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Tema 4
Transcripcin y traduccin. Interacciones relevantes.
Transcripcin
Sntesis de ARN sobre una sola cadena de ADN, que
acta como molde. La secuencia del ARN es
complementaria a la cadena molde y equivalente a la &DGHQDFRGLILFDQWH
cadena codificante.
El proceso est catalizado por la enzima ARN &DGHQDPROGH
/DVHFXHQFLDGHO$51HV
polimerasa. Es unidireccional de 5 a 3 o de regin FRPSOHPHQWDULD DODFDGHQDPROGH
proximal a distal o de regin aguas arriba a regin aguas \HTXLYDOHQWH DODFDGHQD
FRGLILFDQWH
abajo.

La unidad de transcripcin
Una unidad de transcripcin es una secuencia de ADN
que se transcribe a un nico ARN, empezando por el
promotor y finalizando en el terminador.
Comprende:
- Promotor, al principio del gen
- Sitio de inicio y regin que codifica
- Terminador, secuencia al final del gen
El primer nucletido que se transcribe es el punto de
referencia +1.
Aguas arriba Aguas abajo

Fases de la transcripcin
Reconocimiento del promotor: unin de la ARN polimerasa al ADN
en un promotor
- Formacin del complejo cerrado: la ARN polimerasa
abrazada al ADN
- Formacin del complejo abierto: ADN parcialmente
desnaturalizado
Los promotores estn alineados de acuerdo a sus homologas, o
secuencias de bases similares que aparecen justo delante de la primera
base transcrita (punto de iniciacin)
Iniciacin: sntesis de los primeros enlaces nucleotdicos en el ARN.
Suele haber sntesis abortivas hasta que no hay 4-5 nucletidos, fase
crtica, no empieza la sntesis real. La fase de iniciacin termina
cuando la enzima logra elongar la cadena y abandona al promotor.
Elongacin: formacin de la cadena. Implica el movimiento de la
burbuja mediante la alteracin de la estructura del ADN, en la que la
cadena molde de la regin que se ha desenrollado se aparea con el
ARN naciente en el punto de crecimiento.
Terminacin: requerimientos distintos en procariotas y eucariotas.
Implica el reconocimiento del punto que determina el final de la
adicin de bases a la cadena.
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INICIACIN
La burbuja de la transcripcin
La transcripcin ocurre en una burbuja, en la que el ARN es
sintetizado mediante el apareamiento de bases con una cadena de
ADN en la regin desenrollada transitoriamente. A medida que la
&DGHQDFRGLILFDQWH
burbuja progresa, el ADN bicatenario se vuelve a formar detrs de
ella, desplazando al ARN como una cadena nucletdica sencilla.
Durante la transcripcin, la burbuja se mantiene dentro de la
ARNpolimerasa, que desenrolla y enrolla el ADN, mantiene las
&DGHQDPROGH
condiciones de las cadenas codificante y molde.

La burbuja de la transcripcin (dentro de la ARN

polimerasa) se desplaza a lo largo de la unidad de
transcripcin
La polimerasa es un complejo enzimtico grande y
organizado, el sitio cataltico rodea a la cadena molde.

RNA polimerasa de E. coli (Eubacterias)

La capacidad de catalizar sntesis de ARN define el componente mnimo (ncleo) de la polimerasa: 2.
Holoenzima: complejo competente para la iniciacin: 2

Ensamblaje de la enzima
Reconocimiento del promotor
Une algunos activadores

Especificidad del
promotor

Las ARN polimerasas de las eubacterias tienen 4 tipos de

subunidades: , , tienen tamaos relativamente constantes en
especies bacterianas diferentes, y es ms variable.

Las subunidades y componen el centro cataltico.

La subunidad es necesaria para ensamblar el ncleo enzimtico, importante para mantener la estructura,
interviene en el reconocimiento del promotor y en la interaccin de la ARNpol con factores auxiliares.
La subunidad interviene especficamente en el reconocimiento del promotor, slo aparece en la
iniciacin, para reconocer el ADN, se separa del complejo en la elongacin.
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Polimerasas eucariotas
Tpicamente 12 subunidades
Polimerasa I
- Sintetiza ARNr en el nucleolo
- La de mayor actividad
Polimerasa II
- Sintetiza ARNhn (heterogneo nuclear) en el nucleoplasma, que dar lugar al ARNm
Polimerasa III
- Sintetiza ARNm pequeos en el nucleoplasma (ARNt y otros)
Algunas subunidades son comunes a las tres.

RNApol II

La RNA polimerasa II de
levaduras: 12 subunidades

Hay 3 polipptidos mayores muy similares a los de E.coli (, y ). La polimerasa en eucariotas es ms

compleja, puesto que el ADN tambin lo es. Hay ms posibilidades de interaccin.

Estructura de los complejos ADN-RNA polimerasa

RNA polimerasa tiene un canal para el ADN.
Dimensiones de la polimerasa de E. coli: 90 95 160
Dimensiones del ADN dentro de la
polimerasa, en la burbuja:
- 25 bases de longitud
- 9 bases apareadas
- 10 bases aguas arriba
- 10 bases aguas abajo

El ADN se retuerce en el sitio activo.

El resto de subunidades mantienen la estructura.

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Hay polimerasas ms simples, bacterifagos, virus, fagos. El fago T7
tiene la polimerasa con un solo polipptido, es muy rpida.

Anlisis de interacciones ADN /protenas

Retardo /retraso en gel o cambio de banda (band shift)
Se detectan los complejos ADN- protena. En un gel de electroforesis se detecta porque las protenas
retrasan la movilidad del ADN, con lo que la banda se retrasa. Se necesita tener un fragmento de ADN
definido, que se hace por PCR.
Se puede ver por medio de una electroforesis, en el lugar de la banda aparece una banda retardada. Se
usan geles no desnauralizantes o nativos. En la prctica lo habitual es que parte de la banda se retrase
(aparecen 2 o mas bandas, si hay mas de un sitio de unin pueden aparecer 3 o mas).
Se requieren fragmentos definidos de ADN y protenas purificadas o no (extractos).
En principio no hace falta marcar el ADN, pero hay que poner suficiente para verlo a simple vista.
Cuando hay muy poca protena s se usa radiactividad.
Esta tcnica no permite identificar secuencias para las que son afines las protenas, solamente que se
unen protenas.

Requiere:
Fragmentos definidos de ADN
Protenas purificadas o no (extractos)
La regin promotora de nblA: sitios de unin a protenas (diapositiva n 13)

Estrategias experimentales para mapear interacciones con protenas

Footprinting
- Estrategias de proteccin frente a digestin o modificacin.
- Estrategias inversas: la modificacin interfiere con la interaccin.
Se usa para mapear el sitio de unin a la protena. Se basa en que si se tiene una protena unida al
ADN y se ataca a ste con endonucleasas, stas no cortan el fragmento protegido por la protena, y
puede ser detectado.
Hay estrategias inversas, que consisten en modificar la regin de inters, con lo que ahora la protena
no puede unirse.
- Ensayo de proteccin frente a nucleasas (DNAasa I) o footprinting clsico: localizacin precisa
del sitio de unin de una protena a un fragmento de ADN. Requiere geles de secuenciacin y
marcaje de ADN. Se usa ADN bicatenario marcado en un extremo. Se intenta introducir un corte
en cada cadena. Permite obtener fragmentos marcados con diferentes tamaos. Se hace lo mismo
en presencia de la protena y se vuelve a digerir con nucleasa, donde se encuentra la protena la
endonucleasa no puede cortar.
 109
Una secuencia de ADN unida a la protena se digiere
parcialmente con una endonucleasa para atacar enlaces
fosfodister individuales en el cido nucleico. Bajo las
condiciones apropiadas, un enlace particular se rompe en
algunas de, pero no en todas, las molculas de ADN. Las
posiciones en las que se ha cortado se reconocen mediante
el marcaje de las molculas de ADN solamente en un
extremo de una hebra, origina un fragmento de longitud
nica. Los fragmentos digeridos se recuperan y se someten
a electroforesis. Cada fragmento que tenga un extremo
marcado produce una banda radiactiva. La posicin de la
banda corresponde al nmero de bases en el fragmento.
Se corren dos reacciones en paralelo, un control de ADN
puro y una mezcla experimental que contiene molculas de
ADN unidas a protenas. Cuando una protena unida
bloquea el acceso de la nucleasa al ADN en la mezcla
experimental, aquellos enlaces que se encuentren en la
secuencia unida no se rompern.
proteccin frente a DNAsa

En el control cada enlace se rompe, generando una serie de bandas, cada una de las cuales representa
una base. En el fragmento protegido, los enlaces no se pueden romper en la regin que une la protena,
no se originan bandas que representen los fragmentos de las longitudes correspondientes.
Comparando el control y los carriles experimentales con una reaccin de secuencia que se corre en
paralelo es posible leer la secuencia correspondiente directamente, y as identificar la secuencia de
nucletidos del sitio de unin.
Hay bandas con distinta intensidad porque la ADNasa corta con cierta especificidad. Las regiones que
desaparecen son los sitios de unin a las protenas.
La tcnica permite ver zonas de unin conjunta entre dos protenas.
En ciertos casos se aprecia la disminucin de intensidad de las bandas en lugar de su desaparicin, o en
ciertos casos inclusive el aumento de la intensidad, porque la protena cambia la conformacin del ADN y
aumenta la afinidad de la ADNasa por la zona.

- Proteccin por NFAT (factores de la transcripcin)

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Footprinting con agentes modificadores de bases

Los puntos en los que la ARN polimerasa contacta con el
promotor se pueden identificar modificando la tcnica del
ensayo de proteccin con agentes modificadores de bases.
Permiten la rotura en el enlace correspondiente en la cadena
polinucleotdica. El sitio de rotura se puede identificar de
forma similar a la anterior.
La enzima protege al ADN contra el agente qumico.
En ciertos casos en vez de la ADNasa se usa un DMS
(dimetilsulfato), que modifica guaninas. Se generan
footprintings con menos bandas (solo las que acaban en G).
Tras el marcaje se usa piperidina, reactivo que corta detrs

proteccin frente a dimetil-

Motivos de unin a ADN sulfato (DMS)
Motivos: segmentos de protenas (dominios) con estructura secundaria caracterstica, que interaccionan
con el ADN. Regin corta con una estructura secundaria particular, normalmente hlices .

- HTH: hlice-giro-hlice
- HLH: hlice-lazo-hlice
- Dedos de cinc
- Cremalleras de leucina

HTH: dos hlices con un ngulo caracterstico.

- Presente en reguladores procariticos y algunos eucariticos
- Homeodominio: presente en genes hometicos, caractersticos del desarrollo animal. La
secuencia primaria de la protena es diferente pero la estructura secundaria se mantiene.
 111

Una de las hlices se sita en el surco mayor del ADN, hlice de posicionamiento, reconoce y realiza los
contactos con el ADN. La otra hlice es de posicionamiento, participa en colocar la hlice de
reconocimiento. Entre la hlice de reconocimiento y el ADN se establecen puentes de hidrgeno.

Homeodominio: forma parte de un dominio mayor de la protena. Tiene dos

hlices ms de posicionamiento
La hlice 3 del homeodominio se une al surco
mayor del ADN, y las hlices 1 y 2 se sitan por
fuera de la doble hlice. La hlice 3 contacta tanto
con la columna de fosfato como con las bases
especficas. El extremo N-terminal se sita en el
surco menor y realiza contactos adicionales.
El homeodominio solo es responsable de la unin
al ADN
HLH: son motivos de homo y heterodimerizacin.
Los contactos los proporciona la hlice- por medio de
aminocidos bsicos. Cada hlice anfiptica presenta una cara de
residuos hidrofbicos en un lado y de residuos cargados en el otro
lado. El motivo permite que las protenas dimericen, y una regin
bsica cercana contacta con el ADN.
Diferentes tipos de heterodmeros tienen diferente afinidad por
sitios de unin en el ADN y efectos muy distintos (activan o
reprimen) sobre la transcripcin.

Hay dos tipos de protenas HLH dimerizadas:

- bHLH: con regiones bsicas, interaccionan con el ADN
- HLH: uno de las unidades no tiene regiones bsicas, no interaccionan con el ADN.
Dedos de cinc: comprende un motivo de unin al ADN, un patrn
caracterstico de residuos de cistena e histidina. Un grupo de
aminocidos conservados se une a un in de cinc y forma un
dominio relativamente independiente en la protena.
El motivo toma su nombre del bucle de aminocidos que protuye
desde el sitio de unin al cinc.

Tipo Cys2-his2:
Secuencia: Phe y Leu son aminocidos hidrofbicos conservados
Cys-X 2-4-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X3-His
Presentes en protenas eucariotas y en protenas de unin al ARN, el motivo
puede aparecer en un nmero variable de veces. La hlice- es la que
interacciona con el ADN
Tipo Cys2-Cys2: sin histidina, forman dmeros, caracterstico de los
receptores de glucocorticoides.
 112
Las Leu en las caras hidrofbicas
de las hlices interactan entre s

Cremalleras de leucina: secuencia de aminocidos con

un residuo de leucina en cada sptima posicin. Tpicas
de eucariotas
Una cremallera de leucina en un polipptido interacta con una
cremallera de leucina en otro polipptido para formar un dmero.
Adyacente a cada cremallera hay una secuencia de residuos con
carga positiva (bsicos), implicada en la unin al ADN. La
leucina es un motivo de dimerizacin, permitiendo mantener las
hlices juntas, une los monmeros y contina con la regin que
mantiene los contactos con el ADN.

Las dos cremalleras de leucina forman una estructura en forma de Y, en la

cual las cremalleras forman el tallo y las dos regiones bsicas se bifurcan
bZIP simtricamente para formar los brazos de unin al ADN. Esto se conoce
como el motivo estructural bZIP y explica por qu las secuencias diana para
tales protenas son repeticiones invertidas sin separacin.
Promueven la formacin de homodmeros y heterodmeros con otras
protenas, adquieren funciones distintas.

Reconocimiento del promotor en bacterias

El promotor es una secuencia de ADN que debe ser reconocida por protenas y difiere de otras secuencias
que han de ser transcritas o traducidas. La informacin que determina la funcin del promotor la
proporciona directamente la secuencia del ADN: su estructura es la seal. Ejemplo clsico de elemento de
accin en cis.
Las regiones expresadas solo adquiren significado despus de que la informacin es transferida en la
forma de otros cidos nucleicos o protenas.
La polimerasa tiene afinidad por el ADN pero no distingue secuencias
especficas, no tiene motivos de reconocimiento.
El factor sigma (polipptido ).
La transcripcin slo puede ser iniciada por la holoenzima. El factor sigma
asegura que la ARN polimerasa bacteriana se una al ADN de una forma
estable solamente en los promotores. El factor sigma es liberado cuando la
cadena de ARN alcanza 8-9 bases, dejando al ncleo de la enzima para que
proceda con la elongacin.
El ncleo de la enzima tiene una afinidad general por el ADN, por atraccin
electrosttica entre la protena bsica y el cido nucleico acdico. Cualquier
secuencia de ADN (al azar) que se encuentre unida a la ARN polimerasa
mediante esta unin general se denomina sitio de unin dbil.
El factor sigma introduce un cambio en la afinidad de la polimerasa por el
ADN. La holoenzima ha perdido su capacidad para reconocer los sitios de
unin dbiles, por tanto el factor sigma desestabiliza la capacidad de unir
ADN de forma general, pero aumenta la afinidad especfica por regiones
concretas que son los promotores. El factor sigma confiere afinidad por
promotores.
El promotor de E.coli
Reconoce la holoenzima cargada con 70.
Los sitios de reconocimiento en el ADN se pueden definir como una secuencia ideal constituda por las
bases que aparecen con ms frecuencia en una posicin determinada. Una secuencia consenso es un
fragmento corto en el promotor que est conservado y es crucial para su funcin. La conservacin de slo
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secuencias consenso muy cortas es una caracterstica de sitios reguladores (promotores) tanto en procariotas
como en eucariotas.
En los promotores bacterianos hay 4 elementos conservados:

- El sitio de iniciacin: generalmente una purina, la base

Regin 10 T80A95T45A60A50T96
central de la secuencia C A /G T
- La secuencia en la regin 10. Caja TATA
- La secuencia en la regin 35
- La separacin entre las secuencias 10 y 35 (16-19
pb)
Regin -35 T82T84G78A65C54A45

Aguas arriba del sitio de iniciacin, hay una regin de 6 pb que es reconocible en casi todos los
promotores. El centro se encuentra a unas 10 pb aguas arriba del sitio de iniciacin, secuencia 10. el
consenso es TATAAT. Los nmeros subndice representan el porcentaje de aparicin de la base encontrada
con ms frecuencia, variando entre el 45 y el 96%.
La secuencia 35 tiene el consenso TTGACA.
Cuanto ms parecido sea un promotor a la secuencia consenso, ms fcil es la transcripcin.

Anlisis de interacciones promotor- ARN polimerasa: estrategias

Moleculares:
- Proteccin
- Modificacin
Genticas: mutaciones que afectan a la actividad promotora disminuyen la frecuencia de iniciacin
- Efecto de mutaciones
- Supresiones

Modificaciones que impiden la unin de la

polimerasa

Sitios protegidos por la polimerasa, la

polimerasa protege de la modificacin

Mutaciones que afectan la actividad

promotora, afecta a las 2 cadenas. Las
mutaciones eliminan o reducen la actividad del
promotor
 -10: conversin CC a CA
-35: formacin de CC

La polimerasa se une principalmente a una cara del ADN: cadena codificante. Tiene ms flechas en el
esquema indica que la relacin con la holoenzima es asimtrica.
Una cara del promotor contiene los puntos de contacto para la ARN polimerasa.
De los ensayos de mutacin se deduce que las regiones 35 y 10 contienen la mayora de los puntos de
contacto para la enzima. Se demuestra que son secuencias importantes porque las mutaciones en esa zona
disminuyen la eficacia de la transcripcin. (doble flecha lila)
Las mutaciones que hacen que la secuencia se aleje del consenso dan informacin sobre la especificidad
(bases concretas) en la interaccin holoenzima-ADN.
Las flechas negras sealan sitios protegidos por la polimerasa (Footprinting), hay regiones que no son
atacadas porque estn protegidas por la polimerasa, ms en la cadena codificante, hay dos bloques de
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proteccin y abarca una zona ms amplia que la anterior, siendo la zona de unin a la polimerasa donde se
establecen los enlaces fuertes.
Las flechas verdes indican modificaciones que impiden la unin de la polimerasa, ensayos de
interferencia (protena unida a una secuencia especfica). La interferencia se hace aguas arriba de la regin
35, cualquier grupo qumico que se aada impedir que se forme el complejo.
Como el ADN se desnaturaliza en la burbuja: las bases desapareadas de la burbuja son susceptibles de ser
modificadas por agentes qumicos (metilacin) permitiendo definir que la caja TATA forma parte de la
burbuja y aguas abajo se encuentra el inicio de la transcripcin.
La regin 10 est implicada en la formacin del complejo abierto, conversin del complejo cerrado a
complejo abierto.
La regin 35 est implicada en la formacin del complejo cerrado y con la interaccin con la polimerasa
en el contacto inicial.
Una cara del ADN establece ms y mejores contactos con la polimerasa que la otra.

El inicio de la transcripcin es muy dependiente del grado de superenrollamiento del ADN. Enrollamiento
y desenrollamiento ocurren de forma simultnea a medida que la polimerasa transcribe el ADN. A medida
que la polimerasa empuja hacia delante sobre la doble hlice, va generando superhlices positivas (ADN
ms empaquetado), y deja superhlices negativas detrs (ADN parcialmente desenrollado); aumenta el
nmero de vueltas por delante y disminuye por detrs. La torsin negativa facilita la desnaturalizacin. La
girasa introduce hlices negativas; la topoisomerasa quita hlices negativas.
Muchos promotores mejoran la transcripcin disminuyendo el superenrollamiento, sobre todo las cajas
que tienen menos AT.

La polimerasa cambia de conformacin segn est en iniciacin o elongacin.

Cuando se encuentra en fase de elongacin se libera del factor sigma y se hace
ms compacta abarcando un menor nmero de bases.

Relacin estructura funcin en 70

Mutaciones y supresiones identifican zonas de interaccin. Los ensayos de supresin evidencian la
interaccin. Las mutaciones supresoras nos indican los sitios de contacto.
La evidencia directa de que contacta con el promotor es la presencia de mutaciones en que suprimen
mutaciones en las secuencias consenso. Cuando hay una mutacin que impide el reconocimiento por la
polimerasa en una posicin determinada del promotor, y hay una mutacin compensatoria en que permita
que la polimerasa utilice el promotor mutante, se puede decir que el par de bases de ADN relevante est en
contacto con el aminocido que ha sido sustituido.
Sin mutacin (silvestre) se establece interaccin entre aminocidos de y bases especficas del ADN, si
se muta alguna base no se produce interaccin, pero una mutacin en el aminocido se restablece la
interaccin.
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Mapa de 70 de E.coli que identifica las regiones conservadas. Las

regiones 2.1 y 2.2 contactan con el ncleo de la polimerasa, es la parte
ms conservada de .
2.3 se requiere para la fusin y 2.4 y 4.2 contactan con los elementos del
promotor en 10 y 35.
La regin N-terminal evita que 2.4 y 4.2 se unan al ADN en ausencia del
ncleo de la enzima.
Delecionando N-terminal se produce una unin fuerte de con el ADN
en secuencias promotoras, esto sugiere que esta regin se comporta como
un dominio de autoinhibicin, por s solo no se establece la interaccin
con el ADN, precisa de la polimerasa.
2.4 y 4.2 forman -hlices en la protena, establecen contactos, puentes
de hidrgeno, con ciertas bases en la cadena que no sirve de molde en la
secuencia 10 del promotor.

Los factores sigma confieren especificidad a la polimerasa

El factor 70 es universal, hay otros factores que establecen una relacin coordinada de grupos de
genes, transcriben operones relacionados y reconocen promotores caractersticos.
Los factores sigma de
E.coli reconocen a los
promotores con diferentes
secuencias consenso.

Reguln: conjunto de operones con regulacin comn, el regulador puede ser . Se asocian en relacin a
situaciones ambientales, estrs, choque trmico, se produce la sntesis de nuevas protenas.
El factor ms comn, responsable de la transcripcin de la mayora de los genes en condiciones
normales es 70. los factores alternativos se activan en respuesta a cambios ambientales, o para la
expresin de genes flagelares durante el crecimiento. Todos los factores pertenecen a la misma familia
de protenas (son homlogos) excepto 54.
Induccin del factor : en la clula hay abundante 70, pero si cambian las
condiciones ambientales la sntesis de protenas que se estn produciendo en
ese momento se para o disminuye, y se sintetiza una nueva serie de protenas,
stas son producto de genes relacionados con la alteracin ambiental.
En un choque trmico, por ejemplo, el gen rpoH es un regulador necesario
para poner en marcha la respuesta. Su producto es 32, que funciona como un
factor alternativo que activa la transcripcin de los genes del choque
trmico.
Los factores alternativos compiten con 70 por el ncleo de la enzima
disponible, por tanto los genes que se transcriben durante la alteracin
ambiental depende del equilibrio entre .
 116
Cada factor obliga a la polimerasa a iniciar la transcripcin en series de promotores determinados.
Analizando la secuencia de estos promotores se puede mostrar que cada serie se caracteriza por la
presencia de elementos reguladores nicos. La secuencia de cada tipo de promotor asegura que slo puede
ser reconocido cuando la polimerasa es dirigida por el apropiado.
Una caracterstica de los promotores para cada enzima es que tienen el mismo tamao y localizacin en
relacin con sitio de iniciacin, y que muestran secuencias conservadas slo alrededor de los centros de
las secuencias 35 y 10. las secuencias consenso para cada serie de promotores difieren unas de otras en
una o ambas secuencias 35 y 10, la transcripcin de los diferentes grupos es mutuamente excluyente.
54, se usa en condiciones de escasez de nitrgeno, tiene una separacin de 6 pb entre las secuencias
consenso.
Factores : control temporal y espacial de la expresin gnica
Esporulacin en Bacillus subtilis

La esporulacin implica la diferencia de una bacteria vegetativa

en una clula madre que se lisa, y una espora que se libera. Es
como un proceso de minidesarrollo por expresin gnica
programada en el tiempo. Tiene ms factores . La esporulacin
es un ejemplo de cambios de factores .
El ADN se replica, se segrega un genoma hacia un extremo de
la clula y es rodeado por la capa de la espora, especializacin en
los dos polos celulares, cuando se forma el septo, con genes que
tienen que ver con diferentes procesos.
El control gnico est dirigido por diferentes que regulan
diferentes operones. Dentro del grupo de genes uno codifica un
factor alternativo.
La expresin gnica en el tiempo est controlada por . hay
genes de esporulacin tempranos y tardos, programacin en el
tiempo y diferenciacin en el espacio; cambiando se producen
cambios en el tiempo y en espacio.

La esporulacin implica cambios

sucesivos de los factores s que controlan la
especificidad de la ARN polimerasa. Las
cascadas en la protoespora y en la clula
madre se relacionan mediante seales que
se transmiten a travs del septo (flechas
horizontales).
 117
Iniciacin en eucariotas
Los promotores son reconocidos por factores de transcripcin y no por la polimerasa. A la polimerasa le
encuentra encontrar los promotores, necesita de los factores auxiliares que la atraen.
- Tres ARN polimerasa.
ARN pol I: transcribe ARNr
ARN pol II : transcribe ARNm
ARN pol III: transcribe ARNt y ARNsn (nuclear pequeo), 5S
- Abundancia de factores auxiliares (TF, de transcription factor). TFIIIB, factor de la
polimerasa III.
- Abundancia de secuencias reconocibles por distintos factores.
Mayor complejidad que en procariotas.

Inicio en promotores tipo I (humanos)

La ARN polimerasa I tiene mayor actividad, reside
en el nucleolo y transcribe los genes que codifican el
ARNr.
Hay muchas copias de promotores I todos iguales, los
genes ribosmicos son iguales.
Estructura modular: el promotor tiene 2 mdulos
- Ncleo del promotor, secuencia necesaria para
iniciar la transcripcin, no hay un consenso claro,
pero cerca del inicio hay una regin rica en GC y
otra rica en AT. Rodea al punto de inicio, desde 45
a +20.
- UPE o elemento de control aguas arriba, aumenta la
TBP transcripcin. No es un elemento esencial in vitro
pero permite niveles ms altos de transcripcin, in
vivo es necesaria.

Factores auxiliares: protenas que se unen al ADN previo a la transcripcin. La ARN pol I tiene dos:
- UBF: afinidad por UPE. Polipptido que se une a un elemento rico en GC. La unin de la
protena a la regin UPE favorece la unin de otras protenas a la regin posterior. Tiene funcin
de reclutamiento, primero atrae a SL1 y segundo atrae a la polimerasa.
- SL1: unin posterior al ncleo de la polimerasa. Por s mismo no tiene especificidad por el
promotor, pero una vez que se ha unido UBF, el SL1 se puede unir de forma cooperativa para
extender la regin de ADN que es cubierta. SL1 consta de 4 protenas, una de ellas es la TBP
(TATA bilding protein), protena de unin a la caja TATA. Factor de posicionamiento.
Una vez que ambos factores se han unido, la polimerasa se puede unir al ncleo del promotor para
iniciar la transcripcin, formando una estructura muy tupida.
La ARN polimerasa III: tiene 3 tipos de promotores. Tiene ms promotores que la polimerasa I y
menos que la II.
- Tipo 1 y 2, son promotores internos, de control interno,
ICR (internal control region). Se encuentran aguas abajo
del inicio de la transcripcin. ARNt y 5S. Tienen dos
tipos de elementos, dos secuencias cortas se encuentran
separadas por una secuencia variable:
A y C, tipo 1
A y B, tipo 2, si las secuencias estn demasiado
juntas se puede anular la funcin
 118
- Tipo 3: son promotores tpicos con tres elementos:
ARNsn
Iniciacin en promotores internos de polimerasa III, tipos 1 y 2
La iniciacin a travs de los promotores internos de pol III implica a los factores de ensamblaje TFIIIA
y TFIIIC, el factor de iniciacin TFIIIB y la ARN pol III.
- TFIIIA y TFIIIC: factores de ensamblaje, permiten la unin de TFIIIB (TBP) cerca del inicio
- TFIIB: factor de posicionamiento, permite la unin de pol III en el sitio de inicio.
TFIIIA pertenece a la clase de protenas con dedos de cinc.
TFIIIB consta de TBP, que atrae a la polimerasa, y de otras dos protenas.
TFIIIC es un gran complejo protenico que contiene al menos 5 subunidades.

TFIIIC reconoce el sitio B, pero se une a una

zona ms extensa que incluyen a A y B
TIIIFA se une a una secuencia que incluye el
sitio C, el cual se requiere para la funcin de
unin de TFIIIC.
La unin de TFIIIC permite que TFIIIB se una a
una secuencia alrededor del punto de inicio.

ARN polimerasa II: iniciacin

Tiene muchos promotores diferentes, para la organizacin general de un promotor se define un
promotor genrico, que ser la secuencia ms corta posible en la cual la ARN pol II pueda iniciar la
transcripcin.
Promotor genrico contiene como mnimon:
- Caja TATA: aproximadamente en 25, hay promotores sin caja TATA
- Sitio de iniciacin: Pirimidina-A-Pirimidina, donde A es el sitio +1
Factores de transcripcin tipo II
Generales: aparato basal de transcripcin, se encuentran en casi todos los promotores
Especficos: de un tipo celular concreto, los ms abundantes e importantes es eucariotas
superiores
Inducibles: aparecen en respuesta a determinadas seales ambientales

El complejo de iniciacin: ensamblaje

El complejo de iniciacin se une a los promotores de ARN pol II en una
secuencia ordenada de asociacin de los factores de transcripcin.
1. Unin de TFIID: interacta con la caja TATA
2. Otros factores se unen en un orden determinado
3. Unin de la RNA pol II
4. Algunos factores se unen despus
 119
El primer paso en la formacin del complejo es la unin del factor
3URPRWRUHV
SRO ,, TFIID a la caja TATA. TFIID tiene dos tipos de componentes, TBP
que reconoce TATA, y TAFs son factores asociados dependientes
de promotor.

TBP es un factor universal en eucariotas y comn a los tres tipos de iniciacin. Se une al ADN en la
secuencia TATA del surco menor (todas las protenas conocidas de unin al ADN lo hacen en el surco
mayor) en forma de silla de montar. Engloba al ADN, tiene una estructura simtrica, dos dominios
homlogos. Empuja en el surco menor de la doble hlice abrindolo un poco, esto provoca torsiones en el
ADN que sufre un fuerte impacto, y permite que otras protenas entren en contacto o eviten el mismo,
induce una curvatura en el ADN de 80, afectando las interacciones con otras protenas.

Las ARN polimerasas se sitan en todos los promotores mediante un

factor que tiene TBP. 3URPRWRUHV
TFIIIB se une junto a TFIIIC mientras que SL1 se une en conjuncin SRO ,,,
con UBF1.
TFIID es responsable solamente del reconocimiento de promotores
para la ARN pol II.
En un promotor con un elemento TATA, TBP se une de manera
especfica al ADN, pero en otros promotores puede ser incorporado
por asociacin de con otras protenas que se unen al ADN.
3URPRWRUHV
Cualquiera que sea el medio de entrada en el complejo de iniciacin, SRO ,
tiene el propsito comn de interactuar con la ARN polimerasa.

Liberacin de promotores tipo II

Requiere fosforilacin del extremo carboxi-terminal de la ARN pol II

Se fosforila la subunidad mayor de la polimerasa para que pueda
empezar a trabajar.
 120
Terminacin de la transcripcin en bacterias
La terminacin implica el reconocimiento del punto que determina el
final de la adicin de bases a la cadena. Para terminar la transcripcin,
hay que cesar la formacin de enlaces fosfodister, y el complejo de
transcripcin debe desintegrarse. Cuando se aade la ltima base a la
cadena de ARN, la burbuja se colapsa porque el dplex ARN-ADN
desaparece, el ADN vuelve a su doble hlice y el ARN y la enzima son
liberados.
Los terminadores son secuencias necesarias para la terminacin.
La secuencia terminadora, 3, siempre se transcribe.
Se forman estructuras en forma de horquilla en el ARN, importantes
para la terminacin. Interactan con la polimerasa.
La polimerasa no transcribe siempre a la misma velocidad, hace
pausas, si en una de esas pausas la interaccin ADN-ARN es dbil la
transcripcin se acaba.

Paralelismos con la iniciacin:

- Secuencias en cis, son importantes en el sitio donde estn:
Promotores
Terminadores
- Rotura de puentes de hidrgeno
Iniciacin: ADN-ADN
Terminacin: ADN-ARN
- Interacciones ARN polimerasa con:
ADN en la iniciacin
ARN en la terminacin
- La terminacin es dependiente de la estructura secundaria del ARN. La estructura secundaria del
ARN, provocada por apareamientos intracatenarios, es importante para la funcin y est
relacionada con la terminacin.

Terminadores de E.coli
Los terminadores se han clasificado segn el requerimiento de
factores adicionales por parte de la ARN polimerasa para
terminar in vitro.
- Terminadores intrnsecos: la polimerasa puede terminar en
sitios especficos en ausencia de cualquier otro factor. Son
los ms abundantes. Hay terminadores ms eficientes que
otros. Tienen caractersticas estructurales, necesarias para
la terminacin:
Una horquilla en la estructura secundaria, rica en pares
G-C. hace ms estable la estructura.
Sucesin de residuos de U al final, apareamiento dbil
ARN-ADN
Terminador: AAA en el ADN, ser UUU en el ARN Regin del tallo rica en G-C

Los terminadores intrnsecos incluyen regiones palindrmicas

que forman horquillas que varan entre 7-20 pb. Tramo de U monocatenario
 121

- Terminadores dependientes de rho: necesitan de

la adicin de un factor. Hay mutaciones que
demuestran que el factor est implicado en la
terminacin in vivo. Hay pocos terminadores
dependientes de rho en E.coli, pero si en fagos.

Rho: protena esencial implicada en la terminacin de transcritos, slo funciona en la etapa de

terminacin. No se puede delecionar el gen, se pueden hacer mutaciones puntuales que disminuyen la
funcin, pero no de prdida total.
Las secuencias requeridas para la terminacin se encuentran aguas arriba del terminador. El ARN es rico
en C y pobre en G.

Modelo de accin de rho

El factor rho persigue a la polimerasa a lo largo del ARN y

puede provocar la terminacin cuando alcanza a la enzima
haciendo una pausa en un terminador dependiente de rho.
La ARN pol transcribe el ADN. Rho se une a un sitio de
reconocimiento sobre el ARN. Rho se mueve a lo largo del
ARN siguiendo a la ARN pol. La ARN pol hace una pausa en
el terminador y rho lo alcanza. Rho desenrolla el hbrido
ADN-ARN en la burbuja de transcripcin. Terminacin: la
ARN pol, rho y ARN se liberan.
Rho tiene actividad ATPasa, dependiente de ARN, y
helicasa 5-3, causa la separacin ADN-ARN. La hidrlisis
del ATP se utiliza para proporcionar energa para la reaccin.
El ARN de procariotas es policistrnico, se transcribe y se
traduce a la vez, por tanto hay ribosomas en el ARNm y rho
no puede funcionar mientras haya ribosomas, si no hay
ribosomas rho llega al terminador y acaba la transcripcin.
Polaridad de mutaciones: sin funcin aguas abajo, hay
orientacin. Una mutacin en un codn de terminacin de
protena se traducir una protena mutante y el resto, aguas
abajo no se traduce, el ARN se acorta.
Terminador dependiente de rho dentro de la unidad de
transcripcin, antes del terminador utilizado habitualmente,
normalmente estos terminadores tempranos no se utilizan
debido a que los ribosomas evitan que rho alcance a la ARN
polimerasa. Pero una mutacin sin sentido libera a los
ribosomas entonces rho es libre de unirse o de moverse por el
ARNm, capacitndolo para actuar sobre la ARN polimerasa
en el terminador.
Terminacin en eucariotas
Terminadores reconocibles
ARN pol I
- Secuencia de 18 pb en ARN reconocible por factor de
terminacin
ARN pol III
- Poli-U4 situada en una zona rica en GC
 122
El extremo 3 se genera (inicialmente) por terminacin
ARN pol II terminadores ?
El extremo 3 se genera por corte y poliadenilacin.
Es difcil conocer que extremo 3 es el que marca la terminacin.
No est sujeto a regulacin. Una unidad de transcripcin suele
contener un nico gen, y la terminacin ocurre ms all de la regin
codificadora.

En procariotas, transcripcin y traduccin estn acoplados, se afectan mutuamente, por tanto estn ms
sujetos a regulacin.
Cis: secuencias importantes per se, dependen de la situacin en le ADN, cerca del principio
Trans: mutaciones en trans afectan a las protenas, lejos del principio. Trans con relacin a la
configuracin de dos puntos se refiere a su presencia en dos molculas diferentes de ADN
(cromosomas)

TRADUCCIN
Decodificacin del mensaje gentico y sntesis de protenas. Cada aminocido se une a una molcula de
ARNt especfico de ese aminocido mediante enlace de alta energa (ATP). El proceso est catalizado por
la enzima sintetasa, hay una sintetasa para cada aminocido.
El ARNm tiene codones que interactan con los anticodones de los aminoacil-ARNt, de manera que se
incorporen las series de aminocidos en la cadena polipeptdica. El ribosoma proporciona el ambiente para
controlar la interaccin entre el ARNm y el aminoacil-ARNt.
Ribosomas
Componentes esenciales en todas las clulas. El ribosoma posee
diversos centros activos, cada uno construido a partir de un
determinado grupo de protenas que se asocian con una regin del
ARNr. Los centros activos necesitan de la participacin directa del
ARNr con una funcin estructural. Algunas funciones catalticas
necesitan protenas individuales, ninguna de las actividades se
pueden reproducir por protenas aisladas o grupos de protenas,
slo funcionan en el contexto del ribosoma.
Localizacin fsica de componentes: anlisis estructural
Protenas y zonas del ARNr con funciones concretas: anlisis mutacional.
Estructura ribosmica
Todos los ribosomas de una clula son idnticos. Constan de dos subunidades, cada una tiene un ARNr
principal y un nmero de protenas pequeas. La subunidad mayor puede tener adems ARN pequeos.
En procariotas son ms pequeos que en eucariotas y en mitocondrias son ms pequeos.
El ribosoma bacteriano (70S), la subunidad mayor (50S) tiene:
- un ARNr 23S
- un ARNr pequeo 5S
- 31 protenas
La subunidad menor (50S):
- ARNr 16S
- 21 protenas
El ribosoma eucaritico (80S), subunidad mayor (60S):
- ARNr 28S
 123
- ARNr 58S
- ARNr pequeo 5S
- Unas 49 protenas
La subunidad menor (40S):
- ARNr 18S
- Unas 33 protenas

El ribosoma tiene 3 lugares de unin a ARN, uno para ARNm y tres para ARNt, un lugar P de unin al
peptidil ARNt que acoge a la molcula de ARNt unido a la cadena polipeptdica en crecimiento; un lugar
A acoge a la molcula de ARNt entrante cargada con el aminocido; un lugar E ocupado transitoriamente
por ARNt antes de abandonar el ribosoma. El anticodn del ARNt debe ser complementario del codn del
mensajero para que se establezca una unin fuerte.

Funcin ribosmica
Fases de la traduccin:
- Iniciacin: incorporacin del primer aminoacil-ARNt,
formil metionina-ARNt en procariotas; metionina-ARNt
en eucariotas.
La subunidad 30S colocada sobre el punto de unin del
ARNm se une a la subunidad 50S y a esto se une el
aminoacil-ARNt.
El primer aminoacil-ARNt entra en el sitio P, el resto de
aminoacil-ARNt entra en el sitio A.
- Elongacin: sntesis de uniones peptdicas.
El ribosoma se mueve a lo largo del ARNm y la longitud de
la cadena polipeptdica se extiende mediante transferencias
desde el peptidil-ARNt al aminoacil-ARNt.
- Terminacin: liberacin del pptido.
La cadena polipeptdica es liberada del ARNt y el ribosoma
se disocia del ARNm.

Existen diferentes conjuntos de factores accesorios que ayudan

al ribosoma en cada una de las fases. La energa se suministra en
las diferentes etapas mediante la hidrlisis de GTP.
Se han hecho estudios con inhibidores (antibiticos) para
averiguar la estructura ribosmica.
Mutaciones del ADN para protenas ribosmicas, algunas se
pueden restablecer por complementacin.
 124
Iniciacin de la traduccin
En bacterias, la iniciacin necesita de la subunidad 30S y de
factores accesorios.
La iniciacin necesita de subunidades ribosmicas libres. Cuando
los ribosomas son liberados en la terminacin, se disocian para
generar subunidades libres. Los factores de iniciacin estn presentes
solamente en las subunidades 30S disociadas. Cuando las
subunidades se reasocian para proporcionar un ribosoma funcional
en la iniciacin, liberan los factores.

Factores de iniciacin (IF) en bacterias, solo en la subunidad 30S, se

liberan cuando 30S se asocia con la subunidad 50S. los factores de
iniciacin solamente estn en relacin con la formacin del complejo de
iniciacin, estn ausentes en los ribosomas 70S y no tienen ninguna funcin
en las fases de elongacin. Las bacterias utilizan 3 factores de iniciacin:
- IF-3: se necesitan para que las subunidades 30S se unan de forma
especfica a los puntos de iniciacin en el ARNm. Es necesario
para estabilizar las subunidades 30S libres capacitndolo para
unirse al ARNm. Se libera del complejo 30S-ARNm para permitir
que se unan las subunidades 50S. Al liberarse IF-3 se recicla
buscando otra 30S.
- IF-2: se une al ARNt de iniciacin (formil-metionina) y controla su
entrada en el ribosoma.
- IF-1: se une a las subunidades 30S slo como parte del complejo
de iniciacin completo, y puede participar en su estabilizacin.
Unin al sitio A, estabiliza el complejo anti-asociacin con 50S
Reconocimiento en procariotas
La iniciacin ocurre en una secuencia especial del ARNm, es el
sitio de unin al ribosoma. Es una secuencia de bases que
precede a la regin codificadora. Es el lugar donde las
subunidades se asocian sobre el ARNm para formar un ribosoma
intacto.
Los puntos de unin del ribosoma sobre el ARNm se pueden
recuperar de los complejos de iniciacin.
La subunidad 30S protege unos 30 N:
Secuencia de unin al ribosoma Shine-Dalgarno
(complementarias del extremo 3 del ARN 16S). esta
secuencia est ausente en eucariotas.
Codn de iniciacin:
AUG: el ms frecuente
GUG
UUG
 125
Iniciacin en operones
En un ARNm policistrnico, la iniciacin se produce de
forma independiente en cada cistrn. Cuando la regin
intercistrnica es ms larga de lo que abarca el ribosoma,
la disociacin en el punto de terminacin se sigue de una
reiniciacin independiente en el cistrn siguiente.
En el ARNm policistrnico cada regin de codificacin
comienza con un punto de unin al ribosoma.
La naturaleza de los genes bacterianos significa que la
traduccin se lleva a cabo de forma secuencial a travs de
sus cistrones.
El ribosoma se une independientemente al comienzo de cada cistrn. Cuando termina la sntesis de la
primera protena, el ribosoma abandona el ARNm y se disocia, entonces se ensambla un nuevo ribosoma
en la siguiente regin codificadora y traducir el siguiente cistrn.
Traduccin independiente de cada uno de los genes en ARNm policistrnicos. Excepcin: acoplamiento
traduccional.

Iniciacin en eucariotas
Los ribosomas (subunidad 40S) eucariticos migran desde el
extremo 5 del ARNm hasta el punto de unin al ribosoma, que
comprende un codn de iniciacin AUG. Los ARNm son
monocistrnicos y son ms largos que lo necesario para codificar
una protena.
El codn de inicio siempre es AUG que codifica para metionina.
Los ARNm se modifican en el extremo 5 con caperuzas (cap),
metilacin que marca el extremo 5, los ribosomas reconocen el
cap y recorren una corta distancia hasta que encuentran el codn
de inicio. La unin de 40S al ARNm requiere de varios factores de
iniciacin, entre los que figuran protenas que reconocen el cap.
No hay secuencia complementaria al ARNr 18S
La subunidad 40S se une al ARNm por la caperuza (CAP) del
extremo 5 y busca la secuencia de iniciacin
Se requieren ms factores de iniciacin que en procariotas (eIF)
La Met inicial no se modifica
El ARNt iniciador: Met-tRNAi

Los requerimientos energticos se consiguen de la hidrlisis de GTP, se consume mucho y la iniciacin

es la etapa ms lenta y tiene que ver con la etapa de error del proceso.

Elongacin
Una vez que se ha formado el ribosoma completo en el codn de
iniciacin, est dispuesto para un ciclo en el que el aminoacil-ARNt
entra en el lugar A del ribosoma cuyo lugar P est ocupado por el
peptidil-ARNt. Cualquier aminoacil-ARNt puede entrar en el sitio A
excepto el iniciador.
El ribosoma tiene varios centros activos. Se puede asociar con una
membrana. El ARNm hace un giro segn pasa a travs de los sitios A y
P, que estn angulados el uno con respecto al otro. El lugar E se sita
ms all del sitio P.
 126
El punto de actividad peptidil-transferasa se encuentra en la subunidad grande, enzima responsable de la
sntesis de la unin peptdica.
El proceso de cargar un ARNt est catalizado por la enzima aminoacil-ARNt sintetasa. Existen por lo
menos 20 sintetasas, cada una reconoce un nico aminocido y todos los ARNt en los que el aminocido
pueda colocarse de forma legtima. Son importantes para la fidelidad de la decodificacin del cdigo
gentico.
Sitios del ribosoma:
- Subunidad menor: ARNm
- Subunidad grande: ARNt
- Sitio P: donador
- Sitio A: aceptor
- Sitio E: salida de ARNt descargados

El pptido se transfiere al aminocido. El ARNt tiene una estructura secundaria en forma de cruz, y una
estructura tridimensional en forma de L.
Factores auxiliares de elongacin (EF)
Son protenas importantes para asegurar que las reacciones ocurren de forma especfica y en un orden
concreto. Los EF tienen una accin secuencial. Decodificacin de mensajeros: distintos factores de
elongacin se asocian cclicamente con los ribosomas.
Son factores esenciales:
- En procariotas:
EF-Tu: entrada del aa-ARNt en A
EF-Ts: regeneracin EF-Tu
EF-G: translocacin
- En eucariotas:
eEF-1
eEF-1
eEF-2

EF-Tu acompaa al aminoacil ARNt al sitio A y luego abandona el ribosoma. Transporta un nucletido
de guanina y su actividad est controlada por el estado del nucletido de guanina:
- Cuando existe GTP el factor Tu est en su estado activo
- Cuando el GTP se hidroliza a GDP el factor se inactiva
- La actividad se recupera cuando el GDP se sustituye por GTP
El complejo EF-Tu.GTP une el aminoacil-ARNt para
formar ARNt.EF-Tu.GTP, ste se une solamente al
lugar A del ribosoma cuyo sitio P ya est ocupado por
el peptidil-ARNt.
El aminoacil-ARNt se carga en el sitio A, el extremo
del anticodn se une al lugar A de 30S, el
reconocimiento codn-anticodn provoca un cambio de
conformacin de EF-Tu, se rompe el GPT, se libera EF-
Tu-GDP, no tiene afinidad por ARNt.
EF-Ts media la regeneracin de la forma EF-Tu.GDP,
inactiva, en la forma EF-Tu.GTP, activa. Primero EF-Ts
desplaza al GDP de EF-Tu, formando el factor
combinado EF-Tu-EF-Ts. Luego el EF-Ts es desplazado
por el GTP.
 127
Translocacin
La cadena polipeptdica se alarga mediante la transferencia del polipptido unido al ARNt en el sitio P al
aminoacil-ARNt presente en el sitio A. La actividad responsable de la sntesis de la unin peptdica se
llama peptidil transferasa. El ciclo de adicin de aminocidos a la cadena polipeptdica en crecimiento se
completa con la translocacin, en la que el ribosoma avanza tres nucletidos a lo largo del ARNm. El
resultado es expulsar al ARNt no cargado del lugar P, de manera que pueda entrar un nuevo peptidil-
ARNt. La translocacin necesita GTP y el factor EF-G.
El aa-ARNt cambia de sitio dentro del
ribosoma.
Direccin A-P-E
Las subunidades tambin se mueven.
EF-G est implicado en las etapas iniciales
de la translocacin del ribosoma.
Los ribosomas no pueden ligarse de forma
simultnea al EF-Tu y al EF-G, los factores se
son alternativamente ligados y liberados del
ribosoma. EF-Tu.GDP debe liberarse antes de
que se pueda EF-G; entonces ste debe
liberarse antes de que se pueda unir el aa-
ARNt-EF-Tu.GTP.

Mimetismo molecular
Similitud entre diferentes molculas, como el aa-ARNt-EF-Tu-GTP y EF-
G, compiten por el mismo sitio de unin. Hacen falta estructuras similares
para entrar en el mismo sitio, hay interacciones especficas que aseguran que
slo entra una molcula, cuando intenta entrar EF-G el anterior se mueve de
sitio. La necesidad de que cada factor se libere antes de que otro se pueda
unir asegura que los fenmenos de la sntesis de protenas se lleven a cabo
de forma ordenada. Unin alternativa y excluyente al ribosoma.
Parte del ribosoma controla que slo las interacciones ms precisas sean las que permitan continuar la
elongacin. Los aa-ARNt van entrando y si no hay suficiente afinidad salen del ribosoma.

La unin de los factores Tu y G se alternan segn los ribosomas aceptan

un nuevo aa-ARNt, forman uniones peptdicas y se translocan.
El estudio con inhibidores permite parar la traduccin:
- la kirromicina, inhibidor con estructura similar a un aa-ARNt, provoca una
terminacin temprana del pptido, no permite que se liberen los EF.
- El cido fusdico atasca al ribosoma en el estado de post-translocacin.
Se produce un ciclo de translocacin: EF-G se une al ribosoma, se
hidroliza GTP, y el ribosoma se mueve tres nucletidos, pero el cido
fusdico no permite que se libere EF-G-GDP y no se pueden aadir ms
aminocidos a la cadena.
 128
Terminacin
Existen 64 codones, de los cuales 61 codifican para aminocidos, y slo 21 aminocidos, casi todos los
aminocidos estn representados por ms de un codn, excepto Met y Trp, hay tres codones de
terminacin, marcan el fin de cada gen. El cdigo gentico es universal, redundante y degenerado.
Los tripletes de terminacin:
- UAG: mbar
- UAA: ocre
- UGA: palo
Ninguno de los codones de terminacin est representado por un ARNt, son reconocidos por los
factores auxiliares de terminacin.
- Factores de terminacin (Release Factor): RF/eRF
E. coli:
RF-1 y RF-2 reconocen los codones STOP (sitio A) y activan la
hidrlisis del pptido
- RF1: UAA y UAG
- RF2: UAA y UGA
RF3: libera RF1 y RF2 del sitio A
RRF o Factor de reciclaje ribosmico
EF-G: tambin interviene en la elongacin
IF3: tambin en iniciacin, deja al ribosoma listo para un nuevo
ciclo.
RF1 y RF2 reconocen los codones de terminacin y activan al ribosoma
para hidrolizar el peptidil-ARNt, siendo el aceptor el H2O

Factores de elongacin, terminacin y reciclaje mimetizan al

complejo aa-ARNt-factor de elongacin acompaante.
El mimetismo molecular permite que el complejo del factor de
elongacin Tu-ARNt, el factor de translocacin EF-G y los
factores de liberacin RF1, RF2, RF3 se puedan unir al mismo
lugar del ribosoma.
El RRF acta de forma conjunta con EF-G para producir la
disociacin de las subunidades 50S y 30S. tambin es necesario el
IF3, que completa todo el ciclo, conectando la terminacin con la
iniciacin. IF3 acta para retirar el ARNt desacilado de 30S. una
vez que se han separado las subunidades, IF3 sigue siendo
necesario para impedir que se vuelvan a juntar.

Los errores ms importantes se dan en la iniciacin y en la terminacin. Cuando hay errores en aa-
ARNt, es menos drstico porque se introduce en el sitio A un aminocido similar (los aminocidos
parecidos tienen tripletes parecidos).
Las mutaciones en los genes RF reducen la eficacia de la terminacin. RF1 y RF2 slo pueden sufrir
mutaciones puntuales, la alteracin de las dosis gnicas se aumentan o disminuyen las copias de protenas.
Si disminuye RF1 se disminuye la eficacia de la terminacin aumentando el nmero de protenas. Si
aumenta RF1 se puede provocar que la protena se acabe antes. La dosis gnica es importante, alterando la
composicin relativa de los factores se altera la traduccin.
Son elementos esenciales solamente se pueden hacer mutaciones sutiles.
 129
En E.coli ARNm ARNt RibosomasEF-Tu EF-Ts (G) RF aa-ARNt
sintetasa
Tipos 600 40-60 1 1 1 2 20

Copias distintas de 2-3 3000 20.000 70.000 20.000 600 1000

productos gnicos
Total 1500 180.000 20.000 70.000 20.000 1800 20.000 a
60.000

Estructura y funcin en el ARNr (16S)

Forma parte del sitio A

Anlisis mutacional con inhibidores:

La unidad 16S es esencial porque zonas concretas
participan en funciones concretas. Tambin tiene
actividad enzimtica. Se pueden identificar sitios de
interaccin ARN-ARN y ARN-protena.
Asociacin de las subunidades
Supresin de mutaciones de fin de mensaje, participa
en el reconocimiento de codones de fin de mensaje.
Unin a ARNt y a factores de traduccin
Complementariedad a ARNm (E. coli), secuencia S-D
Fidelidad, las mutaciones modifican la tasa de error.

Interacciones moleculares en el ribosoma

La fidelidad de la expresin gnica:

Se cometen ms errores en la traduccin que en la
transcripcin. La tasa de error tiene que ver con la
velocidad del acontecimiento.
Los cambios de aminocidos tiene una tasa de error de
10- 4, la mayora sin efecto fenotpico.
 130
Tema 5
Tema 5
Regulacin de la expresin gnica en procariotas
Tipos de regulacin. Operones. Control a nivel de la iniciacin transcripcional. Control mediado por la
estructura del ARN: terminacin y antiterminacin. Control a nivel de la traduccin. Estrategias de
regulacin. Interacciones moleculares.

Significado biolgico de la regulacin. Genes regulados y constitutivos. En ambientes diferentes con

nutrientes diferentes, los genes que tienen los procariotas relacionados con el ambiente, y reguladores, les
permiten sobrevivir.
Niveles de control:
- transcripcin, controlada en la fase de iniciacin, es la regulacin ms importante
- traduccin
- actividad..
Tipos de control:
- segn regulador: puede ser positiva o negativa
- segn efector: pueden ser sistemas inducibles o represibles
Interacciones implicadas:
- ADN-prot,
- prot-prot,
- ADN-ARN,
- ARN-prot..
Singularidades procariticas:
- ARNm: vida muy corta e inestables (importancia del inicio de la transcripcin), si se deja de activar la
transcripcin los mensajeros desaparecen. La inestabilidad hace fcil la regulacin.
- Operones: transcripcin coordinada y secuencial de los genes, la regulacin afecta a varios genes
- Transcripcin y traduccin acopladas, estn coordinadas.

El opern lac
Los genes estructurales estn organizados en grupos que incluyen genes que codifican para protenas
con funciones relacionadas, enzimas de una ruta metablica.

Elementos (reguladores) en cis,

secuencias importantes porque
estn donde estn.
Elementos que actan en trans
(productos difusibles): Genes
estructurales y reguladores

El opern lac tiene tres genes estructurales. Los productos protenicos permiten a las clulas captar y
metabolizar -galactsidos, como la lactosa. Tiene elementos reguladores en cis asociados y el gen
regulador de actuacin en trans. Las funciones de los genes:
- lacZ: codifica la enzima -galactosidasa, hidroliza la lactosa en glucosa y galactosa. Gen estructural
- lacY: codifica la permeasa de lactosa, sistema de transporte al interior de la clula
- lac A: codifica transacetilasa de lactosa
- lacI: represor

Induccin del opern lac

Las bacterias necesitan responder rpidamente a los cambios del ambiente, pueden aparecer
fluctuaciones en el aporte de nutrientes, la supervivencia depende de la capacidad de cambiar la
metabolizacin de un sustrato por otro.
130
 131
Tema 5
Induccin: sntesis de las enzimas en respuesta a la aparicin de un sustrato especfico.
Cuando E.coli crece en ausencia de lactosa no necesita -galactosidasa y contiene pocas molculas,
menos de 5.
Cuando aparece el sustrato adecuado la actividad enzimtica
aparece con mucha rapidez, en unos 2-3 minutos empieza a
aparecer la enzima, puede suponer el 5-10% de la protena soluble
total de la bacteria. Si se retira el sustrato del medio , la sntesis de
enzima se detiene tan rpido como haba empezado.
La adicin del inductor da lugar a la rpida induccin del
ARNm, y es seguida, tras un corto intervalo, de la sntesis de las
enzimas; la retirada del inductor es seguida por el rpido cese de la
sntesis. Se saturan.
Parte superior de la figura: el control de la transcripcin de los
genes lac responde muy rpidamente al inductor. En ausencia de
inductor, el opern es transcrito a un nivel basal muy bajo. La
transcripcin es estimulada tan pronto como se aade inductor. La
cantidad de ARNm lac aumenta rpidamente a un nivel inducido
que refleja el balance entre la sntesis y la degradacin.
El ARNm lac es muy inestable, permitiendo que la induccin sea
revertida rpidamente. La transcripcin cesa tan pronto como es
retirado el inductor y el contenido celular retorna al nivel basal.
Parte inferior: se muestra la produccin de protena, medida indirecta de la unidad de transcripcin. Hay
un corto intervalo entre la aparicin del ARNm y la aparicin de las primeras molculas de enzima.
Cuando el inductor es retirado la actividad enzimtica persiste por ms tiempo, la -galactosidasa es ms
estable.

Deteccin a distintos niveles para estudiar la regulacin:

- transcritos
- protenas
- actividades
Cuantificacin de la regulacin: puede dar detalles adicionales
- niveles basales
- niveles regulados (inducidos)
Expresin inducible, inductores: Inductores metabolizables y gratuitos
- lactosa: mejor inductor, metabolizable
- IPTG: inductor gratuito, no metabolizable, mejor inductor
- -galactsidos: algunos no se pueden hidrolizar

El represor: lacI
El componente que responde al inductor es la protena represora codificada por lacI.
Los genes estructurales son transcritos a un solo
ARNm desde un promotor localizado en 5 de lacZ.
El estado del represor determina si el promotor es
activado o no.
El gen lacI sintetiza monmeros del represor que
forman un tetrmero.
El tetrmero se une al ADN operador y bloquea la
transcripcin.
El represor mantiene el opern en forma inactiva
mediante su unin al operador.
Regulacin negativa: El represor se une al
operador impidiendo la transcripcin.

131
 132
Tema 5
La adicin de inductor libera el represor y permite
que la ARN polimerasa inicie la transcripcin.
El inductor convierte al represor a una forma inactiva
que no puede unirse al operador.
La ARN polimerasa se une al promotor y transcribe el
ARNm.
El ARNm es traducido para dar lugar a las tres
protenas.
Regulacin inducible: El inductor inactiva al
represor, permitiendo la transcripcin.
El represor tiene propiedades duales:
- Puede evitar la transcripcin
- Puede reconocer la molcula inductora

El represor tiene dos sitios de unin, uno para el operador y otro para el inductor ( 1 mol/ monmero,
total 4 molculas de inductor por represor). Cuando el inductor se une en su sitio cambia la conformacin
de la protena influyendo en la actividad del sitio de unin al operador (control alostrico).
Cuando el represor est unido al operador no hay transcripcin, hay una expresin basal baja y
constitutiva. Un buen represor: niveles de protena bajos (unas 10 molculas de represor por clula).

Regulacin de lac y anlisis gentico

Consideraciones:
- Fenotipo silvestre: expresin inducible de lacZ
- Mutaciones en gen(es) regulador(es) y estructural(es)
9 Tipos de mutaciones reguladoras (cis o trans)
Constitutivas: siempre expresin de lacZ, Lac+!!!
No inducibles: no hay expresin, Lac-, no sintetizan -galactosidasa
Las mutaciones en el circuito regulador pueden o anular la expresin del opern o causar una expresin
no regulada.
Los mutantes que no pueden ser expresados son no inducibles.
La expresin continua de un gen que no responde a la regulacin se llama expresin gentica
constitutiva y los mutantes son mutantes constitutivos.
El promotor y el operador son identificados como dianas para las protenas reguladoras (ARN
polimerasa y represor) mediante mutaciones de actuacin en cis. El locus lacI es identificado por
mutaciones en trans.
- Mutaciones constitutivas cis:
Las mutaciones del operador son constitutivas (Oc)
El represor porque el operador es incapaz de unirse a la protena
activo no
puede unirse represora, lo que permite que la ARN polimerasa tenga
al operador un acceso no restringido al promotor.
mutante Oc Las mutaciones Oc, son cis ( evidencia la existencia de
un elemento que funciona sin estar representado por un
producto difusible) ya que afectan solamente al grupo
contiguo de genes estructurales.
El opern es transcrito Los genes estructurales contiguos a una mutacin Oc
y traducido
son expresados constitutivamente ya que la mutacin
cambia el operador de forma que el represor no se una
ms a l.
Un Operador constitutivo no tiene suficiente afinidad por el represor
c
Complementable con un opern silvestre? NO: O dominantes en cis
Una mutacin en un sitio cis no puede ser asignada a un grupo de complementacin, la capacidad de
complementacin es caracterstica de genes expresados por productos difusibles.
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 133
Tema 5
Cuando dos sitios de actuacin en cis se sitan cerca el uno del otro, promotor y operador, no se pueden
clasificar las mutaciones con un test de complementacin, estando limitados a distinguirlas por sus efectos
fenotpicos.
Las mutaciones en el operador pierde la afinidad por el represor.

- Mutaciones constitutivas en trans:

La ausencia de represor determina expresin
El gen lacI- sintetiza
un represor que no
constitutiva.
puede unirse al ADN Complementable con un opern silvestre? SI: lacI-
recesivas.
Las mutaciones que inactivan el gen lacI dan lugar a
que el opern est constitutivamente expresado porque
el represor mutante no puede unirse al operador.
La mutacin lacI- supone la prdida de la funcin.
El opern es transcrito Cuando el represor est inactivo o ausente la
y traducido
transcripcin puede ser iniciada en el promotor. Las
mutaciones en el represor que suprimen su capacidad de
unin al operador tendrn un fenotipo constitutivo.

Los tipos de mutaciones lacI pueden ser utilizados para identificar los sitios activos individuales en la
protena represora.
- El sitio de unin al ADN reconoce la secuencia del operador y se identifica por mutaciones
puntuales constitutivas que impiden al represor unirse al ADN para bloquear la ARN polimerasa.
- El sitio de unin del inductor es identificado por mutaciones puntuales que causan la no induccin
del sistema dado que el inductor no puede unirse para activar el cambio alostrico en el sitio de
unin al ADN.
Mutaciones lacI constitutivas: No siempre
D
recesivas: lacI
Mutaciones de prdida de funcin y dominantes:
Dominantes negativas /trans -
dominantes /complementacin negativa
La complementacin negativa o dominantes en
trans o dominantes negativas, sucede entre algunos
mutantes represores, como lacID con lacI+. La
mutacin lacID da lugar a la produccin de un
represor que no puede unirse al operador y es por
tanto constitutiva como lacI-. Lac- es recesiva porque
inactiva al represor respecto al tipo salvaje. LacD es
dominante cuando se empareja con un alelo original.
La razn de la dominancia es que lacD produce una subunidad mala que es incapaz de unirse al operador
y como parte de un tetrmero, impide que las subunidades buenas se unan.
El represor mutado ha perdido afinidad por el operador, pero si hay ARNm y producto en la clula es
dominante.
Son mutaciones recesivas si son complementadas y se establece la regulacin.

Complementacin: indica mirar 2 alelos distintos, se pueden introducir alelos interesantes consiguiendo
diploides parciales, merodiploides o merozigotos, se introduce el opern con un plsmido.

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 134
Tema 5
- Mutaciones no inducibles (cis). Operador: ganancia de afinidad por el Represor, son raras
- Mutaciones no inducibles (trans). Represor: ganancia de afinidad por el Operador, son ms
frecuentes. Las mutaciones que reprimen son siempre supresoras.

lacIS (Superrepresor) complementable con un opern silvestre?

S
NO: lacI dominantes.
Las mutaciones que anulan la capacidad del
Unin al O independiente de inductor
represor de unirse al inductor son lacS y son de
tipo trans. El represor est cerrado en la
forma activa que reconoce al operador y se
impide la transcripcin. La adicin del inductor
no tiene efecto ya que su sitio de unin est
ausente y es imposible convertir al represor a su
forma inactiva.
El represor mutante se une a todos los operadores lac de la clula para impedir su transcripcin y no
puede ser desactivado, es genticamente dominante.
Lacs (suprerrepresor), no es capaz de hacer las funciones que hace el silvestre, independizan al represor
del inductor. Mutacin en dominio de unin al inductor.
Mutaciones que no impiden la unin del inductor, pero no se produce el cambio conformacional, por
tanto se une al ADN. Ha perdido funcin. No es complementable con el opern silvestre. Es una mutacin
dominante.

Interacciones entre subunidades. Dominancia negativa en LacI

Mutacin con prdida de funcin: lacI-.

El represor mutado no tiene capacidad

para reprimir pero si para formar
tetrmeros, habiendo tetrmeros de varios
tipos, mixtos, son menos eficaces que el
silvestre. No hay suficiente represor para
evitar la expresin del opern.
Es un fenmeno frecuente entre
protenas polimricas: dominancia
negativa/ trans- dominancia
/complementacin negativa.
Mutantes de prdida de funcin:
- parcial: dominancia negativa
- total
Un represor silvestre ms uno mutado darn 4 tipos de mutantes, la concentracin efectiva de represor
silvestre disminuye.
Ms consecuencias genticas de la oligomerizacin de LacI complementacin intragnica de mutaciones
lacI-. Caracterstica de protenas multimricas.
- si dos mutaciones no se complementan, la mutacin se
encuentra en el mismo gen
- si la mutacin se encuentra en 2 alelos del mismo gen, se
complementan

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 135
Tema 5
Supresin intragnica: mutaciones en el mismo
polipptido, primera y segunda mutacin en la
misma protena, es una mutacin compensatoria,
en cualquier tipo de protenas.
No asociado a oligomerizacin.

Interacciones DNAprotena (O-LacI): Supresin intergnica

Mutaciones en operador que son suprimidas.

Las mutaciones en el represor afecta a
interacciones protena-protena y ADN-protena.
Un represor mutado puede tener afinidad por el
operador silvestre, aunque no se conoce cual es,
depende del tipo de mutacin del represor.

Relacin estructura/ funcin en lacI

El represor tiene varios dominios. Entre los dominios globulares se

encuentra el sitio de unin al inductor, es una amplia zona en la que se pueden
hacer muchas mutaciones.

Estructura de un dominio del represor.

Lac identifica varios dominios independientes

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 136
Tema 5
Localizacin de mutaciones en LacI

lacI- (no represoras), recesivas, las ms abundantes.

Disminuye la capacidad de oligomerizar, afectan a la estabilidad.
Hay unas mutaciones que impiden la formacin del dmero y
otras afectan a la formacin del tetrmero a partir de los dmeros.
lacI-d, dominante negativa. No disminuye la estabilidad pero
afectan a la unin con el ADN.
lacIs, localizada en el centro de la protena, en el sitio de unin
al inductor, disminuye la afinidad por el inductor.
Las mutaciones de ganancia de funcin y prdida de funcin
parcial son dominantes.
Las mutaciones que disminuyen la actividad de la protena son
recesivas.

Estructura del core tetramrico. Consiste en dos dmeros. El cuerpo del

dmero tiene una zona intermedia poco consistente entre las regiones N-
terminales del core de los monmeros, una hendidura en la cual se une
el inductor, y un core hidrofbico (arriba).
Las regiones C-terminales de cada monmero protuyen como hlices
paralelas. Los dmeros interactan para formar el tetrmero que se
mantiene unido por un haz C-terminal.
Los puntos de mutacin son mostrados por pequeas esferas en la
parte inferior de la figura. Cada esfera representa una mutacin.
Las mutaciones lacIs se dividen en dos grupos:
- las que afectan a la interfase de los dmeros (amarillo),
relacionadas con el cambio conformacional de la
dimerizacin.
- las que actan en la hendidura de unin al inductor (gris)
Las mutaciones lacI- que afectan a la oligomerizacin:
- impiden la formacin del dmero (blanco)
- impiden la formacin del tetrmero a partir del dmero
(morado), esos contactos son importantes para mantener el
tetrmero.
Interacciones ADN-represor
Efecto del inductor: la adicin del inductor anula la
capacidad del represor de unirse especficamente al operador.
Los represores unidos al operador son liberados y se unen a
sitios de baja afinidad al azar.
El represor tiene dos cabezales danzando que facilita el
encontrar el sitio especfico; la interaccin la hace el dmero
pero es tetrmero el que se desplaza. En una clula no
inducida el tetrmero est unido al operador, mientras que el
represor est unido a sitios no especficos. El efecto de la
induccin es cambiar la distribucin del represor en el ADN,
ms que generar represor libre.
Cuando el inductor es retirado, el represor recobra su
capacidad de unirse especficamente al operador. Este paso
implica movimiento desde el sitio de almacenamiento no
especfico en el ADN

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 137
Tema 5
Al unirse el inductor al represor se provoca un cambio conformacional,
perdiendo la afinidad por el operador. La interaccin es simtrica (H-giro-
H)
Cuando el inductor se une al represor la afinidad por el operador se
reduce unas 1000 veces, permaneciendo inalterada la afinidad por otras
secuencias inespecficas del ADN.

Protenas reguladoras: hay poco nmero de ellas, es importante, ser

limitante. El nmero de protenas ser mayor si el genoma es ms grande.

El operador: sitio diana para el represor protenico.

Se sita aguas abajo del promotor pero est solapado. Con
experimentos de footprinting se puede observar donde se unen las
protenas. La represin provoca interferencia con la actividad de la
ARN polimerasa. El solapamiento del operador con el represor no
impide que se unan a la vez en el ADN junto con el promotor. El
represor y la ARN polimerasa se unen en sitios que se superponen
localizados alrededor del punto de inicio del opern.
Represion: interferencia con la actividad de la ARN polimerasa.

El represor no impide la unin de la ARN polimerasa, sino que aumenta la afinidad de la polimerasa por
el promotor, se aumenta la formacin del complejo cerrado. El represor es el regulador; el operador atrae a
la polimerasa, en cuanto se separa el represor empieza la transcripcin.
El operador lac tiene una secuencia simtrica. La
simetra de la secuencia de ADN refleja una simetra en
la protena. El represor es un tetrmero de subunidades
idnticas, cada una de las cuales debe tener un sitio de
unin al ADN. Cada repeticin invertida del operador
entra en contacto de la misma forma con un monmero
La simetra del operador refleja la simetra del represor del represor
El operador tienen un hallazgo comn a muchos sitios de reconocimiento de las protenas reguladoras,
es palindrmico. Cada repeticin puede ser considerada como un medio sitio para el operador.

Las mutaciones Oc producen cambios concretos.

Disminuye la afinidad por lacI 20-30 veces, la represin no
es efectiva, ya no tienen afinidad especfica por el
operador.
Mutaciones constitutivas: estn centradas y hay asimetra,
la mitad derecha funciona mejor y por eso se puede mutar
ms fcilmente.
Hay posiciones importantes, con bases concretas. La
regin protegida por la protena es la misma pero slo unas
cuantas bases son especficas para la interaccin: zonas
protegidas.
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 138
Tema 5
Los contactos son, aqu, ms simtricos, hay interacciones especficas. Las interacciones se producen en
ambas cadenas.

El represor en la regin reguladora

lacI es un tetrmero y puede unirse simultneamente a dos sitios en

el ADN, se forma un bucle en el ADN.
Existen dos sitios adicionales del operador en la regin inicial del
opern. El operador original O1, localizado en el inicio del gen lacZ
tiene mayor afinidad por el represor.
Otras secuencias ms dbiles del operador (pseudooperadores) se
localizan a los lados (O2, O3). Cuando el represor se une de forma
simultnea a O1 y a uno de los otros provoca en el ADN un bucle.

03 01 02
El operador son tres sitios: operador y pseudooperadores.
La presencia de los pseudooperadores incrementa la 83 410
represin, aumenta la afinidad.
La eliminacin de O2 o de O3 reduce la eficiencia de la represin 2-4 veces. Si ambos son eliminados, la
represin se reduce unas 100 veces. La habilidad del represor de unirse a uno de los otros dos operadores,
as como a O1, es importante para establecer la represin.

Interacciones ADNrepresor en otros sistemas

Sitios de unin de protenas represoras.
La relacin fsica entre represor y opern es distinta en los diferentes sistemas, tienen diferentes
mecanismos moleculares.
Los operadores se pueden situar en distintas posiciones con
respecto al promotor.
El operador de gal est aguas arriba del promotor, tiene
interacciones indirectas.
Los sitios de unin de distintos represores varan con relacin
al promotor.

El represor trp reconoce los operadores en tres loci. La localizacin del ARNm vara segn est indicado
en el esquema por las flechas. Un represor controla varios operones.

Tipos de regulacin. Directa y mediada por molculas efectoras.

Tipo de protena reguladora:

Negativo: represor
Positivo: activador
Tipo de molcula efectora:
Inducible: inductor
Reprimible: co-represor

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 139
Tema 5
Los sistemas de control positivo y negativo estn definidos por la respuesta del opern cuando est
presente una protena reguladora. Las caractersticas de los dos tipos de control son opuestas.
Los genes bajo control negativo son expresados a menos que sean desactivados por una protena
represora. Proporciona un mecanismo de seguridad, si la protena reguladora es inactivada el sistema
funciona. Na protena reguladora negativa se llama represor.
Los genes bajo control positivo slo se expresan cuando una protena reguladora activadora est
presente. Una protena reguladora positiva que responde a una pequea molcula se llama activador.
En ausencia de protena reguladora, hay expresin?
SI, hay ms actividad: control negativo
NO, hay menos actividad: control positivo
Los operones inducibles funcionan slo en presencia de una molcula inductora.
Los operones represibles funcionan slo en ausencia de una molcula co-represora.
Los circuitos de control son verstiles y
pueden ser diseados para realizar control
positivo o negativo de la induccin o la
represin.
La induccin se logra cuando un inductor
inactiva a una protena represora: Inducible
control negativo.
La induccin se logra cuando un inductor
activa a una protena activadora: inducible
control positivo.
El opern trp es un sistema represible. El
triptfano es el producto final de las
reacciones catalizadas por enzimas
biosintticas y tanto la actividad como la
sntesis de las enzimas son controladas por
el nivel de triptfano dentro de la clula. El
triptfano funciona como un co-represor que
activa a una protena represora: represible de
control negativo. En las condiciones en las
que el triptfano es abundante el opern est
reprimido porque el complejo protena
represora-co-represor se encuentra unido al
operador. Bajo condiciones de represin los
genes estructurales continan siendo
expresados a un nivel basal o nivel
reprimido.
Las rutas de aminocidos son reprimibles
por producto.
Control positivo e inducible: la molcula efectora activa al activador
Control positivo y reprimible: el co-represor inactiva al activador. Es un sistema caro energticamente y
muy raro.
Superposicin de sistemas de regulacin en el mismo opern
El opern lac y Represin por glucosa
Glucosa: fuente favorita de carbono. Interfiere con la expresin de lac a dos niveles:
- Exclusin de inductor: la glucosa impide la entrada de lactosa (inductor de lac)
- Activacin transcripcional (indirecta) mediada por el activador CRP /CAP y AMPc o
fenmeno de represin catablica
Cuando se dispone de glucosa como fuente de energa es utilizada con preferencia respecto de otros
azcares, por tanto cuando E.coli encuentra en el medio tanto glucosa como lactosa metaboliza la primera
y reprime la segunda.

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 140
Tema 5
Uno de los activadores ms comunes es una protena que controla la actividad de un grupo de operones
en respuesta a nutrientes en relacin con hidratos de carbono.
La eleccin es llevada a cabo evitando la expresin de varios operones (lac, gal, ara). Este efecto se
conoce como represin por catabolito, representa un sistema coordinado que ejerce una preferencia por
glucosa inhibiendo la expresin de los operones que codifican las enzimas de vas metablicas
alternativas.
Exclusin del inductor: la entrada de glucosa en la clula provoca
cambios conformacionales en la permeasa de lactosa que impiden la
entrada de la lactosa.
Cuando no hay glucosa en el medio puede entrar la lactosa a la
clula por medio de la permeasa y se activa el opern lac.

Activacin transcripcional (indirecta): mediada por CAP y

AMPc. Represin catablica: un catabolito de la ruta de
degradacin de la glucosa.
- CRP (Protena Receptora de AMPc) = CAP (Protena
Activadora por Catabolito)
La represin por catabolito es puesta en marcha por la capacidad
de la glucosa de reducir el nivel de AMPc en la clula. El AMPc es
sintetizado por adenilato ciclasa. Cuando hay glucosa la actividad
de la adenilato ciclasa es baja y aumenta en ausencia de glucosa.
Correlacin inversa. La expresin de los operones regulados por catabolitos muestran una relacin
inversa con el nivel de AMPc, que acta unindose al producto del gen cap.
Glucosa y AMPc: cuando uno sube el otro baja
El efector es el AMPc.
CAP es un dmero de dos subunidades idnticas, se activa con una nica molcula de AMPc.
CAP-AMPc es el complejo activador.
Cuando hay glucosa desciende el nivel de AMPc y no se une a CAP, es una protena inactiva incapaz de
unirse a la regin de control, impidiendo que la ARN polimerasa inicie la transcripcin.
Represin catablica por glucosa de los operones activados por CRP: regulacin transcripcional
positiva (CRP) e inducible (AMPc). A nivel molecular es un sistema inducible de control positivo.

Activacin por CRP / CAP: interacciones moleculares

Localizacin de los sitios de unin al ADN e interacciones con la ARN polimerasa.
El dmero CAP se une a un sitio de unos 22 pb en un promotor
determinado.
La secuencia consenso para CAP contiene el pentmero altamente
conservado TGTGA y a veces una inversin de esa secuencia TCANA

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 141
Tema 5
La accin de CAP tiene sus sitios de unin en distintas localizaciones con respecto al punto de inicio
segn los distintos operones que regula, y el pentmero TGTGA puede situarse en cualquier orientacin.

La protena CAP puede unirse en
distintos sitios en relacin a la
ARN polimerasa
Tipo 1: Aguas arriba del promotor (p.ejem. lac -61: sitio CAP)
Favorece que se forme el complejo cerrado (CC), recluta hacia el
promotor a la polimerasa. Sitio de unin CAP adyacente al
promotor.
Tipo 2: La interaccin se da solapando casi con el promotor
(p.ejem. gal, -41), afecta al complejo abierto.
Favorece CA (complejo abierto): se producen contactos con la
polimerasa. Sitio de unin de CAP se sita dentro del promotor.
Esto tiene que ver con que la interaccin de la polimerasa con el
promotor es en sitios determinados de la polimerasa y que la enzima
est en una cara del ADN. Las interacciones de la polimerasa con el
promotor son asimtricas.

Otras formas de interaccin con ARN Pol (p.ej. ara -92): el sitio de unin CAP se sita en direccin 5
del promotor, mucho ms aguas arriba. CAP no est en contacto con la polimerasa, no hay interaccin
directa protena- polimerasa, hay otra protena reguladora que se une entre CAP y los sitios de la ARN
polimerasa. La interaccin se produce a travs de un bucle, que acerca las protenas, las protenas
interaccionan cara a cara.

Existe un gran cambio en la organizacin de la doble hlice del ADN cuando

se une a CAP. La curvatura permite que CAP contacte con la ARN polimerasa
en el promotor.
CAP y opern ara: 2 sitios que separan e interaccionan con el promotor a
veces puede actuar como represor, activador o represor; una vez acta como una
cosa y otra vez como otra.
Puede haber ms de un sitio CAP en un promotor, por lo que en determinadas
circunstancias puede funcionar como represor. Que funcione de una forma o de
otra depende de las afinidades relativas por es tos sitios, adems de otros CAP provoca la aparicin
factores como protenas que faciliten o impidan su unin. de un ngulo de ms de 90
alrededor del centro de
simetra
Regulacin transcripcional con intermediarios: transduccin de seales
Hay sistemas donde encontramos ms de una protena reguladora. En bacterias hay sistemas de doble
componente (dos familias de protenas distintas). Muchos sitios de regulacin hay ms de una protena
reguladora.
Sistemas de dos componentes

El componente sensor o histidina quinasa, transmite la seal en forma de

fosforilacin a un regulador de respuesta

La fosforilacin del regulador (en Asp) altera su actividad transcripcional

Dominios conservados que incluyen los sitios de fosforilacin His (fosfotransferasa) o

Asp (receptor)

141
 142
Tema 5

En E-coli podemos encontrar hasta 30 sistemas de 2 componentes. Aumentan en organismos de vida

libre. Prototipo simple de sistemas de dos componentes. En E. coli hay 30 sistemas de dos componentes.
Los parsitos intracelulares apenas tienen de este tipo, pero en bacterias cambiantes s hay bastantes
sistemas de este tipo.
Los dominios conservados entonces son los aa His (en el sensor) y Asp (en el regulador de respuesta).

Dos componentes:
1) Protena sensora: recoge la seal activadora, puede estar anclada o no. Determina esa seal ,la
autofosforilacin de la propia protena, es el componente sensor o histidina quinasa. Detecta
molculas, cambios de temperatura,... Suelen estar en membrana. La deteccin provoca un
cambio conformacional en la protena que hace que se autofosforile y que interacte con otra
molcula, el regulador de respuesta.
2) Regulador de respuesta o efector que regula la respuesta (activador o represor). La fosforilacin
del regulador, siempre en Asp, altera su actividad transcripcional, aumenta la afinidad cuando
est fosforilado.
Dominios conservados que incluyen los sitios de fosforilacin His (fosfotransferasa, en el sensor) o Asp
(receptor, regulador de la respuesta)

Control de la traduccin

El sistema ms simple es en el que un factor (protena o ARN) se une a la secuencia de iniciacin,

impide el acceso de la secuencia al ribosoma e impide la traduccin. Las interacciones son por tanto ARN-
ARN o ARN-protena. El control adems suele ser autgeno (la propia protena que se transcribe es
reguladora de la traduccin).
La regulacin es fundamentalmente intrnseca (no hay seales externas, la acumulacin de esa protena
es la que reprime su propia traduccin).
Hay que tener en cuenta la estabilidad del ARNm tambin, as como su estructura secundaria (pueden
formarse bucles que impidan la traduccin). Esto provoca tambin que cuando tenemos varios genes en el
ARNm tienen ms posibilidad de traducirse los primeros genes que los siguientes
Paralelismos y diferencias con el control de la transcripcin (inicio).
Ejemplo de ello es la protena p32, necesaria en las fases tempranas de la iniciacin. Esta protena tiene
mucha afinidad por el ADN monocatenario. Cuando ya no hay ADN de cadena sencilla, la protena tiene
tambin algo de afinidad por su ARNm. Se une a este ARNm e inhibe su propia traduccin.
Este mismo tipo de interaccin se da en la produccin de las protenas ribosmicas. Estas protenas
tienen que estar en la proporcin adecuada.
Hay fenmenos de regulacin endgena de varios genes del opern. Cuando una protena ribosmica se
produce en exceso, aparte del ribosoma tambin tienen afinidad por su propio mensajero y se unen a ste,
con lo que se regula su cantidad.

Secuencias iniciadoras e interacciones ARN/ protena y

ARN /ARN
La funcin del represor es proporcionada por una protena
que se une a una regin diana el ARNm para evitar que los
ribosomas reconozcan la regin de iniciacin. Esto es
equivalente a la protena represora que se une al ADN para
impedir que la ARN polimerasa utilice un promotor.

Una protena reguladora

puede bloquear la traduccin
unindose a un sitio en el
ARNm que se superpone al
sitio de unin al ribosoma en
el codn de iniciacin.
142
 143
Tema 5

Otra forma de control traduccional ocurre cuando la traduccin de

un cistrn requiere cambios en la estructura secundaria que dependen
de la traduccin de un cistrn precedente. Esto ocurre en la
traduccin de los fagos de ARN, cuyos cistrones siempre se expresan
de forma ordenada.
La estructura secundaria puede controlar la iniciacin. En el ARN
del fago solo hay un sitio de iniciacin disponible, pero la traduccin
del primer cistrn cambia la conformacin del ARN de forma que
otro sitio de iniciacin se torna disponible. El ARN del fago adopta
una estructura en la cual slo es accesible una secuencia de
iniciacin; el segundo no puede ser reconocido por los ribosomas
porque est apareado con otras regiones del ARN.

Caracterstico de protenas con afinidad por cidos nucleicos

p32: Protena implicada en reparacin, recombinacin y replicacin del fago T4, produccin de
material gentico.
R17: interaccin con ADN RegA T4: reguladora, controla genes tempranos

Control negativo y autgeno. Autgeno: propia protena traducida ser propiamente reguladora. El gen
que codifica para el producto regulador es una de las dianas de la regulacin. La regulacin autgena se
produce siempre que una protena (o ARN) regula su propia produccin. La protena reguladora inhibe la
expresin de un grupo contiguo de genes dentro del opern, siendo un ejemplo de regulacin autgena
negativa.
Regulacin intrnseca: no hablamos de seales externas, van a ser la acumulacin de ese producto
gnico lo que reprima la traduccin. La acumulacin de la protena inhibe la sntesis posterior de s misma
y de algunos otros productos gnicos.
Estructura secundaria y estabilidad del ARNm: esta estructura 2 repercute en la estabilidad del
mensajero. La estructura secundaria del ARN proporciona una regulacin en procariotas y en eucariotas.
Diferencia entre procariotas y eucariotas: se diferencia en los operones por haber varios inicios de la
traduccin
Un ribosoma est leyendo y no puede seguir por haber un apareamiento incorrecto el cual impide la
accesibilidad del ribosoma, este ribosoma puede romper ese apareamiento y puede seguir leyendo.
Polaridad en operones bacterianos: si no hay traduccin en el primer gen no habr en el segundo gen
tampoco.
Los genes aguas arriba sern ms abundantes que los de aguas abajo: se les da preferencia.
143
 144
Tema 5

Protena P32
Tiene afinidad por al ADN monocatenario.
La autorregulacin negativa tiene lugar tardamente y ante el
exceso de P32.
El exceso de protena P32 se une a su propio ARNm para impedir
que los ribosomas inicien la traduccin.
No tenemos ya ribosoma ah y se inhibe la traduccin , se apaga
ese gen y as se podr seguir con su ciclo ltico (se sintetizaran las
protenas de la cpside, etc).
Cuando existe ADN monocatenario en la clula infectada por el
fago, la P32 es secuestrada por ese ADN

La afinidad relativa de p32 por distinto tipo de cidos nucleicos

explica en parte sus funciones.
La afinidad de P32 por el sitio en el ARNm debe ser
significativamente menor que su afinidad por el ADN
monocatenario.
La afinidad de P32 por el ARNm debe ser significativamente
mayor que la afinidad por otras secuencias de ADN, estando
influenciada por la composicin de bases y por la estructura
secundaria. La regin reguladora de la unin al ARNm tiene una
secuencia que carece de estructura secundaria.

Protenas ribosmicas

Regulacin autgena y coordinada para varios genes del opern.

En E. coli, esos genes estn distribuidos en operones mezclados con los de la polimerasa y los de la
transcripcin. Esta maquinaria ha de estar coordinada

Los genes para las protenas ribosmicas, factores de sntesis de

protenas y ARN polimerasa estn entremezclados en un pequeo
nmero de operones regulados autnomamente. (Las protenas en
rosa estn sujetas a regulacin)

144
 145
Tema 5
Autorregulacin en funcin de la disponibilidad
de ARNr
La traduccin de los operones de r-protenas es
controlada de forma autgena y responde al nivel
de ARNr.
Cuando no hay ARNr las protenas se sintetizan
y no tienen donde ir, si no hay se van a su propio
mensajero inhiben su traduccin y as se controlan
las protenas ribosmicas en funcin del nivel de
protenas ribosmicas.

Protenas en complejos macromoleculares

Regulacin autgena por monmeros de tubulina en eucariotas

La tubulina es ensamblada en microtbulos cuando es
sintetizada. La acumulacin de tubulina libre en exceso induce
inestabilidad en el ARNm de la tubulina actuando en el sitio de
inicio del marco de lectura en el ARNm, o en la posicin
correspondiente en la protena naciente.
Se est sintetizando tubulina hasta que se acumulan los
monmeros libres, stos son los que regulan la traduccin
inhibindola. La produccin de ARNm de tubulina es controlada
por la cantidad de tubulina libre, cuando alcanza una cierta
concentracin la produccin de ms ARNm queda bloqueada, el
ARNm se degrada. Es una inhibicin de la traduccin muy
efectiva.
El sitio diana para la regulacin es un acorta secuencia al inicio
de la regin de codificacin.
La tubulina puede interaccionar con el ARNm o se puede unir
al polipptido naciente. No est claro.
El exceso de tubulina provoca que el ARNm de tubulina, localizado en los polisomas, sea degradado,
haciendo que el ARNm sea inestable.
En la regulacin autgena el parmetro crtico es la concentracin de la protena en s.

Regulacin por ARN anti-sentido

ARN
ARN como molcula reguladora de la traduccin.
ARN antisentido
El ARN antisentido tiene una orientacin contraria al ARNm y por tanto total o parcialmente homlogo
no se traduce. Puede estar al inicio, en medio o al final del ARNm.
Interfiere con las funciones de los ARN en general: ARNi, interferente o de interferencia
- Procesamiento y transporte (eucariotas)
- Traduccin (procariotas y eucariotas)
- Estabilidad: proporciona dianas para nucleasas que atacan a ARN bicatenario

Regulacin postranscripcional por ARN

Reguladores especficos de un nico gen o reguladores de mltiples operones.
Todos los ARN pequeos (sRNA) pueden ser reguladores
Algunos tienen mltiples dianas en el ARN y /o interaccionan tambin con protenas
145
 146
Tema 5
Algunos pueden activar (formacin de estructuras secundarias alternativas), no es lo normal.
Eucariotas: sofisticados y variados sistemas de regulacin, en plantas estn muy estudiados
ARNi
Interfiere con la iniciacin de la traduccin
Provoca la degradacin de mensajeros
Fenmenos de silenciamiento y cosupresin
Importancia como herramienta gentica para la inactivacin de genes

Regulacin global
La respuesta estricta
Cuando las bacterias se encuentran en malas condiciones de crecimiento, carecen del aporte de algn
aminocido, desencadenan la respuesta estricta. Se produce un reajuste total del metabolismo ante esa
situacin de estrs.
- Efector: carencia de amino cidos
- Reduccin de la expresin gentica y maquinaria (ribosomas, ARNr)
- Disminucin sntesis de ARN estable (10-20 veces)
- Disminucin sntesis global de ARNm (3 veces)
- Aumento degradacin protenas, liberan aminocidos
- Disminucin sntesis lpidos, nucletidos, carbohidratos
- Reutilizacin de protenas
- Acumulacin de alarmonas
ppGpp y pppGpp: (p)ppGpp

La respuesta estricta produce la acumulacin de dos nucletidos no habituales, tetra-guanina y penta-

guanina. Regulan de forma coordinada un gran nmero de actividades celulares. Su produccin se
controla de dos maneras:
- Un aumento drstico de (p)ppGpp es ocasionado por la respuesta estricta
- Una correlacin inversa entre los niveles de (p)ppGpp y la tasa de crecimiento bacteriano
La deprivacin de cualquier aminocido, o una mutacin que inactive cualquier aminoacil-ARNt
sintetasa es suficiente para iniciar la respuesta estricta. El hecho que inicia la respuesta es la presencia de
de ARNt no cargado en el sitio A del ribosoma, dispara una reaccin improductiva.
Los componentes implicados en la produccin de (p)ppGpp han sido identificados por la existencia de
mutantes relajados (rel), impiden la respuesta estricta.
El sitio ms comn de aparicin de mutaciones relajadas es el gen relA, que codifica una protena
llamada el factor estricto (RelA).
9 Mutantes relajados, sin factor estricto: RelA-, no producen
respuesta al estrs.
El factor estricto es una enzima ((p)ppGpp sintetasa) que cataliza
la reaccin de sntesis en la que se utiliza ATP para aadir un
pirofosfato a GTP o GDP.
A ruta sintetiza siempre (p)ppGpp a niveles bajos, en condiciones
normales hay sntesis y degradacin.
Cuando se produce la respuesta estricta entra una ruta de sntesis
ms potente que depende de RelA, se produce una gran acumulacin
de pppGpp que se transforma en ppGpp por distintas protenas
ribosmicas y luego en GDP.
9 Mutantes estrictos: SpoT-: tienen niveles elevados de ppGpp. El factor estricto cataliza la sntesis de
Se mantienen siempre estresados, tienen permanentemente (p)ppGpp; las protenas ribosmicas
inducida la respuesta estricta. La degradacin queda bloqueada. pueden desfosforilar pppGpp y formar
El gen spoT codifica una enzima que ejerce la principal actividad ppGpp
cataltica de la degradacin de ppGpp. La respuesta estricta es
revertida cuando cesa la actividad de (p)ppGpp.
(p)ppGpp es el efector de la respuesta estricta.
146
 147
Tema 5
Activacin de RelA
Comparacin de sntesis normal de protenas y de la
entrada de ARNt no cargado:
En la sntesis protenica normal la presencia de
aminoacil-ARNt en el sitio A es la seal para que la
peptidil transferasa lo transfiera a la cadena polipeptdica,
esto es seguido por el movimiento catalizado por EF-G,
pero bajo condiciones estrictas la presencia de ARNt no
cargado provoca que la protena RelA sintetice (p)ppGpp
y que el ARNt salga despedido.

Elongacin con aa-ARNt: el aa-ARNt es el sustrato

para la sntesis de pptidos, seguida del movimiento del
ribosoma.
Entrada ARNt descargado que inicia la reaccin
improductiva seguida de la liberacin del ARNt.
Cuando entra un ARNt descargado se producen
cambios conformacionales activan a la enzima RelA.

La activacin de RelA se ha identificado con mutantes relC, mutantes relajados, no se pueden obtener
mutantes nulos puesto que es un gen esencial, si falta esa protena la bacteria no puede vivir. RelC, que es
lo mismo que rplk, codifica una protena (L11) de la subunidad 50S, localizada cerca de los sitios A y P.
RelA ha de estar asociada al ribosoma para sintetizar pppGpp.
Cuando hay una elevada carencia de aminocidos, en todos los ribosomas se forma pppGpp, por tanto
aumenta mucho en la clula, cuando se restablece la carencia de aminocidos el pppGpp se degrada
rpidamente.
Funciones del (p)ppGpp
Inhibe la iniciacin de la transcripcin en los promotores de ARNr. Las mutaciones en cis, en los
promotores regulados estrictamente, anulan el control estricto. Esto sugiere que el efecto requiere
una interaccin con secuencias especficas del promotor. (p)ppGpp disminuye la estabilidad de
los complejos abiertos. Repercute en toda la expresin gnica.
Interfiere con la elongacin de la transcripcin de ARNr y otros ARN. Aumenta la frecuencia de
pausas de la ARN polimerasa, aumentan las probabilidades de que la polimerasa encuentre y
reconozca otros terminadores.

Regulacin global
Tasa de crecimiento y transcripcin de ARNr (sntesis de ribosomas)
La regulacin se ejerce a nivel de promotores de ARNr y ARN
polimerasa, se forman complejos abiertos inestables. El esquema
resume los sistemas utilizados para controlar la transcripcin de ARNr
en respuesta a la tasa de crecimiento.
Bajo condiciones de privacin se produce ppGpp, ste inhibe la
iniciacin de los promotores de los loci rrn que codifican ARNr.
Segn aumenta la tasa de crecimiento, los niveles de ATP y GTP
aumentan, lo que aumenta la tasa de iniciacin de los promotores.
Los promotores rrn forman complejos atpicos con la ARN
polimerasa, siendo complejos abiertos inestables. Promotores de los
ARNr y la ARN Pol forman complejos abiertos inestables
El aumento de NTP conduce a la reaccin de iniciacin estabilizando
los complejos abiertos.
el aa-ARNt es el sustrato para la NTP y (p)ppGpp: efectos contrarios sobre la iniciacin (CA)
sntesis de pptidos, seguida del
movimiento del ribosoma

147
 148
Tema 5
Carencia: se acumula ppGpp y se inhibe la transcripcin
Abundancia: se acumulan NTP facilitando la iniciacin de la transcripcin, se acumula ARNr por tanto
hay abundancia de ribosomas y de sntesis proteica.
El nivel de ARNr controla la produccin de ribosomas, inhibiendo la produccin de protenas
ribosmicas, por tanto la produccin de ribosomas y sntesis proteica responden a niveles de ATP y GTP,
los cuales reflejan el nivel nutricional de la clula.

Regulacin de la terminacin de la transcripcin

Mecanismos de antiterminacin:
- Dependientes de factores antiterminadores
- Dependientes de la traduccin

9 Antiterminacin de pendiente de antiterminadores

Mecanismo de control en circuitos reguladores de fagos y de operones bacterianos.

Inhibicin de la terminacin en un terminador especfico.
Antiterminador: regulador especfico. Reconocen secuencias
especificas.
La transcripcin se realiza entre promotor y terminador. La
protena antiterminadora hace que la ARN polimerasa ignore al
terminador y siga transcribiendo. El antiterminador debe
reconocer secuencias especficas para asociarse a la polimerasa
y continuar transcribiendo.
Una caracterstica en el control de la infeccin del fago es
que muy pocos de los genes del fago , los genes tempranos,
pueden ser transcritos por la ARN polimerasa del husped.
Entre estos genes hay algunos reguladores cuyos productos
permiten que se exprese la siguiente serie de genes del fago.
Una protena reguladora de este tipo tendra dos tipos de accin:
- facilitar la iniciacin de nuevos promotores o
- obligar a la polimerasa a leer ms all de los terminadores del fago.

mRNA producido comparte las mismas secuencias 5

Sitio de unin del antiterminador no es el terminador
Varia de un antiterminador a otro o de un terminador a otro
La antiterminacin controla la capacidad de la enzima para
pasar un terminador y leer los genes ms all de ste. El factor
de antiterminacin regula la expresin de la regin 2.
La antiterminacin puede usarse para controlar la
transcripcin al determinar si la ARN polimerasa termina o
ignora un terminador particular para pasar a la regin siguiente.

148
 149
Tema 5
Control de expresin en el fago
La ARN polimerasa del husped transcribe inicialmente dos genes, genes tempranos (fase inicial
temprana). El paso a la siguiente etapa se controla impidiendo la terminacin de los genes tempranos, se
expresan los siguientes (fase inicial tarda).
El gen regulador se identifica por mutaciones en el gen N del fago, que slo puede transcribir los genes
de la fase inicial temprana, los mutantes no siguen transcribiendo. Este es un mecanismo de control
positivo en los que se tiene que elaborar el producto de un gen temprano por parte del fago como
condicin para expresar la siguiente serie de genes.
Hay dos unidades de transcripcin de genes tempranos, que
se transcriben desde los promotores PL y PR. La transcripcin
por la polimerasa del husped se para en los terminadores tL y
tR respectivamente. Ambos terminadores dependen de rho. La
expresin de N (pN) es una protena de antiterminacin que
permite que la polimerasa pueda leer ms all de los
terminadores y entrar en la fase inicial tarda.
Se necesita un control ms para expresar los genes tardos del
fago, codifican la cpside, est regulado por el gen Q, es uno
de los genes de la fase inicial tarda, su producto, pQ, es otra
protena de antiterminacin que permite a la polimerasa iniciar
especficamente en el promotor tardo PR.
La ARN polimerasa interacciona con las unidades de
transcripcin de manera que un factor auxiliar puede promover
la antiterminacin especfica de algunos transcritos.
pN tiene que estar asociada a la polimerasa antes de llegar al
terminador y hace que la polimerasa vaya ms deprisa y no
reconozca al terminador.
Los sitios de reconocimiento de pN se llaman nut y se
encuentran aguas arriba del terminador, muy cercana al
promotor.
Los sitios de reconocimiento de pQ se llaman qut y se encuentra en el promotor. Es una secuencia
esencial, necesita asociarse con la polimerasa antes de iniciar la transcripcin y ejerce su funcin aguas
abajo del terminador.

9 Antiterminacin de pendiente de traduccin

- Polaridad: Mutacin fin de mensaje afecta a la expresin de genes distales o tardos. Provoca la
ausencia de ARNm correspondiente a las partes distales de la unidad. Efecto a nivel de
mensajero. Explicacin: terminadores dependientes de rho que no se usan entre los genes.
- La traduccin controla la terminacin de la transcripcin
La accin rho puede crear un vnculo entre la
transcripcin y la traduccin cuando un terminador
dependiente de rho se encuentra justo antes de una
mutacin sin sentido.
Los ribosomas empaquetan al ARNm detrs de la
polimerasa.
En el silvestre: los ribosomas impiden la unin de rho y
su movimiento. Rho se une pero los ribosomas le impiden
el movimiento. La transcripcin contina. Si hay
traduccin hay expresin de genes distales.
Mutante sin sentido: los ribosomas se disocian en el lugar
de la mutacin. Rho obtiene acceso a la polimerasa. La
transcripcin termina de forma prematura. Si para la
traduccin no hay expresin de genes distales.
Mutaciones en rho suprimen la polaridad.
149
 150
Tema 5
Atenuacin

Mutaciones dominantes en cis que elevan la expresin, independientemente de la regulacin

del opern
Identificacin de un sitio de regulacin negativa
Elementos implicados
Terminador intrnseco, precedido por otro
Elemento que controla la formacin de la horquilla del terminador
Anti-terminacin: si no se forma un terminador no hay terminacin

Varios operones son regulados mediante atenuacin, un mecanismo que controla la capacidad de la
ARN polimerasa de leer a travs de un atenuador, que es un terminador intrnseco localizado al principio
de una unidad de transcripcin. Algn elemento externo controla la formacin de la horquilla necesaria
para la terminacin intrnseca. Si se permite que se forme la horquilla, la terminacin impide que la
polimerasa transcriba los genes estructurales, contina hasta el terminador y los genes son expresados.

Atenuacin en Trp: estructura del ARNm

El opern trp consta de cinco genes estructurales
ordenados en series contiguas, que codifican las tres enzimas
que convierten el cido corsmico en triptfano. Los genes
estn precedidos por una regin control que incluye un
promotor, operador, regin codificadora del pptido lder y
un atenuador.
La regin reguladora de la transcripcin: P y O
Regin reguladora de la terminacin: Pptido lder y
atenuador.
La expresin del opern es controlada por dos mecanismos
separados:
- la represin de la expresin por una protena
represora, codificada por el gen trpR, que se une a un
operador adyacente al promotor
- la atenuacin controla el progreso de la ARN
polimerasa dentro del opern, regulando si la
terminacin sucede en un sitio precedente al primer
gen estructural.

Pequeo pptido lder en el opern, con un terminador intrnseco al final de la zona codificante
El terminador impide la transcripcin cuando el pptido lder se traduce normalmente: no se
expresa el opern
Cuando el pptido lder se traduce lentamente, los ribosomas impiden la formacin del terminador:
expresin
La secuencia entre el promotor y el gen trpE:
- pptido lder: una secuencia codificadora
corta, codifica un pptido sin funcin celular.
- atenuador (terminador intrnseco): supone una
barrera para la transcripcin dentro de los
genes estructurales. Rico en G-C en la
horquilla y con una cola poli U.

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 151
Tema 5
-- La traduccin del pptido lder controla la transcripcin:
El pptido lder consta de 14 aminocidos, contiene un sitio de unin al ribosoma cuyo codn AUG es
seguido de una regin codificadora con dos codones sucesivos para triptfano (el Trp es raro en una
protena). Cuando la clula agota el triptfano los ribosomas inician la traduccin del pptido lder, pero
se detiene al alcanzar los codones de Trp, entonces no se forma el terminador y la traduccin contina. La
secuencia del ARNm sugiere que esta detencin ribosmica influye en la terminacin en el atenuador.
La abundancia de triptfano (aminoacil-ARNt)
determina la terminacin.
La terminacin en el atenuador responde al nivel de
triptfano. En presencia de cantidades adecuadas de
triptfano la terminacin es eficiente, pero en
ausencia de triptfano, la ARN polimerasa contina
su funcin en los genes estructurales.
La represin y la atenuacin responden de la misma
forma al nivel de triptfano. Cuando hay triptfano
presente el opern es reprimido y la polimerasa acaba
en el atenuador. Cuando se retira el triptfano la
polimerasa tiene acceso libre al promotor y adems
no termina prematuramente. Trp funciona como un
correpresor.
Hay factores que facilitan la velocidad de la
transcripcin, la polimerasa va despacio y hace una
pausa en un sitio concreto, facilitando la coordinacin
con el ribosoma que viene detrs, esa pausa es
importante para que el sistema funcione.

La atenuacin tiene un efecto multiplicador por 10

en la transcripcin, cuando el Trp est presente, la
terminacin es efectiva, y el atenuador permite que
slo el 10% de la ARN polimerasa proceda con su
funcin. En ausencia de Trp la atenuacin permite
que casi toda la polimerasa trabaje.
Junto con el aumento de unas 70 veces en la iniciacin de la transcripcin que resulta de la liberacin de
la represin, esto permite la regulacin del opern en un rango de 700 veces.

Estructuras alternativas del ARNm

Dos estructuras alternativas pueden formarse, dependiendo si los ribosomas se detienen o no durante la
traduccin del pptido lder. La secuencia lder puede ser escrita segn estructuras con un apareamiento de
bases alternativo. La capacidad del ribosoma para proceder a travs de la regin lder controla las
transiciones en estas estructuras, siendo la estructura la que determina si el ARNm puede proporcionar los
hallazgos para la terminacin.
La figura central muestra las cuatro
regiones que pueden aparearse.
A la izquierda est la conformacin
producida cuando la regin 1 se aparea con
la 2, y la 3 con la 4 que forman la horquilla
de terminacin que precede a la secuencia
poli U, signo esencial para la terminacin
intrnseca.
A la derecha la regin 2 se aparea con la 3,
dejando la 1 y la 4 sin aparear, la regin de
terminacin es de cadena nica, no se forma
la horquilla de terminacin.
151
 152
Tema 5
Que se forme una estructura u otra depende de la velocidad de los ribosomas, si hay triptfano el
ribosoma va ms deprisa y se forma la estructura del terminador.

La posicin del ribosoma puede determinar una estructura u otra.

Cuando hay triptfano los ribosomas sintetizan el pptido lder hasta el
codn UGA, situado entre regiones 1 y 2. El ribosoma se extiende sobre
la regin 2 e impide que se apareen las bases en ella; la regin 3 se
aparea con la 4 generando la horquilla de terminacin.
Cuando no hay triptfano, los ribosomas se detienen se detienen en los
codones Trp, estn en la regin 1 y no se puede aparear con la 2; la
regin 2 y 3 se pueden aparear antes de que la regin 4 se haya
transcrito, sta se queda como cadena nica y no se forma la horquilla de
terminacin t la ARN polimerasa contina la transcripcin.

El mecanismo de atenuacin es importante en operones de sntesis de

aminocidos.

El opern de histidina slo se regula a nivel de atenuacin.

Para la terminacin: acoplamiento y estructuras secundarias del

ARNm, no se precisan protenas auxiliares.

Papel del Trp-ARNt

Cuando hay triptfano se forma terminador, no hay sntesis del

opern Trp.

Cuando no hay triptfano se impide la formacin del terminador,

hay sntesis del opern Trp.

152
 153
Tema 5
Circuito complejo de regulacin en procariotas
Regulacin a distintos niveles
Integracin de distintos sistemas de regulacin
Fenmenos caractersticos de procesos de desarrollo
- Expresin programada y secuencial de (grupos de) genes
- Decisiones alternativas

Fago : lisis y lisogenia

Organizacin del genoma de

lisogenia y lisis Regin no esencial en vectores

Integracin Regulacin

En estado lisognico, el genoma del profago est inactivo

(reprimido). En la fase ltica, se activan (inducen) los genes
necesarios para la reproduccin del fago.
Cascada ltica
Dos reguladores: N y cro
Circuito lisogenia
cI, cII y cIII
Ambos estn conectados

Regulacin a distintos niveles

Integracin de distintos sistemas de regulacin
Fenmenos caractersticos de procesos de desarrollo
- Expresin programada y secuencial de (grupos de) genes
- Decisiones alternativas

Mapa gentico de , muestra el agrupamiento

de las funciones relacionadas.
N: codifica un factor de antiterminacin cuya
accin en los sitios nut permite que la
transcripcin proceda a travs de los genes de la
fase inicial tarda.
Cro: funcin doble
- Evita la sntesis del represor (necesario si se
va a producir el ciclo ltico)
- Desactiva la expresin de los genes de la
fase inicial temprana, necesarios en fases
posteriores del ciclo ltico
cI: represor de la lisogenia
cII-cIII: reguladores necesarios para comenzar la sntesis del represor
Q: regulador, factor de antiterminacin que permite a la polimerasa del husped progresar en los genes
tardos.

153

La cascada ltica del fago est
interconectada con el circuito
lisognico
154
Tema 5
Cuando el ADN de entra en una nueva clula las vas ltica y
lisognica comienzan de la misma manera. Ambas requieren la
expresin de los genes tempranos inmediatos y tempranos
tardos. Luego divergen:
- el desarrollo ltico contina si los genes tardos son
expresados
- se pasa al ciclo lisognico si se produce la sntesis del
represor
Ciclo ltico:
- Genes tempranos inmediatos:
la ARN polimerasa del
husped transcribe N y cro
desde PL y PR
- Antiterminacin: N
- Genes tempranos tardos: la
protena N permite que la
transcripcin contine una
vez pasados N y cro
- Antiterminacin: Q
- Genes tardos: la
transcripcin se inicia en PR,
(entre Q y S) y pQ permite
que contine a travs de
todos los genes tardos
- Lisis
El ADN de adquiere forma
circular durante la infeccin, de
forma que los genes tardos se
agrupaen en una nica unidad de
transcripcin
El fago tiene dos unidades tempranas de
transcripcin:
- la izquierda, la cadena superior se transcribe hacia
la izquierda. Promotor PL. Terminador tL.
- la derecha, la cadena inferior se transcribe hacia la
derecha. Promotor PR. Terminador tL.
Hay dos genes N y cro. N se transcribe hacia la
izquierda y cro hacia la derecha.
En presencia pN la transcripcin contina hacia la
izquierda de N, en los genes de recombinacin, y hacia
la derecha de cro, en los genes de replicacin.
La progresin hacia la lisis depender de N y de Q.
154
 155
Tema 5
Genes tempranos inmediatos
N y cro: transcritos por la ARN polimerasa bacteriana
PL. N: antiterminador. Permite que la transcripcin contine en el promotor de la izquierda PL.
PR. Cro. Impide la expresin de cI y de los genes tempranos
N acta sobre los terminadores y se extienden los transcritos de PL y PR. Se expresan los genes
tempranos retrasados y se produce la cascada ltica

Expresin temprana de
Genes tempranos inmediatos
N: gen esencial, necesario para progresar en la lisis y adems tiene
funciones en la lisogenia, hay que extender los transcritos. N Cro
Cro: solamente interviene en la lisis, es el regulador transcripcional Antiterminador Reg. Transcripcional
(represor)

Lisogenia Lisis
Control lisis-lisogenia en
Durante la lisogenia no se expresan genes.
Mutantes defectivos en lisogenia, siempre realizan el ciclo ltico. Se
buscan en calvas de lisis que son ms claras, son mutantes clear. Se
hicieron tres grupos de complementacin: cI, cII, cIII. cI resulta esencial
para la lisogenia, cuanto ms cI haya ms lisogenia habr, los otros dos
son activadores de cI.
La regin reguladora contiene un grupo de funciones que actan en
los cultivos de salvaje forman trans y elementos que actan en cis.
calvas turbias (izquierda); los
mutantes que no pueden entrar
en lisogenia forman clavas
claras (derecha).

Los promotores PL y PR se sitan a cada lado de cI. Cada promotor tiene un operador asociado (OL, OR)
al que se une la protena represora que impide la transcripcin, y evita que el fago entre en el ciclo ltico.
La secuencia de cada operador se superpone a la del promotor por lo que se describen como regiones
control PL/ OL y PR/ OR.

Mantenimiento de la lisogenia:
- el Represor cI
La protena represora es codificada por el gen cI. Los
mutantes en este gen no pueden mantener la lisogenia y
siempre entran en el ciclo ltico.
Funciones de cI:
Represin a OL/PL y a OR/PR
Activacin a PRM
Impidiendo el acceso de la ARN polimerasa a estos
promotores, el represor evita que el genoma del fago entre
en el ciclo ltico. Reprime la expresin por al iquierda y por
la derecha.
La protena represora es codificada por cI. Es un dmero y
se une a las regiones reguladoras, al ADN se unen dos
dmeros.
El paso de lisogenia a induccin ltica es irreversible.
155
 156
Tema 5

El gen cI es transcrito a partir de un promotor PRM (mantenimiento de la represin) que se sita en su

extremo derecho, se encuentra entre PL y PR. El represor se une de forma independiente a los dos
operadores. La protena represora unida al ADN hace que se transcriba a partir de PRM, por tanto se
produce ms represor. Autorregulacin positiva.

- Los operadores OL y OR
Mutaciones clear en cis. Tambin son vir. Son mutaciones dominantes. Mutaciones (virulentas): afectan
a la inmunidad.
Los operadores fueron identificados por las mutaciones virulentas. Estas mutaciones impiden que el
represor se una a OL u OR, el fago entra inevitablemente en el ciclo ltico. Los mutantes vir pueden crecer
en clulas lisognicas, pues las mutaciones virulentas en OL y OR permiten que el nuevo fago ignore al
represor residente y entre en el ciclo ltico.

La presencia del represor explica el

4 fagos lambdoides (, 80, 21 y 434) tienen la misma regin de inmunidad
fenmeno de inmunidad. Si un segundo
fago entra en una clula lisogenia, la
protena represora sintetizada a patir del
profago residente se unir inmediatamente
a los operadores del nuevo fago, evitando
que entre en lisis.
La regin que incluye los operadores, el gen cI y el gen cro determinan la inmunidad del fago. Todo
fago que posea esta regin tiene el mismo tipo de inmunidad, se conoce como regin de inmunidad.

El represor cI: estructura y funcin

Es un dmero
Dos dominios:
Dimerizacin
Unin al ADN y una regin conectora
La rotura (protelisis) del represor resulta en la induccin del profago

Los dos dominios del monmero estn unidos por una zona conectora,
cuando el represor es digerido por una proteasa cada dominio es liberado
como un fragmento separado, represor inactivo, induccin del profago y
entra en ciclo ltico.
El dominio de dimerizacin (C-terminal) es diferente al dominio de interaccin con el ADN (N-
terminal). La estructura dimrica del represor es crucial para el mantenimiento de la lisogenia.

Los dmeros de represor se unen al operador. La afinidad de los

dominios N-terminales por el ADN es controlada por la dimerizacin
de los dominios C-terminales.
Los monmeros estn en equilibrio con los dmeros, que se unen al
ADN.

La rotura de los monmeros altera el equilibrio, por lo que los

dmeros se disocian.

La induccin aparece bajo circunstancias adversas, como una

exposicin de la bacteria lisogenia a radiacin UV, produce la
inactivacin por proteolisis del represor.

156
 157
Tema 5

Interacciones represor/ operador

cI interacciona mediante motivos H-T-H (hlice-giro-hlice) de unin a ADN.

El dominio N-terminal del represor contiene motivos H-T-H. La hlice 3

es responsable del reconocimiento de la secuencia diana.

La hlice de reconocimiento de cada

monmero se sita en el surco mayor de la
misma cara del ADN, y las hlices 2 de
forma cruzada respecto a l.

Una de las secuencias del operador se une

al represor.

La secuencia de los operadores

de cI es palindrmica (casi).

cI y cro se unen a las mismas secuencias operadoras con distinta

afinidad. Ambas tienen una organizacin similar del motivo H-T-H.
Las hlices de reconocimiento establecen contactos especficos con las
bases del surco mayor.
Dos de los aminocidos implicados en el reconocimiento son idnticos
en represor y en Cro . las interacciones de la figura representan la unin a
la secuencia de ADN que cada protena reconoce con mayor afinidad. Los
contactos son muy parecidos pero no idnticos.
El represor realiza un contacto adicional con la otra cara del ADN.

Los brazos de cI establecen contactos adicionales y aumentan 1000

veces la afinidad por el ADN. El extremo N-terminal del represor
aumenta la afinidad por el ADN. Cro realiza contactos similares a los del
represor, pero slo se une a una cara del ADN, careciendo de brazos N-
terminales que en el represor rodean al otro lado.

Interacciones represor /operadores/ promotores

Cada operador contiene tres sitios

de unin al represor y se superpone
al promotor al cual se une la ARN
polimerasa. La orientacin de OL ha
sido invertida con respecto a la
situacin normal.
Los sitios de cada operador estn
El represor tiene mayor afinidad (10 veces)
por O1 que por O2, O3 (en OR y OL)
numerados (OR1, OR2, OR3 y OL1,
OL2, OL3). En cada caso el sitio 1 es
el ms cercano al punto de inicio de
la transcripcin en el promotor, los
otros se encuentran ms alejados en
La unin al segundo operador direccin 5.
es cooperativa (en OR y OL)
157
 158
Tema 5

El represor tiene ms afinidad por el sitio 1 de ambos operones, se

apagan las transcripciones de los dos sentidos. El represor se une a
sitios consecutivos dentro de cada operador de una forma
cooperativa. La presencia de un dmero en el sitio 1 aumenta mucho
la afinidad para que un segundo dmero se pueda unir al sitio 2, pero
no por el sitio 3; con muy poco ms de represor se une al sitio 2; con
la cooperatividad el represor se hace ms eficiente sin aumentar
mucho su concentracin, el represor aumenta la afinidad por el Los dmeros de cI en sitios adyacentes
operador a concentraciones fisiolgicas. establecen contactos, aumentando la eficacia de
la represin

La polimerasa no puede acceder a los promotores correspondientes (PR y PL); pero si puede acceder al
PRM, se sintetiza ms represor. El dmero de OR2 interacta con la polimerasa. Autorregulacin positiva.
Se acumula protena represora que se une a OR3 entonces acta como represor de PRM y deja de
sintetizarse represor. A menor concentracin de represor se activa el promotor y se sintetiza ms; cuando
la concentracin aumenta se reprime el promotor y deja de sintetizarse; se mantienen unos niveles
apropiados de represor para mantener la lisogenia. Cuando el represor est unido a :
- OR1: reprime a PR; regulacin positiva
- OR2: aumenta la represin de PR y activa a PRM; autorregulacin
El represor es un regulador autgeno de su propia expresin que funciona positivamente a bajas
concentraciones y negativamente a altas concentraciones.
Las mutaciones de control positivo (mutaciones que suprimen el
control positivo en cI) identifican una pequea regin en la hlice 2 del
represor que interacta de forma directa con la ARN polimerasa.
Hay mutantes capaces de unirse al operador pero no pueden estimular
a la polimerasa para que transcriba desde PRM. Estas mutaciones se
encuentran en la hlice 2 o en el giro entre las hlices 2 y 3

C
Mutaciones O (vir): en O1 y O2. Pueden aparecer mutaciones virulentas en los sitios 1 y 2 de los
operadores. Las mutaciones varan en su grado de virulencia, de acuerdo con la cantidad en la que reducen
la afinidad del sitio de unin por el represor, tambin depende de la relacin del sitio afectado con el
represor. Como los sitios 3 no suelen estar ocupados no se encuentran mutaciones virulentas en estos
sitios.

Ms coperatividad: La cooperatividad aumenta la sensibilidad del sistema, facilitando la induccin

PR y PL estn alejados pero se unen en un
bucle favorecido por la unin del represor
unido a los operadores. Se establecen
contactos entre los dmeros adyacentes y los
de distintos promotores, la represin es ms
eficaz. Esa es la situacin de mantenimiento
de la lisogenia.

Cuando aumenta el represor se ocupan los sitios 3 de los operadores, tambin hay cooperatividad entre
ellos, se produce una situacin ms estable.

158
 159
Tema 5
Establecimiento de la lisogenia:
Sntesis inicial del represor cI
Cuando un ADN de entra en una clula husped,
la ARN polimerasa no puede transcribir a cI, pues no
hay represor presente que active a PRM. La ausencia
de represor indica que PR y PL estn disponibles, por
lo que lo primero que ocurre es que los genes N y cro
son transcritos. Entonces, pN permite que la
transcripcin se prolongue, se transcribe cIII hacia la
izquierda y cII hacia la derecha.

Entre los genes cII y cro hay otro promotor, PRE (establecimiento
de la represin). Este promotor puede ser reconocido por la
polimerasa slo en presencia de la protena cII.
PRE es estrictamente dependiente de cII.
La sntesis de represor se establece por la accin de cII y la ARN
polimerasa en PRE para iniciar la transcripcin que se extiende por
la cadena antisentido de cro y a travs del gen cI.
La protena cII es muy inestable, por lo que la activacin es
transitoria, en cuanto desaparece la protena se acaba la
transcripcin.
La regin codificadora de cI en el transcrito PRE es traducida de forma muy eficiente, el represor es
sintetizado unas 7 veces superior a la transcripcin desde PRM.
Se promueve la lisogenia de dos formas:
- Efecto directo: produccin de protena represora
- Efecto indirecto: transcrito antisentido de cro, se hbrida con el ARNm de cro inhibiendo
su traduccin.
Regulacin positiva de represor.
Regulacin negativa de cro.

Funciones de cII y cIII

Funciones de cII: gen temprano tardo, favorece la lisogenia en ms de un punto.
Activacin a PRE (+ cI, - cro, - N)
Activacin a Pint (integracin), expresin importante y transitoria
Activacin a Panti Q (-Q)
Funciones de cIII
Estabiliza a cII
Secuencia temporal: N y cro se transcriben para poder sintetizar cII y
cIII, entponces se inicia la transcripcin del represor.
cII es antagnica de cro.
Las dos protenas son prescindibles si se le suministra represor a la
clula.
Los genes cII y cIII son reguladores positivos cuyos productos son
necesarios para un sistema alternativo de sntesis de represor.
Es una protena muy inestable, se degrada como resultado de l
actividad de una protena del husped (Hfla). El papel de cIII es
proteger a cII contra la degradacin.
Mutaciones bacterianas hflA, hflB (high frequency of lysogenia)
identifican proteasas que degradan a cII
E. coli: Ms proteasas de cII y ms lisis en medios ricos de cultivo
La lisogenia depende de la estabilidad de cII

159
 160
Tema 5
LISOGENIA
Resumen: es necesaria una cascada para establecer la
lisogenia, pero a continuacin este circuito es
desconectado y sustituido por el circuito autgeno de
mantenimiento del propio represor.
Fase temprana inmediata: N y cro son transcritos

Fase temprana retrasada: N antitermina: se

transcriben cII y cIII

Establecimiento de la lisogenia : cII acta en PRE: se

transcribe cI

Mantenimiento de la lisogenia: el represor se une a

OL y OR: cI es transcrito a partir de PRM. Hay represin
en PR y PL.

LISIS
Resumen: la cascada ltica requiere la protena cro, que
impide de forma directa la activacin de la va de
mantenimiento a travs de PRM, as como desactiva la
expresin de los genes tempranos inmediatos, lo que impide de
forma indirecta, el establecimiento de la represin a travs de
PRE.
Fase temprana inmediata: N y cro son transcritos.

Fase temprana retrasada: pN antitermina: cII y cIII se

transcriben.

Continuacin de la fase temprana retrasada: cro se une a OL y

OR, reprime a PRM

Expresin tarda: cro reprime a cI y a todos los genes

tempranos; pQ (Q: antiterminacin de genes tardos) activa la X
expresin tarda.

160
 161
Tema 5
cro es el responsable de impedir la
sntesis de la protena represora, esta
actividad inactiva la posibilidad de entrar
en lisogenia. Tiene dos efectos:
- Impide la sntesis de represor a
travs del circuito de mantenimiento
- Reduce la expresin de los genes
tempranos a partir de PL y PR.
Cro se une a los mismos operadores que
el represor. Cada protena tiene distinta
afinidad por los sitios dentro de los
operadores.
La afinidad de cro por OR3 es mayor que
por los otros dos sitios, se une primero al
sitio 3. Esto inhibe la unin de la
polimerasa a PRM, por tanto no entra el
circuito de lisogenia.
Luego cro se une a OR1 y OR2, no existe
efecto cooperativo, e impide que la
polimerasa utilice PR deteniendo las fases
tempranas.
Cro reduce la expresin de los genes
tempranos, incluyendo la suya propia.
Dado que cII es inestable, la actividad de
PRE est detenida. Las dos acciones de
cro bloquean, en conjunto, toda la
produccin de represor.

La influencia de la clula husped en el nivel de cII proporciona una ruta a la bacteria para interferir con
los procesos de toma de decisiones. Por ejemplo, las proteasas del husped que degradan cII son activas
por el crecimiento en un medio rico, con lo que tiende a lisar las clulas que estn creciendo bien, siendo
ms probable que entren en lisogenia las clulas con carencia de nutrientes, faltan los componentes
necesarios para un crecimiento ltico eficaz.

161
 Tema 6 162

Tema 6
Regulacin de la expresin gnica en eucariotas
- Niveles de regulacin adicionales
Cromatina: Dificulta la iniciacin de la transcripcin
Procesamiento: CAP, intrones, poli-A. El transcrito primario es modificado por el
recubrimiento del extremo 5 (CAP), la poliadenilacin del extremo 3 (poli-A), se deben
eliminar los intrones de los transcritos.
Transporte al citoplasma
- Niveles de organizacin adicionales
Pluricelularidad: regulacin espacial y temporal. Es importante y complejo, durante el
desarrollo
- Mayor complejidad y diversidad de interacciones
Importancia de la regulacin positiva, en eucariotas la mayora de las regulaciones son
positivas. La polimerasa necesita ms ayuda para acceder al sitio de unin con el ADN.
- TF, de Transcription Factor, en eucariotas es un activador
- RE, de Response Element (sitios de unin en el ADN)
Regiones reguladoras de los genes tipo II
Aumentadores, Potenciadores o Enhancers: responsables de la intensidad y especificidad de la
transcripcin in vivo. Son secuencias potenciadoras de la transcripcin, es otro tipo de sitio implicado en
la iniciacin.
El tpico gen transcrito por la ARN polimerasa II
tiene un promotor que se extiende en direccin 5 del
sitio de inicio de la transcripcin. El promotor tiene
varios elementos de secuencias cortas (<10pb) que se
unen a los factores de transcripcin, que estn
dispersos en >200pb.
Un enhancer (unas 100pb) contiene una serie de
elementos ms agrupados, que tambin se unen a
factores de transcripcin que pueden estar localizados
a varias kb de distancia; el ADN puede estar
enrollado u organizado de otra manera de forma que
los factores de transcripcin en el promotor y en el
enhancer interacten para formar un gran complejo
proteico.
Una diferencia significativa en la transcripcin entre el ARNm eucariota y procariota es que la
iniciacin de un promotor eucariota implica un gran nmero de factores que se unen a una variedad de
elementos que actan en cis. Los promotores se organizan en el principio de mezcla y funcionamiento.
Una variedad de elementos pueden contribuir a la funcin del promotor, pero ninguno es esencial para
todos los promotores. Ejemplos de promotores y regiones reguladoras:
Cuatro tipos de elementos se encuentran en estos promotores:
TATA, GC, CAAT y el octmero (elemento de 8 pb). Los
elementos encontrados en cada promotor individual difieren en
nmero, localizacin y orientacin; y ningn elemento es comn
a todos los promotores. El promotor transporta informacin
direccional (la transcripcin procede solamente en direccin 5),
pero las cajas GC y CAAT son capaces de funcionar en cualquier
direccin (aunque sus secuencias son asimtricas).
La caja TATA se encuentra en todos los promotores, el resto
no se relacionan pero comparten dos a dos los elementos.
Estructura modular: los mismos sitios/ factores en distintas combinaciones y posiciones.
Solo la caja TATA tiene una posicin fija respecto al inicio.
 Tema 6 163
Promotor genrico / mnimo: se encuentra en la mayora de los inicios de genes
- Caja TATA
- Sitio de iniciacin (PyrAPyr)
Promotor basal: nivel mnimo de transcripcin in vivo. Es indispensable para iniciar la transcripcin.
Fueron introducidas sustituciones
individuales de bases en casi todas las
Anlisis de un promotor tpico
posiciones en los 100 pb en direccin 5
desde el punto de inicio. La mayora de las
Nivel relativo de transcripcin (1= normal) mutaciones no afectan a la habilidad del
promotor de iniciar la transcripcin.
Regiones o secuencias importantes para
la transcripcin: los huecos de la grfica.
Las mutaciones lentificadoras (por
debajo de 1) suceden en tres
localizaciones, corresponden a 3
elementos cortos. Los 2 elementos en
direccin 5 tienen un mayor efecto sobre
el nivel de transcripcin que el elemento
Cajas GC CAAT TATA
ms cercano al punto de inicio.
Factores Sp1 CTF NF1 TBP Las mutaciones aceleradoras (por
encima de 1) aparecen solamente en uno
de los elementos.
Las tres secuencias cortas centradas a 30, -75 y 90 constituyen el promotor.
Caja TATA: todas las mutaciones en esta caja han disminuido al frecuencia de transcripcin, disminuye
la frecuencia de inicio de la transcripcin. Es el componente menos efectivo del promotor, no se evita la
iniciacin cuando muta pero cambia el punto de inicio de su posicin habitualmente precisa. La caja
TATA es importante para el inicio de la transcripcin.
Caja GC: a menudo mltiples copias en el promotor, puede aparecer en cualquier direccin
Caja CAAT: tiene un importante papel en la determinacin de al eficiencia del promotor.
Estas dos ltimas cajas tienen efectos ms importantes en la transcripcin, tienen que ver con el
reclutamiento de la polimerasa.
Las bases en rojo sealan sitios de unin a una protena especfica.
Los factores de transcripcin generales estn disponibles e cualquier promotor que tenga una copia del
elemento que pueden reconocer.

Potenciadores /Enhancers
No hay mutaciones que aumenten la frecuencia
de transcripcin. El histograma recoge el efecto
de todas las mutaciones que reducen la funcin
del enhancer a <75% de la funcin original.
Los sitios de unin a protenas estn indicados
debajo del histograma.
Algunos sitios /factores pueden ser los mismos
que los de los promotores.

Los enhancer se descubrieron en levaduras (ms sencillos) se llaman

U.A.S. de Upstream Activator Sequences (activador aguas arriba).
Pueden funcionar en cualquier direccin, a distancias variables en
direccin 5 del promotor, pero no pueden funcionar en direccin 3.
Enhancers y UAS: la distancia y orientacin respecto al inicio no
afectan a su funcin. En bacterias tambin hay secuencias con estas
caractersticas. Aunque los elementos se cambien de sitio seguirn
haciendo su accin de activador.
 Tema 6 164
El enhancer ejerce su funcin potenciadora de la transcripcin an estando lejos del promotor. El ADN
forma bucles de forma que la distancia se reduce. Si una protena unida a un enhancer situado a varios pb
de distancia (100-1000 pb) de un promotor interacta directamente con protenas unidas en la vecindad del
punto de inicio, la organizacin del ADN debe ser lo suficientemente flexible para permitir que el
enhancer y el promotor se siten uno cerca del otro. La mayora de los genes reguladores tienen estos
elementos y actan desde posiciones lejanas. En bacterias tambin hay secuencias con estas
caractersticas, el ADN tambin forma bucles.

Factores reguladores de los genes tipo II

Los FT (generales o especficos) facilitan o estabilizan el ensamblaje de complejo de iniciacin.
Factores basales: Indispensables para el ensamblaje del complejo de iniciacin. Requeridos para
los mecanismos de inicio de la sntesis del ARN en todos los promotores. Se unen a la polimerasa
para formar un complejo que rodea el punto de inicio, determinando el sitio de iniciacin.
Factores de regulacin: incrementan la frecuencia de iniciacin. Protenas de unin al ADN que
reconocen elementos especficos:
- Promotores
- Potenciadores
Activadores: Unin a elementos de respuesta. La mayora se unen al
ADN e interaccionan con otro elemento del complejo de iniciacin.
Interaccin protena-ADN.
Co-activadores: Interacciones indirectas (protena-protena). Algunos
factores de transcripcin no contactan directamente con el aparato basal
sino que son los coactivadores los que contactan con l. Son como factores
de transcripcin cuya especificidad viene conferida por la capacidad de
unirse a factores de unin al ADN.
Represores (menos frecuentes): un represor puede bloquear la
interaccin de un factor de transcripcin en direccin 5 con el aparato
basal. Los represores inhiben la funcin del aparato basal (un represor
bacteriano bloquea directamente la unin o el movimiento de la ARN
polimerasa).

Activadores: Interaccionan con

elementos del complejo de
iniciacin

Un activador tpico tiene dos dominios unidos por una regin larga y flexible, la flexibilidad permite
establecer interacciones distintas en diferentes promotores y es tpica de reguladores eucariticos. Un
dominio interacciona con el ADN y el otro con una protena.

Coactivadores: TF sin dominio o motivo de unin a ADN

Interacciona con una protena que est interaccionando con el ADN y
con otra protena.
 Tema 6 165

Represores: interaccionan con elementos en cis (o trans) de promotores

y enhancers.
Efecto a travs de protenas que activan protenas que se unen a
secuencias que son reconocidas por activadores. apuntan a factores de
transcripcin y no a la polimerasa.

Caractersticas de los Factores de Transcripcin

Naturaleza modular. Funciones: interacciones con:

1. ADN (sitios especficos)
2. protenas del complejo de iniciacin
Las funciones de unin al ADN y de activacin en un factor de
transcripcin pueden implicar a dominios independientes de la
protena.

Demostracin experimental
intercambio de mdulos o dominios

Gal4: activador de Saccharomyces

LexA: represor de E. coli

Depende la activacin de un dominio particular de unin al ADN? .

Este dominio se puede cambiar para demostrar la independencia de los
dominios. Se hicieron experimentos con protenas hbridas: LexA y
GAL4. sistema de doble hbrido en levaduras, tcnica para detectar
interacciones protena-protena. Esta tcnica no permite hacer bsqueda en
genotecas de expresin, se fabrican colecciones de protenas hbridas.
Doble hbrido: aproximacin gentica al anlisis e identificacin de
interacciones protena-protena.
El represor bacteriano LexA tiene un dominio de unin al ADN que
reconoce un operador especfico; la unin de LexA a este operador
reprime al operador adyacente. Fue sustituido por el dominio de unin al
ADN de GAL4. el gen hbrido se introdujo en la levadura junto con el gen
testigo reporter que contiene el UAS o el operador de LexA.
Una protena GAL4 autntica puede activar un gen testigo o reporter
slo si tiene un UAS. El represor LexA en s, carece de la capacidad de
activar cualquier tipo de diana.
 Tema 6 166
El hbrido no puede activar un gen con UAS, pero puede activar un gen con un operador LexA.
La capacidad de GAL4 de activar la transcripcin es independiente de su especificidad de unin al ADN.
Cuando el dominio de unin al ADN de GAL4 es reemplazado por el dominio LexA , la protena hbrida
puede activar la transcripcin cuando un operador LexA se coloca cerca de un promotor.
El resultado demuestra la naturaleza modular de los activadores de transcripcin. El dominio de unin al
ADN sirve para unir la protena en la localizacin correcta. La capacidad de funcionamiento de los dos
tipos de mdulos en protenas hbridas sugiere que cada dominio de la protena forma una estructura
activa independiente que no est influenciada por el resto de la protena.

Regulacin por mltiples seales: El gen de metalotioneina (MT)

Las seales: presencia de metales

pesados y diversas hormonas
Distintos elementos, en promotor o
enhancer, pueden activar
independientemente la transcripcin.
Los TF implicados pueden ser ubicuos
o especficos de tejidos.hay protenas
especficas de tejido, otras son ubicuas
porque se pueden encontrar en cualquier
tejido.

La regin reguladora de un gen de MT humano contiene elementos reguladores tanto en el promotor

como en le enhancer. El promotor tiene elementos para la induccin de metales, y el enhancer tiene un
elemento para la respuesta a glucocorticoides.
El elemento que causa que un gen responda a un factor regulador se conoce como elemento de respuesta
al choque trmico, pueden ser: elemento de respuesta al choque trmico (HSE); elemento de respuesta a
glucocorticoide (GRE); elemento de respuesta srico (SER); elemento de respuesta a metales (MRE).

Un gen es regulado por una secuencia en el promotor o en el enhancer que es reconocida por una
protena especfica. La protena funciona como un factor de transcripcin necesario para la iniciacin de la
ARN polimerasa. La protena activa solamente est disponible bajo condiciones en las cuales el gen va a
ser expresado.

El gen MT puede ser regulado en muchos circuitos diferentes. La protena metalotioneina protege a la
clula de las concentraciones excesivas de metales pesados unindose al metal y extrayndolo de la clula.
El gen se expresa a nivel basal, pero su expresin se induce cuando aumenta la concentracin de iones
de metales pesados o por glucocorticoides,

En la organizacin de un promotor de un gen MT hay una alta densidad de elementos que pueden activar
la transcripcin. No se aprecia la diferencia entre promotor y enhancer. Todas las secuencias en cis son
importantes para la regulacin.
La caja TATA y GC son elementos constitutivos, BLE es un elemento del nivel basal se considera
enhancer; estos tres elementos son necesarios para la expresin basal.
La respuesta inductora a metales pesados es conferida por las secuencias mltiples MRE que funcionan
como elementos promotores.
La respuesta a las hormonas esteroideas es gobernada por GRE, enhancer. La delecin de esta regin no
afecta la nivel basal de expresin o al nivel inducido, pero es necesaria para la respuesta a los esteroides.
La ausencia de un elemento necesario para un modo de activacin no afecta la activacin la activacin
de otros modos.
Es un gen importante en el hgado. Las seales aumentan mucho la transcripcin y s hay varias seales
se aumenta ms todava.
Las posibilidades de combinacin en la regulacin eucariota es muy alta.
 Tema 6 167
Mecanismos de activacin de los TF
La actividad de un factor de transcripcin
inducible puede ser regulada de distintas
maneras:
- Homeoprotenas: propias de factores que
regulan el desarrollo. Un factor puede ser
activo por la presencia / ausencia de una
protena. Si hay protena hay activacin.
- Modificacin qumica, fosforilacin: HSTF,
factor T de choque trmico. La protena es
activa cuando est fosforilada. Es un
mecanismo rpido.
- Modificacin qumica, desfosforilacin:
Activacin por desfosforilacin de la
protena.
- Unin a un ligando o efector: Receptores
esteroideos, la unin del ligando puede
influir en la localizacin de la protena,
provocando su transporte del citoplasma al
ncleo (cambio de compartimiento), y
determina su capacidad de unin al ADN.
Especfica de eucariotas.
- Disponibilidad de un factor: NF-kB se
encuentra unido a un inhibidor secuestrado
en el citoplasma, cuando es liberado el
factor se mueve hacia el ncleo. Cambio de
compartimiento e interaccin con otros
componentes celulares.
- Heterodimerizacin: HLH, Leu-Zippers. Un componente dimrico puede tener componentes
alternativos, un componente puede causar que el factor sea inactivo; la sntesis del componente
activo puede desplazar al inactivo. Hay parejas de protenas que no se unen al ADN pero si forman
un heterodmero distinto si sern capaces de hacerlo. (Prctica usada en eucariotas superiores,
interaccin protena-protena). Interaccin fsica con otros componentes celulares.
- Modificacin proteoltica: roturas que dan lugar a la activacin. Protena anclada a la membrana
nuclear que sufre una proteolisis especfica y parte de ella se libera y puede activar la
transcripcin. Ocurre en respuesta a la ausencia de esteroles. No es exclusivo de eucariotas.

Regulacin transcripcional en los cromosomas eucariticos

El genoma est empaquetado en nucleosomas y la iniciacin de la transcripcin est impedida si la
regin del promotor est organizada en nucleosomas.
Las histonas funcionan como represores generales de la transcripcin,
tambin estn implicadas en interacciones ms especficas.
La activacin de un gen requiere cambios en el estado de la cromatina.
Heterocromatina y eucromatina se asocian a regiones inactivas y activas,
respectivamente.
El sitio importa (transgenes..): la localizacin de todo gen es
importante porque si se cambia el sitioo del mismo es posible que no se
exprese. En el cromosoma no todas las regiones son iguales
(heterocromatina y eucromatina)
Los sitios desprovistos de nucleosomas en el ADN y los activos
(trancripcin, replicacin) son hipersensibles a DNAsa I.
 Tema 6 168
Organizacin en dominios funcionales con secuencias que alteran la estructura de la cromatina y
delimitan zonas de regulacin. Hay regiones importantes (cis) y protenas que reconocen esas regiones
(trans).
Hay distintos elementos que favorecen o no la formacin de heterocromatina y regiones que son barrera
para su expansin.
Aisladores: Interfieren con
- Activacin de promotores a distancia (enhancers)
- Propagacin de la heterocromatina (regiones inactivas)
MAR (Matrix Attachment Region, regiones de unin a la matriz)/SAR (Scaffold, regiones de fijacin al
andamio): unin a la membrana nuclear
LCR (locus control region): facilitan la expresin de los genes del dominio

Aisladores: funciones y localizacin

Son elementos que impiden el paso de los efectos activadores o inactivadores.
Cuando un aislador es colocado entre un enhancer y un
promotor, evita que el enhancer active al promotor.

Cuando un enhancer es
colocado entre un gen activo
y heterocromatina, protege al
gen del efecto del efecto
inactivador que se disemina
desde la heterocromatina.

Los aisladores identificados tienen ambas propiedades, sugiriendo que afectan a la organizacin general
de la cromatina, constituyen una barrera a la expansin de la heterocromatina.

Una protena que se une al aislador se localiza en las

Cromosomas politnicos. Protenas que se unen a los
activadores en interbanda
interbandas de los cromosomas politnicos de
Drosophila. La tincin roja identifica al ADN (las
bandas) en la muestra superior e inferior; la tincin
verde identifica a una protena (generalmente en las
interbandas) en la muestra superior. El color amarillo
muestra la coincidencia de las dos tinciones.

Esto sugiere que la banda es una unidad funcional, y que los elementos de las interbandas impiden que
los efectos de los activadores o inactivadores se propaguen de una banda a la otra.

Fenmenos asociados a sitios transcripcionalmente activos

Acetilacin de histonas: el estado de acetilacin de histonas se correlaciona con el estado de expresin
gnica. Parece que la acetilacin est incrementada en un dominio que contenga genes activos, y la
cromatina acetilada es ms sensible a la ADNasa I. las enzimas que acetilan las histonas se llaman
acetiltransferasas de histonas.
 Tema 6 169
Fenmenos asociados a sitios transcripcionalmente inactivos
Metilacin del ADN: en zonas inactivas. Asociada con la represin de la actividad gnica. Hay enzimas
de restriccin que actan sobre el ADN segn est metilado o no.
Islas CpG: son sitios de metilacin, abundantes en las regiones 5 de los genes. Asociado al
silenciamiento de genes, si est metilado la cromatina es inactiva, no se transcribe. Un 27% de las C del
ADN de clulas animales estn metilasas; la mayora en dobletes CG, dando la estructura 5mCpG 3 y
3 GpCm 5. El estado de metilacin est controlado por metilasas y desmetilasas.
Metilacin: asociada a inactividad. El estado de metilacin puede cambiar en los promotores de genes
que son objeto de un control especfico de tejido. Los promotores estn metilados cuando el gen est
inactivo.
Puede afectar a cromosomas enteros, inactivacin de un cromosoma X en hembras de mamferos. La
inactivacin de X ocurre durante etapas del desarrollo temprano, cada clula inactiva uno u otro, al azar.

Ambos cromosomas X son activos en el

precursor celular.

Un cromosoma X es inactivado en cada

clula.

Capa de color
Expresin de color original o salvaje
mutante

Si los genes ligados a X fueran expresados por igual en ambos sexos, las hembras tendran el doble de
cada producto. La importancia de esta situacin se muestra por la existencia del mecanismo de
compensacin de la dotacin gnica. Todo el cromosoma es una diana para la regulacin. Se metila y se
inactiva. Una vez que el estado inactivado ha sido establecido es heredado por las clulas descendientes:
herencia epigentica, ya que no depende del ADN. Los cambios epigenticos dependen de la actividad de
los genes que se heredan.
Los cambios epigenticos afectan al fenotipo y no al genotipo.
En Drosophila la expresin del nico cromosoma X en los machos es el doble en relacin a la
expresin de cada cromosoma X en las hembras.

Impronta gnica (imprinting). Tipo de herencia epigentica.

La metilacin ocurre en la embriognesis, establecindose un patrn tpico de metilacin en cada sexo
durante la gametognesis. En el sexo femenino,el patrn materno se impone durante la ovognesis. Los
alelos paternos y maternos pueden tener diferentes patrones de metilacin.
El patrn especfico de los grupos metilo en las clulas germinales es responsable de la impronta gnica.
El sexo importa, las especies con dos sexos han creado mecanismos para evitar la partenognesis.
Cuando en ovocitos de ratones se introducan dos ncleos del mismo sexo se iniciaba el desarrollo pero
no era normal y degeneraba. Se producan defectos diferentes si eran dos ncleos masculinos o femeninos.

En las clulas del adulto, para un gen concreto los alelos materno y paterno tienen distintos patrones de
expresin (activo e inactivo)
Los alelos se marcan con el estado de actividad correspondiente en la gametognesis
 Tema 6 170
En el embrin precoz el alelo paterno no est metilado y se expresa,
y el alelo materno est metilado y permanece silente. Cuando el ratn
forma gametos, si es macho, el alelo hace que el esperma aparezca
como no metilado, independientemente de si originariamente lo
estuviera o no. Por ello, cuando el alelo materno se transforma en
esperma, debe ser desmetilado. Si es hembra, el alelo contribuye a que
el vulo se metile, por lo que si originariamente era paterno, se metila.
Durante la gemetognesis se borran las marcas y el individuo pone
su propia marca.
La metilacin del ADN se mantiene tras las divisiones celulares y
con ella se hereda el estado de actividad de los genes correspondientes.

Puede ocurrir que la madre inactiv unos pocos alelos, y por tanto se heredan inactivos, y el padre hace
lo mismo con otro grupo de alelos. Si se heredan los dos alelos inactivos se produce enfermedad.
Casos en los que se tiene el mismo genotipo pero diferente fenotipo.
La descendencia femenina inactiva, normalmente, los mismos genes que la madre, si es masculina se
activan. Macho y hembra normalmente inactivan genes distintos. Por ello, para un determinado grupo de
genes se necesita heredarlo de ambos parentales.

Regulacin a nivel del procesamiento del ARNm

El transcrito primario tiene la misma organizacin que el gen, pre-AENm. La eliminacin de los
intrones deja un mensajero tpico (22 kb). El proceso por el que se eliminan los intrones se llama corte de
intrones y empalme de exones o splicing.

El procesamiento de intrones solamente ocurre en

eucariotas, y slo sucede en el ncleo.
El ARN se modifica en el ncleo por adiciones en los
extremos 5 y 3 y mediante el empalme para eliminar los
intrones.
El empalme necesita una rotura de las uniones exn-intrn
y la unin de los extremos de los exones.
El ARN maduro es transportado a travs de los poros
nucleares hasta el citoplasma donde setraduce.

El proceso se realiza en el ncleo en el spliceosoma. Consta

de una partcula ribonucleo-proteica de 50-60 S. Contiene 5
ARN nucleares pequeos (ARNsn U) y unas 40 protenas.
Actividad cataltica e interacciones:

En el transcurso del fenmeno de empalme se producen varias reacciones de

emparejamiento entre ARNsn y ARN sustrato, estas interacciones son
importantes para la actividad cataltica. Hay una gran precisin, si fallara en
una base se cambiaria la pauta de lectura. Tienen que reconocer secuencias
concretas.
 Tema 6 171
Secuencias necesarias en el ARNm:
Es posible asignar un extremo especfico
a cada intrn por la conservacin de las
uniones exn-intrn. Se alinean para
formar la secuencia consenso. Hay una
alta conservacin en las uniones, la
secuencia de un intrn genrico:
GU......AG. Regla GU-AG, es
imprescindible.
Las secuencias consenso estn implicadas como los sitios reconocidos en el pegado y empalme.

Eliminacin ordenada pero no secuencial de intrones. Utilizando

northern se pueden identificar ARN nucleares que representan productos
intermedios de los que se han eliminado algunos intrones. Existe una serie
discreta de bandas, sugiere que el corte y pegado se produce por una va
definida. Si los intrones se eliminaran de forma aleatoria se veran
muchsimos precursores, no se veran bandas discretas.
Suele existir una va preferida.
La conformacin del ARN influye sobre la accesibilidad de los puntos de
empalme. Segn se eliminan intrones la conformacin cambia, y quedan
disponibles nuevas parejas de sitios de empalme.

Procesamiento de intrones (splicing) alternativo

Hay genes que pueden tener ms de un producto final, donde un intrn puede ser exn para otro
producto del mismo gen.
Las formas alternativas de empalme pueden generar una variedad de
productos protenicos a partir de un gen individual. El cambio en los
puntos de empalme puede introducir codones de terminacin o cambios en
las fases de lectura abiertas.

Un gen y varias protenas por cambio de uso de los sitios de

procesamiento o fronteras Exn / Intrn
Varios sitios 5 a un mismo 3, consecuencias:
Incorporacin /eliminacin codn terminacin
Incorporacin /eliminacin de exones adicionales
Cambio de fase de lectura

Un sitio 3 a varios 5:
Incorporacin /Eliminacin codn terminacin
Las protenas Tra son inactivas en los machos de
Drosophila
 Tema 6 172
Los antgenos de SV40 T/ t empalman dos puntos 5 a un punto 3 comn. El punto 5 utilizado para el
antgeno T elimina un codn de terminacin que est presente en el ARNm de t. El transcrito t (estndar)
es mayor que el de T (alternativo, se cambia la frontera 5).
El adenovirus E15 empalma puntos 5 variables a un punto 3 comn. En el caso de los transcritos del
adenovirus E15, uno de los puntos 5 se conecta al ltimo exn en una fase de lectura diferente
(alternativa), haciendo un cambio significativo en el extremo C-terminal de la protena.
En Drosophila melanogaster TRA empalma un punto 5 constante a puntos 3 alternativos. La va de
determinacin sexual comprende interacciones entre una serie de genes en los que los fenmenos
alternativos de empalme distinguen machos y hembras. La protena Tra solamente aparece en las hembras,
es un regulador de empalme.

Las distintas protenas pueden producirse simultneamente o no:

- Distinto sexo
- Distinto tipo de clula o compartimento celular
- Distinto momento del desarrollo

En clulas de hembras, la protena Tra acta como un regulador

especfico que dirige el procesamiento de intrones. Promueve un
patrn alternativo diferente en los machos.
 Tema 7 173

Tema 7
Control gentico del desarrollo
Drosophila como sistema modelo
Establecimiento de los ejes en el embrin y generacin de
diferencias a lo largo.
El desarrollo temprano determina la formacin de los ejes antero-
posterior y dorso-ventral.
Los gradientes del huevo se traducen en segmentos en el eje
antero-posterior, y en estructuras especializadas en el eje dorso-
ventral de la larva, y ms tarde en las estructuras segmentadas de la
mosca adulta.
- El huevo: se establecen polaridades a lo largo de los ejes
antero-posterior y dorso-ventral.
- La larva: las partes de la boca estn en la zona anterior, las de
la cola en la zona posterior. Desde el lado ventral se
distribuyen bandas de dentculos (pequeos pelos), que
identifican las unidades de segmentacin a lo largo del eje
antero-posterior.
- Mosca adulta: la estructura segmentada tiene 3 segmentos
torcicos y 8 abdominales.

Los productos de los genes maternos establecen gradientes en fases

tempranas de la embriognesis.
Durante la oognesis se establece una asimetra en el oocito de la mosca. Un oocito tiene una superficie
externa de clulas foliculares que envuelve a las clulas nodriza que estn en contacto con el oocito. Las
clulas nodriza se conectan entre s y con el extremo anterior del oocito a travs de puentes
citoplasmticos. Las clulas foliculares son somticas; las clulas nodriza y el oocito pertenecen en origen
a la lnea germinal.
El material citoplasmtico, tanto protenas como ARN, pasa de las clulas nodriza hasta el oocito; la
acumulacin constituye una parte considerable del volumen del huevo. Las conexiones citoplasmticas
tienen lugar en un extremo del oocito, que pasa a ser el extremo anterior del mismo. Los genes que se
expresan dentro de la mosca madre son importantes para el desarrollo temprano. Se identifican mediante
mutaciones que no afectan a la madre pero son necesarios para tener descendencia. Ponen huevos que no
se desarrollarn como adultos, los embriones tienen defectos en el patrn cuticular y mueren durante el
desarrollo.
Los genes maternos se expresan antes de la fertilizacin. Se dividen en dos grupos:
- Somticos: se expresa en las clulas somticas de la madre que influyen sobre el desarrollo del
huevo. Actan sobre el oocito
- Germinales: se expresan en la lnea germinal y actan sobre las clulas nodriza.

Establecimiento del eje A-P

Genes maternos: Esenciales en las etapas ms tempranas. Sus productos se acumulan en el ovocito
Las clulas nodrizas transportan ARNm que forman complejos con protenas (ribonucleoprotenas), se
localizan en posiciones concretas del oocito.
 Tema 7 174
bicoid y oskar son ARNm que hay que localizarlos en lugares
concretos, si no se dirigen a su sitio el desarrollo se queda
bloqueado.

Para la produccin y localizacin de

morfgenos hacen falta varios productos
gnicos maternos.
Morfgeno: protena cuya concentracin
(o actividad) local hace que la regin vecina
adquiera una estructura o destino
determinado. El morfgeno es un regulador
transcripcional o conduce a la actividad de
un factor de transcripcin en dicha regin.
Los morfgenos se determinaron con mutantes. Se determinaron cuatro grupos de genes relacionados
con el desarrollo. Los genes de cada grupo se pueden organizar en una va que refleja su orden de
actuacin.
Cada uno de los sistemas maternos que funcionan en el huevo se inician fuera del mismo. La va se
transporta al interior del huevo, donde cada va tiene un producto concreto, el morfgeno. El compuesto
final es un factor de transcripcin que acta sobre dianas del cigoto que son responsables de las siguientes
etapas del desarrollo.
Los genes somticos maternos actan primero, los de la lnea germinal actan despus.
Morfgenos: tienen concentraciones y localizaciones caractersticas
Sistema anterior: bicoid (mensajero para factor de transcripcin)
Sistema posterior: nanos (mensajero para factor de transcripcin)
Sistema terminal: torso (receptor de membrana)
Sistema dorso-ventral: toll (receptor de membrana)
Bicoid: acta sobre componentes de diversa localizacin y todo lo que se
requiere para desencadenar la formacin de las estructuras anteriores es la
existencia de una concentracin adecuada del producto bicoid.
Este producto establece un gradiente desde su origen (de mxima
concentracin) en el extremo anterior del embrin. El gen bicoid se transcribe en
las clulas nodriza, el ARNm se transporta al oocito por los puentes
citoplasmticos. El ARN se sita en la punta anterior pero no se traduce durante la
oognesis. La traduccin empieza poco despus de la fertilizacin. Posteriormente
la protena establece un gradiente a lo largo del embrin.
Un gradiente dbil origina segmentos anteriores parecidos a las estructuras
posteriores.
Un gradiente fuerte da lugar a que las estructuras con caractersticas anteriores
alcancen zonas ms alejadas del extremo anterior del embrin.
La protena bicoid se comporta como un morfgeno que determina la posicin
antero-posterior en el embrin mediante un mecanismo dependiente de la
concentracin.
 Tema 7 175
Nanos: determinante posterior, controla el desarrollo abdominal. El ARNm
materno (producto de nanos) se coloca en el polo posterior. La protena nanos
se difunde desde el lugar de traduccin para formar un gradiente que se
extiende a lo largo de la regin abdominal.
Fotografa superior: hibridacin in situ. Muestra el ARN tenuamente
marcado en el embrin muy temprano (3 divisin nuclear).
Fotografa inferior: inmnohistoqumica. Muestra la dispersin de la protena
nanos durante la 8 divisin nuclear.

Drosophila: Etapas tempranas en citoplasma comn

El desarrollo inicial del huevo tiene lugar en un citoplasma comn o
sincitio, el huevo no crece.
El huevo fertilizado: tiene dos ncleos. Ambos se encuentran el plasma
polar. Productos transportados o activados por las clulas nodriza o las
foliculares.
Los ncleos se dividen en el citoplasma comn. Los ncleos del plasma
polar (en rosa) se transforman en precursores de las clulas germinales, son
ncleos determinados que han adquirido su destino.

Blastodermo sincitial: los ncleos migran a la periferia y se dividen; se

producen 4 divisiones ms, no existe una perfecta sincrona. Se traducen los
ARN maternos.

Blastodermo celular: las membranas envuelven a los ncleos para formar

una monocapa. Se transcriben los ARN cigticos.
Un ncleo determina su posicin en el embrin en funcin de los
gradientes antero-posterior y dorso-ventral, y se comporta de acuerdo a eso.

Los productos maternos activarn los genes cigticos.

 Tema 7 176

Los genes cigticos permiten establecer la segmentacin

El desarrollo de Drosophila avanza a travs de la formacin
decompartimentos que determinan parasegmentos y segmentos.
En el blastodermo celular se determina el destino de cada regin,
separados por sombras de estras.
Embrin de 10 horas, se han desarrollado los segmentos.
Mosca adulta se han desarrollado 3 segmentos torcicos y 8 abdominales.

Segmentacin
Existen 3 grupos de genes cigticos implicados en la segmentacin. Los genes maternos y cigticos
actan progresivamente sobre regiones ms pequeas del embrin.
Los genes maternos establecen gradientes desde los polos anterior y posterior.
Genes gap: existen cuatro genes gap
involucrados en la formacin de los
principales segmentos del cuerpo.
Definen 4 regiones amplias en el cuerpo.
La mutacin produce prdida de
segmentos adyacentes. Ocurre en etapas
tempranas del desarrollo (< 11
divisiones nucleares).
Genes pair rule o regla par: definen 7
bandas, cada banda es un par de
segmentos. La mutacin presenta
delecin de alguna parte del patrn en
cualquiera de los dems segmentos,
pueden ser pares o impares. (11-12
divisiones nucleares).
Genes de polaridad segmentaria:
definen 14 bandas, cada banda es un
segmento. Los mutantes presentan
reemplazamiento de partes de los
segmentos por sus imgenes especulares,
orden no correcto de segmentos. (13
divisiones nucleares).
Los patrones de expresin de los genes coinciden con las regiones de actuacin. Este hecho se ha
estudiado en mutantes.

Las regiones que faltan es donde deberan

expresarse los mutantes.

En cada etapa se usan protenas reguladoras

maternas, gap o de regla par de un modo combinado
para especificar el patrn de expresin gnica
concreta del embrin
 Tema 7 177
Protenas Gap: activadores y represores de los genes de la regla de los
pares (Pair-rule)
Distintas combinaciones de protenas GAP producen el mismo nivel de
expresin en distintos sitios (expresin en bandas). Se pueden estudiar los
distintos segmentos y se pueden observar las distintas concentraciones de
genes.
Genes Pair-rule: Regiones reguladoras con varios sitios de unin a protenas
Gap
Protenas Pair-rule: activan a los genes de la polaridad (se expresan en las
fronteras)

Establecimiento de la identidad de los segmentos

Los genes de polaridad del segmento controlan el patrn dentro de cada uno de ellos.
Los genes hometicos establecen el programa que determina la diferenciacin propia de cada segmento.
Sus mutaciones transforman una parte del cuerpo en otra; las clulas de un compartimento desarrollan el
fenotipo de otro compartimento celular diferente. Algunos mutantes hometicos transforman parte de un
segmento o uno completo en otro tipo de segmento.
La posicin de los genes en el genoma dan una informacin espacial.

En muchos de los genes hometicos y de segmentacin se encuentran motivos preservados, el ms

frecuente es homeobox (180 pb). La secuencia protenica codificada por homeobox se llama
homeodominio (60 aminocidos).
Agrupados en dos complejos:
- Antenapedia (ANT-C). Estructuras anteriores
- Bithorax (BX-C). Estructuras posteriores

ANT-C
Fenotipos de prdida de funcin:
- lab: afecta a la cabeza
- pb: estructuras labiales reemplazadas por antenas
- Dfd: delecin de segmentos mandibulares
- Scr: transforma T1 en T2
- Antp: transforma T2-T3 en T1
 Tema 7 178

BX-C
Una serie de mutaciones reguladoras afectan a segmentos
sucesivos de la mosca. Las posiciones de las mutaciones
reguladoras muestran las regiones en las que las deleciones,
inserciones y translocaciones le confieren un determinado
fenotipo.
Mutaciones de prdida de funcin:
- abx: transforma T2P / T3A en T2
- bx: transforma T3A en T2A
- bxd: transforma A1A en T3A
- iab6: transforma A6 en A5
- iab5: transforma A5 en A4
- iab4: transforma A4 en A3
- iab3: transforma A3-6 en A2
- iab2: transforma A2A en A1

Mutacin triple, caso extremo de transformacin hometica,

convierte T3A, que porta halterios o balancines, en T2, que porta alas,
con lo que se crea una mosca con 4 alas en lugar de 2.

Los genes que contienen homeoboxes estn involucrados en la regulacin de la embriognesis en una
variedad de especies. Los genes individuales de los mamferos se llaman genes Hox. Un grupo de genes
Hox puede ocupar de 20-100 pb y tener hasta 10 genes.
Los genes Hox estn conservados en animales. Los
mamferos tienen 4 complejos Hox (A-D) por duplicacin
del existente en el ancestro comn.

El ordenamiento de los genes refleja las regiones en las

que se expresan en el eje antero-posterior. Los genes Hox
se alinean con los genes de la mosca en funcin de su
homologa, que es fuerte en los grupos 1, 2, 4 y 9.

Comparacin de genes Hox de ratn y hombre

con los de la mosca

La comparacin de los patrones de expresin de ANT-C y HoxB de muestra

que los productos gnicos comparten una localizacin de su expresin
progresivamente ms posterior en el animal a medida que se avanza en el
grupo de genes de izquierda a derecha.
Los patrones de expresin muestran las regiones de transcripcin en la
epidermis de la mosca a las 10 horas, y en el sistema nervioso central en el
embrin del ratn a los 12 das.

Tambin se mantiene la relacin entre localizacin de los genes en los complejos y sitio de actuacin en
el embrin.
 Tema 8 179
Tema 8
Aspectos genticos del cncer
Sistemas de control en organismos celulares
- Ciclo celular
- Dependencia de anclaje: se necesita una superficie slida o firme para que las clulas se adhieran a
ella.
- Inhibicin por densidad: las clulas nicamente crecen hasta una densidad limitada, ya que el
crecimiento se inhibe, quizs mediante procesos que implican contactos clula-clula.
- Mortalidad tras un nmero de divisiones
- Apoptosis o suicidio celular inducido
- Sistema inmune

Procesos relevantes: tres tipos de cambios que tienen lugar cuando una clula se vuelve cancerosa:
Inmortalizacin: crecimiento indefinido, prdida de controles.
Transformacin: fallo de observacin de los lmites normales del crecimiento. Las clulas
transformadas llegan a ser independientes de los factores que normalmente necesitaban para el
crecimiento celular. Se dividen y forman colonias.
Metstasis: la clula cancergena desarrolla la habilidad de invadir el tejido normal, movindose
desde el lugar de origen y estableciendo una nueva colonia en cualquier parte del cuerpo. Ha
perdido casi todos los controles, se acumulan mutaciones.

Clulas primarias: el cultivo se divide en diversas divisiones

El crecimiento de las clulas es restringido por las propiedades del
tejido.

Crisis: la mayora de las clulas muere; pocas clulas continan

creciendo.

Inmortalizacin: las lneas celulares establecidas se dividen

indefinidamente, pero las clulas continan adheridas al sustrato,
requieren suero y se inhiben por contacto.

Transformacin: las clulas transformadas son independientes de la

adhesin, el suero, e inhibicin por contacto; cambian la forma, se
redondean y crecen en un foco.
Las clulas transformadas pueden formar tumores slidos.

Metstasis: ahora totalmente tumorgenas, las clulas son mviles, y

pueden migrar para dar lugar a nuevas colonias.
Se forman tumores en nuevas localizaciones.

Cncer y mutaciones somticas

- Oncogenes y protooncogenes: genes aceleradores del crecimiento. Mutaciones dominantes
- Supresores de tumores: genes inhibidores del crecimiento, anti-oncogenes. Mutaciones recesivas
- Mutadores: implicados en la estabilidad genmica. Mutaciones recesivas

Fenmenos epigenticos en cncer: genes mutados o mal-regulados, patrones de metilacin.

Oncogenes y protooncogenes
Los oncogenes fueron identificados inicialmente como genes transportados por virus que causan
transformacin de sus objetivos celulares. Uno de los principales tipos de oncogenes virales tienen
homlogos celulares que estn implicados en funciones celulares normales, son los protooncogenes.
 Tema 8 180
En ciertos casos la mutacin o activacin aberrante de los protooncogenes se asocia con la
formacin de un tumor.
9 Identificacin de oncogenes. Los oncogenes/ protooncogenes* inducen la transformacin de clulas
en cultivo.

El ensayo de transfeccin permite aislar oncogenes directamente probando

en el ADN de las clulas tumorales su habilidad para transformar clulas
normales en clulas tumorales.

Extraccin de ADN y transferencia a las clulas normales

El gen transformador se integra en la clula

Colonia aislada de clulas transformadas

Aislamiento de ADN especfico adquirido por las clulas transformadas.

Un oncogn puede ser un protooncogen mutado, o activado.

Fenotipo seleccionable: se da por la activacin de un protooncogn.

9 Induccin de cnceres por virus: la actividad transformante de un virus cancergeno reside en un gen
o genes particulares que forman parte del genoma viral. Un oncogn inicia una serie de
acontecimientos que se ejecuta por las protenas celulares. El virus libera un mecanismo regulador
que cambia las propiedades de crecimiento de la clula diana.
Virus de ADN: portadores de genes especficos virales (oncogenes). Especifican protenas,
productos gnicos propios, que desactivan supresores de tumores.
Retrovirus:
Retrovirus transformantes: portadores de genes celulares (protooncogenes). los oncogenes
transportados por retrovirus se derivan de genes celulares y por tanto pueden imitar el
comportamiento de ganancia de funcin en protooncogenes. Incorporan en su genoma un
protooncogen (estimulador del crecimiento de la clula husped) y lo modifican como oncogn.

Un retrovirus transformante contiene una copia de una secuencia

celular en lugar de algunos genes propios. Un retrovirus captura un
gen celular mediante el intercambio de parte de su propia secuencia
por una secuencia celular.

Productos gnicos
propios

Productos gnicos prestados. Oncogenes de algunos

retrovirus.
Cada retrovirus transformante contiene un oncogen
derivado de un gen celular.

Versiones oncognicas / virales (v) de genes celulares (c)

 Tema 8 181

9 Proto-oncogenes
Mutaciones de ganancia de funcin (prdida de una de varias funciones) los convierten en oncogenes:
activacin de proto-oncogenes en cnceres (de origen retrovrico o no).
Mecanismos de activacin de protooncogenes:
Mutaciones puntuales
ganancia de funcin: constitutivamente activa (ej: genes RAS). RAS, protooncogn que
ms cncer provoca, es una protena de transduccin de seales. Un cambio en un solo
aminocido la mantiene permanentemente activa, ese cambio deja a la protena bloqueada
en la conformacin activa.
Reordenaciones genomicas diversas
Amplificaciones
- Aumento de la dosis gnica, las protenas reguladoras se mantienen en dosis justa.
El protooncogn no est mutado pero no est controlado porque no hay suficiente
protena reguladora. Suele ocurrir en clulas del sistema inmune, reorganizan su
genoma muy a menudo, es ms fcil que se produzcan errores que amplifiquen
protooncogenes (tumores de clulas sanguneas, leucemias...)
Translocaciones cromosmicas
- Fusiones proteicas: protenas hbridas, distinto producto gnico
- Fusiones gnicas: adquisicin de promotores fuertes delante de un protooncogn
(leucemias)
Efectos cualitativos y /o cuantitativos sobre la expresin gnica
Estn implicados en transduccin de seales y proliferacin celular.

Los oncogenes podran codificar protenas de secrecin, de

membrana, citoplasmticas o nucleares.
La parte izquierda de la figura agrupa a los oncogenes segn
la localizacin de sus productos.
Los recuadros de la derecha aportan detalles sobre los
correspondientes proto-oncogenes.
Genes que se han visto mutados en diversos tipos de cncer:
- Protenas secretadas por una clula que acta en otra.
Comunicacin por secrecin.
Factores de crecimiento
- Protenas transmembrana que se activan por la unin de un
ligando extracelular. La oncogenia puede resultar de una
activacin constitutiva, ligando independiente.
Receptor de factores de crecimiento
Protenas G
Protenas de transduccin de seales (Ras)
- Asociadas a membrana
Tirosina quinasas intracelulares
- Citoplasmticas: aumentan o activan constitutivamente las
actividades quinasa
Serina / treonina quinasas
Reguladores de seales
- Nucleares
Fectores de transcripcin
 Tema 8 182
Genes supresores de tumores
Genes cuyos productos se necesitan para el funcionamiento normal de la clula, y cuya prdida de
funcin causa tumores. Los genes de esta clase mejor descritos codifican protenas RB (retiniblastoma) y
p53.
El efecto comn de los oncogenes en la gnesis tumoral es que el aumento o la alteracin de la actividad
del producto del gen resulta oncognica. Ya sea el oncogn introducido por un virus o el resultado de una
mutacin en el genoma, es dominante sobre su protooncogn allico. Una mutacin que activa a un nico
alelo es oncognica. La gnesis tumoral, por tanto, se debe a una ganancia de funcin.
Herencia dominante de la predisposicin a padecer cncer. A nivel celular, enfermedad recesiva: los dos
alelos deben ser inactivados
Pedigr de una familia con sndrome de Li-Fraumeni
I-2: cncer de mama bilateral a los 40;
II-1: tumor cerebral a los 35;
II-3: sarcoma a los 19, cncer de mama a los 33;
II-5, cncer de mama a los 32
III-3: osteosarcoma a los 8;
III-4: leucemia a los 2;
III-5 sarcoma a los 3.
La mutacin de p53 es la causa del sndrome, es una
forma rara de cncer. Los individuos afectados muestran
cnceres en diversos tejidos.
Son heterocigotos que han sufrido mutaciones sin sentido en un alelo.
Estas mutaciones se comportan como negativos dominantes, superando la funcin del alelo silvestre.
Esto explica la aparicin de la enfermedad como un dominante autosmico.

Retinoblastoma
Enfermedad humana dela infancia, tumor en la retina. Se asocia con deleciones del gen Rb. Surge
cuando ambas copias del gen estn desactivadas. En la forma heredada del tumor, un cromosoma parental
porta la alteracin. Un cambio somtico en las clulas retinianas que determine la prdida de la otra copia
del gen causa el tumor. En la forma espordica, los cromosomas parentales son normales; ambos alelos se
han perdido a causa de cambios somticos (individuales).

Rb inhibe el ciclo celular, por interaccin protena-protena. El

ciclo celular se bloquea cuando Rb est fosforilado (en el ciclo
normal) o cuando ha sido secuestrado por un antgeno oncognico
(en una clula transformada).

Es blanco de oncogenes virales. Determinados antgenos virales

cancergenos se unen especficamente a la forma no fosforilada de
Rb (antgeno T de SV40, el mejor descrito).
Rb no fosforilado previene la proliferacin celular; esta actividad
se suprime para continuar con el ciclo celular, es cual se consuma
por fosforilacin cclica. Cuando es suprimido por un antgeno
cancergeno, por secuestro de Rb no fosforilado, el complejo Rb-
antgeno no se une a E2F, ste se encuentra permanentemente libre
para permitir la entrada en fase S.
La sobreexpresin de Rb impide el crecimiento celular.
 Tema 8 183
Rb y p53 y otros TS juegan papeles clave en la inhibicin del ciclo celular

Mediante la aparicin de mutaciones desactivadoras en

tumores se han identificado como supresores de tumores a
diversos reguladores.

p53
El supresor de tumores ms importante es p53. la mayora de los cnceres humanos han perdido el p53 o
presentan mutaciones. Es una fosfoprotena nuclear. Participa en la inhibicin del ciclo celular.
Multiplicidad de funciones para p53, el guardin del genoma, potente inductor de la apoptosis.
Recibe mltiples seales: acortamiento de telmeros, radiaciones
Interacciones: proteasas, quinasas que regulan su actividad.

Un dao en el ADN activa a p53. El resultado depende de la

fase del ciclo celular. Al comienzo del ciclo, p53 activa un
punto de control (checkpoint) que previene la progresin hasta
que el dao haya sido reparado.
Si es demasiado tarde para ejecutar el punto de control, p53
desencadena la apoptosis.

Diferentes dominios son

responsables para cada
actividad de p53.

- Es una protena de unin al ADN que reconoce un motivo

palindrmico
- Activa la transcripcin en promotores que contienen copias
de ese motivo
- Puede unirse al ADN daado
- Es un tetrmero
- Tiene mltiples sitios de interaccin, tambin de oncogenes virales

Mutaciones dominantes?
 Tema 8 184
9 Mecanismos de inactivacin de p53 en tumores
Directos (p53): la mayora de los cnceres
Indirectos: algo interacciona con p53 y provoca
- Aumento de actividad de antagonistas de p53 (protooncogenes)
- Eliminacin de actividad de activadores de p53 (supresor de tumores)

Activador = inhibidor de inhibidor

Genes mutadores

El control de la integridad del genoma. Implicados en la reparacin del ADN.

Los genes mutadores tiene homlogos en E. coli El sistema MutHLS de E. coli: reparacin de
emparejamientos incorrectos su inactivacin incrementa la tasa de mutacin
Las mutaciones en genes mutadores (y la accin de los mutgenos /carcingenos) facilitan la
adquisicin de mutaciones en protooncogenes o genes supresores.