R

E
L
A
T

R
I
O

C
Relatrio Tcnico de Estgio
N
I
Polmeros Integrado
C
O

D
E
Aluno: Hlder Brinate Castro

E
S Orientador: Mrcio Martins Loureiro
T

G
I
O Duque de Caxias, 23 de setembro de 2013
R
E
LL
A
A
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N Estudo da Enzima Hexocinase em
AI
CL Linhagens de Clulas Normais e
O
D
Cancerosas de Pulmo
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G Duque de Caxias, 23 de setembro de 2013
I
O
R
E

A
A
LL
Ficha Tcnica
TT

R
R
I
IO
O Instituio: Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ),
T
F Centro de Cincias da Sade
CI
N
AI
Setor da Instituio: Instituto de Bioqumica Mdica, Laboratrio
CL de Biologia Molecular do Cncer
O
D
D
E Responsvel da Instituio pelo Estgio: Nvea Dias Amodo
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E
LL
A
A
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
Introduo
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Introduo
TT

R
R
I
IO Cncer
O
T
F O cncer uma doena caracterizada pelo desenvolvimento
CI
N desordenado de clulas que invadem tecidos e rgos e que
AI podem ainda espalhar-se para outras regies do corpo
CL
O (metstase), agravando o caso clnico da doena.
D
D
E
E O seu desenvolvimento atribudo a alteraes no cido
E desoxirribonucleico (DNA) dos genes de uma clula normal.
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Introduo
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
A parte superior do esquema mostra
TT
a diviso celular normal. E a inferior, o

que ocorre no cncer, quando a

G
G diviso de clulas tumorais
I descontrolada.
O
R
E

A
A
LL
Introduo
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

Distribuio proporcional dos dez tipos de cncer mais incidentes

G
G estimados para 2012, exceto pele no melanoma (INCA)
I
O
R
E

A
A
LL
Introduo
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

Distribuio proporcional dos dez tipos de cncer mais incidentes

G
G estimados para 2012, exceto pele no melanoma (INCA)
I
O
R
E

A
A
LL
Introduo
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Introduo
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E
LL
A
A
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O Atividades Realizadas
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Atividades Realizadas
TT

R
R
I
IO
O
T
Linhagens Celulares Analisadas e Estudas
F
CI
N
AI Clulas de Pulmo Transformadas Clulas de Pulmo Normais
CL A549 BEAS
O
D H460 (metasttica)
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Atividades Realizadas
TT

R
R
IO
I Expresso Gnica
O
T
F
CI
N
AI
CL
O Extrao de
D RNA para a PCR e Gel Real Time
D
E
E Sntese de de Agarose PCR
E
E cDNA
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Atividades Realizadas
TT

R Polymerase Chain Reaction (PCR)

R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Atividades Realizadas
TT

R
R
I
Polymerase Chain Reaction (PCR)
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Atividades Realizadas
TT

R
R
IO
I Atividade Enzimtica: Hexocinase
O
T
F
CI
N
AI
CL
O Extrao das
D Atividade da
D fraes
E Enzima
E mitocondriais e
Hexocinase
E
E citoplasmticas
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Atividades Realizadas
TT

R
R
IO
I Atividade Enzimtica: Hexocinase
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E
LL
A
A
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
Resultados e Discusses
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Resultados e Discusses
TT

R
R
IO
I Expresso Gnica
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

Foto de um gel de agarose corado com brometo de etdio e visualizado em

G
G transluminador. 1) A549-; 2) A549+; 3) BEAS-; 4) BEAS+; 5) H460-; 6) H460+;
I 7) LDH-; 8) LDH+; 9) Gene Ruler 100 bp.
O
R
E

A
A
LL
Resultados e Discusses
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G Grfico da expresso gnica da enzima hexocinase I nas linhagens celulares A549, BEAS e H460.
I RP32 foi utilizado para normalizar o contedo de cDNA. Valores representam mdia erro. N (A549
O e H460) = 4; N (BEAS) = 2
R
E

A
A
LL
Resultados e Discusses
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G Grfico da expresso gnica da enzima hexocinase II nas linhagens celulares A549, BEAS e H460.
I RP32 foi utilizado para normalizar o contedo de cDNA. Valores representam mdia erro. N
O (A549 e H460) = 3; N (BEAS) = 2
R
E

A
A
LL
Resultados e Discusses
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G Grfico comparando a expresso das isoformas I e II da enzima hexocinase nas linhagens celulares
I A549, BEAS e H460. RP32 foi utilizado para normalizar o contedo de cDNA. Valores representam
O mdia erro.
R
E

A
A
LL
Resultados e Discusses
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I Atividade da HK nas fraes mitocondrial e citoplasmtica. Valores representam mdia erro; N
O (A549 cit e mit e H460cit e mit) = 4, N (BEAS cit e mit) = 2.
R
E

A
A
LL
Resultados e Discusses
TT

R
R
I
IO
O
T Os resultados sugerem uma diferenciao entre clulas
F normais e de cncer de pulmo quanto atuao das
CI
N Hexocinases I e II no metabolismo glicoltico.
AI
CL
O H poucas pesquisas e estudos sobre o comportamento da
D enzima hexocinase em cnceres, o que justifica a
D
E
E necessidade de ensaios mais analticos que possam
E comprovar o observado.
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E
LL
A
A
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
Consideraes Finais
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E

A
A
LL
Consideraes Finais
TT

R
R
I
IO Consolidao de diversas teorias aprendidas durante o curso,
O principalmente aquelas relacionadas s disciplinas Fsico-Qumica I e II e
T Anlise e Caracterizao de Polmeros I;
F
CI
N A rotina de realizao de todos os experimentos abordados durante o
AI relatrio e outros, como o preparo de diversas solues, Western Blotting,
CL entre outros possibilitou uma melhoria em minhas habilidades tcnicas e
O
em meu desempenho em aulas laboratoriais. Construiu-se, assim, um perfil
D
D tcnico e profissional;
E
E
E Minha mente comeou a funcionar segundo os princpios do mtodo
E
SS cientfico;
TT

Compreenso da importncia da enzima hexocinase em cnceres como

G
G
I
possvel alvo para tratamento.
O
R
E
LL
A
A
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
Referncias Bibliogrficas
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
I
O
R
E
LL
Referncias
A
A
TT

Bibliogrficas
R BRASIL. Instituto Nacional de Cncer Jos Alencar Gomes da Silva. Tipos de cncer: pulmo. Disponvel em:
R <http://www.inca.gov.br/wps/wcm/connect/tiposdecancer/site/home/pulmao> Acesso em: 02/05/13
I
IO
O BRASIL. Instituto Nacional de Cncer Jos Alencar Gomes da Silva. O que cncer?. Disponvel em:
<http://www.inca.gov.br/conteudo_view.asp?id=322> Acesso em: 02/05/13
T
F BRASIL. Ministrio da Sade. Instituto Nacional de Cncer Jos Alencar Gomes da Silva. Estimativa 2012:
CI Incidncia do Cncer no Brasil. Rio de Janeiro, 2011.121 p.
N
AI CARVALHO, Robson F. PCR em Tempo Real. So Paulo: Universidade Estadual Paulista, Departamento de
CL Morfologia [200?]. 30 slides, color. Acompanha texto.
O
CONGRESSO NACIONAL DE GENTICA. 52, 2006, Foz do Iguau. PCR Tempo Real: PCR Quantitativo. 54 p.
D
D
E HIRATA, Mario H.; HIRATA, Rosrio D.C. Apostila de Noes de Biologia Molecular. Universidade de So
E Paulo, 1999.
E
E KO, Y.H.; MATHUPALA, S.P.; PEDERSEN, P.L. Hexokinase II: Cancers double-edged sword acting as both
SS facilitator and gatekeeper of malignancy when bound to mitochondria. Oncogene 25: 47774786, 2006.
TT
RABELO, Jorge. Reao em Cadeia de Polimerase (PCR). Salvador: Universidade Catlica do Salvador,

G Departamento de Biologia, [200?]. 26 slides, color. Acompanha texto.

G
I WILSON, John E. Isozymes of mammalian hexokinase: structure, subcellular localization and metabolic
O function. The Journal of Experimental Biology 206: 2049-2057, 2003.
R
E
LL
A
A
TT

R
R
I
IO
O
T
F
CI
N
AI
CL
O
D
D
E
E
E
E
SS
TT

G
G
Obrigado!!!
I
O