Informe Prac. 7

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA y a DISTANCIA
ZONA CENTRO BOGOT CUNDINAMARCA

CEAD JOS ACEVEDO y GMEZ
ESCUELA Ciencias Bsicas, Tecnologas e Ingenieras ECBTI
Profesor. Juan Gabriel Perilla Jimnez (MDQ); 2016-1
INFORME PRCTICA 7 COMPONENTE PRACTICO LABORATORIO
QUIMICA AMBIENTAL
NOMBRE ESTUDIANTE: (Diana Gisel Salamanca)

DOCUMENTO:
CORREO:
PROGRAMA: Ingeniera Ambiental
CURSO: Qumica Ambiental
GRUPO DE PRCTICA: 05
NOMBRE TUTOR PRCTICA: Juan Gabriel Perilla Gonzlez
NOMBRE ESTUDIANTE: (Leidy Matamoros)

DOCUMENTO:
CORREO:
NOMBRE ESTUDIANTE: Norma Catherine Ledesma Novoa)

DOCUMENTO: 1018418331
CORREO: normaledesmanovoa@yahoo.com
NOMBRE ESTUDIANTE: (Karol Natalia Gmez Molina)

DOCUMENTO: 1.030.684.071
CORREO: Karol-gomez24@hotmail.com
Universidad Nacional Abierta y a Distancia
Octubre 14 2017
INFORME DE PRCTICA DE LABORATORIO # PRACTICA No. 07 Estudio de los

parmetros cromatogrficos a ser aplicados en muestras ambientales
FECHA DE LA PRCTICA: 16 de septiembre FECHA DE PRESENTACIN: 14 de octubre

INFORME: 03
OBJETIVO GENERAL:
Conocer, analizar, determinar, adquirir y practicar a travs del desarrollo de la gua temas
referentes y especficos a la cromatografa.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Estudiar parmetros cromatogrficos a partir del simulador HPLC.
Adquirir conocimientos sobre la cromatografa.
Analizar y determinar el comportamiento de los compuestos a desarrollar.
FUNDAMENTO TERICO:
La cromatografa se defina como un sistema de separacin dinmica que permite separar

componentes que se distribuyen en 2 fases, una inmvil conocida como fase estacionaria
y una fase mvil. Esta tcnica se aplica para la separacin de compuestos orgnicos, donde
se analizan los 2 compartimentos ambientales (agua, suelo, alimentos, etc.). Para
profundizar en el equipo a emplear se definen conceptos que permitirn una mayor
comprensin de la prctica.
Fase mvil: Solvente: Es aquella que interacta con la fase mvil donde se generan la
operacin de componentes que se grafican a partir del programa, se debe tener en cuenta
que esta fase puede presentar alteraciones en el anlisis.
Retencin y factor de capacidad: Al introducir un compuesto corriente de fase mvil si no

hay una interaccin con la fase inmvil o estacionara, esta banda tendra el mismo
desplazamiento que la fase mvil y el volumen sera igual, esto se denomina volumen
muerto.
Dispersin de bandas: Se lleva a cabo un proceso de difusin que es dependiente del

tiempo, la dispersin aumenta en funcin del tiempo de elucin.
Eficacia: verifica los picos que deben ser agudos.
Resolucin: Depende de la retencin y selectividad de manera proporcional.
Elucin: se puede definir como una funcin que se da a partir de la composicin de la fase
mvil, esta se divide en dos:
Elucin Isocratica: Representa la composicin constante de la fase mvil, aqu los

compuestos migran por medio de la columna hasta finalizar.
Elucin en Gradiente: En esta elucin los compuestos son eludidos por el aumento de
fuerzas inicas y la modificacin de la polaridad donde esto genera una disminucin del
factor de retencin y sus tiempos.
DATOS EXPERIMENTALES:
PARTE 1:
Los datos experimentales los proporciona el simulador al establecer configuraciones que

permitieron obtener los resultados, por lo tanto se anexa una imagen de los datos
obtenidos por el simulador en cada parte. Lo subrayado son los resultados al configurar
el simulador de acuerdo a las especificaciones del gua, a partir de all se obtienen los
resultados:
PARTE 2:
Se Configura el simulador segn las caractersticas descritas en la Tabla 1.
Tabla 1 Primera configuracin del HPLC Simulator

Modo de Fraccin del
Composicin de Solvente A: Solvente B:
elucin: solvente B
la fase mvil Agua Metanol
Isocrtico (%v/v): 50
Propiedades Temperatura Volumen de
Flujo (mL/min): 20
cromatogrficas (C): 25 inyeccin (L): 10
Constante de Desplazamiento Puntos

Propiedades
tiempo (s): de la seal (min): Ruido: 2.0 marcados:
generales
0.1 0.0 300
Fase Dimetro Tamao de
Propiedades de la Longitud (mm):
estacionaria: interno partcula
columna 100.0
Agua (mm): 4.6 (m): 3.0
Imagen 1. HPLC Simulator parte 2
Luego se Cambia la composicin de la fase mvil de metanol a acetonitrilo como se

muestra en la Tabla 2.
Tabla 2 Segunda configuracin del HPLC Simulator

Modo de Fraccin del
Composicin de Solvente Solvente B:
elucin: solvente B
la fase mvil A: Agua Acetonitrilo
En la tabla 23, la diferencia en los cambios de energa libre (G) para la retencin de los
solutos en las fases mviles MeOH/Agua 50/50 y ACN/Agua 50/50, segn las siguientes
ecuaciones:
PARTE 3:
Luego En el listado de compuestos, se eliminan 7 solutos dejando solo a acetofenona y

etilparabeno.
Se Fijan las condiciones del simulador de acuerdo con la Tabla 3
Tabla 3 Tercera configuracin del HPLC Simulator

Modo de Fraccin del
Composicin de Solvente A: Solvente B:
elucin: solvente B
la fase mvil Agua Metanol
Volumen de
Propiedades Temperatura
inyeccin (L): Flujo (mL/min): 10
cromatogrficas (C): 25
5.0
Constante de Desplazamiento Puntos
Propiedades
tiempo (s): de la seal (min): Ruido: 2.0 marcados:
generales
0.1 0.0 3000
Fase Dimetro Tamao de
Propiedades de la Longitud (mm):
estacionaria: interno partcula
columna 100.0
Agua (mm): 4.6 (m): 3.0
CLCULOS:
Parte 2:
Para la tabla 3 se calcula a partir de las siguientes ecuaciones:
= 1 2
1 = .1
2 = .2
= 0.0821 . /.
= 273.15
Aplicando formulas:
Para MeOH/Agua (metanol) donde corresponde al solvente b utilizado en la primera
parte, se reemplaza valores de k que es la constante, se resuelve as:
1 = .1
Reemplazando:
Acetofenona:

1 = 0.0821. . . (273.15). (14.57) = 26.09.

Butilparabeno:

1 = 0.0821. . . (273.15). (245.79) = 53.60 .

Ketoprofeno:

1 = 0.0821. . . (273.15). (90.69) = 43.89 .

Benzofenona:

1 = 0.0821. . . (273.15). (184.76) = 50.83.

Propiofenona:

1 = 0.0821. . . (273.15). (38.54) = 35.56.

3-nitrofenol:

1 = 0.0821. . . (273.15). (9.61) = 22.03.

Etilparabeno:

1 = 0.0821. . . (273.15). (38.99) = 35.67 .

Propilparabeno:

1 = 0.0821. . . (273.15). (103.16) = 45.15 .

4-nitrofenol:

1 = 0.0821. . . (273.15). (8.06) = 20.32 .

Para ACN/agua (Acetonitrilo):
2 = .2
Acetofenona:

2 = 0.0821. . . (273.15). (7.36) = 19.44 .

Butilparabeno:

2 = 0.0821. . . (273.15). (59.85) = 39.85 .

Ketoprofeno:

2 = 0.0821. . . (273.15). (30.30) = 33.22 .

Benzofenona:

2 = 0.0821. . . (273.15). (68.79) = 41.20 .

Propiofenona:

2 = 0.0821. . . (273.15). (19.20) = 28.77 .

3-nitrofenol:

2 = 0.0821. . . (273.15). (6.20) = 17.76 .

Etilparabeno:

2 = 0.0821. . . (273.15). (12.57) = 24.65 .

Propilparabeno:

2 = 0.0821. . . (273.15). (29.17) = 32.85 .

4-nitrofenol:

2 = 0.0821. . . (273.15). (5.40) = 16.4 .

Ahora se aplica la ecuacin de diferencia en los cambios de energa libre (G):
= 1 2
Acetofenona:

= (26.09. ) (19.44. ) = 6.65.

Butilparabeno:

= (53.60. ) (39.85. ) = 13.75.

Ketoprofeno:

= (43.89. ) (33.22. ) = 10.67.

Benzofenona:

= (50.83. ) (41.20. ) = 9.63.

Propiofenona:

= (35.56. ) (28.77. ) = 6.79.

3-nitrofenol:

= (22.03. ) (17.76. ) = 4.27.

Etilparabeno:

= (36.67. ) (24.65. ) = 12.02.

Propilparabeno:

= (45.15. ) (32.85. ) = 12.3.

4-nitrofenol:

= (20.32. ) (16.4. ) = 3.92.

RESULTADOS:
Tabla 4 Resultados primera configuracin del HPLC Simulator

Compuesto Tiempo de Factor de retencin Ancho de banda (sigma
retencin (tR) (k) total)
Acetofenona 8,28 14,57 4,44
Butilparabeno 131,25 245,79 70,17
Ketoprofeno 48,76 90,69 26,07
Benzofenona 98,79 184,76 52,82
Propiofenona 21,03 38,54 11,25
3-nitrofenol 5,64 9,61 3,03
Etilparabeno 21,27 38,99 11,37
Propilparabeno 55,40 103,16 29,63
4-nitrofenol 4,82 8,06 2,60
Tabla 5 Segunda configuracin del HPLC Simulator

Compuesto Tiempo de Factor de retencin Ancho de banda (sigma total)
retencin (tR) (k)
Acetofenona 4,45 7,36 2,18
Butilparabeno 32,36 59,85 15,7

Ketoprofeno 16,65 30,30 8,12
Benzofenona 37,12 68,79 18,10
Propiofenona 10,75 19,20 5,25
3-nitrofenol 3,83 6,20 1,89
Etilparabeno 7,22 12,57 3,53
Propilparabeno 16,05 29,17 7,83
4-nitrofenol 3,41 5,40 1,68
Compuesto Fase mvil

MeOH/Agua ACN (50/50) G
(50/50)
G1 G2
Acetofenona
26.09. 19.44 . 6.65.

Butilparabeno
53.60 . 39.85 . 13.75.

Ketoprofeno
43.89 . 33.22 . 10.67.

Benzofenona
50.83. 41.20 . 9.63.

Propiofenona
35.56. 28.77 . 6.79.

3-nitrofenol
22.03. 17.76 . 4.27.

Etilparabeno
35.67 . 24.65 . 12.02.

Propilparabeno
45.15 . 32.85 . 12.3.

4-nitrofenol
20.32 . 16.4 . 3.92.

Tabla 6 Resultados tercera configuracin del HPLC Simulator

Compuesto Tiempo de Factor de retencin Ancho de banda (sigma total)
retencin (tR) (k)
Acetofenona 0.1129 0.0516 0.1545
Butilparabeno 0.1130 0.0526 0.1545
Tabla 7 Resultados cuarta configuracin del HPLC Simulator

% MeOH retencin (tR) (k) total)
95 Acetofenona 0.1129 0.0516 0.1545

Butilparabeno 0.1130 0.0526 0.1545
85 Acetofenona 0.1191 0.1096 0.1703
Butilparabeno 0.1209 0.1270 0.1711
75 Acetofenona 0.1322 0.2325 0.1897
Butilparabeno 0.1400 0.3066 0.1937
65 Acetofenona 0.1599 0.4930 0.2175
Butilparabeno 0.1861 0.7399 0.2341
55 Acetofenona 0.2188 1.047 0.2680
Butilparabeno 0.2974 1.79 0.3299
45 Acetofenona 0.3438 2.2222 0.3768
Butilparabeno 0.5658 4.3094 0.5787
35 Acetofenona 0.6090 4.7157 0.6166
Butilparabeno 1.2136 10.4002 1.1932
25 Acetofenona 1.718 10.0070 1.1176
Butilparabeno 2.7771 25.0997 2.6245
15 Acetofenona 2.3661 21.2358 2.1131
Butilparabeno 6.5504 60.5755 5.8354
5 Acetofenona 4.9005 45.0642 4.0248
Butilparabeno 15.6567 146.1926 12.8508
Tabla 8 Resultados quinta configuracin del HPLC Simulator

% ACN retencin (tR) (k) total)
95 Acetofenona 0.1088 0.0098 0.1324

Butilparabeno 0.1077 0.0023 0.1322
85 Acetofenona 0.1100 0.0237 0.1378
Butilparabeno 0.1082 0.0072 0.1374
75 Acetofenona 0.1135 0.0573 0.1442
Butilparabeno 0.1099 0.0227 0.1431
65 Acetofenona 0.1222 0.1385 0.1527
Butilparabeno 0.1151 0.0717 0.1500
55 Acetofenona 0.1431 0.3349 0.1655
Butilparabeno 1.315 0.2260 0.1610
45 Acetofenona 0.1936 0.8099 0.1942
Butilparabeno 0.1832 0.7125 0.1890
35 Acetofenona 0.3157 1.9584 0.2709
Butilparabeno 0.3464 2.2465 0.2903

25 Acetofenona 0.6111 4.7355 0.4818
Butilparabeno 0.8608 7.0832 0.6638
15 Acetofenona 1.3254 11.4509 1.0257
Butilparabeno 2.4829 22.3339 1.9079
5 Acetofenona 3.0525 27.6893 2.3644
Butilparabeno 7.5974 70.4198 5.8755
GRAFICAS:
MeOH/Agua (50/50) disminuyendo progresivamente de 10 en 10 hasta 5.
Imagen 6. Descenso del porcentaje hasta 5 con metanol.
MeOH/Agua (50/50).
Imagen 3. Cromatograma obtenido al tener como solvente B Metanol.
ACN/Agua (50/50) disminuyendo progresivamente de 10 en 10 hasta 5.
Imagen 8. Descenso del porcentaje hasta 5 con metanol.

ACN.
Imagen 4. Cromatograma obtenido al tener como solvente B Acetonitrilo.
ANALISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS:
De acuerdo a lo realizado y visto en el simulador se puede observar que el tiempo

de retencin disminuye cuando se cambia de metanol a acetonitrilo, esto se debe
a que este solvente tiene una constante dielctrica de 37 y el metanol de 33, esto
quiere decir que este es ms polar que se define como una separacin de cargas
elctricas, lo que genera que los tiempos de retencin sean ms cortos en el
segundo solvente, adems de la disminucin de la constante de retencin.
CUESTIONARIO:
PARTE I
Reconocimiento de los parmetros cromatogrficos en cromatografa lquida de alta
eficiencia (CLAE)
Defina y explique cmo se relacionan los siguientes conceptos. Incluya cuando

corresponda, el smbolo y ecuacin que representa al concepto:
1. Factor de separacin.
2. Resolucin.
3. Eficiencia.
4. Factor de retencin.
5. Tiempo de retencin.
6. Tiempo muerto.
7. Ancho de banda (sigma total)
8. Cromatografa lquida en fase normal.
9. Cromatografa lquida en fase reversa.
10. Gradiente de elucin.
11. Elucin isocrtica.
Desarrollo
1. Factor de separacin: Es un parmetro de la cromatografa definido para separacin de

dos analitos, es la relacin entre los tiempos de retencin ajustados, factores de capacidad
o retencin respectivos, esta columna sirve para separar dos picos, esta puede ser selectiva
cuando identifica un valor alto de este factor.

= = . 4

Entonces a se puede calcular de la siguiente manera:
()
=
()
2. Resolucin.: (RSS) constituye una medida cuantitativa de su capacidad para separar dos
analitos, en este trmino si se toma en cuenta el ensanchamiento de los picos, as que la
magnitud de este valor si permite asegurar la separacin de dos picos. Indica la calidad de
una separacin, como una medida numrica de la separacin entre los compuestos y se
define como:
2 1
=
1/2 (1 + 2)
Donde:
V= Es el volumen de la retencin de cada compuesto

W= la anchura de cada pico
Los parmetros que influyen en la resolucin de una separacin cromatografa son la

eficiencia de la columna, la selectividad y el factor de retencin:
1
= ( ).( ).( )
4 1+
3. Eficiencia: (N) Para realizar una separacin cromatografa optima, debe evitarse en lo
posible, el ensanchamiento de las bandas debido a la dispersin; en efecto cuanto ms
anchas sean las bandas, menor nmero de ellas podrn ser resueltas en un espacio de
tiempo dado; es decir cunto ms agudos sean los picos que emergen de una columna
mejor estar actuando dicha columna. Las anchuras de las bandas cromatogrficos
dependen de las caractersticas de la columna (tamao de las partculas del lecho
estacionario, homogeneidad de este, velocidad de la fase mvil, etc.). Se expresa como el
nmero de platos tericos: El nmero de platos de una columna depende de su longitud,
por lo que se debe tener en cuenta la altura equivalente de un plato terico, que relaciona
la eficacia de una columna con su longitud y se define como el cociente entre la longitud
de la columna y su nmero de platos tericos.
4. Factor de retencin: (K) Define la velocidad d emigracin de un analitos en una

columna determinada (B) es la relacin de fases. El tiempo que tarda la fase mvil en
pasar a travs de la columna se le conoce como (to) que es el equivalente del tiempo de
una sustancia no retenida.

= =

5. Tiempo de retencin: Es el tiempo que transcurre despus de la inyeccin de la muestra

para que el pico del analitos alcance el detector y se le da el smbolo. O en otras palabras
es el tiempo que tarda cada sustancia en abandonar el sistema cromatogrficos.
6. Tiempo muerto: Es el tiempo determinado para que la especie no retenida alcance el

detector; en pocas palabras podemos decir que es el tiempo que tarda en eludir un soluto
que no interacciona con la fase estacionaria.
= /
7. La anchura de banda: se puede expresar en trminos de la apertura o amplitud de las

rendijas, S, y la dispersin lineal recproca del monocromador como:
= . 1
8. Cromatografa liquida en fase normal: La fase estacionaria es polar (gel de slice, grupos
ciano, amino y diol) y la fase mvil es no polar (hexano o isopropileter). El componente
menos polar es el que eluye primero.
9. Cromatografa liquida en fase reversa: La fase mvil es polar (agua, metanol o

acetonitrilo). El componente ms polar es el primero en eluir y la fase estacionaria es no
polar (cadena hidrocarbonada que puede ser: Cadena larga: C: 18 Cadena intermedia:
C: 8 Cadena corta: C: 2 7.
10. Gradiente de elucin: Se utilizan dos o ms disolventes de distinta polaridad y se vara

la composicin de forma continua o mediante etapas escalonadas.
11. Elucin socrtica: Es la separacin con disolvente de composicin constante,

ocasionados que todos los compuestos migren a travs de la columna con diferentes
velocidades provocando una elucin ms rpida o lenta.
Para este parmetro se emplean las siguientes ecuaciones:
Tiempo de retencin: = +
Factor de capacidad: K= ( )/

Resolucin Rs= [(
) (( )// ]][ /( + )
PARTE II
Efecto de la estructura de los compuestos (solutos) y de la composicin de la fase mvil
sobre la retencin y la resolucin.
1. Dibuje estructuras de los siguientes compuestos utilizando las convenciones de

cua/flash representando los ngulos de enlace adecuados:
Acetofenona Benzofenona Etilparabeno

Butilparabeno Propiofenona Propilparabeno
Ketoprofeno 3-nitrofenol 4-nitrofenol
Acetofenona: Densidad: Benzofenona: Densidad: Butilparabeno:
1030kg/;1,03g/ Punto de fusin: 1110kg/;1,11g/ Masa Molar: Densidad: 1,06g/ Masa
293,15K Punto de ebullicin: 182,217g/mol Apariencia: Molar: 180,2g/mol
475,15K Solido blanco
Ketoprofeno: Masa Molar: Propiofenona: Densidad: 3-nitrofenol: Masa

254,281g/mol 3. 1,06g/ Masa Molar: molecular: 139,11 g/mol
180,2g/mol Punto de ebullicin: 194
C / 70 mmHg (Lit).
Punto de fusin: 93-
103 C
Etilparabeno: Densidad: 1,06g/ Propiloparabeno: Densidad: 4-nitrofenol: Masa

Masa Molar: 180,2g/mol 1,06g/ Masa Molar: molar: 139,11 g mol -1
180,2g/mol Punto de ebullicin:
279 C (534 F; 552 K)
2. Sobre la base de sus estructuras:
a) Prediga el orden de elucin de los compuestos, partiendo del menos al ms

retenido en RPLC (Cromatografa lquida en fase reversa).
ORDEN DE ELUSION
Etilparabeno
Propilparabeno
Butilparabeno
Ketoprofeno
Acetona
Propiofenona
Benzofenona
Justifique su respuesta.
La elucin de los compuestos cambia el orden porque aumenta la polaridad de la fase

mvil o eluyente. Este cuadro est organizado de manera creciente segn la fuerza y
elucin de los compuestos ms utilizados.
b) Cules son los principales usos de cada uno de estos compuestos?
Acetofenona:
Es un lquido viscoso e incoloro de l se realizan numerosas preparaciones de fragancias

y resinas. Se utiliza como un catalizador de polimerizacin para la fabricacin de olefinas,
tambin como producto intermedio para los productos farmacuticos, agroqumicos y
otros compuestos orgnicos. Tambin se ha sido utilizado como una droga para inducir
el sueo. Es un disolvente de plsticos, resinas, teres de celulosa y steres.
Benzofenona:
Es un compuesto importante en la fotoqumica orgnica, perfumera y como reactivo en

sntesis orgnicas, se puede utilizar como un iniciador de foto en aplicaciones de curado
UV, tales como tintas, imgenes, y barnices de acabado en la industria de la impresin,
tambin se puede aadir a los envases de plstico como un bloqueador de UV. Su uso
permite a los fabricantes para empaquetar el producto en vidrio transparente o de
plstico. Sin ella, sera necesario envases opacos u oscuros. En aplicaciones biolgicas,
benzofenonas se han utilizado ampliamente como sondas fotofsicas para identificar y
mapear las interacciones pptido- protena.
Butilparabeno
El butilparabeno es un polvo cristalino inodoro e incoloro a temperatura ambiente, muy

utilizada como conservante en alimentacin, medicina y cosmtica, se utiliza muchsimo
en muchos productos del cuidado de la piel e incluso en medicinas tan comunes como el
ibuprofeno. Es el antifngico ms potente de entre los parabenos. De hecho, su potencial
microbiano es mayor que el del metilparabeno, el Propilparabeno o el Etilparabeno. Es
particularmente eficaz contra mohos y levaduras, y menos contra bacterias.
Propiofenona
Reactivos comunes, productos farmacuticos, perfumes y la industria de sntesis orgnica.
Etilparabeno
Son utilizados como conservadores protegiendo a los productos de las levaduras y los
hongos. No obstante, no son muy efectivos contra las bacterias. Su actividad es
independiente de la acidez, y adicionalmente, son poco solubles, lo que limita sus
aplicaciones (antimicrobianos y ciertas propiedades antioxidantes) en formas
farmacuticas liquidas como jarabes, soluciones, suspensiones e inyectables. Son usados en
una gran variedad de alimentos y cosmticos.
Propilparabeno
Se usa como conservador para cosmticos (es el segundo producto de este tipo ms
utilizado) y en combinacin con metilparabeno se utiliza en formulaciones farmacuticas
parentales. Para productos de cuidado para la piel y comida. Tiene una toxicidad
generalmente baja por ingestin. Puede irritar los ojos, la piel, el tracto intestinal y el
respiratorio con el contacto, la ingestin y la inhalacin, respectivamente. Tambin es
combustible.
Ketoprofeno
Es un antiinflamatorio no esteroideo dotado de potente actividad analgsica, muy eficaz

en el tratamiento de enfermedades reumticas, traumatolgicas y procesos inflamatorios
en general. El principio activo Ketoprofeno se utiliza en el tratamiento de la artritis
reumatoide, osteoartrosis, espondilitis anquilosante y episodios agudos de gota.
3-nitrofenol
Usa principalmente para manufacturar tinturas, pigmentos, productos de caucho y

sustancias funguicidas.
4-nitrofenol
Es usado principalmente en la manufactura de medicamentos, fungicidas, tinturas y para

oscurecer el cuero. Es un producto de la degradacin de plaguicidas como el paratin y
el fluoridifen. Puede producir enfermedades de la sangre. Los fenmenos observados en
personas por inhalacin del 4nitrofenol son sensacin de quemazn, vrtigo y debilidad.
La inhalacin en altas concentraciones puede originar un aumento del metabolismo.
Tambin puede absorberse por la piel. En contacto con los ojos produce enrojecimiento
y dolor.
3. Explique por qu se da el cambio en los tiempos de retencin y en la separacin

de los compuestos cuando el metanol es sustituido por el acetonitrilo.
Se da porque los tiempos de retencin disminuyen cuando el porcentaje de agua es menor

ya que el disolvente empleado tiene tiene una baja capacidad polar, como se explica en
el anlisis se debe a que el acetonitrilo es ms polar que el metanol y se obtiene una mejor
separacin con el acetonitrilo que con el metanol.
4. En qu caso se obtiene una mejor separacin?
Se obtiene una mejor separacin al momento de incorporar un modificador de PH.
5. Cul es la importancia del agua en la composicin de la fase mvil?
El agua tiene una constante dielctrica de 78, lo que lo hace ms estabilizador para
especies inicas ya que contiene compuestos que ayudan a la separacin del mismo.
6. Cules solutos poseen las diferencias ms grandes y ms pequeas en la energa

libre asociada a la retencin, comparando las fases mviles MeOH/Agua (50/50)
y ACN/Agua (50/50)? Explique la naturaleza de esos cambios.
7. Con los hallazgos realizados hasta ahora, elabore una conclusin sobre el efecto
de la estructura de los solutos y la composicin de la fase mvil sobre la retencin
y la resolucin.
Se puede concluir que los efectos dependen en cuanto a las propiedades de cada
compuesto o soluto, infiriendo en las capacidades de intercambio inico que resultan ms
eficientes si la polaridad del compuesto es mayor, interactuando en la fase estacionaria
ocasionando una retencin y una mejor separacin.
PARTE III
Efecto del porcentaje del modificador en la composicin de la fase mvil sobre la
retencin y la resolucin.
1. Con los hallazgos realizados en esta seccin, elabore una conclusin sobre el efecto
del porcentaje modificado en la composicin de la fase mvil sobre la retencin y la
resolucin.
El efecto modificado entre ms grande sea permitir que el tiempo de retencin sea
menor, garantizando una mayor eficacia mientras que al disminuirlo se dilata el tiempo
significativamente. Esto es posible al poder modificar las caractersticas del sistema,
dentro de los cuales se encuentra la fase mvil que abarac PH, fuerza ionica y solvente
modificador; la columna donde se simboliza la presin gradiente y al ser diferentes en
su composicin, el gradiente se mantiene estable, llevando a una elucin constante.
2. Si fuera contratado en un laboratorio para separar (empleando cromatografa lquida)

una mezcla los compuestos acetofenona y etilparabeno cul sera la mejor
composicin de fase mvil a emplear? Justifique su respuesta
La composicin de fase mvil que se utilizara sera el acetonitrilo por sus tiempos de
retencin tan cortos, la exactitud que se obtiene en los grficos adems de un estudio con
mrgenes mnimos de error.
CONCLUSIONES:
El simulador permite entender la cromatografa y como las fases mviles pueden

alterar tiempos de retencin, constantes y anchos de banda generando alternativas
de cual fase es la ms indicada para un estudio de laboratorio.
El % / puede alterar el tiempo de una muestra dilatando el proceso y teniendo
menor exactitud en los resultados como se observa en las grficas al ir
descendiendo.
Esta es una herramienta muy til en cuanto a experimentacin y anlisis de
muestras.
Se observ en esta prctica que por medio de la cromatografa es posible
identificar de que sustancias est compuesta una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de los compenetres evaluados.
La cromatografa es una herramienta fundamental para separar las sustancias
qumicas a travs de cada una de sus fases que en este estudio se determinaran.
REFERENCIAS
Acetofenona, consultado en octubre de 2017, recuperado de

http://www3.uah.es/mol_play/1.htm
Butilparabeno, Quiminet, consultado en octubre de 2017, recuperado de

http://www.quiminet.com/productos/butilparabeno-6373322859.htm
Laboratorio quimico, (2017), consultado en octubre de 2017, recuperado de

https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/procedimientos-basicos-de-
laboratorio/que-es-la-cromatografia.html

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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA y a DISTANCIA

ZONA CENTRO BOGOT CUNDINAMARCA

INFORME PRCTICA 7 COMPONENTE PRACTICO LABORATORIO

NOMBRE ESTUDIANTE: (Diana Gisel Salamanca)

NOMBRE ESTUDIANTE: (Leidy Matamoros)

NOMBRE ESTUDIANTE: Norma Catherine Ledesma Novoa)

NOMBRE ESTUDIANTE: (Karol Natalia Gmez Molina)

Universidad Nacional Abierta y a Distancia

INFORME DE PRCTICA DE LABORATORIO # PRACTICA No. 07 Estudio de los

FECHA DE LA PRCTICA: 16 de septiembre FECHA DE PRESENTACIN: 14 de octubre

Estudiar parmetros cromatogrficos a partir del simulador HPLC.

Adquirir conocimientos sobre la cromatografa.

Analizar y determinar el comportamiento de los compuestos a desarrollar.

La cromatografa se defina como un sistema de separacin dinmica que permite separar

Retencin y factor de capacidad: Al introducir un compuesto corriente de fase mvil si no

Dispersin de bandas: Se lleva a cabo un proceso de difusin que es dependiente del

Eficacia: verifica los picos que deben ser agudos.

Resolucin: Depende de la retencin y selectividad de manera proporcional.

Elucin Isocratica: Representa la composicin constante de la fase mvil, aqu los

Los datos experimentales los proporciona el simulador al establecer configuraciones que

Se Configura el simulador segn las caractersticas descritas en la Tabla 1.

Tabla 1 Primera configuracin del HPLC Simulator

Constante de Desplazamiento Puntos

Imagen 1. HPLC Simulator parte 2

Luego se Cambia la composicin de la fase mvil de metanol a acetonitrilo como se

Tabla 2 Segunda configuracin del HPLC Simulator

Luego En el listado de compuestos, se eliminan 7 solutos dejando solo a acetofenona y

Se Fijan las condiciones del simulador de acuerdo con la Tabla 3

Tabla 3 Tercera configuracin del HPLC Simulator

Para la tabla 3 se calcula a partir de las siguientes ecuaciones:

Para ACN/agua (Acetonitrilo):

Ahora se aplica la ecuacin de diferencia en los cambios de energa libre (G):

Tabla 4 Resultados primera configuracin del HPLC Simulator

Tabla 5 Segunda configuracin del HPLC Simulator

Butilparabeno 32,36 59,85 15,7

Compuesto Fase mvil

Tabla 6 Resultados tercera configuracin del HPLC Simulator

Tabla 7 Resultados cuarta configuracin del HPLC Simulator

95 Acetofenona 0.1129 0.0516 0.1545

Butilparabeno 15.6567 146.1926 12.8508

Tabla 8 Resultados quinta configuracin del HPLC Simulator

95 Acetofenona 0.1088 0.0098 0.1324

Butilparabeno 0.3464 2.2465 0.2903

Butilparabeno 7.5974 70.4198 5.8755

MeOH/Agua (50/50) disminuyendo progresivamente de 10 en 10 hasta 5.

Imagen 6. Descenso del porcentaje hasta 5 con metanol.

Imagen 3. Cromatograma obtenido al tener como solvente B Metanol.

ACN/Agua (50/50) disminuyendo progresivamente de 10 en 10 hasta 5.

Imagen 8. Descenso del porcentaje hasta 5 con metanol.

Imagen 4. Cromatograma obtenido al tener como solvente B Acetonitrilo.

ANALISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS:

De acuerdo a lo realizado y visto en el simulador se puede observar que el tiempo

Defina y explique cmo se relacionan los siguientes conceptos. Incluya cuando

1. Factor de separacin: Es un parmetro de la cromatografa definido para separacin de

Entonces a se puede calcular de la siguiente manera:

V= Es el volumen de la retencin de cada compuesto

Los parmetros que influyen en la resolucin de una separacin cromatografa son la

4. Factor de retencin: (K) Define la velocidad d emigracin de un analitos en una

5. Tiempo de retencin: Es el tiempo que transcurre despus de la inyeccin de la muestra

6. Tiempo muerto: Es el tiempo determinado para que la especie no retenida alcance el

7. La anchura de banda: se puede expresar en trminos de la apertura o amplitud de las

9. Cromatografa liquida en fase reversa: La fase mvil es polar (agua, metanol o

10. Gradiente de elucin: Se utilizan dos o ms disolventes de distinta polaridad y se vara

11. Elucin socrtica: Es la separacin con disolvente de composicin constante,