvlasztsa a
target gzbl Waste1

H2 11
CO2 talaktsa
11
CH4-n

He, I2
He
A11CH4 konvertlsa
11
CH3I-d Waste2

He

Metionin panel
A 11CH3I reagltatsa
az L-homociszteinnel
Waste3

He
0,9 % NaCl
oldat
A 11C-metionin tiszttsa
(Sep Pak patronok)

He

A 11C-metionin steril Osztberendezs

szrse s letltse

6
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

2.2.3. Minsgellenrzs
Az injekcis ksztmny enantiomer tisztasgnak meghatrozsa radio-HPLC
mdszerrel
Szksges eszkzk, anyagok
System-1 HPLC rendszer (Lsd a rendszer sszetevinek lerst a Minsgellenrz
laboratriumban)
Eluens: 30 mM ntrium-acett, 17 mM L-prolin, 8 mM rz(II)-acett vizes oldata
Hulladktrol edny lomvdelem mgtt
10-100 l-es digitlis pipetta

Kromatogrfis krlmnyek
Kolonna: Merck Lichrospher 100 RP-18, 5 um, 250x4 mm
Trfogat-ramlsi sebessg: 2,0 ml/perc, izokratikus elci
Kolonnatr hmrsklete: szobahmrsklet
Injektlt trfogat: 20 l
Detektorok: RA detektor
Vizsglati id: 15 perc

Minta elkszts
A radiokmiai- s a kmiai tisztasg meghatrozshoz 20 l mintt injektlunk az oszlopra.

Kirtkels
Kromatogrfis vizsglat adatgyjtse s kiintegrlsa ChromPass szoftverrel trtnik. A
vizsglat megkezdse eltt ki kell vlasztani a megfelel rendszert (System-1), majd a
Enant.METH mdszert kell megadni. A kromatogrfis mrs indtsakor a mrsi fjl nevet
meg kell adni. A kromatogram kiintegrlsnak alaprtkei a kromatogrfis mdszer rszt
kpezik. Amennyiben az automatikus integrls nem megfelel, gy azt manulisan kell
mdostani. (ChromPass Manual Set)

A kromatogrfis mdszer az L-[metil-11C]metionin hatanyag s a D-[metil-11C]metionin

szennyez forma kimutatsra alkalmas. Az L-[metil-11C]metionint s a D-[metil-
11
C]metionint tartalmaz minta RA detektoron mrt kromatogramjt az albbi bra
tartalmazza.

7
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

Tjkoztat retencis idk:

D-[metil-11C]metionin TR=5,5 perc
L-[metil-11C]metionin TR=11 perc

Az enantiomer tisztasg meghatrozshoz a radioaktivits detektoron kapott kromatogramot

hasznljuk. A ksztmny enantiomer tisztasgt az albbi kplettel szmtjuk ki:

100 AL
%E = %
AL + AD

ahol,

E% a ksztmny enantiomer tisztasga

AL az L-[metil-11C]metionin hatanyag cscshoz tartoz, a 11C bomlsval korriglt
cscsalatti terlet
AD a szennyez D-[metil-11C]metionin cscshoz tartoz cscsalatti terlet

A ksztmny enantiomer tisztasga megfelel, ha %E 90%!

Az injekcis ksztmny etanol tartalmnak meghatrozsa GC eljrssal

Szksges eszkzk, anyagok
Clarus 500 GC rendszer (Lsd a rendszer sszetevinek lerst a Minsgellenrz
laboratriumban)
5-50 l-es Hamilton-fecskend, adagolval elltva, amely lehetv teszi 1 l minta
injektlst
Pipetta 40-200 l s 0,5-10 l
Srtett leveg, gst tpll gzknt alkalmazzuk
H2 gz, gst biztost gz
He gz, vivgzknt hasznljuk
Metanol 30 mg/ml koncentrcij vizes oldata (bels standard).

Kromatogrfis krlmnyek
Kolonna: Porabond U., 25 m, bels tmr: 0,32 mm, filmvastagsg: 7 m
Detektor: FID
Injektor hmrsklete: 250C
Detektor hmrsklete: 250C
Vivgz nyomsa: 10 psi
Split arny: 250
Leveg ramlsi sebessge: 450 ml/perc
Hidrogn ramlsi sebessge: 45 ml/perc
Injektlt trfogat: 1 l
Kolonnatr hmrsklete: 150C
Vizsglati id: 3 perc

Minta elkszts
A kapott vizsglati minta 50 l trfogathoz 50 l bels standardot adunk, majd az j elegy
1 l-nyi trfogatt injektljuk a kapillris kolonnra.

8
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

Kirtkels
Kromatogrfis vizsglat adatgyjtse s kiintegrlsa TotalChrom szoftverrel trtnik. Az
etanol tartalmat bels standard mdszerrel hatrozzuk meg.

Az oldszerek tjkoztat retencis idi:

Elcis Retencis id (TR),

Oldszer
sorrend (perc)
1 Metanol 1,5
2 Etanol 2,0

Referencia kromatogram az albbi brn lthat:

A kromatogrfis szoftver a felvett kalibrcis grbbl automatikusan kiszmtjk az etanol

koncentrcit az etanol-ISTD terlet arny ismeretben.

Az elfogadott etanol koncentrci-tartomny 45-70 mg/ml!

Az injekcis ksztmny radionuklidos azonostsa s radionuklidos tisztasgnak,

felezsi idejnek meghatrozsa gamma-spektrometris eljrssal

Szksges eszkzk s anyagok

A Nukleris Medicina Intzet Radiokmiai Kzpontjnak 001. laboratriumaiban

teleptett Canberra gamma spektromter
0,5-10,0 l digitlis pipetta,

9
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

radioaktv forrs ksztshez szrpapr korong,

152
Eu hitelest sugrforrs.

A minta radionuklidos azonostsa s radionuklidos tisztasgnak meghatrozsa

A vizsglatot a 152Eu etalonforrs (10 kBq-100 kBq) spektrumnak felvtelvel kezdjk. Mrsi
id 600 sec (10 perc). A spektrum felvtelt kveten energiakalibrcit vgznk a 152Eu izotp
1. tblzatban szerepl, legintenzvebb -vonalai alapjn. A -vonalak azonostsa az egyes
vonalakhoz tartoz energik s intenzitsok alapjn vgezhet.

Az L-[metil-11C]metionin tartalm minta spektrumnak felvtelhez elszr a httrspektrumot

vesszk fel, mrsi id 600 sec (10 perc). Ezt kveten a minsgellenrzsre sznt ampullbl
100 kBq-nek megfelel trfogat mintt vesznk s egy szrpaprkorong kzepre cseppentjk.
A mrst ugyanolyan geometriai elrendezs mellett vgezzk, mint az etalonforrs esetben. A
spektrum felvtele eltt a memrit trljk, de az energiakalibrcit meghagyjuk. A spektrum
felvtelnek idejt 600 sec (10 perc) rtkre lltjuk. A felvtel utn cscskeresst vgznk, majd
az rtkeket jelents formjban kinyomtatjuk.

1. tblzat

Izotp -energia, (keV) -emittlsi hatsfok, (%)

152
Eu 121,8* 30,72
244,7 7,74
344,3* 27,24
411,1 2,25
778,9* 12,75
964,1* 14,36
1085,8 10,11
1112,1* 13,43
1408,1* 20,77
11
C 511 97,0

Az energiakalibrcit a *-gal jellt -vonalak alapjn vgezzk.

A minta spektrumban 510-512 keV energiatartomnyban meg kell talljuk a 11C izotp
annihilcis -vonalt. Ezt kveten szoftveresen kivonjuk a htteret a felvett spektrumbl.
Amennyiben ezektl eltr energiknl is ismeretlen cscsok tallhatk, gy a minta
spektrumt ebben az esetben mennyisgileg is kirtkeljk, a fotocscsok ROI rtkeit
figyelembe vve. Kvetelmny: a 11C izotphoz tartoz ROI szzalkos terlet arnya 99%!

10
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

Felezsi id mrse
A felezsi id mrshez hat alkalommal felvesszk az L-[metil-11C]metionin tartalm minta
gamma spektrumt 600 sec (10 perc) mrsi idvel. A spektrumokbl kapott fotocscsok ROI
terleteinek termszetes alap logaritmus rtkeit s a mrsek kztti idk percben kifejezett
rtknek fggvnyben grafikusan brzoljuk. A kapott pontokra egyenest illesztnk, amely
meredeksgbl az albbi kplet segtsgvel meghatrozzuk a cscshoz tartoz radionuklid
felezsi idejt:

T1/2 = ln2/Meredeksg

A mrs alapjn szmtott felezsi idnek 19,9 s 20,9 perc kz kell esnie!

2.3. Nagyhatkonysg folyadkkromatogrfia

A mszeres analzis kromatogrfis mdszereinek feladata, hogy a minta komponenseit
legtbbszr szerves vegyleteket egymstl elvlassza. A mdszer mkdsnek alapja az,
hogy a mozgfzisba (amely gz vagy folyadk lehet) kevert mintaelegyet szoros kontaktusba
hozzuk egy azzal nem elegyed msik fzissal, amelyet llfzisnak hvunk (egy lapra felvitt,
vagy cs belsejben rgztett folyadk vagy szilrd halmazllapot anyag). A mozgfzist
(eluens) llandan mozgsban tartva a mintaelegy komponensei az llfzissal val
klcsnhatsuk klnbz mrtke miatt megfelel kontaktid utn elklnlnek egymstl.
Amennyiben a rendszerben egy detektort helyeznk el, amely a mintakomponenseket kpes
megklnbztetni a minta oldszertl, akkor a detektorjel id fggvnyben val
brzolsakor a mintakomponenseket reprezentl cscssorozatot fogunk szlelni. Ezt a
grafikont hvjuk kromatogramnak, a berendezst pedig kromatogrfnak. [2]

A nagynyoms (vagy nagy teljestmny/hatkonysg) folyadkkromatogrfit, amely

mintegy 30 ve ismert, a jelzett vegyletek tiszttsa szempontjbl az egyik legrtkesebb
elvlasztsi eljrsnak tartjuk. Elnyei kz tartozik, hogy a mrseket szobahmrskleten
vagy annak kzelben vgezhetjk, gy akr termikusan rzkeny anyagok is vizsglhatk
vele, megfelel szerkezeti anyagok felhasznlsval pedig biolgiai eredet mintk is
kzvetlenl analizlhatk. A kromatogrfis krlmnyek (kolonna tltetanyaga, eluens
minsge, stb.) megfelel megvlasztsval szinte minden vegyletcsald s minta
vizsglatra alkalmas, st esetenknt sszetett reakcielegyek komponenseinek zemi lptk
sztvlasztsra is alkalmazzk. Hozzrt kromatogrfus kezben a HPLC olyan eszkz,
amellyel a gygyszerekkel, szerves kmiai vagy biolgiai eredet mintkkal kapcsolatos
legtbb analitikai jelleg problma nagy pontossggal s nagy megbzhatsggal megoldhat.
Elnyei mellett nem szabad megfeledkeznnk arrl, hogy mg alap kiptettsg mellett is egy
HPLC kszlk meglehetsen drga, folyamatos zemeltetse pedig szintn nagy anyagi
terheket jelent. A legutbbi vekben elterjedben vannak azok a nagyon kis bels tmrj
kolonnk, amelyekkel a felhasznlt eluens mennyisge az analitikai felbontkpessg
megtartsa, st esetenknt nvekedse mellett a korbbi mennyisg tredkre cskkenthet
(gyors kromatogrfia, Ultranagyhatkonysg folyadkkromatogrfia - UPLC). A
legelterjedtebb, ltalnos clokra szolgl kolonnk mellett ma mr szmos, clzottan csak
egy bizonyos vizsglatra kifejlesztett kolonna is hozzfrhet, amelyekkel nagy szm mintt
gyorsan elemezhetnk. [3]

11
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

A HPLC rendszer a kvetkez alkotrszekbl ll: a kromatogrfis tltetet (llfzist)

tartalmaz oszlopbl (kolonnbl), a mobil fzist (mozg fzist, eluenst) az oszlopon
tnyom pumpbl valamint a molekulk retencis (visszatartsi) idejt jelz detektorbl.
Kolonna Szoftver

Injektor

Eluens

Pumpa Detektor

Hulladk
A HPLC technika nagy hatkonysg s igen gyors analziseket tesz lehetv: akr tucatnyi
komponens is elvlaszthat egy perc alatt. A hatkonysg nvelst a specilis
megosztfzisok alkalmazsa mellett igen apr szemcsemret s gy nagy fajlagos fellet
tltetek ksztsvel rtk el. Az apr tltetszemcsk azonban igen tmren helyezkednek el
a kolonnban, ami jelentsen megnveli annak ramlsi ellenllst. Ennek kvetkeztben a
mozgfzis ramoltatsa csak nagy (100-500 bar, vagyis 107 Pa nagysgrend) nyomssal,
klnleges szerkezeti anyagbl kszl s kmiailag ellenll, kltsges dugattys
folyadkpumpkkal lehetsges. A kromatogrfis gyakorlatban nagyon sok fajta
tltetanyaggal tallkozhatunk. A legegyszerbb szorbens a szoksos szilikagl (norml fzis),
amelynek a fellett klnbz reagensekkel reagltatva hosszabb-rvidebb sznlnccal
(fordtott fzis), vagy funkcis csoportokkal szubsztitult sznlnccal bortjk be. A kmiailag
kttt bevonat a ksbbiekben mr nem tvolthat el. A bevonat alapveten megvltoztatja a
szilikagl tulajdonsgait, pldul alkilcsoportokkal (C8, C18) bevonva az addig ersen polris
fellet szilikagl fellete apolriss vlik, illetve polris csoportokkal (CN, NH2)
homognebb s kevsb aktvv vltoztathat a szilikagl fellet. Megfelelen megvlasztott
felleti csoportokkal teljesen j tulajdonsg tltetanyagok llthatk el. Nemcsak a porzus
felpts szilikagl lehet a hordozja a felleti rtegeknek, hanem mikroszkopikus mret
veg- vagy manyaggyngyk is. A szilikaglen alapul tltetanyagok csak olyan pH-n
hasznlhatk, ahol nem olddik fel a hordoz sziliktvz, azaz az oldat nem lehet bzisos,
sem pedig ersen savas. Vglezrssal a pH-tartomny kiss kibvthet, de semmikppen
sem lehet pH = 9 fltt dolgozni velk. A hasznlhat pH-tartomny problmjt gy
oldottk meg, hogy a felleti rtegeket nem szilikaglhez, hanem mikroszkopikus
veggyngykhz (nem porzus szerkezet), kemny polisztirol-szemcskhez, vagy ms
polimer hordozkhoz ktttk. A polimer hordozs tltetek a mechanikai ignybevtelekkel
szemben kevsb ellenllak, az oldszervlts, pH-vltozs hatsra duzzadhatnak vagy
zsugorodhatnak, a hirtelen nyomsvltozsokat pedig nem viselik el, de izokratikus elci
esetn jl hasznlhatnak bizonyultak. A HPLC kolonnk tbbnyire 1-4 mm bels tmrj,
10-30 cm hosszsg aclcsvek, amelynek tltete apr szemcsj (2-40 m) porzus
hordozbl s annak felletn kttt megosztfolyadkbl ll. Azt, hogy az elkszlt kolonna
milyen komponensek hatkony elvlasztsra lesz alkalmas, a kapcsolt megosztfolyadk
kmiai tulajdonsgai dntik el: pl. fenilcsoportok aroms vegyletek elvlasztsra, kirlis
funkcis csoportok az optikailag aktv komponensek elvlasztsra alkalmas klnsen. Az
igen elterjedt n. C18 kolonnkban a hordoz fellethez oktadecil-csoportok kapcsoldnak.

12
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

Termszetesen az eluens sszettel is nagyban befolysolja az elvlaszts eredmnyessgt

(mozgfzis szelektivits).

Normlfzis kromatogrfinl az llfzis polros, mg a mozgfzis apolros jelleg;

ilyenkor a polros komponensek jobban ktdnek az llfzishoz, vagyis nagyobb retencis
idej cscsokat fognak produklni, ez az sszellts teht a polros komponensek
elvlasztsnak kedvez. Fordtott fzis kromatogrfia esetben ez ppen fordtva van, az
llfzis apolros (pl. C18 csoportokat tartalmaz) s a mozgfzis polros (pl. vz-metanol
elegy); ilyen krlmnyek mellett az apolros komponensek, pl. aroms sznhidrognek
vlaszthatk el jl.

A nagy nyomson val mkds tovbbi kvetelmnyeket tmaszt a felhasznlt

folyadkokkal s a mintaadagolval szemben is. Az eluens s a minta sem oldott gzokat, sem
apr szemcss szennyezdseket nem tartalmazhat; az elbbiek a detektorban felszabadulva a
jel pulzlst idzhetik el, mg az utbbiak a tltetszemcsk kztti, mikromternl kisebb
jratokat eltmtik. gy az eluenseket s a mintt 0,2-0,45 m-es prusmret szrn val
vkuumszrssel s az eluens esetben mg ultrahangos kirzssal szoks elkszteni a
hasznlatra. A HPLC vizsglatokhoz hasznlt oldszereket nagyon gondosan meg kell
szabadtani a bennk oldott gzoktl. Nagy gztartalm oldszert hasznlva a kolonnban
buborkok kpzdnek, amelyek eredmnyekppen az elvlaszts jelentsen romlik, a svok
kiszlesednek, alakjuk torzul, a kolonnn mrhet nyoms, az oldszerramls sebessge
ingadozik. A detektorban keletkez nagyobb buborkok lcscsokat, a fotometris
detektorcella falra feltapad, egyre nvekv mret buborkok az alapvonal emelkedst.
lesen kiugr tskket eredmnyeznek, termszetesen ezen jelensgek egyike sem
reproduklhat. Egy-egy lcscs adott esetben jelentsen megkesertheti a kromatogrfus
lett, hiszen sok munkt kell arra fordtani, hogy bebizonytsuk, az l-knt azonostott
cscs valban lcscs volt.

A radioaktv izotpokat tartalmaz vegyletek HPLC elvlasztsa sorn megfelel tpus

radioaktivits detektorokat alkalmaznak. Ezek ltalban tfolys detektoroknak tekinthetk,
amelyek tulajdonkppen egy lomrnykolssal elltott a megfelel ionizl rszecskkre
rzkeny detektor (mr) fejbl s a hozz csatlakoztatott elektronikai kiszolgl egysgekbl
ll. A kromatogrfis oszloprl tvoz un. aktv komponensek pedig a mrfej eltt elhalad
csszakaszba jutva kerlnek a detektor ltmezejbe. A detektorjel nagysga rtelemszeren
fgg a minta radioaktivitsnak nagysgtl. A mrfej ltalban olyan vegyletet rejt, amely
rzkeny az adott ionizl rszecskre. A klcsnhats eredmnyekppen fotonok
keletkeznek, amit az elektronikai kiszolgl egysgek jelknt rtelmeznek s tovbbtanak az
adatgyjt szoftver fel.

2.4. Gzkromatogrfia
A gzkromatogrfia mozgfzisa gz, az llfzisa vagy felleten (legtbbszr kolonna bels
felletn) kttt folyadk vagy szilrd anyag. A mintt, amely lehet brmilyen
halmazllapot, de leggyakrabban gz vagy folyadk, gz halmazllapotban juttatjuk a
kolonnra a folyadk vagy szilrd halmazllapot mintkat teht a mintabevitel sorn el
kell prologtatni. Ebbl kvetkezik, hogy a kolonnt s a detektort is olyan hmrskleten
kell tartanunk (100-500C), hogy a minta az analzis egsz ideje alatt gz halmazllapot
legyen. A gzkromatogrfia teht bomls nlkl gzz alakthat vegyletek elvlasztsra
alkalmas. Megfelel llfzis megvlasztsval gyors, hatkony elvlasztst biztost

13
 L [metil-11C]]metionin minsgellen
Gyakorlati segdanyag: L-[ sgellenrzs

mindazon vegyletek esetben, amelyek megfelelnek az elbbi elbbi felttelnek. A

gzkromatogrfok felptsnek ltalnos smjt az
a albbi bra mutatja. [2]

Az eluenst, amelyet itt vivgznak

gznak neveznk, rendszerint egy nagynyoms gzpalackbl
vesszk. A vivgz gz megvlasztsa leginkbb a detektor fggvnye: lngionizcis
detektorhoz nitrogn vagy argon, hhvezetkpessgi detektorhoz leginkbb hidrogn
hidrogn- vagy
hliumgz hasznlatos. A gz nyomscskkent
nyomscskkent utn, az ramlsi sebessg folyamatos
mrse mellett jut a kolonnra. A viv
vivgz ltalban: H2, He, (N2, Ar). A vivgz
gz oxign, vz-
vz
s sznhidrognmentes legyen, 99,999% vagy annl nagyobb tisztasg. A hidrogn gz s
robbansveszlyes, palackbl csak indokolt esetben clszer
clszer hasznlni, ma mr a hlium az
ltalnosan elterjedt vivgz. A gzok hagyomnyos gzpalackokbl, vagy azok egy rsznek
kivltsra szolgl gzgenertorokbl vehetk
vehet ki. (bemeneti nyomsok: kb. 4-66 bar).

A kolonnatr egy hthet s ffthet, tipikusan 30-450 C tartomnyban m mkd

lgtermosztt, a hmrsklet
mrsklet vltoztatsa ltalban 3-77 lpsben programozhat. Nagy
stabilits, gyors mkds
kds a kvetelmny, maximlis felftsi
felf sebessg kb. 30-50
50 C/perc. [3]
A mintaadagols tbb okbl is kritikus pontja a gzkromatogrfinak. Egyfell
Egyfel nem knny
megoldani, hogy a minta elprologtatsa pillanatszeren
pillanatszer jtszdjk le mrpedig a hatkony
elvlaszts
lvlaszts alapfelttele, hogy a minta egyszerre, minl gyorsabban kerljn be az eluens
ramlsba. Msfelll a kis trfogat mintk kezelse, reproduklhat adagolsa is nagy
krltekintst ignyel. Ennek megfelel
megfelelen
en tbbfle mintaadagol rendszert is kido
kidolgoztak.
Ezek kzl a legegyszerbb
bb megoldst aaz albbi bra mutatja be.
 L [metil-11C]]metionin minsgellen
Gyakorlati segdanyag: L-[ sgellenrzs

Itt a minta beadagolsa kzvetlenl a kolonna bemenetre szerelt, fttt

fttt mintakamrba
trtnik oly mdon, hogy a kamra tetejt lezr, gumibl kszlt zrkupakot (szeptum)
(szeptum
tszrjuk a preczis, teflon dugattys mintaadagol fecskendvel.
fecskend vel. A szeptum feladata a
fecskend kihzsakor jbl lezrni a kamrt.

Az elvlasztst vgz kolonna acl

acl- vagy vegcsbl kszl. Kls megjelenst tekintve
ktfle lehet: 2-6 mm bels tmrj,
tm , tltetet tartalmaz n. tltetes kolonna, vagy 0,2-0,5
mm tmrj,, a megoszt fzist belsbels faln vkony filmknt felhordottan tartalmaz
kapillris kolonna. A tltetes oszlopok hordoz tltete megfelel mechanikai szilrdsg,
nagy fajlagos fellet s kmiailag inert anyag (diatmafld, polimerek, stb.), amelynek a
felletn egyenletes filmet kpezve jl tapad a megosztfolyadk. A megosztfolyadkot
alkalmas oldszerben feloldjk, az oldatba belekeverik a szilrd hordozt, majd lassan
elprologtatjk
jk az oldszert. Az ily mdon elksztett
el ksztett llfzissal tltik meg a kolonnt.
Kszthet mg tltetes kolonna szilrd adszorbenssel (pl. aktv szn, alumnium alumnium-oxid,
szilikagl) val megtlts tjn is. A tltetes kolonnk az elllts
el llts nehzkessge miatt
viszonylag rvidek (1-55 m), ellenllsuk a viv vivgzramlssal
gzramlssal szemben viszonylag nagy,
azonban kapacitsuk nagy, ezrt nagyobb (pr L) L) mintamennyisggel dolgozhatunk velk. A
ban nincs hordoz, a megosztfolyadkot kzvetlenl a cs
kapillris kolonnkban cs bels falra
viszik fel. Az egyszerbb,
bb, de kevsb tarts eljrs sorn a folyadkot oldszerben oldjk,
bb,
majd nyoms alatt tprselik a 15-60
15 60 m hossz kapillrison. A modern kapillris kolonnkban
a megosztfolyadkot valamilyen kmiai ktssel (gyakran szilanizlssal)
szilanizlssal) rgztik a cs
cs
bels falhoz, ezzel megakadlyozva annak lehordst (a vivgzzal
viv gzzal val lass kirlst),
ami a kolonna lettartamt megrvidten. A kapillris kolonnk hosszsga nagy, gy
elmleti tnyrszmuk k kimagasl, 50000
50000-100000 is lehet. Hasznlatukat megnehezti
azonban, hogy kapacitsuk kicsi, ezrt igen kis mintamennyisg (a L L trtrsze) adagolhat
rjuk.

Kapillris kolonnk: 0,10 0,53 mm kls

kls tmr, 5-100
100 m hosszsg, 0,1 0,1-5 mikron
filmbevonat.
Tlttt kolonnk: 2-6 mm kls tmr,
tmr 0,02-33 mm szemcsemret, vastagabb film bevonat
bevonat.

Elnyk s htrnyok:
Kapillris: nagy cscsfelbonts, kis terhelhetsg,
terhelhet sg, nagyobb kmiai rzkenysg, kis gzram,
b mretbeli s fzisvlasztk, nhny detektorhoz nem elnys.
el
 L [metil-11C]]metionin minsgellen
Gyakorlati segdanyag: L-[ sgellenrzs

Tlttt: kis cscsfelbonts,

scsfelbonts, nagy terhelhetsg,
terhelhet sg, nagy gzfogyaszts, hzilag tlthet
tlthet, a fzis
hzilag mdosthat, nagy rzkenysg
rzkenysg detektorokhoz csak gzsztosztssal
csatlakoztathat.

A megoszt folyadkot az elvlaszt komponensek anyagi minsgi,

min sgi, kmiai jellemz
jellemzi alapjn
vlasztjuk meg. Polros mintakomponensekhez pl. szintn polros polietiln
polietiln-glikolok
(Carbowax, DB-WAX,
WAX, stb.), mg apolris komponensekhez pl. polipropiln hasznlhat.
Fontos szempont kivlasztsukkor, hogy az analzis sorn szksges kolonna hmrskleten
h
kevss prologjanak.

A kolonnn elvlasztott komponenseket a viv

vivgz a detektorba juttatja, amely a komponensek
vivgzbeli
gzbeli koncentrcijval arnyos elektromos jelet ad. Sokfle, a mintakomponensek
klnbz kmiai s fizikai jellemz
jellemzjnek mrsn alapul detektort fejlesztettek ki ezek
kzl az albbiakban csak a kt legelterjedtebbrl
legelterjedtebbr lesz sz. A hvezetkpessgi
kpessgi detektor
(TCD, kataromter) rzkelje
je egy kis trfogat cellban elhelyezett, elektromosan fttt
f
fmszl.

A fttt fmszl ellenllsa hmrskletvel

h arnyos, hmrsklete
mrsklete azonban a krltte
raml gz hvezetkpessgt
kpessgtl fgg. Tiszta vivgz
gz (hidrogn vagy hlium) ramlsakor,
az analzis kezdetn egy adott ellenllsrtket mr a hozzkapcsolt elektromos m mszer,
azonban rosszabb hvezetkpessg
kpessg gz vagyis a mintakomponensek ggznek
detektorba jutsakor a szl kevsb hl
h le, gy ellenllsa n. A hvezetkpessgi
kpessgi detektor
univerzlis, a vivgzon kvl mindent mrni kpes detektor (vagyis nem szelektv), amely
3-5 koncentrci nagysgrenden keresztl lineris vlaszjelet ad. Kimutatsi kpessge
ugyanakkor nem kiemelked; ; kb. 1 g.

A lngionizcis detektor egy msik, igen elterjedten alkalmazott gzkromatogrfis

detektortpus. Ez tulajdonkppen egy kismret
kismret hidrogn/leveg gzeleggyel tpllt lng,
amely fl elektrdprt helyeznek el. Ezen kt elektrd kz olyan feszltsget kapcsolnak,
amelyen mg nem keletkezik szikrakisls az igen nehezen ionizlhat vivg
vivgzramlsban
(nitrogn vagy argon). A kolonnt elhagy szerves komponensek a lngban oxign
kzremkdsvel
kdsvel ionizldnak. Az ionok kpzdse
kpz dse hatsra a kt elektrd kztt gyenge
ram folyik, amely ersts
sts utn mrhet
mrhet,, s a mintakompoens koncentrcijval
koncentrcijva arnyos
nagysg lesz. Ez a detektor igen rzkeny, mintegy 10-11
10 11 g anyag kimutatsra alkalmas,
linearitsa valamivel jobb, mint a hvezetkpessgi
h detektor.
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

2.5. Flvezet detektoros gamma-spektrometria

A gamma-sugrz nuklidok kimutatshoz a legrzkenyebb mdszer a flvezets gamma-
spektrometria. A gamma-sugrzs energija meghatrozott rtk (a spektruma teht
vonalas), jellemz az t kibocst atommagra a gamma-sugrzs teht nuklid specifikus. A
gamma-spektrometria a gamma-sugrz nuklidok gamma-energijnak meghatrozsa
alapjn a nuklid minsgi meghatrozst teszi lehetv megfelel nuklidknyvtr
segtsgvel. A minsgi analzis mellett a gamma-sektrum teljesenergia cscsainak
intenzitsaibl (cscs alatti terlet) megfelel hatsfok ismeretben az aktivits, a radioizotp
mennyisge hatrozhat meg.
A flvezetkben a sugrzsbl elnyelt energia hatsra elektron-lyuk prok jnnek ltre. Ge-
ban egy elektron-lyuk pr ltrehozshoz szksges energia viszonylag kicsi (2.9 eV 77 K
hmrskleten). Ez az rtk kb. 100-szor kisebb, mint pl. a NaI (Tl) szcintillcis detektorok
megfelel jellemzje, az egy fotoelektron ltrehozshoz szksges energia. Azonos energia-
leads esetn teht kt nagysgrenddel tbb tltshordoz keletkezik Ge-ban, mint a
szcintillcis detektorban. A tltshordozk szmnak relatv statisztikus ingadozsa gy
lnyegesen kisebb lesz, ami a detektor sokkal jobb energiafelbontst eredmnyezi. A
tltshordozk szma arnyos a leadott energival (azaz teljes energialeads esetn a gamma-
foton energijval). Ez a kapcsolat lineris az egsz energiatartomnyban. Az sszegyjttt
tltsnek megfelel feszltsgimpulzus amplitdja arnyos a gamma-sugrzsbl elnyelt
energival.
Az energiaszelektv detektor jeleinek feldolgozshoz sokcsatorns analiztor szksges.
Mkdsnek az a lnyege, hogy az elnyelt energival arnyos feszltsgimpulzusok
sztvlogatshoz s megszmllshoz a vizsgland impulzusmagassg tartomny a
csatornaszmnak megfelel rszre van osztva. Az erstbl rkez impulzusok nagysgt
megfelel elektronika rtkeli ki s az adott impulzusmagassgnak megfelel csatorna
tartalma minden analizlt impulzussal, eggyel n. A detektort folyamatosan cseppfolys
nitrognnel kell hteni. A felvett spektrumok kirtkelshez az energia s hatsfok kalibrci
szksges. A kalibrcikhoz olyan ismert sszettel sugrforrsra van szksg, amely
legalbb 3, egymstl jl elklnl gamma-vonalat ad s amelyeknek pontosan ismerjk az
aktivitsait.
Az energiakalibrcihoz leggyakrabban hasznlt radioizotpok:
Co-60 1173.2 s 1332.4 keV
Cs-137 661.6 keV
Na-22 1274.6 s 511 keV
K-40 1462 keV
Cs-134 604.6 s 795.9 keV
Ba-133 356 keV
Y-88 898 s 1836.1 keV
Az energia-kalibrci lnyege, hogy a csatornkhoz (feszltsgtartomnyokhoz) energikat
rendelnk adott nagyfeszltsgnl s erstsnl. Az energia-kalibrcinak azt az
energiatartomnyt kell lefednie, amelyben a vizsgland radioizotpok elfordulhatnak. Az

17
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

energia-kalibrci lineris. Ha van energia-kalibrcink, segtsgvel a mintnkban lev

radioizotpokat tudjuk meghatrozni. Ha ezek mennyisgt is tudni szeretnnk, hatsfok-
kalibrcit is kell vgeznnk.
A hatsfok-kalibrci fgg a krnyezeti minta mrsnl alkalmazott geometritl: a minta
lehet szilrd (pl. talaj, kzet stb.) vagy folyadk (pl. ivvz, folyvz, tej stb.), a mintk
tmege klnbz adott halmazllapotnl is (pl. nhny grammos porminta, nagyobb darab
kzetminta, vagy a vzminta lehet 50 ml, vagy 250 ml stb.). Teht az adott energiakalibrci
mellett minden alkalmazott geometrinl el kell vgezni a hatsfok- kalibrcit, amennyiben a
mintban a radionuklid aktivitst is meg akarjuk hatrozni. Ehhez a krnyezeti minta
mrsnl alkalmazott geometrij, ismert sszettel s aktivits sugrforrsra van szksg.
Fordtva: amilyen geometrij kalibrcit tudunk elvgezni, olyan geometriban mrhetjk a
mintinkat!

3. A gyakorlaton alkalmazott System-1 HPLC rendszer lersa

A HPLC rendszer jellemzse
A System-1 HPLC rendszer a Nukleris Medicina Intzet Radiokmiai Kzpontjnak
Minsgellenrz laboratriumban van elhelyezve (25. szoba). A rendszer egysgeit s
tartozkait az albbi tblzat s bra mutatja be.

Egysg Tpus Gyrt Forgalmaz Szriaszm Funkci

HPLC PU-2080 (Intelligent ABL&E-JASCO

JASCO B034960962 Eluens szllts
pumpa HPLC pump) Magyarorszg Kft.

Gzmentest DG-2080-54 ABL&E-JASCO Eluens

JASCO B017460885
egysg (4-line degasser) Magyarorszg Kft. gzmentests

Kvaterner LG-2080-04
ABL&E-JASCO Euens
szelep (Quaternary gradient JASCO C016560882
Magyarorszg Kft. kivlaszts
rendszer unit)

Injektor
AD-950-02 (Auto ABL&E-JASCO
Drain JASCO A730096 hulladk
drain unit) Magyarorszg Kft.
elszvs

AS-950-10(Intelligent ABL&E-JASCO
Injektor JASCO D3471961 Mintaadagols
sampler) Magyarorszg Kft.

Switching valve 1
Knauer LAB-COMP Kft. 67480
(vltszelep) Kolonna
Oszlopvlt
Switching valve 2 kivlaszts
Knauer LAB-COMP Kft. 67481
(vltszelep)

18
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

Egysg Tpus Gyrt Forgalmaz Szriaszm Funkci

Photosensor module
Radioaktivit with PMT tube Hamamatsu Hamamatsu 13160004 Radioaktv
s (RA) plasztik anyagok
detektor szcintilltorral detektlsa
Tpegysg NMI NMI TE-1

UV-2077 (4- ABL&E-JASCO UV aktv

UV/VIS
Intelligent UV/VIS JASCO Magyarorszg B012960868 anyagok
detektor
detector) Kft. detektlsa

ABL&E-JASCO
Adatgyjtss
Interfsz LC-Net II/ADC JASCO Magyarorszg B233061067
adattovbbts
Kft.

ABL&E-JASCO Vezrl- s
ChromPass 03-950023-
Szoftver JASCO Magyarorszg kirtkel
Ver. 1.7.403. 01
Kft. szoftver

Rendszer-
Szmtgp DELL Dell Inc. Dell Inc. GW2SV4J
vezrls

HP Laserjet M1120n Hewlett- CND8832R5

Nyomtat Hewlett-Packard Nyomtats
MFP Packard S

LCNet
PC

Elektromos csatlakozsok HP
Eluens csatlakozsok

Gradient Oszlop
Degasser Pumpa Injektor UV/Vis RA
unit vlt

Eluens Hulladk
Drain
tartly trol

19
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

A kszlk mkdtetse

Ellenrizzk, hogy az eluenstartlyban van-e elegend eluens, s a megfelel csvel van-e a

szivattyhoz csatlakoztatva. Gyzdjnk meg rla, hogy az adott vizsglathoz szksges
oszlop van-e kivlasztva az oszlopvltn: a 3 pozciban lv kolonna hasznlatos; a 6
pozci a mosg. Az utols detektor kimenethez tegynk lomrnykolssal elltott
hulladkgyjt ednyt. A mrsek vgeztvel a rendszert vzzel mossuk t!
A pumpt a fkapcsol bekapcsolsa utn a rajta lv `PUMP` gomb megnyomsval lehet
elindtani. Az ramlsi sebessget a `FLOW` gombbal tudjuk szablyozni gy, hogy a pumpa
kijelzjn aktivldott sebessget a kvnt rtkre lltjuk. A `PUMP` gomb ismtelt
megnyomsval pedig az ramlst tudjuk meglltani. A maximum s minimum nyomsokat
rtelemszeren megadhat a megfelel `P. max` s a `P. min` gombok megnyomsval.
A pumpa folyamatos mkdtetse kzben figyeljk meg, buborkmentes-e az eluensram a
csvekben, illetve nem ingadozik-e a rendszer nyomsa nagymrtkben (>0,3-0,5MPa).
Szksg esetn nyissuk ki a `PURGE` szelepet, s addig engedjk ki az oldszert, mg a
buborkols megsznik. Ezutn zrjuk a szelepet. A PU-2080 HPLC pumpa mkdsvel
kapcsolatos tovbbi adatok a MODEL PU-2080 Intelligent HPLC Pump Operator`s Manual,
P/N 0302-0548B kezelsi tmutatban tallhatk meg.

4. A gyakorlaton alkalmazott Clarus 500 GC gzkromatogrf lersa

A Clarus 500 gzkromatogrf a Nukleris Medicina Intzet Radiokmiai Kzpontjnak
Minsgellenrz laboratriumban van elhelyezve (25. szoba), melynek egysgeit s
tartozkait az albbi tblzat foglalja ssze:
Egysg Tpus Gyrt Szriaszm Funkci
Clarus 500,
Perkin Elmer, Kromatografls,
GC Firmware 650N3091601
Inc. detektls
Rev 2.02
Perkin Elmer, Adatgyjts s
Interfsz NCI 901 3230280001
Inc. adattovbbts
Vezrl- s
TCWS, Perkin Elmer,
Szoftver 0903-WS0017 kirtkel
Version 6.2.1 Inc.
szoftver
Rendszer-
Szmtgp Optiplex 780 Dell, Inc. 4C3605J
vezrls

20
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

A Clarus 500 GC ktcsatorns, hmrsklet programozhat gzkromatogrf, amely manulis

injektlsi mdban hasznlatos, valamint kapillris kolonna injektorral (split/splitless md),
FID s TCD detektorral van elltva. A detektorok analg kimenettel rendelkeznek, az ltaluk
kibocstott jelet az NCI 901 interfsz fogadja s tovbbtja a vezrl egysg fel. A
mszerhez kapillris kolonna installlhat.

A rendszer mkdtetse
A gzkromatogrf elindtsa eltt ellenrizzk, hogy a hlium (vivgz), a srtett leveg
(gst tpll gz) s a hidrogn (gst biztost gz) vezetkek csapjai nyitott llapotban
vannak. Ezt kveten a Clarus 500 GC-t a jobb oldaln lv fkapcsolval lehet bekapcsolni.
nellenrzs utn a mszer kijelzjn a Log in felirat jelenik meg, mely megrintsvel
belphetnk a rendszerbe, ahol a megfelel ikonok rintsvel naviglhatunk az egyes
menpontok kztt. Az Oven menben a kolonnatr paramterei kvethetek: a
hmrsklet s a kromatogrfis mdszerek ltal alkalmazott hmrskletprogramok
alakulsa. A Cap az injektor hmrsklett, a vivgz ramlsi-sebessgt s a Split arnyt
jelzi ki. A FID menben a lngionizcis detektor hmrsklete, a hidrogn s a leveg
ramlsi-sebessge olvashat le tbbek kztt. A TCD menben a hvezet-kpessgi
detektor hmrsklete, a referencia gz ramlsi-sebessge figyelhet meg. A kromatogrfis
mrs alatt a kromatogram alakulsa a Signal menpontban kvethet nyomon a megfelel
nagyts mellett. A mrs indtsra a Run menpontba val belpssel van lehetsg.

A tovbbiakban indtsuk el a szmtgpen az adatgyjt s vezrl programot: klikkeljnk a

TCNav ikonra. A belpshez meg kell adnunk egy felhasznlnevet s a hozz tartoz
jelszt, amellyel csak a gzkromatogrfot jogosultan hasznl szemly rendelkezik. Sikeres
belps utn a TotalChrom Navigator-Clarus 500 GC fellet jelenik meg. Abban az
esetben, ha a FID detektort szeretnnk hasznlni, akkor az Instruments kzl a Clarus
500 GC flet kell aktivlni, viszont ha a TCD detektorral mrnk, az NCI900 opcit kell
vlasztani. Az Instruments-ek llapott a Status fln lehet nyomon kvetni. Abban az
esetben, ha zld sznben jelenik meg a felirat, a mszer ksz a mrs indtsra, ha kk szn a
kirs, akkor az interfsz aktv llapotban van (mrs megy vagy az interfsz ppen feltlti a
TotalChrom-ra az adatokat), piros szn esetn a mszer nem ksz az adatok gyjtsre, mivel
nincs kapcsolatban az interfsszel, vagy nincs aktivlva a mdszer, illetve szneteltetve van a
mszer hasznlata.

Egyszeri mrs indtshoz be kell lpni a Setup menpontba, ahol a Method opci
kijellsvel behvhatjuk a hasznlni kvnt mdszert, s megadhatjuk a fjl azonostjt,
valamint a fjl mentsi helyt. Sorozatos mrsek indtshoz a Setup menpontban a
Sequence opcit kell kivlasztani. Ezutn behvjuk az elzetesen megszerkesztett seq
kiterjeszts fjlt, amely tartalmazza a mrsek szmt, a mrsi fjlok nevt, mentsi helyt,
az alkalmazott kromatogrfis mdszereket, jelentseket. Mindkt mrstpus esetn a
belltott adatokat OK val fogadtatjuk el, miutn bellnak s stabilizldnak a kvnt
paramterek (tbbek kztt a vivgz ramlsi-sebessge, az injektor, a detektor s a
kolonnatr hmrsklete, split arny), amit a GC kijelzjn is nyomon kvethetnk. A mrs
indtsnak lehetsgt a gzkromatogrf kijelzjn a Run menpontban az Equilibrating
s a Pre-Run lefutsa utn a Ready felirat jelzi. Az injektlst a Start jelzs
megrintst kveten 5 msodperc utn a hossz spsz utn kell elvgezni. Mrs kzben a
Real-Time plot-tal kvethet az aktulis kromatogram alakulsa. Az egyszeri mrs
vgeztvel a mszer visszall az alkalmazott mdszer kezdeti paramtereire. Tbb mrsre
nincs lehetsg, ehhez a Setup menpontban kell kezdemnyezni az jabb mrst.

21
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

Sorozatos mrs esetn a rendszer felajnlja az Equilibrating s a Pre-Run mveletek

utn a soron kvetkez mrs indtsnak lehetsgt anlkl, hogy a Setup menpontban
kezdemnyeznnk azt. (TotalChrom Workstation Users Guide)

Tekintettel arra, hogy a gzkromatogrfis mrsek sorn egszsgre kros radioaktv s/vagy
szerves gzok, gzk keletkezhetnek mrs kzben az elszvkar hasznlata ktelez! A
vizsglatok alatt az elszvkart bekapcsolt llapotban kell az injektor s a Vent cs fel
helyezni! A mrs vgeztvel a kirtkel szoftver az alkalmazott mdszer belltsai alapjn
meghatrozza a cscsok integrlshoz szksges pontokat, meghzza az alapvonalakat s
elvgzi a megfelel szmtsokat (koncentrci-meghatrozs, terletarnyok szmtsa stb.).
Az eredmnyek rtkelse, a cscsok esetleges jra integrlsa s azonostsa a fmen
Results menjben vgezhet el, az rtkelni kvnt rst kiterjeszts fjl behvsa utn. A
kromatogramok manulis kirtkelsekor a Manual Integration parancsot kell aktivlni,
majd a kijellend cscs kezdetre klikkelve folyamatosan hzva az alapvonalat a cscs
vgnl elengedjk a bal egr gombot. A cscs azonostshoz a Manual Identification
parancsot kell aktivlni, majd rklikkelve az azonostand cscsra a legrdl ablakbl kell
kivlasztani a megfelel anyagnevet s a Reassign paranccsal elfogadtatni a vltoztatst. A
mrsi eredmnyt jelents formjban kinyomtathatjuk, ha a Print report parancsra
klikkelnk. Kromatogrfis mdszereket, ezen bell kalibrlsi fjlokat, jelentsi fjlokat
csak adminisztrtori jogosultsggal rendelkez felhasznlk hozhatnak ltre. Ezek a
mveletek a TotalChrom Workstation Users Guide utastsai alapjn vgezhetk el.

A gzkromatogrf kikapcsolst az albbiak szerint vgezzk el. A Run menpontban

rklikkelnk a Release control opcira, s a GC kijelzjn a kolonnateret 30C-ra htjk le,
majd kilpnk az adatgyjt programbl, illetve a kromatogrf paneljn kivlaszthat Log
Out ikon megrintsvel a fmenbl. A kolonnateret az ajt megnyitsval hteni
szigoran tilos, klnben a kapillris kolonna a hirtelen hmrskletess kvetkeztben
krosodhat! Ezt kveten a GC fkapcsoljval kikapcsolhatjuk a mszert. Vgezetl
elzrjuk a gzvezetkek csapjait. (Clarus 500 GC Users Guide)

5. A gyakorlaton alkalmazott Canberra gamma spektromter sszetevi

A Nukleris Medicina Intzet Radiokmiai Kzpontjnak 003. sz. helyisgben teleptett
Canberra gamma spektromter sszetevi:

Egysgek Gyrt Tpus Szria szm

Ge flvezet detektor Canberra GC 1020 b 06345

Cryostat Preamp 7500SL
2002CSL

Spektrum analiztor Canberra DSA-1000 00000847

Kirtkel szoftver Canberra Genie 2000 C37535/S500

Szemlyi szmtgp Dell Optiplex 780 GB3605J

Nyomtat Hewlett-Packard Deskjet 3845 TH4BP1511Q

22
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

A gamma spektromter elektromos csatlakozsai:

A gamma spektromter helyes mkdsnek felttele a mrmszer egysgei kztti
megfelel elektromos csatlakozsok meglte. Ennek biztostsa vgett a mszer hasznlata
eltt ellenrizzk az albbi tblzatban megadott egysgek kztti kapcsolatok megltt.

Gamma spektromter Gamma spektromter Kapcsoldsi md

egysg egysg
Szemlyi szmtgp Hardverkulcs (SCT 11912) USB HUB

Szemlyi szmtgp DSA-1000 Kbel: 79102

spektrum analiztor

Ge flvezet detektor DSA-1000, HV bemenet Kbel: C123-10

(Canberra)

Ge flvezet detektor, DSA-1000, HV INH. bemenet Kbel: C120-10

HV inhibit kimenet

Ge flvezet detektor, DSA-1000, AMP IN. bemenet Kbel: C120-10

ENERGY kimenet

Ge flvezet detektor, DSA-1000, PREAMP bemenet Kbel: 96A21652

C140710-10 kimenet

A gamma spektrum felvtele:

A gamma spektrumok felvtelt az albbiak szerint valstjuk meg. Miutn meggyzdtnk
arrl, hogy a spektromter egysgei kztt megfelel az elektromos csatlakozs, illetve a
detektorrendszer cseppfolys nitrognnel fel van tltve, bekapcsoljuk a szmtgpet s
elindtjuk a Genie2000 programot: Gamma Acquisition&Analysis. Ezt kveten az MCA
menben kivlasztjuk az Adjust opcit. A megjelen felleten bejelljk a HVPS-t a Status-
t pedig ON-ra lltjuk. Ezzel a DSA-1000 belltja a megfelel feszltsg rtket. A spektrum
felvtel indtshoz az Analyze menbe lpnk s kivlasztjuk az Acquisition majd az
Acquire parancsokat. A mrs indtsa eltt megadhatjuk a fjl nevt, a mrsi idt, a ments
helyt, stb. Abban az esetben, ha sorozatmrst akarunk kivitelezni, szekvencia fjlt kell
ltrehozni. Ehhez az Edit menben az Analysis sequence parancsot kell vlasztani. A feljv
ablakban meg lehet adni a mrsek szmt, kirtkels mdjt, az eredmnyek nyomtatst,
stb. A sorozatmrs elindtshoz az Analyze menben az Execute sequence opcit kell
kivlasztani, majd megadni a megfelel szekvencia fjlt. A vizsglati jelentseket PDF
formtumban is elmenthetjk, ehhez a File menben az Export report to PDF opcit kell
vlasztani. A mrs vgeztvel a nagyfeszltsget nullra cskkentjk: az MCA menben
kivlasztjuk az Adjust opcit, a megjelen felleten bejelljk a HVPS-t a Status-t pedig
OFF-ra lltjuk. Ezt kveten kilpnk a Genie2000 programbl. A Genie2000 szoftverrel
kapcsolatos tovbbi informci a Genie2000 Operational Manual tmutatban tallhat.

23
 Gyakorlati segdanyag: L-[[metil-11C]]metionin minsgellenrzs

6. A gyakorlaton elvgzend feladatok

A gyakorlat alkalmval el kell vgezni a kiadott L-[metil-11C]metionin tartalm minta

rszleges minsgellenrzst. Ennek keretben a 2.2.3. Minsgellenrzs pontban
rszletezett eljrsok alapjn az albbi feladatokat kell elvgezni:

Enantiomer tisztasg vizsglat: eluens kszts s a kiadott minta enantiomer

tisztasgnak meghatrozsa
Etanol tartalmom meghatrozs: bels standard oldat, 60 mg/ml etanol vizes
oldatnak ksztse illetve a standard etanol oldat (rendszeralkalmassg) s a kiadott
minta gzkromatogrfis vizsglata.
Gamma spektrometris vizsglat: energiakalibrci, a minta radionuklidos
azonostsa s felezsi id mrs.
A kapott eredmnyeket s tapasztalatokat jegyzknyv formjban szksges leadni a
gyakorlat vgig.

7. Krdsek nll felkszlshez

A PET elve
A L-[metil-11C]metionin szintzise s minsgellenrzse a Nukleris Medicina
Intzetben
HPLC s GC alapjai
Gamma spektrometria

8. Felhasznlt s ajnlott irodalom

[1] http://en.wikipedia.org/wiki/PET. Megtekintve: 2014.02.17.
[2] Galbcs Gbor, Galbcs Zoltn, Sipos Pl: Mszeres analitikai kmiai gyakorlatok,
JATEPress, 2008.
[3] Dr. Lzr Istvn: Nagynyoms folyadkkromatogrfia (Elvlasztstechnika
segdanyag).

24