Laboratorio de biotecnologa
Bacterias fijadoras a simbiticas de
nitrgeno de los suelos de Ccuta
norte de Santander, Colombia
Original
Autores: Natalia Garca, Derly dayana Chacn, Nataly Ortiz.
Universidad de Santander, Programa de Bacteriologa y Laboratorio Clnico
INFORMACION DEL ARTCULO
Historia del artculo:
Entregado el 29 de septiembre 2017
Palabras clave:
Azotobacter spp, azopirillum spp.
Nitrgeno, simbiosis, fijacin biolgica.
Keywords:
Azotobacter spp, azopirillum spp.
Nitrogen, symbiosis, biological fixation
ABSTRACT
Objective: to isolate diazotrophic
bacteria from the genera azotobacter
1 DRA CLAUDIA DIAZ
RESUMEN
Objetivo: aislar bacterias diazotroficas de los gneros
azotobacter sp y azospirillum sp. A partir de cultivos de
rastrojos (zonas sin cultivar) Ccuta, norte de Santander.
Introduccin: El nitrgeno es muy abundante en la
atmsfera, sin embargo, las plantas no pueden utilizarlo en
su forma elemental y tienen que obtenerlo del suelo
principalmente en forma de nitratos o amonio. La fijacin
biolgica de nitrgeno es un proceso clave en la biosfera, por
el cual microorganismos portadores de la enzima
nitrogenasa convierten el nitrgeno gaseoso en nitrgeno
combinado. Las poblaciones microbianas se identificaron
mediante tcnicas de tincin de Gram y cultivo. a) Ashby
(gnero Azotobacter sp), y b) rojo Congo (gnero
Azospirillum sp).Materiales y Mtodos: el aislamiento Se
inici con la correcta limpieza y desinfeccin del area de
trabajo y de la muestra, seguido Se llev a cabo el
aislamiento de azospirillium sp. Se Tom la raz de una
planta y se introdujo el medio semislido Nfb se llev a
Incubar 30C - 32C durante 5 das, aislamiento de
azotobacter sp. Mediante la TCNICA DE LOS GRANOS DE
SUELO Colocando simtricamente en cajas con medio de
cultivo ASBHY. Resultados: el crecimiento de azotobacter
sp. Microscpicamente se observ bacilo y cocobacilos
Gram negativos, y los quistes caractersticos del
microorganismo, en el cultivo de abono se observ colonias
mucoides (Agar Ashby). Crecimiento de Azospitillum se
observ la pelcula blanca de crecimiento caracterstica.
Conclusiones: segn los resultados obtenidos del
aislamiento de Azotobacter y Azospirillum crecen fcilmente
por lo tanto los medios de cultivo utilizados son especiales
para el aislamiento.
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crops (uncultivated areas) Ccuta,
north of Santander. Introduction:
Nitrogen is very abundant in the
atmosphere, however, plants can not
use it in its elemental form and have to
obtain it from the soil mainly in the form
of nitrates or ammonium. Biological
nitrogen fixation is a key process in the
biosphere, whereby microorganisms
carrying the nitrogenase enzyme
convert nitrogen gas into combined
nitrogen. Microbial populations were
identified by Gram and culture staining
techniques. a) Ashby (genus
Azotobacter sp), and b) Congo red
(genus Azospirillum sp). Materials
and Methods: the insulation was
initiated with the correct cleaning and
disinfection of the aerial work and
sample, followed. azospirillium sp. The
root of a plant was taken and the
semisolid medium Nfb was introduced
to incubate 30 C - 32 C for 5 days,
isolation of azotobacter sp. By means
of the SOIL GRAIN TECHNIQUE
Placing symmetrically in boxes with
ASBHY culture medium. Results: the
growth of azotobacter sp.
Microscopically bacillus and Gram
negative coccobacilli were observed,
and cysts characteristic of the
microorganism, mucoid colonies
(Ashby Agar) were observed in the
fertilizer culture. Growth of
Azospitillum was observed the
characteristic white growth film.
Conclusions: according to the results
obtained from the isolation of
Azotobacter and Azospirillum they
grow easily therefore the culture media
used are special for the isolation.
INTRODUCCION
El nitrgeno molecular (N2) que existe
en la atmsfera no es fcilmente
2 DRA CLAUDIA DIAZ
asimilable por los vegetales debido a
que el triple enlace que une los tomos
que forman la molcula es difcil de
romper; la nica forma de aprovechar
el nitrgeno atmosfrico es mediante
el proceso metablico conocido como
Fijacin Biolgica de Nitrgeno (FBN),
el cual asegura la disponibilidad de
nitrgeno en los ecosistemas
naturales (Zuberer, 1998). El proceso
es llevado a cabo por ciertos
microorganismos del suelo que se
conocen como microorganismos
fijadores de nitrgeno; todos los
microorganismos que convierten el
nitrgeno (N2) en amoniaco lo hacen
gracias a la actividad del complejo
enzimtico llamado nitrogenasa que
est constituido por dos
metaloprotenas: la protena (I),
llamada hierro-molibdeno-protena, y
la protena (II), llamada hierro-protena
(Baca et l, 2000); la enzima requiere
de la colaboracin de otras dos
protenas: ferrodoxina y flavodoxina,
que actan como donadores de
electrones y reductores naturales de la
nitrogenasa. Los electrones son
transportados a la nitrogenasa por la
ferrodoxina y llegan a la
hierroprotena, sta activa a la Mo-Fe-
protena y se produce la reduccin de
nitrgeno, siendo luego fijado como
compuesto aminado (Hernndez,
1998). Reaccin de la FBN: N2 (g) +
8H+ + 8e- Nitrogenasa 2NH3 (g) + H2
(g) Los microorganismos fijadores de
nitr- geno incluyen dos variantes: los
fijadores simbiticos que fijan
nitrgeno en asociacin con plantas, y
los no simbiticos (asimbiticas) o de
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vida libre que proporcionan al medio
compuestos nitrogenados como
amonio, aprovechados por los
vegetales (Hernndez, 1998; Zuberer,
1998). Numerosas bacterias de los
gneros Azotobacter sp, Azospirillum
sp, Pseudomonas sp, Enterobacter sp
y Klebsiella sp son eficientes fijadoras
asimbiticas de nitrgeno
contribuyendo sustancialmente a que
los agricultores economicen en
fertilizantes nitrogenados
conservando el ambiente (Martnez,
1999). Los fertilizantes qumicos han
sido benficos para el sector agrcola
en general, sin embargo, el abuso en
la utilizacin de ellos genera residuos
qu- micos de las sales que contienen
produciendo la salinizacin,
problemas en el drenaje,
compactacin del suelo y disminucin
de la actividad microbiana
comprometida en el proceso de
nutricin vegetal. Se ha comprobado
que cada ao se incrementa la
cantidad de fertilizantes por aplicar,
debido a la menor eficiencia de
adsorcin en el suelo y absorcin en la
planta aumentando los costos en la
produccin. A lo anteriormente dicho
se suma el problema ambiental,
debido a la produccin de los gases
txicos que se desprenden de los
fertilizantes, como los xidos de
nitrgeno que daan la capa de ozono
(Kiehl, 1995; Orozco, 1995;
Corporacin Bioma, 1995; Coronado,
2002; Meunchang et l, 2005; Curso
Internacional, 2006). La actividad y
eficiencia de los microorganismos de
vida libre con capacidad de fijar
3 DRA CLAUDIA DIAZ
nitrgeno han demostrado un
extraordinario potencial para la
explotacin agrcola. Los resultados
de investigaciones sobre la
incorporacin a los suelos de esta
clase de microorganismos
(inoculantes microbianos o
biofertilizantes) han originado altos
rendimientos en las cosechas de una
gran diversidad de cultivos, como
arroz, maz, frjol, tomate, etc.,
minimizando el uso de fertilizantes
qumicos especialmente los
nitrogenados (Meunchang et l, 2005;
Curso Internacional, 2006;
Hernndez, 1998; Bonilla, 2001).
MATERIALES Y METODOS
Aislamiento e identificacin de los
microorganismos Azotobacter sp y
Azospirillum sp se utiliz muestras de
suelo, races de plantas, lanceta
estril, Pinzas, gradillas, Frasco de
compota con solucin de hipoclorito al
2.5% Frasco de compota con agua
destilada estril, Laminas,
portaobjetos, cajas de agar ASBHY
Tubos con medio semislido Nfb,
Tubos con medio semislido
modificado Nfb, Agar Rojo Congo.
Aislamiento de Azotobacter sp
Se inici con la correcta limpieza y
desinfeccin del rea de trabajo
seguido se llev a cabo el aislamiento
de Azotobacter sp mediante la tcnica
de los granos de suelo Colocando
simtricamente en cajas con medio de
cultivo ASBHY los granos de suelo (
abono) a una distancia de 1 cm
dejando 20 grnulos por caja, con la
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ayuda de unas pinzas estriles se
procedi a Incubar 30C 32C
durante 3 das.
Aislamiento de Azospirillum sp
Se tom la raz de una planta y se
introdujo a una solucin con
hipoclorito de sodio al 2.5%, durante 2
minutos, seguidamente se realiz la
operacin en agua destilada estril y
tomando un pedazo de raz e
introduciendo en el medio semislido
Nfb se llev a Incubar 30C 32C
durante 5 das. En la observacin
Posterior al periodo de incubacin se
realiz una coloracin de Gram para
evidenciar bacilos cortos Gram
negativos.
RESULTADOS Y DISCUSION
Discuten los resultados obtenidos
colocan imgenes ( SI VAN A
COPIAR NO EVIDENCIEN LA COPIA
.l. )
CONCLUSIONES
Los microorganismos son muy
importantes ya que sin ellos la fijacin
del nitrgeno no sera posible, pues
son las bacterias las que propician tal
proceso que es en gran suma
beneficio, adems con este trabajo
queda claro que no todas las bacterias
son patgenas, que de hecho gracias
a ellas ya muchos de los procesos en
los que se encuentran inmiscuidas hay
vida en la tierra como la conocemos,
adems tambin se denota la
importancia de conocer a los
microorganismo e identificarlos, como
en este caso que se identific el factor
para que una planta pudiera ser
4 DRA CLAUDIA DIAZ
fijadora de nitrgeno y con ellos crear
formas de cultivo o biotecnologa que
sea de ayuda a las actividades
humanas y a la conservacin de la
ecologa.
BIBLIOGRAFIA
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