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INFORMACION DE LA PRCTICA
CROMATOGRAFIA
MUESTRAS UTILIZADAS
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA:
Silica gel
Laminas de vidrio, laminas porta objetos.
Envase con tapa (cmara cromatografa)
Flores y frutos de colores
HCL metanlico al 1%
Eluyentes
n-butanol: cido actico glacial: agua
(60:15:25)
HCl 1 N
cido actico glacial: HCl : Agua
(60:6:20)
Cromatografa en columna
Sephadex G-25
Tubo de vidrio (1 x 08 cm)
Buffer Fosfato de potasio 50 mM, pH 7.2
Reservorio de Buffer con mangueras
Muestra: Azul de dextrano 10mg/mL y rojo de fenol 0.5%
METODOLOGA UTILIZADO PARA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
I) Utilizando el mortero se aplastaron los ptalos y se aadimos 5ml de
HCL y luego 2ml ms.
Figura n1: ptalos de rosa molidos en un mortero con 7ml de HCL. Fuente:
https://es.123rf.com/photo_12420252_petalos-de-rosa-de-flores-en-un-mortero-de-porcelana-
con-su-correspondiente-mano-y-dispersas-aislada.html
Figura n2: tiza introducida en el tubo de ensayo con la ayuda de un alfiler. Fuente: propia
IV) Luego se espera por 10 minutos y se observa la distancia recorrida
por el lquido fuertemente coloreado.
Figura n4: Sephadex G-5 con buffer fosfato de potasio 50Mm a pH 7,2. Fuente propia.
OBJETIVOS
Conocer las diferentes tcnicas de cromatografas y determinar su uso
prctica dentro del campo de la biologa.
Ds
Dm
***Rf =Dm / Ds
MUESTRAS Dm Ds Rf
A (nuestro) 4.6 cm 5,9 cm 0,78 cm
B (otros) 0,4 cm 6,6 cm 0.06 cm
Cromatografia en columna
Volumen Volumen de Volumen
MUESTRAS Tiempo
muerto elucion total
A (nuestro) 20 ml 21 ml 41 ml 29.17 min
B (otros) 10 ml 20 ml 30 ml 17.18 min
Volumen relativo
MUESTRAS
de elucion
A (nuestro) 1.05 ml
B (otros) 2 ml
DISCUSIN
-Comparando la efectividad y rapidez entre las tcnicas de cromatografa
empleadas la cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente
a otros mtodos cromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya
que lo que se emplea es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir
las separaciones es mucho menor y la separacin es generalmente mejor en
donde la fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La
fase estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser por lo general
menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se
desplacen con mayor velocidad sern los menos polares. Polaridad de los
compuestos orgnicos en orden creciente: hidrocarburos < olefinas < flor <
cloro < nitro < aldehdo aldehdo < ester < alcohol < cetonas < aminas < cidos
< amidas. (4)
Mientras que en la cromatografa en columna se utiliza una columna de vidrio
vertical que se llena con un soporte slido adsorbente (fase estacionaria: los
ms utilizados son gel de slice (SiO2) y almina (Al2O3). La muestra que se
quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la
columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase mvil) que,
por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a travs de la columna. Se
establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el
disolvente eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los
componentes de una mezcla establecer interacciones diferentes con la fase
estacionaria y la mvil, sern transportados a diferentes velocidades y se
conseguir su separacin. No obstante, a menudo los compuestos que deben
ser aislados suelen ser incoloros. En este caso, se recogen secuencialmente
pequeas fracciones de eluatos (Cada una de las sustancias que migran a
travs del lecho de la fase estacionaria (impulsadas por la fase mvil) dentro de
un sistema de separacin cromatogrfico) en tubos rotulados y la composicin
de cada fraccin se analiza por cromatografa en capa fina. Una vez
identificadas las diferentes fracciones que contienen el mismo producto, se
renen, se elimina el disolvente y se analiza la identidad de los componentes
por mtodos espectroscpicos. (5).
Se puede inferir entonces que la cromatografa en capa fina es la ms fcil y
rpida ya que se basa en la preparacin de una capa, uniforme, de un
adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte
CONCLUSIONES
Efectivamente, se pudo conocer tericamente las diferentes tcnicas de
cromatografas expuesta en clase como la importancia biolgica que
representa esta tcnica para separar compuestos biolgicos que se
encuentran en una mezcla.
Se pudo realizar la tcnica de cromatografa en capa fina con xito como
tambin se pudo observar, separar e identificar el pigmento del material
biolgico utilizado que en este caso fue el de flores de varios colores.
CUESTIONARIO
Cromatografa de capa fina
1. Qu criterios permiten elegir el solvente adecuado para separar
solutos?
La eleccin del solvente est directamente relacionada con el tipo de
reaccin y requiere tener en cuenta ciertas consideraciones. A la hora de
escoger el solvente se debe tener perfectamente estudiada la solubilidad
de los reactivos a la temperatura a la cual se tiene que realizar el
experimento. Cuando se deben realizar experimentos a temperatura
elevada se tienen que seleccionar disolventes de puntos de ebullicin
altos, como por ejemplo DMF, DMSO, N-metilpirrolidona, tolueno, xileno,
etc. (Grupo GIDOLQUIM; 2016).
Cuestionario
Cromatografa en columna
1. Cul es la relacin entre el Peso Molecular de los solutos separados
por cromatografa en columna y el Volumen relativo de Elucin?
Es indirectamente proporcional ya que este es independiente del tamao
de la columna del gel(De esta respuesta no estoy seguro, no encontr
info solo estoy suponiendo por la info que nos dan en la gua)
Bibliografa
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm.
https://bioquimexperimental.files.wordpress.com/2009/08/cromatografc3
adas.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos
_6700.pdf
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tip
us.html