TCNICA DE CULTIVO ESTRIL

El alimento de los hongos (ms apropiadamente llamado sustrato) es muy parecido al alimento para los
humanos: una mezcla nutritiva que contiene un balance de carbohidratos, protenas, minerales y vitaminas.
Igual que nuestro alimento, esta mezcla es tambin exquisita para una gran variedad de microorganismos,
como lo puede ser un pan de molde olvidado algunos das sobre la cocina. Pero a diferencia de los humanos,
los hongos son microorganismos y tienen que competir por los alimentos con otros microorganismos del
mismo entorno. Aqu las bacterias y los mohos llevan la ventaja en la competicin, ya que son capaces de
reproducirse miles incluso millones de veces ms rpido que el promedio de las dems especies. Cualquier
sustrato que contenga una sola espora de moho o una sola bacteria acabar pronto enmohecido y blando.

Es ms, un centmetro cbico de aire normal en una habitacin normal contiene ms de 100.000 partculas.
Una lluvia de esporas de mohos invisible y silenciosa, de partculas de polvo y granos de polen estn
constantemente asentndose en cada una de las superficies horizontales de la casa, sin importar lo
escrupulosamente limpia que podamos creer que pueda estar.
La nica forma de evitar que estos bichos secuestran nuestros cultivos de hongos es asegurarse de que
ninguno de ellos llegue primero. Existen dos mtodos bsicos para conseguirlo: matar bien todo tipo de mohos
y bacterias que estn ah para empezar, y excluir todo el resto que pueda quedar en el aire trabajando en un
ambiente autnticamente limpio (o estril). La mejor forma de eliminar todo tipo de contaminantes de
nuestros materiales ser esterilizndolos en una olla a presin o autoclave, ya que ningn ser viviente ser
capaz de sobrevivir ni a las altas temperaturas ni a las altas presiones de su interior. Crearemos adems un
lugar estril filtrando el aire de nuestra rea de trabajo y/o esterilizados con desinfectantes qumicos.

Estos dos mtodos constituyen la tcnica de cultivo estril o asptico, concepto primordial que, sin duda, se
deber tener bien aprendido si se quiere tener xito a la hora de cultivar hongos. Para enfatizar quisiera retirar
esto: la tcnica de cultivo estril es lo ms importante que se aprender de este texto. Si no se entiende esto,
ninguno de los mtodos de cultivo funcionar, aunque se sigan estrictamente las instrucciones. Con mucha
suerte, a lo mejor, se logra un par de setas, pero seguro que lo que se conseguir ser un deslumbrante pastel
de hongos azules, verdes y negros, o una viscosa, apestosa y brillante coleccin de bacterias. Muchos de los
cultivadores que lo ha intentado han fallado en este punto, y los que obtuvieron xito aprendieron el camino
de la tcnica de cultivo estril. Espero que los mtodos descritos enseen el camino ms fcil, ahorrando
mucho tiempo, dinero y sufrimiento.

LIMPIAR REA DE TRABAJO

La primera tarea ser la de preparar el rea de trabajo. Lo ideal sera que se dedicase una habitacin u otro
espacio cerrado exclusivamente para los proyectos seteros, como una habitacin de sobra o algn bao para
invitados que no se use. Si no se dispone de tal espacio, entonces la mayor parte del trabajo podra realizarse
en una cocina de tamao medio, pero en la que se deber llevar a cabo una labor de mantenimiento y limpieza
inmaculada. La cocina compite con el bao por ser los espacios de la casa as desastrosos, ya que son los ms
activos biolgicamente hablando y aquellos donde los niveles de esporas de mohos suelen ser muy altos. El
rea de trabajo debera disponer de una mesa amplia, preferentemente con una superficie bien lisa y fcil de
limpiar. Las alfombras son autnticos depsitos de esporas y polvos, millones de ellos son sacudidos al aire
con cada uno de nuestros pasos sobre ellas, por lo que deben evitarse por completo. Los muros deberan estar
limpios y cualquier otro espacio y superficie de la habitacin debera limpiarse a conciencia y en profundidad.
Claramente no se puede desinfectar todas las superficies cada vez que se necesite usarlas, pero aconsejamos
llevar a cabo, de forma peridica, una limpieza a fondo y desinfectar todo lo que se pueda antes de cada uso.

El espacio debe estar libre de corrientes de aire para que el movimiento del mismo alrededor del cultivo sea
mnimo. Las ventanas y las puertas han de estar cerradas mucho antes de empezar a trabajar. Una manera de
trabajar en un espacio cerrado que es desinfectarle, es hacerse de una glove box o una clean box que
puede ser desinfectable al mximo y sin corrientes de aire.

HIGIENE PERSONAL
Ya limpio y preparado el espacio, es el momento de considerar la otra fuente primaria de contaminantes del
laboratorio provisional: nosotros. El cuerpo, el cabello y la ropa son una autntica selva amaznica de
bacterias, virus y hongos, todos invisibles y la mayora inocuos para nosotros y para los dems, pero letales
para los cultivos de hongos. Debemos estar lo ms limpios posibles: ducharse y secarse con toalla limpia recin
lavada, y ponerse ropa limpia inmediatamente antes de trabajar. No usar poleras o camisas/blusas manga
larga o prendas anchas que puedan entorpecer mientras se trabaja. Atarse pelo, lavar y frotar bien las manos
y antebrazos con alcohol isoproplico 75%.
HIGIENE MENTAL
Una vez que se ha preparado el lugar de trabajo y el cuerpo, hay que atender al estado mental por un
momento antes de trabajar. La higiene mental es tan importante como la higiene personal, ya que el estado
mental va a influir en cmo se trabaja. Si se est distrado o con prisas, probablemente se cometan fallos y
acabe colndole algn contaminante al cultivo. Los movimientos deben ser cautos, medidos e intencionados.
Movimientos innecesarios, bruscos o entrecortados, slo crearn corrientes de aire indeseables. Hay que
tomarse su tiempo. Si se tiene prisa, ralentizar, o apartar el proyecto unas horas o unos das hasta que se
tenga el tiempo que el mismo necesita. Advertir al resto de personas o animales que vivan en la casa de la
prohibicin de entrar a la habitacin.

Es importante sealar que el cultivo de Psilocybe cubensis est sancionado en la ley N 20.000, al estar los
hongos y setas de la especie Psilocybe en la lista nmero uno como especie vegetal ilcita (micelio y setas).

El kit de cultivo viene con todo lo necesario para cultivar de forma sencilla en casa (para uso microscpico, no
para consumo). Consiste en un tupper con sustrato fortificado y con ph ajustado para que germine y colonicen
varios tipos de hongos (arroz salvaje y bulk), vial de esporas o micelio (dependiendo del hongo), jeringa 5cc,
esterilla calefactora de 5W y lo necesario para la fructificacin.
INSTRUCCIONES RPIDAS
Higiene
Limpiar rea de trabajo segn instrucciones de tcnica de cultivo estril mencionadas ms arriba. Cloro,
alcohol 95, Lysoform, ninguna medida sobra y nunca sers lo suficientemente precavido.

Para garantizar esta tcnica de cultivo, este mtodo se realiza mejor en una glovebox o una cleanbox.

Fabricacin de jeringa desde vial de

Limpiar el headspace del sello del vial de esporas con pad de alcohol o alcohol 95.
Utilizando jeringa estril, introducir la jeringa por el espacio en el sello del vial para retirar la
suspensin acuosa de esporas.

Inoculacin
1. Dejar contenedor del kit en una superficie de trabajo limpia, junto con la jeringa de esporas y un
mechero de alcohol.
2. Quitar tapa jeringa y luego mantener la punta de la aguja en la llama del mechero hasta que se vuelva
roja (preservar la punta de plstico de la jeringa lejos de la llamada y siempre poner sumo cuidado
cuando se trabaja con alcohol cerca de una llama). Dejar que se enfre la punta de la aguja durante
unos segundos antes de utilizarla.
3. Con la punta de la aguja ya esterilizada (no queremos meter contaminantes) inyectar por el filtro
en forma de abanico la suspensin de acuosa completa. Idealmente apuntar hacia los bordes.
4. Marcar el exterior del contenedor con la informacin pertinente.
Incubacin
El spawn ha de ser incubado en un lugar templado, sin luz y libre de suciedad a una temperatura de entre 18C
y 28C (ideal 27C). Si la temperatura de la habitacin est dentro de este rango, simplemente ponerlos en
una caja limpia (caja de empaque). Esto debera ser suficiente, si no, se ha dispuesto del heatmat de 5W
dimmeable para llegar a la temperatura (kit invierno), se debe situar el heatmat bajo la caja de cartn, o
dentro de la caja de cartn con un par de lpices para elevar el contenedor. Poner al mnimo y con un
termohigrmetro o termmetro ambiental controlar dimmer para llegar a la temperatura ideal. Los hongos
en actividad de crecimiento desprenden calor mientras consumen el sustrato. Hay suficiente actividad dentro
de un contenedor como para elevar su temperatura varios grados por encima de la temperatura ambiente. Es
mejor pecar de cautos por esta razn y asegurarse que no se sobrecaliente evitando colocar los tarros en
zonas que excedan los 28.

En una semana, ms o menos, se debera empezar a ver signos de germinacin de las esporas en los
contenedores. Buscar pequeos puntitos blancos compactos enmaraados, generalmente cerca de la base de
los tarros, directamente debajo de los puntos de inoculacin.

Con el tiempo, esas colonias irradiarn hacia afuera formando las primeras esferas de micelio. A partir del
dcimo da aproximadamente, las esferas comenzarn a unirse unas con otras y el contenedor acabar
colonizndose totalmente.

Fructificacin
En el momento que ha llegado al 100% el micelio y libre de contaminaciones. Ha llegado el momento de
fructificar.

Romper sello de contenedor y meterlo en la bolsa de fructificacin. Asegrate que la bolsa est recta y con la
apertura hacia arriba. La bolsa hace las veces de un contenedor de microclima con un correcto intercambio
de gases gracias a su filtro. Pon la caja en un sitio templado (22C 25C) con luz natural o, en su defecto, luz
fluorescente azul, no colocar directamente al sol o encima del heatmat. Deja la bolsa cerrada, ventila 3 veces
al da con la tapa del kit.

La evaporacin, colonizacin completa y el continuo intercambio de aire fresco son los factores ms
importantes para la formacin de primordios. En 7-10 das aparecern los primeros hongos, los cuales se
vuelven adultos al cabo de una semana aproximadamente. Normalmente, y dependiendo de las condiciones
que se den, el kit dar 1 a 3 cosechas.

Casing
Muchas de las especies de Psilocybes, incluida el Psijlocybe cubensis, fructificarn en forma abundante solo si
son recubiertas por una capa de tierra o similar que llamaremos capa de cubierta o casing. La tierra que se
usa para recubrirlas suele estar compuestas por materiales sin nutrientes, pero con altas capacidades de
retencin de agua, como la turba o la vermiculita.

Debido a su capacidad de retencin de agua, esta capa de cobertura evita que el sustrato se seque; lo que
crea un microclima en el que los primordios frgiles crecen. La capa de cubierta absorbe y cede agua como
una esponja, lo que permite al cultivador mantener fcilmente el nivel ptimo de humedad en el lecho
minimizando el riesgo de inundar y ahora el hongo
De todas formas, si queremos ser muy cuidadosos o pensamos que existe la posibilidad de infecciones en la
capa de cobertura, una rpida pasteurizacin puede ser til. Un mtodo simple para pasteurizar pequeas
cantidades es usar el microondas. Para ello, colocar la capa de cobertura hmeda preparada en un recipiente
resistente al calor o en una bolsa (polipropileno, o bolsas grandes para hornear y meterla en el microondas al
mximo durante 15 minutos. Asegurarse de dejar la bolsa o recipiente abiertos para evitar que rebosen. Dejar
que la bolsa asiente 10 minutos y luego volver a ponerla 15 minutos ms en el microondas.

Si no disponemos de microondas, se podran esterilizar tambin en una olla a presin a 15 psi durante 45
minutos o en un horno a 180C durante dos horas. Dejar que se enfren completamente antes de utilizarlas.
Tendremos que volver a aadir agua para que la capa de cobertura tenga su capacidad de absorcin al
mximo, ya que algo de humedad se habr escapado en el proceso por el calor.

Preferimos la frmula de cobertura con vermiculita pura. Comparndola con otros materiales de
recubrimiento, la vermiculita tosca es muy fcil de retirar de la base de la seta cosechada. Hacer una capa de
cobertura con la vermiculita pasteurizada o esterilizada sobre el sustrato justo al momento de pasar a
fructificar,