UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA

CARRERA DE INGENIERA QUMICA
LABORATORIO DE BIOQUMICA

PRCTICA 2
ACONDICIONAMIENTO DE MATERIALES Y MTODOS DE ESTERILIZACIN

RESUMEN

Desarrollo de los mecanismos de acondicionamiento especficos para cada tipo

de material de vidrio del laboratorio y proceso de desinsectacin para la eliminacin de
residuos grandes; conocimiento de los mtodos de esterilizacin y ejecucin del mtodo
ms apropiado que garantice la descontaminacin de los elementos de vidrio y entender
el manejo correcto de los instrumentos de estilizacin y la manipulacin de los
materiales purificados, con el fin de evitar la contaminacin microbiana del material de
laboratorio y el deterioro del mismo.

DESCRIPTORES

ESTERILIZACIN/CALOR_SECO/CALOR_HUMEDO/ACONDICIONAMIENTO/
AUTOCLAVE

Ayudante: Christian Cruz

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LABORATORIO DE BIOQUMICA

1. OBJETIVOS
1.1. Conocer lo que es la esterilizacin y sus mtodos, aplicacin de procedimientos,
tcnicas y productos que suprimen la vitalidad de los microorganismos patgenos.
1.2. Llevar a la prctica los pasos necesarios en el uso del autoclave, la estufa y el
mechero Bunsen.

2. TEORA
2.1. Esterilizacin por Calor seco
La esterilizacin por calor seco produce la destruccin de los microorganismos por oxidacin de
sus componentes celulares. ste es un proceso menos eficiente que la esterilizacin por calor
hmedo, porque los microorganismos mueren con mayor rapidez cuando se encuentran en
presencia de agua, ya que ste permite que se altere con mayor facilidad la configuracin de sus
protenas y proporciona un medio para distribuir el calor uniformemente en toda la c- mara
interna del equipo de esterilizacin. Por esta razn, para lograr la esterilizacin del material
empleando el calor seco, se deben aplicar temperaturas ms altas durante mayor tiempo.
(HANNA Instrumentos, 2012)

La esterilizacin por calor seco se puede realizar por varios mtodos:

Aire caliente
Llama directa
Incineracin

2.2. Esterilizacin por Calor hmedo

El calor hmedo como vapor saturado a presin es el mtodo ms seguro y ms utilizado. en la
esterilizacin con calor hmedo la causa de la muerte del microorganismo es distinta que la
esterilizacin con calor seco; en efecto con calor hmedo el microbio muere porque se coagula
la protena celular, mientras que el calor seco destruye principalmente por medio de un proceso
de oxidacin. (PBX Laboratorios y Equipos, 2011)
La USP define a la esterilizacin al vapor como el empleo de vapor saturado a presin durante,
por lo menos, 15 minutos a una temperatura de 121C en un recipiente de presin regulada. La
forma ms sencilla de autoclave es la olla a presin domstica, que, sin embargo, no se
recomienda para esterilizar productos mdicos porque no tiene dispositivos apropiados para
medir la presin y la temperatura y carece de un medio eficiente para desplazar el aire atrapado.
(PBX Laboratorios y Equipos, 2011)

2.3. Autoclave
Una autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio,
utilizando vapor de agua a alta presin y temperatura, evitando con las altas presiones que el
agua llegue a ebullir a pesar de su alta temperatura. El fundamento del autoclave es que coagula
las protenas de los microorganismos debido a la presin. (PBX Laboratorios y Equipos, 2011)
Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero
restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual provoca que el
vapor alcance una temperatura de 121 grados centgrados. Un tiempo tpico de esterilizacin a
esta temperatura y presin es de 15-20 minutos.. (PBX Laboratorios y Equipos, 2011)

Ayudante: Christian Cruz

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2.4. Controles de la Calidad de Esterilizacin

Los resultados del ciclo de esterilizacin no son verificables mediante inspeccin o ensayo de
los materiales, ya que dichos productos perderan su condicin de estril. Dicha dificultad
obliga por una parte a validar el proceso de la esterilizacin de forma global atendiendo a los
diferentes controles (fsicos, qumicos y biolgicos) y por otra parte a acreditar y almacenar
dicha certificacin. La efectividad del proceso de esterilizacin, por tanto, incluir los registros
de identificacin y control de carga y descarga, contribuyendo a la trazabilidad del producto.
Como primer paso y actividad fundamental e imprescindible en el proceso de esterilizacin, se
halla el mantenimiento adecuado de los aparatos ya que no se puede iniciar el proceso sin la
garanta del buen funcionamiento de los aparatos esterilizadores. Es por ello, que todos los
equipos de la Unidad de Esterilizacin (U.E.), estarn sometidos a un mantenimiento preventivo
(siguiendo las instrucciones tcnicas de los fabricantes) con el fin de verificar si se dan las
condiciones ptimas para su puesta en funcionamiento. (Inoz, 2015)

El control del proceso propiamente de esterilizacin se divide en cinco etapas:

Tabla 1.4.-1.
Control de Calidad

Fuente: (Inoz, 2015)

3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Materiales y Equipos
3.1.1. Autoclave
3.1.2. Cajas Petri
3.1.3. Tubos de Ensayo
3.1.4. Estufa
3.1.5. Mechero Bunsen
3.1.6. Matraz Erlenmeyer
3.1.7. Cmara de Flujo Laminar

3.2. Procedimiento

Acondicionamiento de materiales
3.2.1. Lavamos el material a esterilizar
3.2.2. Desinfectamos con alcohol antisptico el material
3.2.3. Se toma papel empaque, algodn y gasa para realizar el acondicionamiento de
acuerdo al material de laboratorio que se va a usar

Ayudante: Christian Cruz

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Tampones de algodn
3.2.4. Se toma algodn y envuelve con gasa haciendo un ovalo el cual debe tapar por
completo el matraz Erlenmeyer y no caerse

4. OBSERVACIONES

Tabla 4.4-1
Observaciones
PROCEDIMIENTO OBSERVACIN
Pipeta Una vez lavada y desinfectada con alcohol se
utiliz un pedazo de algodn y se coloc en la
punta de la pipeta, luego se tom de la
esquina del papel de empaque de 7cm x 20cm
y se empez a envolver diagonalmente la
pipeta, de modo que quede completamente
forrada, para luego colocarla en la autoclave
de 15-20 min.
Matraz Se lav y desinfecto el material previamente
4.1.Acondicionamiento erlenmeyer para luego colocar el tampn de algodn y
de materiales fijar con un capuchn de papel empaque
cuadrado al cuello del matraz y ajustarlo con
un pedazo de piola, para proceder a colocar en
el autoclave de 15-20 min.
Caja petri Se coloc la caja petri encima de un pedazo
de papel empaque rectangular y se procedi a
envolver de forma similar a un regalo, luego
se da la vuelta, se doblan los extremos y se
coloca un pedazo de cinta adhesiva y se
indica la fecha de acondicionamiento.
4.2.Tampones de Se utiliz una cantidad de algodn proporcional al matraz,
algodn se envolvi el algodn en forma ovalada en una gaza y se
asegur como una toalla, luego se coloc en el matraz
observndose que se encuentre fijo y seguro de no caer
dentro del mismo.
Fuente: (Universidad Central de Ecuador: Laboratorio de Bioqumica, 2016)

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5. DISCUSIN
Se utiliz el mtodo de esterilizacin a travs de calor hmedo, mediante el uso de l
autoclave y previo acondicionamiento de los materiales; demostrando as la
validacin del mtodo; no se observaron errores sistemticos, sin embargo se puede
deducir que existen factores que pueden afectar una correcta esterilizacin como
envolver errneamente los materiales con el papel empaque, colocar un tampn muy
pequeo en el matraz, no establecer un tiempo adecuado de esterilizacin en el
autoclave, o no llevar los materiales esterilizados rpidamente a la cabina de flujo
laminar permitiendo que se vuelvan a contaminar en el ambiente. Se recomienda
tomar en cuenta un correcto acondicionamiento de los materiales, el tiempo de
estilizacin y as como el manejo adecuado del autoclave.

6. CONCLUSIONES
6.1. Se prepar el material de vidrio del laboratorio y se realiz el correcto
acondicionamiento con el uso de papel empaque y tapones de algodn para
proceder con una efectiva esterilizacin.

6.2. Se conoci los mtodos de esterilizacin por calor seco y hmedo; se realiz la
esterilizacin de los materiales de vidrio por medio calor hmedo en la autoclave,
tomando en cuenta que el mtodo estndar es el vapor saturado, a una temperatura
de 121 C durante 15-20 minutos en el caso de descontaminacin.

6.3. Se aprendi el manejo correcto de los materiales esterilizados y el uso de la cabina

de flujo laminar, para mantener al material apartado de cualquier posible
contaminacin ambiental.

7. RECOMENDACIONES
7.1.Es necesario lavar el material con agua y desinfectarlo con alcohol, para eliminar
partes gruesas de suciedad o residuos infecciosos antes de proceder con el
acondicionarlo y as garantizar una mxima esterilizacin.

7.2.Se sugiere revisar que los tapones se encuentren colocados correctamente y

asegurados con un capuchn de papel empaque para evitar que el calor latente del
vapor de agua, que se libera se condense dentro del objeto.

7.3.Se recomienda realizar la esterilizacin por calor hmedo en la autoclave, debido a

que no produce residuos txicos, no deteriora el material de vidrio expuesto y el

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tiempo de esterilizacin es corto a diferencia del mtodo de esterilizacin por calor

seco.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
8.1. Bibliografa
Tetra Pak International S.A. (2014). TECNOLOGA UHT PARA ALIMENTOS Y
PRODUCTOS
LCTEOS. Obtenido de http://www.tetrapak.com/ec/processing/uht-treatment
AKUN Water Filters . (2013). Cul es la diferencia entre bacteriosttico y bactericida?
Obtenido de http://akunfilters.com/index.php/purificadores-ultravioleta/item/28-cual-es-
la-diferencia-entre-bacteriostatico-y-bactericida
HANNA Instrumentos. (2012). Medidor de pH de Mesa. Obtenido de HANNA:
http://www.hannainst.com.mx/catalogo-hanna-instruments/item/medidor-de-ph-de-
mesa
Inoz, C. (2015). Gua para gestin de procesos de estandarizacin. Vasko: Ecograf.
PBX Laboratorios y Equipos. (2011). Autoclaves de Laboratorios. Obtenido de Equipos y
Laboratorios: http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1498
Universidad Nacional del Nordeste: Microbiologa General- Carrera Farmacia. (2006).
Preparacin
del material para el trabajo en Microbiologa Limpieza y Esterilizacin. Obtenido de
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp3.pdf

9. ANEXOS
9.1. Diagrama del Equipo (Ver Anexo 9.1.)

10. Cuestionario
10.1. Qu es lo que ocurre en cada mtodo de esterilizacin?
En el mtodo de esterilizacin por calor hmedo se produce la desnaturalizacin y
coagulacin debido a la presencia de agua, que produce que se rompan los puentes
de hidrogeno entr los grupos C = O----HN que constituye la estructura secundaria y se
agrega (tambin mediante puente de hidrgeno) una molcula de agua a cada extremo de
esas uniones rotas. Las protenas en soluciones ms diluidas coagulan a menor
temperatura que las concentradas. Se utiliza este mtodo para esterilizar exclusivamente:
medios de cultivos, recipientes contaminados, material de goma, y todo elemento que no
resista las altas temperaturas del calor secoEl calentamiento es rpido por la gran cantidad
de calor latente del vapor de agua, que libera al condensarse sobre la superficie del objeto.
(UNN, 2006, p.2)

Ayudante: Christian Cruz

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El mtodo de esterilizacin por calor seco provoca la deshidratacin de las bacterias,

virus, etc. y facilita la coagulacin o desnaturalizacin de las protenas. Se requieren
mayores temperaturas para producir dao irreversible (muerte). Se acepta que el calor
seco acte oxidando los constituyentes intracelulares. En el proceso de esterilizacin son
prioritarios los procesos oxidativos y de fusin de membranas por sobre la
desnaturalizacin. Resulta lento por la menor eficacia del calor seco y por la lentitud del
transporte del calor (conveccin y radiacin).Este mtodo se utiliza para esterilizar: Cera,
vaselina, talco, recipientes cerrados hermticos de vidrio o metlicos sin filo. (UNN,
2006, p.2)

10.2. Cul es la diferencia entre bacteriosttico y bactericida?

Tabla 10.2.-1. Diferencias

BACTERIOSTTICO BACTERICIDA
No produce la muerte de la bacteria
Impide su reproduccin y muere sin Produce la muerte de la bacteria
dejar descendencia
Filtros de agua
Filtros de carbn activado con Purificadores ultravioleta
contenido de plata o KDF
Fuente: (AKUN Water Filters , 2013)

10.3. Cul es el propsito de la accin de la presin en el proceso de autoclavado?

La autoclave utiliza vapor a presin superior a la normal. As, la temperatura del vapor
de agua asciende a 121C. El vapor saturado penetra en los recipientes tomando contacto
con los microorganismos a destruir, all se condensa liberando calor. (UNN, 2006, p.2)

10.4. Qu mtodo de esterilizacin es ms comn en los alimentos y por qu?

El tratamiento (UHT), ultra alta temperatura, se utiliza para calentar el producto a una
temperatura lo suficientemente alta, 135 C y 150 C durante un tiempo muy corto, entre
1 a 5 segundos. Este proceso se lleva a cabo por contacto directo entre el producto y
vapor a baja presin. El producto se esteriliza y luego se enfra envasndose
aspticamente. Se utiliza para los productos con bajo nivel de acidez (pH superior a 4,6),
como la leche UHT, la leche saborizada UHT, las cremas UHT, la leche de soja y otras
alternativas lcteas. El mismo proceso tambin se utiliza para esterilizar alimentos

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preparados, como sopas, salsas, postres, preparaciones a base de tomate y frutas, y

alimento para beb. ( Tetra Pak International S.A., 2014)

10.5. Cmo se realiza el acondicionamiento de: matraz Erlenmeyer y caja Petri?

Tabla 10.5.-1. Acondicionamiento Matraz Erlenmeyer y Caja Petri

Matraz Se lav y desinfecto el material previamente para luego
erlenmeyer colocar el tampn de algodn y fijar con un capuchn de
papel empaque cuadrado al cuello del matraz y ajustarlo con
un pedazo de piola, para proceder a colocar en el autoclave de
15-20 min.
Caja petri Se coloc la caja petri encima de un pedazo de papel
empaque rectangular y se procedi a envolver de forma
similar a un regalo, luego se da la vuelta, se doblan los
extremos y se coloca un pedazo de cinta adhesiva y se indica
la fecha de acondicionamiento.
Fuente: (Universidad Central de Ecuador: Laboratorio de Bioqumica, 2016)

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