PRACTICA N 1

Fundamento

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes

indispensables para el crecimiento de los
microorganismos. La composicin precisa depender de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades
nutricionales varan considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales y microorganismos muy
exigentes que necesitan determinadas sustancias como
vitaminas, suero o sangre para crecer.

Existen medios cuya composicin permite el crecimiento de:

1. un gran nmero de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de Sabouraud),

2. determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los

denominados medios selectivos.

3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas fisiolgicas

o test bioqumicos (utilizacin de citratos, acidificacin a partir de azcares, etc.).

Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:

1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgnicos (hidratos

de carbono, aminocidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgnicos (P, Fe, N, Mg, S, etc)

2. Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-agar),

tampones, indicador de pH, etc.

Durante las prcticas se van a manejar medios de cultivo de composicin muy variada y
de tres tipos diferentes en cuanto a consistencia: medios slidos, semislidos y lquidos.
Este ltimo aspecto es importante a la hora de la preparacin de los mismos. Aunque los
medios artificiales o sintticos se pueden preparar a partir de sus componentes
individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los que
solamente hay que aadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la
composicin, la caducidad, y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e
incluso como debe esterilizarse.

Objetivos concretos de la prctica

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de

los microorganismos in vitro.

2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el

laboratorio de microbiologa.

3. Hacer un primer acercamiento a la manipulacin de microorganismos. Adquirir la idea

de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las tcnicas ms comunes
para realizarlo.

Realizacin Prctica

Cada mesa de trabajo se encargar de la preparacin de una cantidad suficiente del medio
de cultivo, para ser utilizado, por todos los alumnos del grupo de prcticas. Las
instrucciones a seguir dependern del nmero de mesa y el medio de cultivo asignado,
pero en todos los casos, los pasos son los siguientes:

1. Ya realizado el clculo correspondiente al cada mesa de trabajo, pesar las

cantidades suficientes de medio de cultivo.

2. Disolver los componentes del medio en agua destilada siguiendo las instrucciones
del fabricante o del profesor, aadir la cantidad de agua adecuada para conseguir
la concentracin deseada de los mismos. Si el medio contiene un agente
solidificante (agar-agar) hay que calentar el preparado hasta la ebullicin del
mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una completa disolucin del agar
 (medios slidos y semislidos); para medios lquidos no es necesario calentar,
nicamente se agita la mezcla hasta la completa disolucin de la misma.
3. Esterilizar la disolucin, una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar
el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse
el medio, el procedimiento ser diferente. Tapar el matraz con tapn de algodn
y cubrir con papel craf. Llevar a esterilizar al autoclave (1210C) durante 15-20
minutos.

4. Una vez estril, preparar 15ml de sangre por mesa de trabajo y ser aadidos con
rapidez y cuidado al medio de cultivo, repartir en placas de Petri estriles y dejar
en reposo para que solidifique.

5. Se procede a realizar la toma de muestra para la prxima reproduccin de los

microorganismos a crecer. Se lleva a incubadora a 37C de 24 a 48hr.
6. Una vez se haya visto crecimiento de microorganismos en el caldo se procede a
realizar la siembra en las placas con agar sangre.

7. Llevar las placas a la incubadora a 37C de 24 a 48hr.

8. Muy aparte le realizamos un Gram a lo obtenido en el caldo de cultivo para tener

expectativas de los resultados que obtendremos en la placa Petri.

9. Observamos al microscopio con aumento de 100x y una gota de aceite de

inmersin en la lmina porta objeto.