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DISCUSIONES Una vez obtenida la grfica de absorbancia vs longitud
de onda, se observa a la longitud de onda de 260 nm
Para la obtencin de DNA de origen vegetal, se
una campana en la grfica, la cual corresponde al DNA,
utilizaron hojas de espinaca, las cuales se colocaron en
mientras que a la longitud de onda de 280 nm se
un mortero y se procedi a triturar, de esta forma se
observa otra campana pero ms pequea que la de 260
est rompiendo la pared celular de estas clulas
nm, esta corresponde a las protenas. Lo anterior
vegetales y a su vez separarlas. Al finalizar se adiciono
significa que se tiene ms DNA que protenas, lo cual se
5 mL solucin de EDTA-Tris-NaCl y se sigui triturando,
puede comprobar cuando obtenemos las
en esta solucin el EDTA protege al DNA al no permitir
concentraciones de estos con ayuda de nomograma, en
que lo ataquen las nucleasas (enzimas que atacan
el cual se tienen que la concentracin de DNA es de
cidos nucleicos) que tienen como cofactor al Mg+2, ya
0.054 mg/mL, mientras que en las protenas se tiene
que el EDTA forma un complejo con el cofactor y por lo
una concentracin de 0.05 mg/mL.
tanto no permite que las nucleasas realicen su funcin,
el Tris es una sal que da amortiguamiento de pH para Identificacin de bases pricas y pirimdicas
dar estabilidad al DNA. por cromatografa en capa fina
Posteriormente se 0.3 mL de amilasa, la cual se Para la cromatografa se utiliz DNA y RNA hidrolizados
encarga de romper el almidn en molculas ms de los cuales se colocaron 5 aplicaciones sobre el
pequeas, se mezcl y se incubo durante 10 minutos a cromatograma, y tambin se colocaron 2 aplicaciones
temperatura ambiente, de inmediato se agregaron 10 de las bases nitrogenadas. Se desarroll la placa de
mL de una solucin saturada de NaCl, la cual favorece cromatografa, utilizando como fase mvil una mezcla
la ruptura de la clula, ya que con esta se ejerce una de butanol: cido actico: agua. Una vez desarrollado el
presin osmtica muy alta y por lo tanto las membranas cromatograma se revelo por exposicin a la luz
se rompen, por lo tanto se libera almidn, lpidos ultravioleta en un cuarto oscuro. Se puede observar en
protenas, etc. Tambin se adiciona 5 mL de SDS al el cromatograma, dos manchas muy amontonas, las
10%, el cual rompen las membranas tambin y se libera cuales corresponden al DNA y RNA (de derecha a
el DNA, una vez adicionas estas soluciones se filtr el izquierda) y estas al estar hidrolizados se tiene una
homogeneizado a travs de una tela sinttica en un impureza y por lo tanto no se distingue la separacin de
embudo, colocando el filtrado en un tubo Falcon. Ms manchas, estas largas manchas tienen a su lado
tarde se adiciono 15 mL de la mezcla cloroformo: izquierdo las manchas de guanina, adenina y citosina
alcohol isoamlico, en donde los lpidos son afines al (de derecha a izquierda), lo cual significa que tanto DNA
cloroformo y se van con l, mientras que el alcohol como RNA contienen estas 3 bases nitrogenadas.
isoamlico desnaturaliza a las protenas, por lo tanto
estas precipitan.
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timina, y la mancha de RNA se encuentra a la misma
distancia que la mancha de uracilo, con esto podemos
decir que el DNA y RNA tienen las mismas bases
nitrogenadas (adenina, guanina y citosina) a excepcin
de una ltima, que en el DNA corresponde a timina y en
el RNA corresponde a uracilo.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA