You are on page 1of 10

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134.

ISSN:0377-9424 / 2013
www.mag.go.cr/rev agr/index.html www.cia.ucr.ac.cr

Nota tcnica

BIODEGRADACIN DE QUEROSENO EN LA RIZSFERA DE GRAMNEAS EN


CONDICIONES DE INVERNADERO

Elizabeth Garca1/*, Ronald Ferrera**, Juan Jos Almarz**, Refugio Rodrguez***, Edelmira Garca*

Palabras clave: Hidrocarburos, contaminacin, gramneas, poblaciones microbianas.


Keywords: Hydrocarbons, contamination, grasses, microbial populations.

Recibido: 04/03/13 Aceptado: 24/06/13

RESUMEN ABSTRACT

El queroseno afecta de manera negativa la Kerosene biodegradation in the


actividad biolgica del suelo, as como el creci- grasses rizosphere under greenhouse
miento y desarrollo de las plantas. Para analizar conditions. Kerosene affects in a negative way
lo anterior, se evalu este contaminante en avena the soil biological activity, also the growth
(Avena sativa), cebada (Hordeum vulgare), pasto and development of the plant. To examine the
(Chloris gayana) y trigo (Triticum aestivum), en aforesaid, this contaminant was evaluated in oats
las poblaciones microbianas de la rizsfera y el plants (Avena sativa), barley (Hordeum vulgare),
rizoplano, as como el porcentaje de degradacin grass (Chloris gayana) and wheat (Triticum
del contaminante en suelo rizosfrico. Se emple aestivum), in the microbial populations of the
un diseo experimental completamente al azar rizosphere and rhizoplane. Also determined was
con un arreglo factorial 2 x 4, con 8 tratamientos the contaminants degradation percentage in
y 5 repeticiones en cada uno. Los factores fueron the rizospheric soil of the different grasses. A
dosis de queroseno (0 y 2000 mg.kg-1) y especie completely at random experimental design with
de planta. A los 56 das de haber establecido el a 2x4 factorial arrangement, was used, with 8
experimento, el suelo contaminado redujo de treatments and 5 repetitions each. The factors
manera significativa (p0,05) el rea foliar, la were kerosene doses (0 and 2000 mg.kg -1) and
materia seca total y el volumen radical de las 4 plant species. At 56 days after establishment of
gramneas, con respecto a las establecidas en el the experiment, the contaminated soil reduced
suelo sin contaminar. En el suelo contaminado se significantly (p0.05), the foliar area, the total
incrementaron las poblaciones de bacterias tota- dry matter and the root volume of the 4 grasses,
les en el rizoplano y la rizsfera de las plantas; compared to those established in soil without
mientras que las que emplearon el hidrocarburo contamination. In the contaminated soil the total
como fuente de carbono se incrementaron en microbial populations in the rhizoplane and the
el rizoplano. La colonizacin micorrzica fue plant rizosphere increased; while those that used
del 28,8 al 15,7% y al contaminar el suelo se the hydrocarbon as carbon source increased in
redujo del 11,4 al 5%; sin embargo, el hongo the rhizoplane. The mycorrhizal colonization

1 Autor para correspondencia. Correo electrnico: ** Instituto de Recursos Naturales, Colegio de


gallegoseg@hotmail.com Posgraduados en Ciencias Agrcolas, Montecillo,
* Centro de Investigacin en Gentica y Ambiente Estado de Mxico.
de la Universidad Autnoma de Tlaxcala, Tlaxcala, *** Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera
Mxico. del CINVESTAV-Instituto Politcnico Nacional,
Mxico, D.F.
126 AGRONOMA COSTARRICENSE

endomicorrzico realiz sus funciones aun con went from 28.8 to 15.7%, and when the soil was
la presencia del hidrocarburo en el suelo. La contaminated it was reduced from 11.4 to 5%;
rizsfera de avena permiti una degradacin de however, the endomycorrizal fungus performed
queroseno del 84,4%, mientras que la de pasto its functions even with the hydrocarbon present in
slo del 39,6%. Es conveniente ampliar los estu- the soil. The oats rizosphere allowed a kerosene
dios rizosfricos con otro contaminante orgnico degradation of 84.4%, while that of the grass only
para determinar la efectividad de la rizsfera de 39.6%. It is convenient to expand the rizospheric
avena y evaluar si el hidrocarburo se acumula en studies with another organic contaminant, to
sus tejidos. determine the oats rizospheric effectiveness and
to evaluate if the hydrocarbon is accumulated in
its tissues.

INTRODUCCIN y mejora el establecimiento y desarrollo de las


plantas en suelos contaminados (Gaspar et l.
La actividad petrolera en Mxico es de 2002). La intensidad del dao a las plantas y
suma importancia por las divisas que genera; sin la capacidad para la degradacin a travs de la
embargo, es una fuente potencial de contamina- rizsfera dependen de la concentracin y tipo
cin, en donde los mayores problemas ocurren del contaminante, la especie vegetal, la edad,
durante la explotacin, la refinacin, el alma- sus exudados, el tipo de suelos y sus propieda-
cenamiento y el transporte (Prez et l. 2000).
des (Chaneau et l. 2000, Ferrera et l. 2007).
Uno de los compuestos derivados del petrleo es
Yateem et l. (2000) investigaron la degradacin
el queroseno, el cual al derramarse en el suelo
de hidrocarburos totales del petrleo en un suelo
se convierte en un contaminante que afecta de
rizosfrico de alfalfa (Medicago sativa), haba
manera negativa sus propiedades. El queroseno
(Vicia faba) y pasto Ryegrass (Lolium perenne),
es una mezcla compleja de hasta 260 compuestos
aunque las plantas exhibieron un crecimiento
alifticos y aromticos (C6-C17, ms posible-
normal con el 1% de hidrocarburos en el suelo;
mente 2000 formas isomricas), que incluye
diversas concentraciones de txicos potencia- la degradacin fue mayor en alfalfa y haba con el
les, tales como el benceno, n-hexano, tolueno, 36,6 y 35,6%, respectivamente, comparado con el
xileno, trimetilpentano, metoxietanol y algunos 24% de la rizsfera de pasto. Por otro lado, Prez
hidrocarburos aromticos policclicos como el et l. (2000) y Hernndez et l. (2003) menciona-
naftaleno y n-propilbenceno e ismeros como el ron que en la rizsfera de frijol contaminada con
trimetilbenceno (Ritchie et l. 2003). queroseno se encuentran poblaciones de bacterias
La rizsfera de las plantas proporcio- fijadoras de nitrgeno atmosfrico capaces de uti-
na condiciones favorables para las poblaciones lizar al contaminante como fuente de carbono y
microbianas y su diversidad, constituida prin- energa, lo que las coloca como microorganismos
cipalmente por bacterias y hongos, provee un biodegradadores (hidrocarbonoclastas). Quiones
microambiente complejo y dinmico, donde la et l. (2003) reportaron que una concentracin de
microflora en asociacin con las races forman 25 000 mg.kg-1 de petrleo en el suelo favoreci
comunidades nicas que responden a exudados el crecimiento de plntulas de maz, debido a
radicales (Lpez et l. 2005). La endomicorri- que en su rizsfera proliferaron rizobacterias,
za es una simbiosis mutualista entre plantas y las cuales promueven el crecimiento de las plan-
hongos, facilita la absorcin de nutrimentos al tas; mientras que con una concentracin de 30
aumentar el volumen de absorcin de la raz, 000 mg.kg-1 de petrleo y con la adicin de

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


GARCA et l.: Rizsfera de gramneas en condiciones de invernadero 127

enmiendas orgnicas, se beneficia el desarrollo 56 das. Al trmino, las plantas se cortaron a ras
de maz (Marques et l. 2010). de suelo, se separaron las hojas para medir el
Por lo anterior, el objetivo del estudio fue rea foliar con un medidor, modelo LI-31000 A
evaluar el efecto de 2000 mg.kg-1 de queroseno LICOR. La raz se separ de la parte area, se
sobre el crecimiento y el desarrollo de avena lav con agua destilada y luego se determin el
(Avena sativa), cebada (Hordeum vulgare), trigo volumen radical mediante el volumen desplazado
(Triticum aestivum) y pasto Rhodes (Chloris de agua por la raz. Las plantas se secaron a 75oC
gayana), y su degradacin en la rizsfera. hasta obtener peso constante. Las races libres de
suelo de las diferentes gramneas se colocaron
en cpsulas esterilizables y se depositaron en un
MATERIALES Y MTODOS
vaso de precipitado al que se le agreg KOH al
El experimento se desarroll bajo condi- 10%, el clareo se realiz en una olla de presin
ciones de invernadero; el suelo se colect en el por 10 min a 10 lb. Se retir el KOH y se agreg
campo experimental de Lomas de San Juan, per- H2O2 al 10% por 3 min (blanqueo); se realiz un
teneciente a la Universidad Autnoma Chapingo, enjuague y se cubrieron las cpsulas con HCl al
Municipio de Texcoco, Estado de Mxico. Una 10% por 3 min (acidificacin); se agreg azul de
vez que el suelo se traslad al laboratorio, se tom tripano con lactoglicerol al 0,05% y se coloc
una muestra para determinar pH, materia orgni- el vaso de precipitado con las cpsulas en una
ca, capacidad de intercambio catinico, textura, olla de presin por 10 min a 10 lb (tincin). Los
densidad aparente, N-inorgnico, P, K, Ca, Mg, Fe, segmentos de raz se colocaron en un portaob-
Cu, Zn y Mn, con base en los mtodos que estable- jetos para observarlos al microscopio ptico; se
ce la NOM-021-SEMARNAT-2000 (DOF 2002). registr la presencia o ausencia de hifas, vesculas
Se emplearon semillas de avena, cebada, y arbsculos para determinar el porcentaje de
trigo y pasto, con un porcentaje de germinacin colonizacin total (Phillips y Hayman 1970).
de 80, 85, 95 y 95%, respectivamente. Se agreg Las poblaciones microbianas totales (bac-
a charolas de plstico una mezcla estril de suelo- terias, bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfri-
germinaza (1:1 v/v) y se colocaron las diferentes co de vida libre y hongos) y aquellas que toleran
semillas. Despus de la emergencia de las plntu- queroseno se determinaron por el mtodo de
las (7 das) se realiz el trasplante a macetas. En dilucin y cuenta viable de unidades formadoras
ese momento se inocul con la cepa del hongo de colonias (UFC) crecidas en cajas Petri con
endomicorrizgeno Glomus intraradix, propa- medio de cultivo especfico para cada grupo
gado en plantas de sorgo; el inculo consisti microbiano (Clark 1965 y Parkinson 1982). De
en races con 81,7% de colonizacin total y 680 los tratamientos se tomaron 10 g de raz sin lavar
esporas por 100 g de arena. (suelo de rizoplano) y 10 g de suelo circundan-
El diseo experimental fue completamente te a la raz (suelo rizosfrico). Para cuantificar
al azar con un arreglo factorial 2 x 4 (8 tratamien- bacterias totales se us agar nutritivo (Marca
tos con 5 repeticiones en cada uno). Los factores Baker), para hongos totales papa dextrosa agar
fueron dosis de queroseno (0 y 2000 mg.kg-1) y (PDA, Marca Baker) y para bacterias fijadoras de
tipo de planta (avena, cebada, pasto y trigo). Para nitrgeno atmsferico (BFNA) medio de carbn
la contaminacin del suelo, se realiz una mezcla combinado (Rennie 1981) (por l: 0,2 g KH2PO4;
homognea de agua y queroseno mediante una 0,8 g K2HPO4; 0,1 g NaCl; 4,9 ml FeEDTA;
agitacin rpida, para enseguida incorporarla 0,025 g Na2MoO4.2H2O; 0,2 g MgSO4.7H2O;
al suelo. Se trasplantaron las plntulas a cada 0,06 g CaCl2.2H2O; 0,1 g extracto de levadura; 5
unidad experimental y al mismo tiempo se agre- g manitol; 5 g sacarosa; 0,5 ml lactato de sodio
garon 15 g de inocul del hongo endomicorrzico. (60% v/v): 5 g biotina y 10 g cido p-amino
El suelo se mantuvo a humedad constante por benzoico; pH 7). Para las poblaciones de bacterias

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


128 AGRONOMA COSTARRICENSE

tolerantes al queroseno se us el medio mine- agregaron 5 ml de iso-octano y se filtraron por


ral (Morales 1969) (por l: 5 g KH2PO4; 2,5 g un cartucho C18. Para la lectura de las muestras
MgSO4.7H2O; 0,8 g CaCl2.2H2O; 7 g NH4Cl; 80 se utiliz un cromatgrafo de lquidos (HPLC)
g CuSO4.5H2O; 200 g KI; 400 g FeCl3.6H2O; marca Varian 9012 con un detector UV-VIS
800 g MnSO4.7H2O; 800 g ZnSO4.7H2O; 400 Varian 9050, columna C18; la fase mvil fue ace-
g Na2MoO4.7H2O: 30 g actidiona; pH 7. Para tonitrilo (CH3CN) 80% y agua 20% con un flujo
las bacterias fijadoras de nitrgeno tolerantes de 0,5 ml min-1, la longitud de onda utilizada para
al contaminante el medio carbn combinado; la deteccin fue de 254 nm (Wild et l. 1990).
modificado por Hernndez et l. (2003) (por l: Los datos se sometieron a un anlisis de varianza
0,2 g KH2PO4; 0,8 g K2HPO4; 0,1 g NaCl; 4,9 y se us la prueba de comparacin de medias de
ml FeEDTA; 0,025 g Na2MoO4.2H2O; 0,2 g Tukey (p0,05) con el programa Statgraphics
MgSO4.7H2O; 0,06 g CaCl2.2H2O: 5 g biotina Centurion XVI (StatPoint Technologies 2011).
y 10 g cido p-amino benzoico; pH 7) y final-
mente para las poblaciones de hongos tolerantes
a queroseno el medio mineral agar+rosa de RESULTADOS Y DISCUSIN
bengala (por l: 3 g NH4NO3; 1 g KH2PO4; 0,5 g
MgSO4.7H2O; 0,5 g KCl: 40 g de estreptomici- Efecto del queroseno en la planta
na; pH 7). En los 3 casos el queroseno se aplic
en papel embebido y adherido en el interior de la En el Cuadro 1 se presentan los valores de
contratapa de la caja de Petri. Las cajas se incu- los parmetros edficos y nutrimentales del suelo
baron de 24-72 h a 28C. utilizado en el experimento.
A los 56 das se determin la degradacin El suelo present una baja fertilidad, el pH
del queroseno en suelo rizosfrico; la extraccin fue medianamente alcalino; la materia orgnica,
se realiz con hexano grado HPLC (Marca capacidad de intercambio catinico, N-inorg-
SIGMA) en un equipo soxhlet con un reflujo de 8 nico y P se encontraron en concentraciones
h a 69oC. Los extractos se llevaron a sequedad en bajas, K, Ca y Mg fueron aceptables. Fe y Cu
un rotavapor; luego se agregaron 2 ml de hexano se encontraron en niveles adecuados, mientras
y nuevamente a sequedad; posteriormente se que Zn y Mn en concentraciones deficientes,

Cuadro 1. Parmetros edficos y nutrimentales del suelo.

Parmetro Valor

pH 7,6
Materia orgnica (%) 0,5
Capacidad de intercambio catinico [cmol(+).kg-1] 14,5
N-inorgnico (mg.kg-1) 2,3
P (mg.kg-1) 2,3
K (mg.kg-1) 238
Ca (mg.kg-1) 3813
Mg (mg.kg-1) 730,3
Fe (mg.kg-1) 4,8
Cu (mg.kg-1) 0,2
Zn (mg.kg-1) 0,4
Mn (mg.kg-1) 0,5
Textura Franco arcillosa

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


GARCA et l.: Rizsfera de gramneas en condiciones de invernadero 129

de acuerdo con la clasificacin que establece la al efecto negativo del queroseno. Las plantas al
NOM-021-SEMARNAT-2000 (DOF 2002). La crecer en el suelo contaminado presentaron una
textura del suelo empleado present un contenido clorosis y reduccin en su crecimiento, lo que
de arcilla importante y con ello una superficie pudo deberse a la presencia de queroseno, a la
especfica mayor que en consecuencia propor- deficiencia de nutrimentos en el suelo empleado
ciona un incremento en el contacto microorga- o a la capa hidrofbica que forman los hidro-
nismo-hidrocarburo. Garca et l. (2012) sealan carburos alrededor de la raz, lo que impide la
que una textura franco-arcillo-arenosa favorece absorcin de nutrimentos y agua (Gaspar et l.
el proceso de biodegradacin de los hidrocarbu- 2002). Con una concentracin de queroseno de
ros totales, particularmente en los componentes 400 mg.kg-1, Prez et l. (2010) reportaron que
saturados, en comparacin con el suelo de textu- plantas de maz presentaron una mayor altura;
ra arenosa. sin embargo, existi un menor desarrollo radi-
Las plantas a los 56 das presentaron cal. Thompson et l. (2008) reportaron que en
una reduccin significativa (p0,05) en rea suelos contaminados con pireno 1000 mg.kg-1 el
foliar, materia seca y volumen radical cuando se pasto Cynodon dactylon L., tuvo una reduccin
contamin el suelo. En el suelo sin contaminar en el crecimiento del tallo, biomasa radical y la
se encontraron diferencias estadsticas (p0,05) longitud de la raz. Por otro lado, las plantas de
entre las especies de plantas para las 3 variables trigo y maz son gramneas que mostraron un
estudiadas (Cuadro 2). La interaccin especie de mayor crecimiento en un suelo contaminado con
planta X dosis fue significativa (p0,05) en todas una mezcla de hidrocarburos (1% diesel/aceite) a
las variables, lo que indica que por lo menos diferencia de lo encontrado en este trabajo con la
alguna de las especies evaluadas es ms sensible planta de trigo.

Cuadro 2. Variables agronmicas de avena, cebada, pasto y trigo a los 56 das en un suelo sin contaminar y contaminado con
queroseno.

Queroseno
Planta rea foliar (cm2) Materia seca (g) Volumen radical (cm3)
(mg.kg-1)
0 Avena 138,411,1 b 5,90,4 a 10,30,3 b
Cebada 115,312,6 b 3,60,5 b 10,90,1 b
Pasto 506,923,6 a 5,40,1 a 20,70,7 a
Trigo 122,67,6 b 4,90,3 ab 10,70,2 b
2000 Avena 4,20,7 b 0,10,03 a 1,50,2 c
Cebada 11,31,3 a 0,10,02 ab 4,00,1 a
Pasto 0,80,3 c 0,050,01 b 0,70,05 d
Trigo 3,70,1 bc 0,10,0 b 2,30,1 b

Factores
Planta (A) 0,00 0,00 0,00
Queroseno (B) 0,00 0,00 0,00
Interaccin de A y B 0,05 0,003 0,05

Letras diferentes en la columna por dosis indican que existe una diferencia estadsticamente significativa. Prueba de medias
Tukey EE (p0,05). n=5.

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


130 AGRONOMA COSTARRICENSE

Poblaciones microbianas se increment substancialmente con la adicin de


queroseno (Cuadro 3). En tanto, en la rizsfera
El tipo de planta, la dosis de queroseno y la la poblacin de bacterias fue significativamente
interaccin de ambos factores tuvieron un efecto mayor en trigo y las BFNA en el pasto; mientras
significativo en la poblacin total de bacterias, las que, los hongos en cebada. La rizsfera provee un
BFNA y los hongos totales (p0,05) tanto en el microambiente complejo y dinmico, donde las
suelo de rizoplano como en el rizosfrico (Cua- bacterias y hongos en asociacin con las races
dro 3). En el suelo de rizoplano sin contaminar, forman comunidades nicas que responden a
las bacterias fueron significativamente mayores exudados radicales, los cuales cumplen un papel
en trigo, las BFNA en cebada y el nmero de significativo en la degradacin de contaminantes.
hongos totales en avena (p0,05). En el suelo Algunos compuestos orgnicos exudados por las
rizosfrico, las bacterias y las BFNA fueron sig- races; por ejemplo, fenlicos, cidos orgnicos,
nificativamente ms altas en el pasto, mientras alcoholes y protenas son fuente de carbono y
que los hongos en cebada (p0,05). Por otro lado, nitrgeno para el crecimiento y supervivencia de
en el suelo de rizoplano contaminado las bacte- microorganismos que son capaces de tolerar y
rias y hongos totales fueron significativamente degradar contaminantes orgnicos (Hong et l.
mayores en trigo (p0,05) y las poblaciones 2011). Etuk et l. (2012) reportan que en un suelo
de BFNA en cebada (p0,05). Al comparar las contaminado con queroseno se tuvo un intervalo
poblaciones microbianas en el rizoplano entre los de 2,2 x 103 a 3,4 x 106 UFC/g de bacterias y 1,4
tratamientos no-contaminados y contaminados, x 102 a 2,3 x 104 UFC/g de hongos, poblaciones
se observ que la poblacin de bacterias totales menores a las encontradas en este trabajo.

Cuadro 3. Poblaciones microbianas totales en gramneas a los 56 das.

Rizoplano Rizsfera
UFC x 105 UFC x 105
Queroseno Bacterias Hongos Bacterias Hongos
Planta BFN BFN
(mg.kg-1) totales totales totales totales
0 Avena 19,70,5 b 7,40,2 b 32,20,8 a 8,10,3 ab 6,60,2 c 18,80,3 b
Cebada 17,50,4 c 10,10,2 a 24,81,0 b 8,00,4 b 10,60,3 b 20,40,5 a
Pasto 17,40,4 c 7,40,2 b 15,80,2 c 9,60,3 a 13,10,3 a 14,80,2 c
Trigo 38,10,6 a 9,70,3 a 31,60,8 a 8,70,3 ab 6,20,2 c 15,40,4 c
2000 Avena 22,10,9 c 6,20,09 c 6,60,06 b 12,80,5 d 3,50,1 b 5,20,06 a
Cebada 25,61,1 c 8,30,06 a 5,90,1 c 18,90,4 c 7,60,03 a 5,50,1 a
Pasto 31,30,8 b 7,80,1 b 4,50,1 d 24,90,7 b 7,90,09 a 2,80,09 b
Trigo 58,61,3 a 5,60,05 d 7,40,09 a 31,10,9 a 3,10,03 c 5,40,1 a
Factores
Planta (A) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Queroseno (B) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Interaccin de A y B 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Letras diferentes en la columna por dosis indican que existe una diferencia estadsticamente significativa.
Prueba de medias TukeyEE (p0,05). n=5. BFN: Bacterias fijadoras de nitrgeno.

En el Cuadro 4 se observan las pobla- en el rizoplano del pasto se observ un mayor


ciones de microorganismos que utilizan a los nmero de bacterias y hongos; mientras que,
hidrocarburos del queroseno como fuente de las BFNA fueron significativamente (p0,05)
carbono y energa. En el suelo sin contaminar, ms altas en avena que en las otras especies. En

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


GARCA et l.: Rizsfera de gramneas en condiciones de invernadero 131

Cuadro 4. Poblaciones microbianas totales que emplean el queroseno como fuente de carbono y energa.

Rizoplano Rizsfera
UFC x 105 UFC x 105
Queroseno Bacterias Hongos Bacterias Hongos
Planta BFN BFN
(mg.kg-1) totales totales totales totales
0 Avena 3,80,05 c 19,20,2 a 20,20,1 c 3,60,1 d 5,30,05 c 19,20,1 a
Cebada 6,30,1 b 15,00,1 c 21,50,4 bc 6,00,1 c 6,00,08 b 20,20,2 a
Pasto 9,40,1 a 16,30,1 b 25,10,3 a 8,40,1 a 8,20,1 a 21,20,2 a
Trigo 6,50,08 b 12,30,1 d 22,30,4 b 7,20,1 b 5,60,09 c 20,90,3 a
2000 Avena 7,10,3 b 10,80,2 a 13,50,3 a 4,10,3 b 3,30,2 b 6,20,2 a
Cebada 6,20,3 b 10,30,3 a 9,60,3 b 1,10,1 d 3,70,3 ab 7,00,1 a
Pasto 11,70,3 a 10,40,3 a 9,30,3 b 2,30,2 c 3,90,2 ab 7,00,1 a
Trigo 6,10,3 b 10,50,2 a 10,30,2 b 7,00,2 a 4,40,2 a 6,20,2 a
Factores
Planta (A) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Queroseno (B) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Interaccin de A y B 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Letras diferentes en la columna por dosis indican que existe una diferencia estadsticamente significativa.
Prueba de medias TukeyEE (p0,05). n=5. BFN: Bacterias fijadoras de nitrgeno.

la rizsfera, las bacterias y las BFNA fueron suelo con 6400 mg.kg-1 de queroseno (Kabelitz
significativamente mayores en el pasto y no et l. 2009), Pseudomonas desmolyticum NCIM
existieron diferencias significativas entre plantas 2112 (Pd 2112) y Nocardia hydrocarbonoxydans
con respecto a las poblaciones totales de hongos. NCIM 2386 (Nh 2386) (Kalme et l. 2008),
Con 2000 mg.kg-1 de queroseno las poblaciones Cladosporium, Candida, Bacillus y Microoccus
totales de bacterias fueron mayores en el rizopla- (Etuk et l. 2012) que toleran y son capaces de
no del pasto, con respecto a las otras gramneas realizar su metabolismo a travs del empleo de
y no existieron diferencias significativas entre los hidrocarburos del petrleo como fuente de
plantas con respecto a las poblaciones de BFNA; carbono y energa. Respecto a las BFNA, se ha
en cambio, las poblaciones de hongos fueron ms reportado que Azotobacter nigricans (Garca et
altas en avena (p0,05). En el suelo rizosfrico, l. 2009), Nitrosomonas y Nitrobacter (John y
las mayores poblaciones de bacterias y BFNA Okpokwasili 2012), son bacterias nitrificantes
se presentaron en el pasto y no hubo diferencias capaces de utilizar el queroseno como fuente de
significativas entre especies de plantas, con res- carbono. Por otro lado, Muratova et l. (2005)
pecto a la poblacin de hongos totales (p0,05). reportaron que poblaciones de Azospirillum sp.,
Los consorcios microbianos (bacterias y hongos) aisladas de la rizsfera de la planta de trigo incre-
aislados de la rizsfera de especies vegetales mentaron la degradacin de los hidrocarburos del
han probado su eficiencia en la biodegradacin petrleo, adems de promover el desarrollo del
de hidrocarburos (Mikeskov et l. 2012). Sin sistema radical.
embargo, se reportan bacterias de los gneros En la Figura 1 se muestra que en el suelo
Sphingobacterium sp., Bacillus sp., y Achro- sin contaminar el pasto y avena presentaron el
mobacter sp., aisladas de la rizsfera de maz mayor porcentaje de colonizacin micorrzica,
(Marques et l. 2010), Pseudomonas aeruginosa respecto a lo encontrado en las plantas de cebada
AT18 (Prez et l. 2010) y Pseudomonas sp., y trigo (p0,05). En cambio, con la presencia de
bacteria que se desarrolla favorablemente en un queroseno, las plantas de cebada y avena tuvieron

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


132 AGRONOMA COSTARRICENSE

Fig. 1. Colonizacin micorrzica total en avena, cebada, pasto y trigo a los 56 das en suelo no contaminado y contaminado
con queroseno. Media TukeyEE.

una colonizacin por el hongo Glomus intraradix l. (2006) mencionaron que Glomus geosporum
significativamente mayor que en las plantas de y Glomus intraradices pueden absorber fenan-
trigo y pasto. treno y antraceno del suelo y acumularlo en sus
Por lo que con base en estos resultados, las esporas. Sin embargo, cuando se absorbe por las
gramneas cebada y avena se pueden considerar hifas el contaminante no se degrada, se mantiene
para incrementar la biodegradacin de sitios sin modificaciones; por lo que al inmovilizarse
contaminados por queroseno. En este sentido, el contaminante en las esporas se reduce la con-
Chen et l. (2013) mencionan que actualmente centracin alrededor de las races de las plantas.
la rizoremediacin es un proceso de degradacin
complejo con mltiples interacciones que involu- Degradacin de queroseno
cra a la raz, el suelo rizosfrico y los microor-
ganismos, entre los que se incluyen a los hongos A los 56 das se observ una degradacin
endomicorrzicos arbusculares. Joner y Leyval de queroseno en avena del 84,4% y en cebada del
(2001) al evaluar la colonizacin micorrzica con 81,5%; mientras que en pasto fue del 39,6% y en
el hongo Glomus mosseae P2, BEG69 en el pasto trigo del 25,3%. Estos resultados indican que en
Ryegrass establecido en un suelo contaminado la rizsfera de avena y cebada existe una degra-
con una mezcla de 500 mg.kg-1 de antraceno, 500 dacin importante del queroseno, posiblemente el
mg.kg-1 de criseno y 50 mg.kg-1 de dibenzo(a,h) hongo endomicorrzico y las poblaciones micro-
antraceno, encontraron una colonizacin total del bianas tuvieron un papel fundamental en la trans-
4%, menor a lo reportado en este trabajo con el formacin de los hidrocarburos del contaminante,
pasto Rhodes y Glomus intraradix. Alarcn et l. debido a que generan compuestos intermediarios
(2006) reportaron que la disipacin del benzo[a] que pueden subsecuentemente ser empleados por
pireno de la rizosfera fue mayor en plantas no los propios microorganismos o beneficiar a otros,
inoculadas en comparacin con plantas micorri- al establecer entre ellos relaciones sinrgicas
zadas con Gigaspora margarita. Echinochloa que generan un proceso de degradacin mayor.
polystachya (pasto alemn) al parecer tiene una Prez et l. (2010) evaluaron la degradacin de
capacidad intrnseca para disipar benzo[a]pireno 200 mg.kg-1 de antraceno a travs de la rizsfera
de su rizosfera. Gaspar et l. (2002) y Verdin et de maz. A los 30 das se logr una degradacin

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


GARCA et l.: Rizsfera de gramneas en condiciones de invernadero 133

del 54,9%. En otro estudio, se reporta que en adems de ampliar los estudios rizosfricos con
la rizsfera de maz existi una degradacin de otro tipo de hidrocarburo para poder determinar
diesel del 84,5% y al inocular el suelo con la la efectividad de la rizsfera, principalmente de
bacteria Gordonia sp. S2RP-17 ms la presencia avena con propsitos de fitorremediacin.
de la planta existi una degradacin del 95,8%,
por lo que ambos, la planta de maz y Gordo-
LITERATURA CITADA
nia sp. S2RP-17 son una prometedora estrategia
para incrementar la eficiencia de la degradacin AGARRY S.E., OWABOR C.N., YUSUF R.O. 2010. Studies
de suelos contaminados por diesel (Hong et l. on biodegradation of kerosene in soil under different
2011). Diab (2008) report que en la rizsfera bioremediation strategies. Bioremediation J. 14:135-141.
ALARCN A., DELGADILLO J., FRANCO A.,
de maz y trigo existi una biodegradacin de DAVIES F.T., FERRERA C.R. 2006. Influence
hidrocarburos totales de petrleo del 16,8% y of two polycyclic aromatic hydrocarbons on spore
13,7%, respectivamente, menor que lo reportado germination, and phytoremediation potential of
en este trabajo con avena y cebada. A los 60 das Gigaspora margarita-Echynochloa polystachya
symbiosis in benzo[a]pyrene-polluted substrate. Rev.
despus de haber inoculado Azospirillum brasi-
Int. Contam. Ambient. 22(1):39-47.
lense a un suelo contaminado con 30 mg.kg-1 de CHANEAU C.H., MOREL J.L., OUDOT J. 2000.
fenantreno, la rizsfera del pasto alemn (Echino- Bioremediation and biodegradation of fuel oil
chloa polystachya) present una degradacin del hydrocarbons in the rhizosphere of maize. J. Environ
57% (Martnez et l. 2007). Agarry et l. (2010) Qual. 29:569-578.
CHEN J., XU Q.X., SU Y., SHI Z.Q., HAN F.X. 2013.
mencionaron que una baja poblacin microbiana
Phytoremediation of organic polluted soil. J.
en un proceso de degradacin se puede deber a la Bioremed. Biodeg. 4:132-134.
deficiencia de nutrimentos en el suelo, los cuales CLARK F.E. 1965. Agar plate method for total microbial
son necesarios para el crecimiento bacteriano e count, pp. 1460-1466. In: C.A. Black (ed.). Methods
incrementar la biodegradacin. En este sentido, of soil analysis. Agronomy N. 9. Part 2. American
Society of Agronomy. Madison, WI.
Ghulam et l. (2008) evaluaron la biodegradacin
DIAB E.A. 2008. Phytoremediation of oil contaminated
de queroseno en el suelo (4% p/p) con un cultivo desert soil using the rhizosphere effects of some
bacteriano mixto estimulado con la adicin de N, plants. Res. J. Agricul. Biol. Sci. 4:604-610.
P y K. A las 6 semanas se obtuvo una degrada- DIARIO OFICIAL DE LA FEDERACIN (DOF). 2002.
cin del 65% y el contenido de N se redujo del NOM-021-RECNAT-2000. Norma oficial Mexicana
que establece las especificaciones de fertilidad,
54 al 24%, el P de 43 al 3% y del K de 35 al 2%.
salinidad y clasificacin de suelos. Estudios,
muestreos y anlisis. 31 de diciembre 2002. 85 p.
ETUK C.U., JHON R.C., EKONG U.E., AKPAN M.M. 2012.
CONCLUSIONES
Growth study and hydrocarbonoclastic potential of
microorganisms isolated from aviation fuel spill site
El queroseno provoc una disminucin in Ibeno, Nigeria. Bull. Environ. Contam. Toxicol.
significativa del rea foliar, la materia seca y 89:727-732.
el volumen radical de las gramneas; aun as se GARCA E.G., CALVA C.G., FERRERA C.R.,
estableci la simbiosis micorrzica y existi un FERNNDEZ L.L.C., RODRGUEZ V.R.,
crecimiento importante en la zona de rizoplano y ESPARZA G.F.J. 2009. Encystment of Azotobacter
nigricans grown diazotrophically on kerosene as
rizsfera de bacterias totales capaces de utilizar sole carbon source. Arch. Microbiol. 191:275-281.
al queroseno como fuente de carbono y energa GARCA MA.G., INFANTE C., LPEZ L. 2012.
lo que caus una degradacin del contaminante, Biodegradacin de un crudo mediano en suelos de
por lo que la avena, cebada, trigo y el pasto tienen diferente textura con y sin agente estructurante.
la capacidad de degradar a travs de su rizsfera Bioagro 24:93-102.
GASPAR M.L., CABELLO M.N., CAZAU M.C., POLLERO
contaminantes orgnicos, pero al ser plantas R.J. 2002. Effect of phenanthrene and Rhodotorula
comestibles es importante evaluar la concentra- glutinis on arbuscular mycorrhizal fungus
cin del contaminante en los diferentes tejidos, colonization of maize roots. Mycorrhiza 12:55-59.

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013


134 AGRONOMA COSTARRICENSE

GHULAM S., AFZAL M., ANWAR F., TAHSEEN R., associative rhizobacteria of the genus Azospirillum.
KHALID Z. M. 2008. Biodegradation of kerosene Microbiology 74:210-215.
in soil by a mixed bacterial culture under different PARKINSON D. 1982. Filamentous fungi, pp. 949-953. In: A.L.
nutrient conditions. Inter. Biodeterioration and Page (ed.). Methods of soil analysis. Agronomy 9. Part 2.
Biodegradation 61:161-166. American Society of Agronomy. Madison, WI.
HERNNDEZ A.E., FERRERA R., RODRGUEZ R. PREZ V.J., POGGI H.M., CALVA G., ROS E.,
2003. Bacterias de vida libre fijadoras de nitrgeno RODRGUEZ R., FERRERA R., ESPARZA F.
atmosfrico en rizsfera de frijol contaminada con 2000. Nitrogen-fixing bacteria capable of utilizing
queroseno. Terra Latinoamericana 21:81-89. kerosene hydrocarbon as a sole carbon source. Water
HONG S.H., RYU H.W., KIM J., CHO K.S. 2011. Sci. Technol. 42:407-410.
Rhizoremediation of diesel-contaminated soil PREZ A.B., CASTAEDA A., CASTELLANOS G.,
using the plant growth-promoting rhizobacterium JIMNEZ T., TAPIA A., MARTNEZ D. 2010.
Gordonia sp. S2RP-17. Biodegradation 22:593-601. Efecto del antraceno en la estimulacin del
JHON R.C., OKPOKWASILI G.C. 2012. Crude oil- crecimiento en maz y frijol. Terra Latinoamericana
degradation and plasmid profile of nitrifying bacteria 29:95-102.
isolated from oil-impacted mangrove sediment in PHILLIPS J.M., HAYMAN D.S. 1970. Improved procedures
the Niger Delta of Nigeria. Bull. Environ. Contam. clearing roots and staining parasitic and vesicular-
Toxicol. 88:1020-1026. arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of
JONER E.J., LEYVAL C. 2001. Influence of arbuscular infection. Trans. Br. Mycol. Soc. 55:158-161.
mycorrhiza on clover and ryegrass grow together in QUIONES A.E.E., FERRERA C.R., GAVI R.F.,
a soil spiked with polycyclic aromatic hydrocarbons. FERNNDEZ L.L., RODRGUEZ R., ALARCN
Mycorrhiza 10:155-159. A. 2003. Emergence and growth of maize in a crude
KABELITZ N., MACHACKOVA J., IMFELD G., oil polluted soil. Agrociencia 37:585-594.
BRENNEROVA M., HEIPPIEPER D.H., JUNCA RENNIE R.J. 1981. A single medium for isolation of
H. 2009. Enhancement of the microbial community acetylenereducing (dinitrogen-fixing) bacteria from
biomass and diversity during air sparging soils. Can. J. Microbiol. 27:8-14.
bioremediation of a soil highly contaminated with RITCHIE G.D., STILL R.K., ROSS J., BECKKEDAL
kerosene and BTEX. Appl. Microbiol. Biotechnol. V.Y.M., BOBB J.A., ARFSTEN P.D. 2003. Biological
82:565-577. and health effects of exposure to kerosene-based jet
KALME S., PARSHETTI G., GOMARE S., GOVINDWAR fuels and performance additives. J. Toxicology and
S. 2008. Diesel and kerosene degradation by Environ. Health. Part B. 6:357-451.
Pseudomonas desmolyticum NCIM 2112 and STATPOINT TECHNOLOGIES. 2011. Statgraphics
Nocardia hydrocarbonoxydans NCIM 2386. Curr. Centurion XVI. Software estadstico versin en
Microbiol. 56:581-586. espaol. United States.
MARQUES A.P.G.C., PIRES C., MOREIRA H., RANGEL THOMPSON O.A., DUANE C.W., MATTICE J.D., THOMA
A.O.S.S., CASTRO P.M.L. 2010. Assessment of the G.J. 2008. Influence of nitrogen addition and plant
plant growth promotion abilities of six bacterial root parameters on phytoremediation of pyrene-
isolates using Zea mays as indicator plant. Soil Biol. contaminated soil. Water Air Soil Pollut. 189:37-47.
Biochem. 42:1229-1235. VERDIN A., SAHRAOUI L., FONTAINE J.,
MARTNEZ M.MA.R., DELGADILLO J., ALARCN A., GRANDMOUGIN A., DURAND R. 2006. Effects
FERRERA C.R. 2007. Degradacin de fenantreno of anthracene on development of a arbuscular
por microorganismos de la rizsfera del pasto mycorrhizal fungus and contribution of the symbiotic
alemn. Terra Latinoamericana 25:25-33. association to pollutant dissipation. Mycorrhiza
MIKESKOV H., NOVOTN C., SVOBODOV K. 2012. 16:397-405.
Interspecific interactions in mixed microbial cultures WILD S.R., WATERHOUSE K.S., McGRATH S.P., JONES
in a biodegradation perspective. Appl. Microbiol. K.C. 1990. Organic contaminants in an agricultural
Biotechnol. 95:861-870. soil with a known history of sewage sludge
MORALES P.J.L. 1969. Propagacin de hongos filamentosos amendments: polynuclear aromatic hydrocarbons.
en fracciones del petrleo. Tesis profesional. Instituto Environ. Sci. Technol. 24:1706-1711.
Politcnico Nacional, Mxico, D.F. 80 p. YATEEM A., BALBA A.T., NAWAWY A.S., AL-AWANDHI
MURATOVA A.Y., TURKOVSKAYA O.V., ANTONYUK N. 2000. Plants associated microflora and
L.P., MAKAROV O.E., POZDNYAKOVA L.I., the remediation of oil-contaminated soil. Int. J.
IGNATOV V.V. 2005. Oil-oxidizing potential of Phytorem. 2:183-191.

Todos los derechos reservados. Universidad de Costa Rica. Este artculo se encuentra licenciado con Creative Commons
Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 3.0 Costa Rica. Para mayor informacin escribir a rac.cia@ucr.ac.cr

Agronoma Costarricense 37(2): 125-134. ISSN:0377-9424 / 2013

You might also like