1.

INFORMACION GENERAL DEL PROYECTO

Ttulo: Caracterizacin de predios ganaderos del municipio de Guachucal,

dentro del proyecto piloto de excelencia sanitaria en ganadera de leche
entre Junio y Agosto de 2014.
Autores: Danny Fernando Portillo Benavides1, Fausto Bladimir Pantoja Estacio2

Correo electrnico: 1 ; 2 tatosfbpe@gmail.com

Telfono: 1 3123599115; 2 3157462366
Direccin de correspondencia: 1 ;
2
Pasto (Nario)
Lnea de Investigacin:
Facultad: Ciencias Pecuarias
Programa: Medicina Veterinaria
Director del Trabajo: Cdula de ciudadana:
Katia Benavides Romo

Direccin: Clnica Veterinaria Carlos Telfono: 3175020073 Fax:

Martnez Hoyos E-mail: katiabenavides@gmail.com
Ciudad: San Juan de Pasto Departamento: Nario
Tipo de Entidad: Universidad Pblica.
Lugar de Ejecucin del Proyecto: Pasto
Ciudad: San Juan de Pasto Departamento: Nario
Duracin del Proyecto (en meses):
Tipo de Proyecto: Trabajo de grado para optar por ttulo profesional
Financiacin:
Autores:

Universidad de Nario:
Otra entidad:
Valor total del Proyecto:
Descriptores/Palabras claves:

Expertos reconocidos:
MV Esp.
MV Esp.

2. RESUMEN DEL PROYECTO

1
La paratuberculosis (enfermedad de John) es una enfermedad de difcil
diagnstico debido a que la mayora de sus estadios clnicos son silenciosos, est
causada por la bacteria Micobacterium avium subespecie paratuberculosis,
afectando principalmente el ganado lechero, cursa con diarrea persistente o
intermitente, prdida de peso, y como consecuencia conlleva a una emaciacin
progresiva que finalmente desencadena la muerte del animal, por lo cual el
impacto econmico en un hato se debe a que afecta de forma directa la
produccin lctea, la condicin corporal, la fertilidad, la perdida de animales del
hato por descarte, entre otras.

La ausencia de informacin sobre esta enfermedad, lleva a desconocer su

prevalencia y epidemiologia, y la dificultad en su diagnstico, resulta en un
inconveniente al identificar los animales portadores y diseminadores, por ello se
requiere pruebas ms sensibles y especficas para determinar los animales en los
estadios iniciales de la enfermedad, principalmente si son asintomticos. Por lo
tanto la prueba ms adecuada en este caso es la deteccin de anticuerpos anti-
mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en el suero sanguneo mediante
una prueba de inmuno-reaccin como ELISA.

De igual forma es de vital importancia el conocer la realidad sobre esta

enfermedad, ya que por investigaciones recientes puede haber un vnculo entre la
enfermad de Crohn y la presencia de MAP en el intestino humano, por lo cual
desde un punto de vista de salud pblica se deben mejorar los controles sanitarios
pecuarios junto con la elaboracin y comercializacin de alimentos de origen
animal como leche, sus derivados y carne.

Con el presente proyecto se pretende establecer un estatus epidemiolgico de la

situacin actual de la enfermedad en nuestra regin, ya que la produccin lechera
es una parte importante de la economa, se requiere asegurar la calidad del
producto mediante la implantacin de programas de prevencin y control de la
paratuberculosis.

3. DESCRIPCIN DEL PROYECTO:

3.1 PLANTEAMIENTO DE LA PREGUNTA O PROBLEMA DE INVESTIGACIN

Y SU JUSTIFICACIN EN TRMINOS DE NECESIDADES Y PERTINENCIA;
MARCO TERICO Y ESTADO DEL ARTE.

3.1.1 Planteamiento de la pregunta o problema de investigacin

Cul es estado epidemiolgico actual de Mycobacterium avium subsp.

paratuberculosis (MAP) en hatos lecheros del departamento de Nario?
El problema radica en el hecho de que se sabe que dentro de nuestro
departamento hay un sinnmero de casos en los que se reporta algn tipo de

2
diarrea, pero no hay estudios que traten de dar un diagnstico certero a estos
cuadros clnicos. Con el presente trabajo se trata de determinar la magnitud de la
enfermedad e implementar programas de prevencin y control dentro de los
predios con ganado lechero de Nario

3.1.2 Justificacin en trminos de necesidades y pertinencia

Al presentar alto riesgo para la industria de la produccin lechera y una posible

relacin zoontica con la enfermedad de Chron, la paratuberculosis debera ser
considerada dentro de los programas de prevencin y control rutinarios de todas
las explotaciones ganaderas.

En el departamento de Nario con frecuencia se reportan animales cuyo estado de

salud se ve afectado por una serie de sntomas sugerentes a infeccin del TGI
como diarrea crnica, pero debido al desconocimiento etiolgico de las mismas, se
opta por tratar los animales empricamente y no se toman las medidas preventivas
necesarias, lo que facilita que los animales que posean estadios silentes de la
enfermedad sean diseminadores y/o propagadores dentro del mismo hato y a
predios cercanos.

El poco conocimiento sobre esta enfermedad y el posible factor de riesgo como

zoonosis, hace que la poblacin sea vulnerable al realizar prcticas artesanales
con la leche y sus derivados. Por lo cual se debe instaurar un sistema de vigilancia
efectivo contra el MAP, en donde se requieran pruebas serolgicas sencillas y de
bajo costo como lo es ELISA, que actualmente se procesa en kit comercial de muy
fcil manejo y adquisicin; lo que permite su uso en grandes proporciones
asegurando el diagnstico de gran cantidad de animales por bajo costo y sea una
herramienta confiable para el mdico veterinario de campo.

Este estudio permitir ampliar el conocimiento acerca de las condiciones reales de

la enfermedad y ayudar en el momento de proponer programas de control y
prevencin de la misma, para disminuir su impacto econmico en los hatos
lecheros del departamento.

3.1.3 Marco terico y estado del arte

Etiologa

La paratuberculosis o tambin llamada enfermedad de Johne, entidad patolgica

descrita completamente en el ao 1895 por Johne y Frothingham, perteneciente a
la lista B de la Organizacin Mundial de Sanidad Animal (OIE). Es una
enfermedad entrica crnica de rumiantes causada por la infeccin con la bacteria
Micobacterium avium subespecie paratuberculosis (MAP), que es un bacilo

3
aerobio facultativo, Gram positivo, no esporo-formador, con una pared celular
compleja, relativamente impermeable y rica en lpidos que le confiere propiedades
cido alcohol resistente y refuerza su sobrevivencia en medio ambientes que se
encuentran al sol y al agua, donde la supervivencia es ms larga en el agua que
en la tierra. Su mayor constituyente es la lipoarabinomanosa, que es altamente
inmunognica y forma la base de los inmunoensayos ligados a enzima (ELISA) 4, 6,
7, 9, 10, 15, 21, 23, 24

Necesita micobactina exgena para su crecimiento in vitro, principalmente en el

aislamiento primario, y durante su desarrollo forma pequeas colonias de 1 a 5
mm, firmes, brillantes, blancas y lisas. Es un patgeno obligado, porque solamente
se multiplica en el husped susceptible 7

Por su conformacin antignica, est estrechamente relacionado con el M. Avium,

M. Intracellulare y M. Scrofulaceum, y su diferencia gentica ms evidente con
respecto a las dems micobacterias es la presencia de 14 a 18 copias de la
secuencia de insercin 900, denominada IS900 la cual es usada en el diagnostico
por la prueba de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) 31

El MAP ha sido investigado en un amplio rango de especies domsticas y de

ambientes ecolgicos de fauna silvestre y parques zoolgicos, como cabras,
ciervos blancos, ciervos rojos, alces, muflones, camellos, ovinos, us, bfalos,
llamas, pero en la especie que ms se ha estudiado es en el bovino. En los
animales infectados, el MAP causa enteritis granulomatosa y linfadenitis con
infiltracin mononuclear de macrfagos, linfocitos, y clulas plasmticas
epiteloides, tambin puede observarse clulas gigantes de tipo Langhas y reas
necrticas. 7, 10

Epidemiologa

La prevalencia de paratuberculosis en Europa vara entre 7 a 55%. En Estados

Unidos, aproximadamente 40% de los hatos con ms de 300 cabezas de ganado
estn infectados. En Australia, la prevalencia est distribuida desigualmente, del 9
al 22%. En Colombia no se conoce la prevalencia de la enfermedad de Johne en
el ganado bovino, en el ao 2001 en un estudio realizado por la universidad de
Antioquia se confirmaron 4 casos positivos a la enfermedad por hallazgos
histopatolgicos. La ausencia de una informacin consolidada en nuestro pas que
permita conocer la prevalencia y la epidemiologia de la paratuberculosis bovina
puede ser debida a la dificultad en diagnosticar los animales portadores y
diseminadores de la enfermedad, pues se requiere de pruebas diagnsticas
suficientemente sensibles y especficas para detectar los animales infectados en
los estados iniciales de la enfermedad, para erradicarla del hato infectado, lo que
exigen polticas gubernamentales que implican un alto costo econmico y un
elevado costo social en potencia. 2, 31

4
Toda la evidencia indica que la infeccin por MAP se expande dentro de los hatos
infectados, entre hatos dentro del mismo pas y entre pases a travs del mercado
de animales. Este organismo atrae inters en los aos recientes por dos razones.
Primero, ha aumentado la evidencia de un vnculo entre la enfermedad de Crohn y
la presencia de M. paratuberculosis en el intestino humano. Segundo, la
enfermedad de John del ganado, cuyo agente causal es el M. paratuberculosis,
est aumentando y se disemina alrededor del mundo y aunque existen estrategias
en muchos puestos de control para esta enfermedad, contina afectando la salud
y la productividad del ganado a nivel global. 16, 19, 26

En comparacin con diferentes estudios que involucran la prevalencia de la

enfermedad, parte de las dificultades radican en la variacin de definicin acerca
de qu constituye un caso positivo. En algunos casos, los resultados serolgicos
positivos, es el diagnstico definitivo y en otros, un resultado positivo solo
determina la presencia de la bacteria. 19

Es bien sabido que la paratuberculosis tiene naturaleza inmunopatolgica variada

mostrando diferentes formas incluso en las mismas especies. Estas formas
diferentes pueden aparecer en el mismo individuo, en diferentes localizaciones en
el intestino. Esto puede ser compatible con los dos tipos principales de enteritis
regionales comnmente reconocidas como son la enfermedad de Crohn y la
colitis ulcerativa. 15

Las potenciales consecuencias primarias de la infeccin con MAP son:

Salud y bienestar animal reducidos en las vacas son diarrea crnica

Disminucin de la produccin debido al bajo rendimiento lechero,
disminucin del peso al sacrificio, descarte prematuro, perdida del potencial
gentico y aumento de la mortalidad.

Transmisin zoontica

Valor reducido de los predios infectados con MAP, los cuales no pueden ser
certificados como libres de la infeccin. 20

Transmisin

Si los animales se pueden infectar con M. paratuberculosis, son posibles muchas

formas de infeccin, incluyendo la transmisin entre humanos. Sin embargo,
debido a que la bacteria vive libre en el medio ambiente y adems los animales
son el reservorio primario de la infeccin, la transmisin de animales a humanos
puede ser ms probable. 8

La excrecin de M. paratuberculosis de los animales infectados ocurre

principalmente en las heces y en menor medida en la leche. En los estadios
finales de la enfermedad, la infeccin se disemina y es posible encontrar el agente
en la sangre y en otros rganos internos como ndulos linfticos diferentes a los
5
del tracto gastrointestinal, hgado, pulmn, rin, tero, glndula mamaria y
epiddimo. Consecuentemente, es posible la contaminacin de productos
alimenticios procedentes del ganado antes y despus del sacrificio.
Hay evidencia de que se ha encontrado 52-92% de la presencia de M.
paratuberculosis en intestino de pacientes con la enfermedad de Crohn usando
mtodos de deteccin como PCR. 26

Aunque la ruta fecal oral es la va de transmisin ms frecuente, debido a la

diseminacin del MAP en las heces, la leche y semen de animales infectados son
otras fuentes de infeccin, aunque hay poco conocimiento acerca de cmo se da
la transmisin a travs de estas vas . El alimento, agua y varios componentes del
medio ambiente pueden ser contaminados por la diseminacin del MAP. Los
animales jvenes son los ms susceptibles a la infeccin, se pueden contaminar a
travs de calostro y leche o por los pezones contaminados con materia fecal. 1, 30

Sin embargo, a pesar de que se ha reportado la transmisin intrauterina durante

los ltimos estadios de gestacin y se ha aislado el bacilo del endometrio de
hembras gestantes y no gestantes en animales con forma clnica y subclnica de la
infeccin y de fetos provenientes de vacas infectadas, no se han reportado hasta
el momento abortos debidos a esta enfermedad. El estado nutricional y hormonal
tambin puede influenciar la susceptibilidad a la infeccin por MAP. Otros factores
inherentes al animal que influyen en la diseminacin de la infeccin son la edad, el
volumen de la dosis infectiva, el estrs y los agentes inmunosupresores, como es
el caso de la infeccin concomitante con el virus de la diarrea viral bovina. La
expulsin del agente puede ocurrir en cualquier momento durante el curso de la
enfermedad, pero la bacteria es raramente detectada antes de los dos aos de
edad. Durante la fase clnica de la infeccin, la expulsin del microorganismo en
las heces es alta y puede exceder 1010 organismos/g de heces. 31

El MAP tambin se ha sugerido como el agente etiolgico de la enfermedad de

Crohn en los humanos. El modo de transmisin es poco claro; sin embargo,
algunas evidencias sugieren que los humanos pueden infectarse a travs del
consumo de leche contaminada. Actualmente, no se sabe si la pasteurizacin
comercial efectivamente mata al MAP en la leche cruda contaminada. Usando una
unidad a escala de pasteurizacin utilizado por las lecheras comerciales actuales,
en el laboratorio, diseado para simular la alta temperatura en un corto tiempo
(72C en 15 segundos), ha demostrado que el tratamiento de leche cruda
inoculada con 104 a 106 UFC de MAP por ml se reduce a nmeros a un nivel
indetectable. 25

Estudios para evaluar las tasas de contaminacin con MAP de productos crudos y
de la habilidad de tcnicas de procesamiento de alimentos particularmente las que
usan calor para eliminar la bacteria son necesarios con el fin de juzgar el riesgo de
exposicin de personas a travs de alimentos de origen animal. 8

6
Los siguientes factores han sido asociados con la presencia de la infeccin por
MAP en un hato.
a. Diferencias regionales.
b. Tamao del hato
c. Frecuencia de la compra de ganado, con porcentaje de vacas nacidas en
otros hatos relacionados con la presencia de MAP
d. Presencia de cra de ciervos en la granja. 27

La bacteria puede excretarse en la leche de los animales infectados, pero hay

poca informacin acerca del nmero de organismos que pueden estar presentes.
Entre 2 a 8 UFC por 50 ml fueron reportados en leche de origen de vacas
infectadas con estadios subclnicos y clnicos. 11

Las fuentes de agua pueden estar contaminadas con MAP por escorrenta de los
campos pastoreados por animales infectados o de tierras que han usado estircol
de animales infectados como fertilizante. En el Reino Unido se ha demostrado que
MAP sobrevive al tratamiento del agua en el acueducto; igualmente no se elimina
completamente en el tratamiento por cloracin usado para purificar las aguas
municipales de los Estados Unidos. 6

Aunque MAP afecta principalmente el tracto gastrointestinal, en animales con

infeccin avanzada es diseminado a varios rganos, ha sido aislado de glndula
mamaria, sangre, rin y bazo. As los crnicos de animales infectados
aparentemente saludables potencialmente pueden contener MAP viable; adems
el riesgo de contaminacin de las canales en frigorficos es alto. 6

Fisiopatologa

El espectro histopatolgico e inmunolgico depende de la respuesta del

hospedador, puede ser: (I) Tuberculoide extremo (forma paucibacilar), la
desarrollan aquellos animales asintomticos con lesiones limitadas, asociados con
una fuerte respuesta inmune celular y baja o nula respuesta humoral, es la ms
frecuente en pequeos rumiantes. (II) Paucibacilar linfoctica (forma linfoctica),
propia de animales sintomticos con lesiones difusas y ausencia o baja cantidad
de MAP en las lesiones, se acompaa de una fuerte respuesta celular. (III)
Multibacilar no linfoctica (forma lepromatosa) la sufren animales sintomticos con
lesiones difusas, alta cantidad de MAP en las lesiones, fuerte respuesta humoral y
escasa respuesta celular, es la forma ms comn en bovinos. 6

Los animales ms susceptibles de contraer la infeccin son los jvenes,

especialmente antes de los seis meses de edad, pero las manifestaciones clnicas
aparecen a la edad de 2 a 5 aos. El estado nutricional y hormonal tambin puede
influenciar la susceptibilidad a la infeccin por MAP. Durante el periodo del parto y

7
la lactancia las hormonas prolactina y de crecimiento se incrementan, lo cual
favorece la multiplicacin intracelular de MAP en los macrfagos de los bovinos. 7

El MAP llega al intestino del animal, se une a las protenas y glicoprotenas

presentes en la mucosa y luego es fagocitada por las clulas M de las placas de
Peyer, las cuales se las presentan a los macrfagos de la mucosa, en cuyo interior
se multiplica. Las primeras lesiones granulomatosas se observan en las regiones
interfoliculares de las placas de Peyer y los ndulos linfticos mesentricos, tres
meses despus de la infeccin.

Los hallazgos de MAP en clulas mononucleares de sangre perifrica y tejido,

sugieren que los macrfagos infectados pueden funcionar como vehculos en la
diseminacin de los organismos desde los sitios infectados.

La infeccin con MAP afecta la respuesta mediada por linfocitos T, especialmente

durante los estados avanzados de la enfermedad. Durante los estados subclnicos
de la infeccin, el MAP induce la respuesta inmune mediada por clulas del
hospedero, produciendo la proliferacin de linfocitos y produccin de citoquinas.

A medida que progresa la infeccin hacia un estadio clnico, la respuesta inmune

mediada por clulas declina y se da una respuesta fuerte de tipo humoral. Durante
los estadios finales de la enfermedad, la falta de respuesta inmune mediada por
clulas especficas del antgeno puede desencadenar una rpida diseminacin de
la infeccin en el hato. Por otro lado, en los estadios tempranos de la infeccin, las
lesiones del tipo tuberculoide estn asociadas con la secrecin de IFN- , a una
fuerte respuesta dominada por linfocitos T CD4 +, mientras que la respuesta celular
de linfocitos CD8+ est asociada con los estadios tardos donde predominan las
lesiones tipo lepromatosa, o con estados susceptibles del animal infectado, lo cual
indica que existe una fuerte correlacin entre el estado de la enfermedad, la
susceptibilidad o resistencia del animal y la respuesta inmune especialmente
mediada por clulas.

Desde el momento en que el MAP cruza la barrera epitelial de la mucosa

intestinal, la bacteria es fagocitada por los macrfagos subepiteliales, por el
mecanismo de receptores de superficie. Los macrfagos representan la primera
lnea celular de defensa contra la invasin bacteriana, son presentadores de
antgenos a travs del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CHM) de clase I y
de clase II y secretan citoquinas desencadenantes de la respuesta inflamatoria,
como el factor de necrosis tumoral alfa (TNF) y algunas interleuquinas como IL-1,
IL-6. Sin embargo el MAP tiene la habilidad de evadir estos mecanismos de
defensa y es capaz de sobrevivir y replicarse dentro del macrfago. El principal
tipo de clulas involucradas en la respuesta inmune son los linfocitos T CD4+ y
CD8+ que secretan citoquinas como el IFN gamma (ITN- ) e interleuquinas,
importantes activadores de macrfagos para eliminar el MAP.

8
En los macrfagos bovinos infectados con MAP disminuye la expresin de
molculas del complejo mayor de histocompatibilidad clase I y clase II durante las
primeras 12 a 24 horas post-infeccin lo cual resulta en una deficiente capacidad
del macrfago para presentar los antgenos del MAP a los linfocitos T en la fase de
activacin de la respuesta inmune. 31

En la paratuberculosis bovina, la persistencia de MAP en los tejidos entricos y la

extensin asociada a la respuesta inmune del husped se cree que son factores
clave para la progresin de la enfermedad. 11

Los hallazgos patolgicos en rumiantes infectados con MAP han sido identificados
como similares a los observados en las personas infectadas con Mycobacterium
leprae. 12

Signos clnicos

El principal signo clnico de la enfermedad de Johne es la diarrea de tipo acuoso

de color gris a negro, que puede ser constante o intermitente e incluso puede no
estar presente, tpicamente, sin presencia de sangre o moco, el animal no
presenta signos de fiebre, deshidratacin o inapetencia, pero mantiene buen
apetito y posiblemente incrementa el consumo de agua, por lo cual, la enfermedad
cursa con prdida de peso, baja produccin lechera, llevando a una eventual
emaciacin que es progresiva y por ltimo, es fatal, el estado general de los
animales puede estar normal hasta desarrollar estadios terminales. 3, 5, 9, 24, 29
La mayora de los signos clnicos estn ausentes hasta los 2 o ms aos despus
de la infeccin, la cual ocurre despus del nacimiento, stos pueden ser
intermitentes con largos periodos de remisin. 5, 30

La diarrea est acompaada de perdida rpida de peso, se desarrolla edema en el

rea submandibular y en la parte ventral del torso debido a la hipoproteinemia. En
casos severos, puede presentarse marcada perdida de la masa muscular y atrofia
serosa de los depsitos de grasa corporal. 24

La enfermedad cursa con cuatro categoras o estados definidos en concordancia

con los signos clnicos:

Infeccin silente (estado I): animales de hasta dos aos de edad que no presentan
ningn signo clnico y aparentemente son iguales al resto de los animales, la
infeccin solo es detectable en sus tejidos por cultivo o examen histopatolgico y,
aunque eliminan el agente por va fecal, las cantidades de microorganismos estn
por debajo del umbral de deteccin por las pruebas de rutina.

Enfermedad subclnica (estado II): adultos portadores. Animales con infeccin

subclnica por MAP sin presencia de signos clnicos pero con niveles detectables

9
de anticuerpos contra MAP. Alteracin de la respuesta inmune celular y presencia
de otras enfermedades por la cuales se descartan de difcil diagnostico con las
tcnicas comunes.

Enfermedad clnica (estado III): se presenta despus de un periodo de incubacin

que dura entre 2 a 10 aos, incluye la prdida gradual de peso, puede presentar
diarrea intermitente. Usualmente el animal incrementa el consumo de lquidos. Los
animales raras veces permanecen en este estado por ms de 3 o 4 meses sin
progresar al estado IV y unos pocos casos regresan al estado II, en el que
permanece por un periodo indeterminado.

Enfermedad clnica avanzada (estado IV): a medida que la enfermedad progresa

se incrementa en el animal la letargia, debilidad y emaciacin. Edema
submandibular, caquexia y diarrea profusa. 31

La exacerbacin de la enfermedad clnica puede estar asociada con el proceso del

parto, bajo nivel nutricional, alto rendimiento lechero y enfermedades
concomitantes. 5

Diagnstico

El diagnstico de paratuberculosis en bovinos a travs del cuadro clnico (edema

submandibular, diarrea crnica y prdida progresiva de peso) no es difcil; sin
embargo, el diagnstico de la enfermedad en animales infectados asintomticos
es extremadamente difcil ya que no existe ningn mtodo diagnostico capaz de
detectar a todos los animales infectados de un rebao. 22

Las pruebas diagnsticas disponibles se dividen en dos grandes categoras: (1)

pruebas diagnsticas basadas en la respuesta inmune, que detectan los
anticuerpos del hospedero o la respuesta celular inmunomediada a la infeccin
con MAP. Y (2) las pruebas de deteccin del organismo, las cuales determinan la
presencia del mismo o de su ADN en muestras de tejido y materia fecal. 24

Las pruebas basadas en inmunoensayos tienen problemas en cuanto a la

especificidad y sensibilidad debido a la similitud entre M. Paratuberculosis, M.
Avimun y otras mycobacterias del medio ambiente. 261

Los inmunoensayos ms comnmente aplicados son aquellos que detectan

anticuerpos en suero o leche. Estos incluyen la prueba de fijacin de complemente
(FC), la prueba de inmunodifusin en gel agar (AGID) y la prueba de

1
ANTOGNOLI, Maria, GARRY, Franklyn, HIRST, Heather, LOMBARD, Jason, DENNIS, Michelle, GOULD, Daniel,
SALMAN, Mo. Characterizacion of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis disseminated infection in dairy
cattle and its association with antemortem test results. En: Veterinary microbiology. August 2007, vol 127, p. 300-308.

10
inmunoabsorcion ligada a enzimas (ELISA). ELISA es la prueba comercial ms
especfica y sensitiva. 24 2

La sensibilidad de ELISA depende del estado de la enfermedad, alcanzando alta

sensibilidad cuando se presenta una mayor carga bacteriana, por ejemplo en
casos severos, (a menudo en los ltimos estados clnicos) la sensibilidad es del
75% comparada con el 15% en casos leves, la especificidad de ELISA en
muestras bovinas varia del 98.9 al 99.8% mientras que en cabras el rango es de
44.6 a 97.6%. 263

Un mtodo para demostrar la presencia de MAP en cultivos de materia fecal es la

evaluacin microscpica de muestras fecales teidas con Ziehl-Neelsen en busca
de la presencia de cmulos de la bacteria acido-resistente (ZN-test). Aunque se ha
demostrado que la prueba de ELISA es superior al test de Ziehl-Neelsen para
confirmar el diagnstico presuntivo de paratuberculosis clnica. 294

Las pruebas de deteccin del organismo en muestras de materia fecal son el

cultivo y la prueba de reaccin de la cadena de polimerasa (PCR) que consiste en
detectar especficamente el elemento de insercin IS900, especifico del MAP,
aunque tambin se han descrito los genes 16S rRNA y el HspX. Estas tienen un
ventaja sobre los test de deteccin de anticuerpos porque (1) generalmente
permite la deteccin temprana en el curso de la infeccin porque la aparicin del
antgenos en la materia fecal precede la deteccin de anticuerpos; (2) permite la
cuantificacin del grado de contaminacin fecal para evaluar el impacto en la
bioseguridad de los animales y (3) definitivamente identifica MAP en el hato a
tiempo para el primer diagnstico. La desventaja con ELISA es que son ms caros
y en el caso del cultivo, requiere largos periodos de incubacin para obtener
resultados. 24 5

El cultivo bacteriano a partir de heces de animales que presenten excrecin fecal,

siegue siendo una prueba contundente para confirmar el diagnstico dada su alta
sensibilidad, sin embargo el lento crecimiento (de 12 a 16 semanas o 4 a 7 con el
mtodo BACTEC) representa un inconveniente para dar un diagnstico rpido y
oportuno. 316

2
AYELE, W, BARTOS, M, SVASTOVA, P, PAVLIK, I. Distribution of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in organs
of naturally infected bull-calves and breeding bulls. En: Veterinary microbiology. July, 2004, vol 103, p. 209-217.

3
BLOWEY, Roger. WEAVER, David. alimentary disorders. En: Color atlas of diseases and disorders of cattle. Tercera
edicin, captulo 4. Reino Unido.. Mosby. 2011, p, 57-58.

4
BOELAERT, F. WALRAVENS, K. BIRONT, P. VERMEERSCH, J. P. BERKVENS, D. GODFROID, J. Prevalence of
paratuberculosis (Johnes disease) in the Belgian cattle population. En: Veterinary microbiology, 2000, vol 77, p, 269-281.

5
BROWN, C. Corrie. BAKER, C. Dale. BARKER, K. Ian. Alimentary Sistem. En: MAXIE, M. Grant. Pathology of domestic
animals. volume 2 Fifth edition, Mosby, 2007, p, 222-224

11
Si bien es cierto existen algunos antecedentes para afirmar que la
paratuberculosis caprina tambin est presente en el pas, solo recientemente la
enfermedad ha sido descrita en caprinos lecheros, basado en antecedentes
clnicos, histopatolgicos, serolgicos y bacteriolgicos (cultivo y PCR),
constituyendo el primer caso publicado en forma oficial en Chile. 177

M. paratuberculosis puede ser cultivado de leche, heces, sangre y tejidos bovinos.

La sensibilidad depende de muchos factores como el estadio clnico de la
enfermedad, edad de la muestra y que tipo de muestra se use. 268

Impacto econmico

Los reportes de la prdida de productividad incluyen la reduccin de la produccin

lctea, incremento en el intervalo de partos, aumento de animales de descarte y
mastitis. Los costos debido a la reduccin de la productividad han sido estimados
hasta 200 dlares por vaca por ao en hatos donde la prevalencia de los casos
clnicos en vacas de descarte era > 10% 279

El impacto econmico de la enfermedad de John en un hato o en una regin es

difcil de cuantificar debido a los diversos factores de la produccin que se afectan,
como la produccin lctea, la condicin corporal, la fertilidad, la perdida de
animales del hato, etc. Y principalmente debido a la naturaleza de la enfermedad
al ser, en la mayora de los casos una infeccin silenciosa e invisible. 3110

El mecanismo biolgico para la reduccin de la fertilidad en vacas positivas con

paratuberculosis est basado en la relacin entre el balance energtico y la
reproduccin. Las vacas que estn infectadas con M paratuberculosis pueden
estar en un mayor riesgo de presentar balance energtico negativo debido a la
reduccin de la absorcin intestinal de nutrientes. 1411

6
CALDERON, Johan, GONGORA, Agustn. Similaridades clinicopatolgicas entre paratuberculosis y enfermedad de
Crohn. posible vnculo zoontico?. En: Rev MVZ Crdoba. Marzo, 2008., vol 13 (1), p. 1226-1239.

7
CIRONE, K. MORSELLA, C. ROMANO, M. PAOLICCHI, F. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: presencia en
los alimentos y su relacin con la enfermedad de Crohn. En: Revista argentina de microbiologa, 2007, vol 39. P. 57-68.
8
COLLINS, Michael. Mycobacterium paratuberculosis: A potencial Food-Borne Pathogen?. En: Journal Dairy Science, 1997,
vol 80, p, 3445-3448.
9
Cynthia, M. K. Trastornos generalizados. En: Manual Merck de veterinaria. Sexta edicin. Barcelona (Espaa),
Ocano, 2007, p. 600-603.

10
DELGADO, F. ETCHECHOURY, D. GIOFFRE, A. PAOLICCHI, F. BLANCO, F. MUNDO, S. ROMANO, M.I.
Comparison between two in situ methods of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis detection in tissue samples
from infected cattle. En: Veterinary microbiology, 2009, vol 134. p. 383-387.

11
DENNIS, M, ANTOGNOLI, M, GARRY, F, HIREST, H, LOMBARD, J, GOULD, D, SALMAN, M. Association of severity
of enteric granulomatous inflammation with disseminated Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis infection
and antemortem test results for paratuberculosis in dairy cows. En: Veterinary microbiology. February, 2008, vol 131, p.
154-163.

12
En Estados Unidos las prdidas econmicas para la ganadera de leche, fluctan
entre 200 y 250 millones de dlares anuales y son atribuidas a reduccin en la
produccin, los costos de reemplazo de las vacas, costos del veterinario y de los
tratamientos. En razn a las implicaciones econmicas, los gobiernos de Australia,
Estados Unidos y la Unin Europea, desarrollan en la actualidad programas
nacionales de control de la enfermedad, cuyos objetivos incluyen: incrementar la
participacin del productor, extender el conocimiento sobre la paratuberculosis,
mejorar la supervisin e informacin y desarrollar un plan rpido de erradicacin 612

Mediante estudios realizados en otros pases, se estim que la reduccin en la

produccin de leche se aproximara a un 4% del rendimiento total. Investigaciones
realizadas en INTA, Argentina, estimaron que esta disminucin alcanzara hasta
un 19%, y que las prdidas econmicas directas e indirectas en la produccin
pecuaria se aproximaran a 22 millones de U$S para explotaciones de bovinos
destinados a carne y hasta 6,3 millones de U$S para las cuencas lecheras de la
provincia de Buenos Aires. 713

Salud pblica 14

La evidencia disponible en la actualidad no es suficiente para confirmar o refutar si

tiene un rol causal en al menos algunos casos de la enfermedad. 1, 1815

La enfermedad de Crohn (EC) es una afeccin intestinal crnica, inflamatoria y

granulomatosa de los humanos, que afecta principalmente el leon terminal y el
colon, se caracteriza por episodios intermitentes de recada y remisin; su nombre
deriva de la descripcin hecha por Crohn en 1932 de 8 casos de iletis regional;
junto con la colitis ulcerativa (CU) se denominan enfermedades intestinales
inflamatorias crnicas (EII). 616

12
FOSGATE, Geoffrey, OSTERSTOCK, Jason, BENJAMIN Lisa, DOBEK Gerogina, ROUSSEL, Allen. Preleminary
investigation of a humoral and cell-mediated immunity ratio for diagnosis of paratuberculosis in beef cattle. En:
Preventive veterinary medicine. June, 2009, vol 91, p. 226-233.

13
GONDA, M, CHANG, Y, SHOOK, G, COLLINS, M, KIRKPATRICK, B. Effect of Mycobacterium paratuberculosis infection
on production, reproduction, and health traits in US Holsteins. En: Preventive veterinary medicine. January, 2007, vol 80, p.
103-119

14
JOHNSON-IFEARULUNDU Y, KANEENE, J, SPRECHER, D, GARDINER, J, LLOYD, J. The effect of subclinical
Mycobacterium paratuberculosis infection on days open in Michigan, USA, dairy cows. En: Preventive veterinary
medicine. May, 2000, vol 46, p. 171-181.

15
JUSTE, Ramon. Current strategies for erradication of paratuberculosis and issues in public health. En: Veterinary
inmunology and inmunopatology, 2012, vol 148, p. 16-22.

16
KALIS, C, COLLINS, M, BARKEMA, H, HESSELINC, J. Certification of herds as free of Mycobacterium paratuberculosis
infection: actual pooled faecal results versus certification model predictions. En: Preventive veterinary medicine. July, 2004,
vol 65, p. 189-204

13
Durante el transcurso de esta patologa, M. avium subsp. paratuberculosis puede
parasitar las clulas inmunorreguladoras en el intestino de personas con
susceptibilidad adquirida o heredada, lo que resultara en una inmunodepresin
del revestimiento mucosal del intestino y la aparicin de sntomas como: diarrea
profusa, inflamacin de nodulos linfticos e intestino, depresin inmunolgica
general y debilitamiento. Otros sntomas asociados a la EC son dolor abdominal,
fiebre leve y persistente, poco apetito, prdida de peso, ruidos abdominales, fatiga,
sangrado intestinal y heces ftidas. Se han notificado molestias en la piel,
articulaciones, ojos, hgado, retraso en la aparicin de la pubertad y problemas de
crecimiento y, finalmente, complicaciones como obstruccin intestinal, lceras y
fstulas717

En vista de esta asociacin sin embargo, es importante determinar si las

condiciones especficas de pasteurizacin de la leche inactiva nmeros suficientes
de la bacteria para prevenir la transmisin del organismo a los seres humanos en
la leche pasteurizada adecuadamente y teniendo en cuenta que esta bacteria
tiene la facultad de estar presente en carne cruda para el consumo humano,
puede ser una fuente de exposicin del MAP a la poblacin 1, 1818

En una compilacin de informacin de M. paratuberculosis que ha sido publicada

por la federacin internacional de lechera (IDF, 2001). En un estudio de mercado
se report que muestras de leche pasteurizada presentaban clulas vivas de M.
Paratuberculosis en un 2,1% y 1,9% en muestras de leche cruda, en Inglaterra se
supone que la pasteurizacin comercial (altas temperaturas-corto tiempo HTST)
es insuficiente para inactivar esta bacteria, aunque no se proporciona informacin
de los nmeros de esta presentes en las muestras de leche cruda o pasteurizada.
1819

En 1993, Chiodini y Hermon-Taylor en reportes de estudios de laboratorio

demostraron que M. Paratuberculosis era ms resistente al calor que
Mycobacterium bovis, uno de las bacterias patgenas usadas para definir el
tiempo de pasteurizacin y los estndares de temperatura 8 20

Teniendo en cuenta el potencial zoontico de M. avium subsp. paratuberculosis y

su importancia desde el punto de vista de la salud pblica, deberan enfatizarse

17
KRUZE, J. SALGADO, M. COLLINS, M. T. Paratuberculosis en rebaos caprinos chilenos. En: Arch. Med. Vet, 2007, vol
39, no 2, p. 147-152

18
LUND, Barbara, GOULD, Grahame, RAMPLING, Anita. Pasteurization of milk and the heat resistance of Mycobacterium
avium subsp. paratuberculosis: a critical review of the data. En: International Journal of food microbiology. February, 2002,
vol 77, p. 135-145

19
MCKENNA, S, KEEFE, G, BARKEMA, H, MCCLURE, J, VANLEEUWEN, J, HANNA, P, SOCKETT, D. Cow-Level
prevalence of Paratuberculosis in Culled Dairy in Atlantic Canada and Maine. En: Journal Dairy science. April, 2004, vol 87,
p. 3770-3777

20
NIELSEN, Soren. Dairy farmers reasons for participation in the Danish control programme in bovine paratuberculosis. En:
Preventive veterinary medicine. December 2010, vol 98, p. 279-283.

14
los controles en los sistemas sanitarios pecuarios, tanto en rodeos bovinos
lecheros como en industrias lcteas, con el objetivo de proteger a los
consumidores contra el posible riesgo de infeccin 21.

Asimismo, deberan desarrollarse mtodos de deteccin rpidos, confiables y

accesibles a la mayora de los laboratorios e industrias de alimentos para
identificar poblaciones infectadas, reas de riesgo y luego aplicar medidas de
control ms eficientes, tanto en la produccin primaria como en la elaboracin o
procesado de alimentos722

Prevencin y control23

No existe tratamiento para la enfermedad y el control se hace difcil debido a los

largos periodos de latencia de la enfermedad 124

En varios pases desarrollados se invierte mucho dinero y esfuerzo en la prctica

de programas de control, certificacin de rebaos y evaluacin de progresos.
Estos proyectos se fundamentan en la deteccin de anticuerpos contra MAP
mediante ELISA, la cual ha sido reconocida como la herramienta diagnostica de
mayor impacto en muchas regiones y esquemas de control contra la
paratuberculosis2825

Se debe implementar un plan especfico adaptado individualmente, pero en

general, los puntos de control claves estn en los cuidados de los terneros,
manejo de la alimentacin (calostro y leche) e instalaciones para los terneros,
especialmente cuando pueden estar expuestos a las heces de vacas adultas
infectadas, o a superficies contaminadas con materia fecal, por lo cual es
importante identificar y separar las madres infectadas del resto de los animales, de
igual forma los nacimientos deben realizarse en un ambiente limpio y seco. 31, 2426
21
PINEDO, Pablo. BUERGELT, Claus. DONOVAN, G. Art. MELENDES, Pedro. MOREL, Laurence. WU, Rondling.
LANGAEE, Taimour. RAE, D. Owen. Candidate gene polymorphisms (BoIFN, TLR4, SLC11A1) as risk factors for
paratuberculosis infection in cattle. En: Preventive veterinary medicine, 2009, vol 91, p, 189-196.

22
PRADERAS, M. KRUZE, J. VAN, SCHAIK, G. Sensibilidad del cultivo de pool fecal para detectar infeccin por
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en rebaos bovinos de leche y su relacin con la prueba de ELISA. En:
Arch. Med. Vet, 2008, vol 40, p, 31-37

23
SIGURDARDOTTIR, Olof. VALHEIM, Mette. PRESS, Charles. Establishment of Mycobacterium avium subsp.
paratubreculosis infection in the intestine of rumiants. En: Advanced drug delivery reviews, 2003, vol 56 p. 819-834

24
SMITH B. y JONES Samuel. Diseases of the alimentay tract, En: Large animal internal medicine. Quinta edicin. E.E.U.U.
Mosby. 2009, p, 834-837

25
STABEL J. R; Johnes disease and milk: Do consumers Need to Worry?. En: Journal Dairy Science. September, 1999, vol
83, p. 1659-1663

26
TIMMS, Verlaine. GEHRINGER, Michelle. MITCHELL, Hazel. DASKALOPOULOS, George. NEILAN, Brett. How
accurately can we detect Mycobacterium avium subsp. paratuberculos infection?. En: Journal of microbiology methods,
2011, vol 85, p, 1-8

15
Se debe retirar del hato los animales que sean positivos para evitar la
diseminacin de la enfermedad, adems de mantener los utensilios de ordeo
limpios y desinfectados 3127.

Los factores asociados con una reduccin en la prevalencia de infeccin incluyen

la aplicacin de cal a las zonas de pastoreo, y limpiar el corral de maternidad
despus de cada uso 2728.

La primera vacunacin contra paratuberculosis fue descrita en 1926. Una vacuna

efectiva, debe tener la capacidad de inducir la respuesta mediada por clulas de
manera que inhiba la implantacin del bacilo en la puerta de entrada del intestino.
La vacunacin se recomienda como una medida para reducir la enfermedad en los
hatos en los que las prcticas de manejo no se puedan implementar y en muchos
pases el uso de las vacunas se restringe a los hatos infectados. Sin embargo, a
pesar de que la vacunacin reduce el nmero de animales que desarrollan la
enfermedad clnica, reduce el nmero de animales que excretan cantidades
detectables de MAP, y reduce el nmero de animales con infeccin intestinal
detectable, no es completamente efectiva para prevenir la enfermedad. 29

Las vacunas varan de organismos muertos a vivos atenuados con o sin

adyuvante principalmente el aceite mineral. La vacunacin a terneros menores de
un mes de edad se reporta como eficaz para reducir la incidencia de la
enfermedad pero no lo es para eliminar la infeccin. Algunos autores han
desarrollado sub-unidades vacunales y vacunas con ADN recombinante con
resultados promisorios, y con la posibilidad de diferenciar animales naturalmente
infectados de animales vacunados. 3130

Se necesita ms investigacin para cuantificar los riesgos de la exposicin

humana a este agente a travs del consumo de tejidos animales, sobre todo si el
MAP se determina que es un agente causal de la enfermedad de Crohn. 1131
27
TIWARI, A, VANLEEUWEN, J, DOHOO, I, KEEFE, G, HADDAD, J, SCOTT, H, WHITING, T. Risk factors associated with
Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis seropositivity in Canadian dairy cows and herds. En: Preventive
veterinary medicine. June, 2008, vol 88, p. 32-41

28
VILLALOBOS, Alfredo, RODRIGUEZ, Nailet, RAMIREZ, Luis, FARIA, Nelba, URDANETA, Merilio, BUSTOS, Ana,
NAVA, Sunny, OCANDO, Julio, SARAS, Gladys, RAMIREZ, Disney. Infeccin por Mycobacterium avium subsp.
Paratuberculosis EN UN REBAO CRIOLLO LIMONERO. En: Revista cientfica FCV-LUZ. Octubre, 2008, vol XIX, No
6, p. 555-565

29
WEBER, M, VERHOEFF, J, SCHAIK, C, MAANEN, C. Evaluation of Ziehl-Neelsen stained faecal smear and ELISA as
Tools for surveillance of clinical paratuberculosis in cattle in the Netherlands. En: Preventive veterinary medicine. 2009, vol
92, p. 256-266

30
YOO, Han San. SHIN, Sung Han. Recent research on bovine paratuberculosis in South Korea. En: Veterinary
inmunology and inmunopatology, 2012, vol 148, P, 23-28.

31
ZAPATA RESTREPO, Margarita. RODAS GONZALEZ, Juan. MALDONADO ESTRADA, Juan. Paratuberculosis
bovina: conocemos la situacin real de la enfermedad en la ganadera colombiana?. En: Revista colombiana de

16
3.2 OBJETIVOS

Objetivo general

Determinar la seroprevalencia de Mycobacterium avium subsp.

paratuberculosis (MAP) en hatos lecheros del departamento de Nario

Objetivos especficos

Correlacionar la seroprevalencia con la procedencia de los animales y

caractersticas como la edad y la raza.

Especificar la presencia de la enfermedad en bovinos lecheros y encontrar

un vnculo entre las variables de inters y su respectiva sintomatologa
clnica.

3.3 METODOLOGA

rea de Estudio

El estudio se realizara en los hatos lecheros de los principales municipios de la

cuenca lechera del departamento de Nario, representados en Tquerres,
Guachucal, Pupiales y Pasto.
El municipio de Guachucal est situado al sur del departamento de Nario a 99 km
de la ciudad de Pasto. La mayor parte de su territorio es montaoso, su piso
trmico es propiamente pramo y est a una altura de 3.180 msnm y una latitud
norte de 0 57 50" y a 77 43 50" de longitud al oeste de Greenwich. Es el
segundo municipio ms alto de Colombia despus de Vetas.
Pasto se ubica 0112N 7716de longitud al oeste de Greenwich, a una altitud de
2.527 msnm, se encuentra al pie del volcn Galeras, perteneciendo a un
ecosistema de bosque seco montano bajo segn la clasificacin de Holdridge.
Tquerres se encuentra ubicado al suroccidente del departamento de Nario, a 1
4 59 Norte, 77 37 1 Oeste de Greenwich, a una altitud de 3104 msnm, con
temperatura media de 11 C.

ciencias pecuarias, 2008, vol 21, p, 420-435.

17
Pupiales est ubicado al sur del departamento de Nario, entre los 0 54de
Latitud norte y 77 39 de longitud al Oeste de Greenwich. En la cordillera de los
Andes; a 7 km. de Ipiales, 10 km. de la frontera con la repblica de Ecuador, a
91km de Pasto.

Seleccin de Animales
Para este estudio se incluirn todos los bovinos mayores de 3 aos de edad
dentro de los predios lecheros de la zona que deseen participar en el estudio.

Se realizara un muestreo estratificado proporcional por municipio, basado en la

poblacin de animales mayores de 3 aos, establecido segn el censo del ltimo
ciclo de vacunacin de Aftosa del 2012, as:

MUNICIPIO HEMBRAS MACHOS TOTAL

MAYORES DE MAYORES DE
TRES AOS TRES AOS
Guachucal/Tquerres 15478 118 15596
Pasto 12813 433 13246
Pupiales 9263 65 9328

Para Calcular el tamao de muestra se utiliz el componente Stat Calc para

estudios transversales del programa epidemiolgico Epi Info 7, y se consideraron
los siguientes parmetros: tamao de la poblacin 38170, probabilidad de
ocurrencia de la enfermedad (Frecuencia esperada) 50%, ya que no existen
estudios previos en el pas o la zona que nos permitan extrapolar esos resultados
para el presente estudio, lmites de confianza 10%, Nivel de confianza 95%.

El tamao de muestra calculado es de 960 bovinos, los cuales se distribuyeron

proporcionalmente en cada municipio de la siguiente forma

MUNICIPIO TAMAO DE MUESTRA PROPORCIN

Guachucal/Tquerres 393 41%
Pasto 336 35%
Pupiales 231 24%

Tcnica de Anlisis

Deteccin de anticuerpos

18
Se utilizaran muestras del banco de sueros de sangre bovinos pertenecientes al
grupo de investigacin de BUIATRIA del programa de Medicina Veterinaria de la
Universidad de Nario

Para la identificacin de anticuerpos mediante el kit diagnstico ID Screen

Paratuberculosis Indirect ELISA kit - screening format, siguiendo las
recomendaciones del fabricante, lo cual permitir identificar a los animales que
desarrollen anticuerpos para MAP, clasificndolos como positivos.

Debido a que el objetivo es determinar la relacin de las variables de inters y la

presencia del microorganismo, la prueba adecuada para realizar el anlisis de
datos es la de chi-cuadrado utilizando un intervalo de confianza del 95%.

3.4 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Meses
ACTIVIDAD 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Adquisicin y preparacin
de sueros del grupo de
investigacin BUIATRIA
Realizacin de anlisis de
sueros con la tcnica de
ELISA
Presentacin informe
Discusin de resultados.
Laboratorio
Estudio de Bibliografa
Preparacin artculo
Presentacin artculo

19
 4. PRESUPUESTO

VALOR/
VALOR TOTAL
MATERIAL CANTIDAD UNIDAD
(PESOS)
(PESOS)
Resma de papel tipo carta 2 $10.000 $20.000
Impresiones 100 $ 200 $20.000
Fotocopias 200 $ 50 $10.000
Cosedoras 1 $ 6.000 $6.000
Ganchos de cosedora 2 $ 3.000 $6.000
Lapiceros 3 $ 1.000 $3.000
Marcador y resaltador 2 $ 1.600 $. 3.200
TOTAL $68.200

20