PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DE SUERO DE LECHE EN

CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO CON CICLOS REPETIDOS

Karelen Araujo, Alejandra Romero, Patricia Chirinos, Gisela Paz, Zulay Mrmol y Marisela Rincn

RESUMEN

Se evalu la produccin de etanol a partir de Kluyve-
romyces marxianus var. marxianus ATCC 8554 usando lacto-
suero como sustrato previamente desproteinizado, mediante
cultivos por lote alimentado con ciclos repetidos. Los ensayos
se realizaron por triplicado y se estudiaron a dos concentra-
ciones de lactosa, 6,0 y 10% p/v a pH 5,0; temperatura 30C y
con una velocidad de agitacin de 150rpm. Se emple un bio-
rreactor Bioflo 4000 con un volumen de trabajo de 4500 litros
y controles automticos de temperatura y velocidad de agita-
cin. La alimentacin se adicion al reactor con un flujo de
0,375lh-1 y cada ciclo de lote alimentado tuvo una duracin de
4h. El lactosuero ultrafiltrado y concentrado se caracteriz en
trminos de pH, fsforo, cenizas, lactosa a travs del mtodo
espectrofotomtrico fenol-cido sulfrico, contenido de nitr-
geno por el mtodo de Kjeldahl, y protenas, multiplicando el
porcentaje de nitrgeno por 6,38. La biomasa en el medio de
cultivo se determin con la tcnica de peso seco. La produc-
cin de etanol se determin utilizando cromatografa de gases
con detector FID a 250C y con una columna HP5. La ma-
yor concentracin de biomasa fue de 78,15 0,1120kgm-3 y de
etanol 31,392 0,0053kgm-3 para el suero concentrado al 10%.
Los resultados demostraron que la produccin de etanol en el
cultivo por lote alimentado con ciclos repetidos arroja mejores
rendimientos en comparacin con los obtenidos por carga.

Introduccin
La produccin de CO2 pro-
veniente de la utilizacin de
combustibles fsiles, aunado
al resultante del cambio
climtico, es uno de los prin-
cipales problemas de contami-
nacin ambiental a nivel mun-
dial, por lo que hay necesidad
de cambiar el empleo de com-
bustibles fsiles por recursos
naturales renovables. El etanol
puede ser utilizado como sus-
tituto de este tipo de combus-
tibles en los vehculos de
combustin interna como car-
burante, aditivo, disolvente y
ms recientemente en la ela-
boracin de celdas de hidr-
geno. Este producto puede
obtenerse a partir de diferen-
tes materias primas como
caa de azcar, maz, trigo o

PALABRAS CLAVE / Bioprocesos / Cultivo por Lote Alimentado / Etanol / Lactosuero /

Recibido: 28/03/2014. Modificado: 24/03/2015. Aceptado : 26//03/2015.

Karelen Araujo. Ingeniera
Qumica, Magster en Ciencia
y Tecnologa de Alimentos y
Doctora en Ingeniera, La
Universidad del Zulia (LUZ),
Venezuela. Profesora, LUZ,
Venezuela. Direccin: Labora-
torios de Tecnologa de
Alimentos y Fermentaciones
Industriales. Facultad de
Ingeniera, LUZ. Apar tado
526. Maracaibo, Estado Zulia.
Venezuela. e-mail: karelena-
raujo@gmail.com
Alejandra Romero. Ingeniera
Qumica, LUZ, Venezuela.
Patricia Chirinos. Ingeniera
Qumica, LUZ, Venezuela.
Gisela Paz. Ingeniera Qumica Marisela R incn. Marisela
y Magster en Ingeniera Rincn. Ingeniera Qumica y
Qumica, LUZ, Venez uela. Magster en Ingeniera
Profesora, LUZ, Venezuela. Qumica, LUZ, Venezuela.
Zulay Mrmol. Mr mol. Profesora, LUZ, Venezuela.
Ingeniera Qumica y Magster
en Ingeniera Qumica, LUZ,
Venezuela. Profesora, LUZ,
Venezuela.

MAY 2015, VOL. 40 N 5 0378-1844/14/07/468-08 $3.00/0 305

ETHANOL PRODUCTION FROM WHEY USING FED-BATCH CULTURE WITH REPEATED CYCLES
Karelen Araujo, Alejandra Romero, Patricia Chirinos, Gisela Paz, Zulay Mrmol and Marisela Rincn

SUMMARY

Ethanol production from Kluyveromyces marxianus var.
marxianus 8554 was evaluated using previously de-proteinat-
ed whey as a substrate, by means of fed-batch culture with
repeated cycles. All the experiments were made by triplicate
using two lactose concentrations, 6.0 and 10.0% w/v, at pH
5,0 and 30C, with agitation at 150rpm. A Bioflo 4000 biore-
actor was used with working volume of 4500 liters and auto-
matic temperature and agitation speed controls. The reactor
was fed at 0,375lh-1 using 4h cycles. The fresh and concen-
trated whey was characterized in terms of pH, phosphorus,
ash, lactose through spectrophotometric phenol-sulfuric acid
method, nitrogen content by the Kjeldahl method, and protein
multiplying the percent nitrogen by 6.38. Biomass in the cul-
ture medium was determined by dry weight loss. Ethanol pro-
duction was determined by gas chromatography. The highest
concentration of biomass was 78,15 0,1120gm-3 and that of
ethanol was 31,392 0,0053kgm-3 for 10% lactose whey. Re-
sults showed that ethanol production in the fed-batch culture
with repeated cycles gave better results in comparisson to
those obtained with loading.

PRODUO DE ETANOL A PARTIR DE SORO DE LEITE EM CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO COM CICLOS
REPETIDOS
Karelen Araujo, Alejandra Romero, Patricia Chirinos, Gisela Paz, Zulay Mrmol e Marisela Rincn

RESUMO
Avaliou-se a produo de etanol a partir de Kluyveromy-
ces marxianus var. marxianus ATCC 8554 usando lactosoro
como substrato previamente desproteinizado, mediante cul-
tivos por lote alimentado com ciclos repetidos. Os ensaios
se realizaram por triplicado e foram estudados em duas
concentraes de lactose, 6,0 e 10% (p/v) pH 5,0; tempera-
tura 30C e com uma velocidade de agitao de 150rpm.
Empregou-se um biorreator Bioflo 4000 com um volume
de trabalho de 4500 litros e controles automticos de tem-
peratura e velocidade de agitao. A alimentao foi adi-
cionad ao reator com um fluxo de 0,375lh-1 e cada ciclo
de lote alimentado teve uma durao de 4h. O lactosoro ul-
trafiltrado e concentrado se caracterizou em funo do pH,
fsforo, cinzas, lactose atravs do mtodo espectrofotomtri-
co fenol-cido sulfrico, contedo de nitrognio pelo mt-
odo de Kjeldahl, e protenas, multiplicando a porcentagem
de nitrognio em 6,38 vezes. A biomassa no meio de culti-
vo foi determinada com a tcnica de peso seco. A produo
de etanol se determinou utilizando cromatografia de gases
com detector FID a 250C e com uma coluna HP5. A maior
concentrao de biomassa foi de 78,15 0,1120kgm -3 e a de
etanol foi de 31,392 0,0053kgm -3 para o soro concentrado
em 10%. Os resultados demostraram que a produo de eta-
nol no cultivo por lote alimentado com

harina de yuca (Christensen
etal., 2011; Castao etal., bles limpios como el etanol,
2012). Sin embargo, el empleo
de estas materias primas es
cuestionable debido a son
fuentes de alimentos.
Es posible la obtencin de
etanol a partir de suero de le-
che, el cual es un subproducto
de la industria lctea con un
alto potencial contaminante por
los altos contenidos de DBO y
DQO, de 50gl-1 y 80gl-1 res-
pectivamente (Ozmihci y
Kargi, 2007; Hadiyanto etal.,
2014). Generalmente, las plan-
tas procesadoras de queso no
hacen un uso adecuado de este
subproducto y la mayor parte
es descargada a los cuerpos de
agua (Parra, 2009). No obstan-
te, tambin es empleado como
suplemento en la alimentacin
animal.
El suero de leche ha sido
empleado como sustrato para
la generacin de combusti-
(Oz m i hci y K a rg i, 20 06.
2007; Padn y Das, 2006;
Ch r istensen etal., 2011).
Para la elaboracin de este
combustible se ha utilizado
la levadura Kluyveromyces
marxianus, la cual ha sido
ampliamente utilizada en el
bioprocesamiento del suero
de leche y es capaz de fer-
mentar la lactosa a etanol
directamente (Ch ristensen
etal., 2011). La produccin
de etanol usando el suero de
leche como sust rato se ha
llevado a cabo a travs de
diferentes mtodos: fermen-
taciones por carga con mi-
croaereacin (Ghaly y El-
Tawel, 1995), fermentaciones
continuas a diferentes tasas
de d ilucin (Ghaly y El-
Tawel, 1997) y mtodos de
inmovilizacin de levaduras
termotolerantes, (Kourkuotas
etal., 20 02; Guo etal., de leche como sustrato.
2010; Gabardo etal., 2014).
Sin embargo, en la mayora
de esos estudios se obtienen
bajos rendimientos de etanol
debido al bajo contenido de
lactosa del suero de leche.
No est reportado en la lite-
ratura el empleo de suero de
leche concent rado para la
produccin de etanol usando
cultivo por lote alimentado
con ciclos repetidos, proceso
que of rece vent ajas sobre
otros, ya que se evitan los
fenmenos de inhibicin por
sustrato como resultado de
una baja concentracin de
sustrato concentrado. Por tal
motivo, el objetivo principal
de este trabajo es evaluar la
produccin de etanol utilizan-
do Kluyveromyces marxianus
var. marxianus en cultivo por
lote alimentado con ciclos
repetidos, a partir de suero
Materiales y Mtodos
Microorganismo
Se utiliz la levadura
Kluymeromyces marxianus
var. marxianus ATCC 8554,
obtenida de la American Type
Culture Collection (Rockville,
MD, EEU U), cultivado en
medio agar YEPD.
Sustrato
Como sustrato se emple
suero de leche con 6,0 y
10,0% p/v de lactosa, prove-
niente de la produccin de
queso prensado, proporciona-
do por la empresa Lcteos
Pacomela C.A, ubicada en La
Concepcin, estado Zulia,
Venezuela.

306 MAY 2015, VOL. 40 N 5

Procesamiento del suero
de leche
Se aplic un tratamiento ter-
mocido. Para ello se ajust el
pH a 4,5 con HCL 6N y se ca-
lent a 90C por 10min. Se dej Scientific (New Jersey, EEUU).
enfriar hasta una temperatura
por debajo de 35C para some-
terlo al proceso de ultrafiltra-
cin y as garantizar una
eficiente desproteinizacin
(Quintero etal., 2001). Del sue-
ro sometido a ultrafiltracin se
obtuvieron dos corrientes de
salida: un concentrado proteico
que se hizo recircular para reti-
rar la mayor cantidad de prote-
na posible y otra corriente rica
en lactosa, la cual fue utilizada
para los procesos de fermenta-
cin. Una vez desproteinizado el
suero, se pas por la membrana
de nanofiltracin, se separaron
las sales y se obtuvo un recircu-
lado concentrado de lactosa
(Mui etal., 2005; Araujo
etal., 2007). Se requiri un
volumen de 90 litros para alcan-
zar la concentracin de 10% p/v
de lactosa. La temperatura de
operacin fue de 30C y la pre-
sin de 150psi. El suero se su-
plement con extracto de leva-
dura 0,75% (Merck), sulfato de
amonio 0,84% (Merck) y sulfato
de magnesio 0,05% (Merck). El
pH se ajust a 5 y se esteriliz
en un autoclave (Felisa) a 115C
y 24,52psi durante 15min
(Cardona y Snchez, 2007).
Luego fue almacenado a 10C
hasta su posterior utilizacin.
Caracterizacin del suero
de leche
Se determinaron: nitrgeno
por el mtodo de Kjeldahl
(Quintero etal., 2001); prote-
nas, multiplicando el porcentaje
de nitrgeno por 6,38 (AOAC,
1990); pH con un pHmetro mar-
ca Metrohom modelo Fwitzland,
segn la Norma 1315-79
(COVENIN, 1979); lactosa por
el mtodo de Dubois etal.
(1957); fsforo siguiendo el m-
todo de la AOAC (1995) y ceni-
zas segn la Norma 368-82
COVENIN (1994).
Proceso de fermentacin
El inculo se prepar aa- hora y le fueron realizados los
diendo a cada 200ml de medio
MAY 2015, VOL. 40 N 5
el contenido de dos cuas de
microorganismo activado (20ml)
con un volumen total de 1 litro.
Se incub a 30C y 150rpm
durante 5h en una incubadora
INNOVA 4300 New Brunswick
Los cultivos por lote alimentado
con ciclos repetidos se desarro-
llaron utilizando un fermentador
Bioflo 4000 de 5 litros (New
Brunswick Scientific). Se co-
menz con una operacin por
carga con 3000ml del medio de
cultivo (2000ml de lactosuero
tratado y suplementado y 1000
ml del inculo) con agitacin a
150rpm y aireacin de 1 vvm;
el pH del lactosuero se ajust a
5. Este proceso por carga dur
hasta garantizar la fase de creci-
miento exponencial, para luego
iniciar el proceso por lote ali-
mentado, agregando medio de
cultivo fresco hasta que se al-
canz condiciones cuasi estacio-
narias. La alimentacin se adi-
cion al reactor bajo condicio-
nes aspticas con un flujo de
0,375lh-1 utilizando una bomba
peristltica (Watson-Marlow,
Modelo 323) hasta alcanzar un
volumen total de 4500ml. Cada
ciclo de lote alimentado conti-
nu por 4h con agitacin de
150rpm, sin control de pH y
aireacin de 1 vvm, seguido de
4h de operacin por lote sin
agitacin y sin aireacin. Se re-
movieron 1500ml del caldo fer-
mentado al finalizar cada opera-
cin de lote alimentado, las que
se desarrollaron bajo las mis-
mas condiciones, a un caudal
constante 0,375lh-1 y sin con-
trol de pH.
Se determin la absorbancia
del inculo a 580nm con un
espectrofotmetro Varian UV-
50-10 (Victoria, Australia) y se
realiz un contaje directo de
clulas para estandarizar la
concentracin de biomasa ini-
cial. Para ello se emple un
microscopio Will-Wetzlar
GMBH d 6330 Wetzlar 21
(Netzstecker, Alemania) y una
cmara de Neubauer Propper
(Long Island City, NY, EEUU).
Anlisis efectuados durante la
fermentacin
Se tomaron muestras cada
siguientes anlisis:
Biomasa. La concentracin de
biomasa se determin turbido-
metricamente midiendo la ab-
sorbancia de la muestra a
580nm en un espectrofotme-
tro modelo Car y UV- 50
Varian (Mulgrave, Victoria,
Australia). La densidad ptica
fue relacionada con el peso
seco de biomasa por unidad de
volumen a travs de la cons-
truccin previa de una curva
de calibracin.
Lactosa. El contenido de lacto-
sa se determin utilizando el
mtodo espectrocolorimtrico
(mtodo fenol - cido sulfri-
co) de Dubois etal. (1957)
empleando un espectrofotme-
tro modelo Cary UV-50 Varian
(Mulgrave, Victoria, Australia)
a intervalos constantes de 1h
desde el inicio de la fermenta-
cin, a una longitud de onda
de 490nm.
Etanol. La concentracin de
etanol se determin utilizando
un cromatgrafo de gases
Agilent Technologies 6890L,
con una columna HP5 y pro-
visto de detector FDI y se uti-
liz un mtodo estndar exter-
no desarrollado para ste an-
lisis. Las condiciones de ope-
racin fueron: temperatura del
FDI 230C, Split 100:1, gas de
arrastre helio, horno a 40C,
temperatura del detector
250C, velocidad de f lujo de
calor 10C/ min -100C.
pH. Se determin el pH a tra-
vs del pHmetro marca
Metrohom modelo Fwitzland.
Anlisis estadstico
Se llevaron a cabo tres rpli-
cas de los cultivos por lote ali-
mentado con ciclos repetidos a
TABLA I
CARACTERIZACIN DEL SUERO DE LECHE*
Suero
Composicin
crudo
pH 6,431 0,458
Lactosa (kgm-3) 71,882 0,458
Nitrgeno (% p/v) 0,187 0,056
Protena (% p/v) 1,193 0,058
Fsforo (% p/v) 0,295 0,025
Cenizas (% p/v) 0,568 0,143
* Valores promedio de triplicados.
30C y concentraciones de lac-
tosa de 6,0 y 10,0% p/v. Se
realiz un test de significacin
t-student (= 0,05), para esta-
blecer el efecto de la concen-
tracin de lactosa sobre la cin-
tica de crecimiento de la leva-
dura Kluyveromyces marxianus
var. marxianus ATCC 8554, el
consumo de la lactosa y la pro-
duccin de etanol a las distin-
tas concentraciones de lactosa.
Resultados y Discusin
Composicin del suero de
leche
La caracterizacin del lacto-
suero empleado en este estudio
se muestra en la TablaI. El
suero crudo es un suero de
leche dulce debido a que pre-
senta un pH de 6,431 0,458 y
coincide con los valores repor-
tados por Badui (2006). El pH
para el suero ultrafiltrado y
concentrado disminuy con
respecto al suero crudo debido
a los procesos de acidificacin
y calentamiento realizados du-
rante el tratamiento termico-
cido. El alto contenido de pro-
tena en el suero cr udo se
debe a que es obtenido de la
primera etapa o corte de pro-
duccin del queso; el valor
coincide con el reportado por
Quintero etal. (2001). El suero
ultrafiltrado present una con-
centracin menor de lactosa
inicial que el suero cr udo,
mientras que el contenido de
nitrgeno y protena se redujo
notoriamente, demostrando la
eficiencia de los procesos de
desproteinizacin aplicados.
Para el suero concentrado se
obtuvo una concentracin
de lactosa de 101,251kgm 3
utilizando una membrana
de nanofiltracin. El porcentaje
Suero Suero
ultrafiltrado concentrado
4,532 0,234 4,723 0,113
60,947 0,563 101,251 0,371
0,050 0,027 0,045 0,019
0,319 0,017 0,285 0,034
0,112 0,050 0,028 0,024
0,392 0,138 0,581 0,025
307
de protena no vari considera- lactosa al utilizarse para la En la Figura1 se puede estudio con respecto a los tra-
blemente debido a que el pro- propagacin del inculo en el apreciar que para ambos bio- bajos anteriormente citados.
ceso de nanofiltracin se utili- medio de trabajo; es decir, el procesos hay un aumento pro- El ciclo III se llev a cabo
z para obtener una mayor inculo estaba ya adaptado al gresivo de la concentracin de para demostrar que el microor-
concentracin de lactosa. De crecimiento en las condiciones biomasa con respecto al tiem- ganismo no fue capaz de meta-
acuerdo a los resultados obte- presentes en el medio fresco po para los ciclos I y II, donde bolizar el sustrato alimentado,
nidos por Mui etal. (2005) (Montiel etal., 2000). La velo- se alcanz condiciones cuasi dando lugar a la fase de muer-
se observa en la TablaI que la cidad especfica de crecimien- estacionarias al final del ci- te. Por lo tanto, existe un de-
desproteinizacin es ms efec- to celular () a lo largo de la cloII; obtenindose mayor crecimiento en ambos compor-
tiva utilizando el proceso de fase exponencial durante el concentracin de biomasa en tamientos produciendo bajas
tratamiento trmocido junto proceso por carga fue ligera- el medio de fermentacin para concentraciones de biomasa.
al proceso de ultrafiltracin mente mayor cuando se utiliz el suero concentrado. En el La Figura2 muestra el con-
tangencial, que solo el proce- suero concentrado (mx= 0,472 ciclo I de ambos bioprocesos, sumo de lactosa para las fer-
dimiento termocido reportado 0,0166) en comparacin con el microorganismo empieza a mentaciones control y experi-
por Quintero etal. (2001). el valor obtenido para el suero consumir gradualmente el nue- mental en suero ultrafiltrado y
En la Figura1 se ilustra la fresco ( mx= 0,407 0,0151), vo sustrato alimentado. concentrado. Puede observarse
produccin de biomasa a dife- superando los valores reporta- En el ciclo II se aprecia un que en la fermentacin control
rentes concentraciones de lac- dos por Araujo etal. (2007) aumento del cultivo de clula para ambos bioprocesos; la
tosa inicial obtenida en un para suero concentrado ( mx= donde se obtienen las mximas concentracin de lactosa se
proceso por lote alimentado 0,224 0,017) y suero ultrafil- concentraciones de biomasa incrementa con el tiempo, de-
con tres ciclos repetidos (I, II trado (mx= 0,290 0,006). Se con respecto a los dems ci- bido a la ausencia de clulas
y III). Se aprecia que al inicio realiz un test de significacin clos, en el suero ultrafiltrado de levadura, para as determi-
del proceso del cultivo por t-student (= 0,05) y se obtuvo fue de 26,78 0,0856kgm-3 y nar la cantidad de sustrato a
carga cuando se utiliza suero que las velocidades especificas con el suero concentrado fue consumir por parte del mi-
ultrafiltrado, la fase de adapta- del suero ultrafiltrado y con- de 78,15 0,1120kgm-3, siendo croorganismo. En la fermenta-
cin es corta con un creci- centrado no varan significati- superior al encontrado por cin experimental, las concen-
miento exponencial que tuvo vamente. Una vez alcanzada la Araujo etal. (2007) de traciones de lactosa fueron
una duracin de ~6h, mientras fase de crecimiento exponen- 19,68kgm -3 y por Ozmihci y siempre inferiores que las de
que para el suero concentrado cial en el proceso de fermenta- Kargi (2007) de 9,0kgm -3 . la fermentacin control, debido
no se observa dicha fase, lo cin por carga, se da inicio a Mediante el test de significa- a que hubo una efectiva utili-
que puede sealar que para la alimentacin del nuevo sus- cin t-student se encontr que zacin de lactosa por el mi-
altas concentraciones no hubo trato con las caractersticas hay diferencia significativa croorganismo utilizado.
una limitacin en el transporte iniciales del medio de cultivo, entre los mximos valores de De lo anteriormente mencio-
de lactosa y nutrientes hacia el y as comenzar el lote alimen- biomasa reportados en este nado cabe destacar que el
interior de la clula, ya que se tado con tres ciclos repetidos
parti de clulas inducidas con para cada bioproceso.
250

90
Ciclo II 200 Ciclo I
80

70 Ciclo III
Lactosa (kg.m-3)

150
60
Biomasa (kg.m -3 )

Ciclo III
Ciclo I
30
100 Ciclo II
40
Alimentacin
30 50 Alimentacin

20

10 0
0 10 20 30 40
Carg
0 Tiempo (h)
0 5 10 15 20 25 30 35
)
-3

Tiempo (h)
)
-3

Suero Ultrafiltrado (60,947 kg/m3) Control Suero Concentrado (101,251 kg.m-3)

Suero Concentrado (101,257 kg/m3) Experimental Suero Concentrado (101,251 kg.m-3)

Figura1. Produccin de biomasa. Figura2. Consumo de lactosa.

308 MAY 2015, VOL. 40 N 5

comportamiento del microor-
ganismo fue el esperado en
cuanto a la utilizacin del sus-
trato debido a la velocidad de
consumo, lo cual difiere a los
resultados presentados por
Ozmihci y Kargi (2007). Se
observa tambin que en las
fermentaciones experimentales
para ambas concentraciones el
consumo de lactosa es ms
rpido en la fase de adaptacin
durante el proceso por carga y
disminuye gradualmente a me-
dida que transcurren los tres
ciclos. Tambin muestra que al
aumentar la concentracin ini-
cial del sustrato disminuye la
velocidad de consumo.
En el suero ultrafiltrado, el
sustrato ha sido consumido a
las 20h, quedando un exce-
dente de lactosa de 2,66kgm-3
que cor responde al 96,46%
del lactosuero consumido du-
rante el ciclo II, a diferencia
del suero concentrado, donde
el sustrato se consumi lenta-
mente quedando una lactosa
residual de 13,73kgm -3 que
corresponde al 85,61% en el
ciclo II y as dar inicio al ci-
cloIII, en el cual se consume
la lactosa en su totalidad a las
28h con 1,08kgm -3, que co-
rresponde al 98,86%.
La Fig u ra3 muest ra el
comportamiento del pH para
suero ultrafiltrado y concen-
trado en el proceso por lote
alimentado con tres ciclos re-
petidos, lo cual se llev a
cabo con un pH inicial de 5,0
0,254 y luego transcurri sin
control durante todo el proce-
so de fermentacin. El pH del
medio disminuy con el tiem-
po en las primeras 10h, hasta
alcan zar niveles de 4,28
0,106. Este comportamiento
coincide lo observado por con
Ozmihci y Kargi (2007). La
disminucin de pH puede de-
berse a la formacin de otros
productos tales como glicerol,
enzimas, protena unicelular y
trazas de cidos actico o lc- fresco y concentrado no varan
tico (Christensen, 2011). No
obstante, la fer mentacin
mostr altos rendimientos de
etanol a 30C, 150vvm y sin
control de pH.
En la Figura4 se muestra el
efecto de la concentracin ini-
cial del lactosuero sobre la
produccin de etanol en una
MAY 2015, VOL. 40 N 5
operacin de lote alimentado 4,9
con tres ciclos repetidos. Se
observa que durante las prime-
4,8
ras horas de fermentacin por
carga para ambos bioprocesos
la produccin de etanol se in- 4,7 Alimentacin
crement gradualmente en
funcin del tiempo alcanzado, 4,6
mostrando que a medida que Ciclo I
aumenta la concentracin de
pH
4,5
lactosa inicial, aumenta la can-
tidad de alcohol producido.
Como puede notarse, la mayor 4,4
produccin de etanol se produ-
Ciclo III
jo para suero concentrado, ob- 4,3
Ciclo II
tenindose 31,392kgm 3 de
alcohol en la hora 18 durante 4,2
el ciclo II, mientras que para
suero ultrafiltrado la produc-
cin de etanol fue de 4,1
21,568kgm3 en la hora 19 del 0 5 10 15 20 25 30 35
Carg
ciclo II. Estos valores superan Tiempo (h)
los obtenidos por Padn y Daz
(2006). Inmediatamente luego
-3
)
de alcanzar el punto mximo Suero Concentrado (101,251 kg.m-3)
se aprecia una disminucin de
la produccin del alcohol. Figura3. Comportamiento del pH.
En el ciclo III, para ambos
bioprocesos se evidencia que
para concentraciones de etanol 35
por encima de 31,392kgm 3 y
21,568kgm3 se reduce la acti- Ciclo III
vidad de la levadura K. mar- 30
xianus, probablemente debido Ciclo II
a la tolerancia limitada de la
misma (inhibicin celular) a 25
esas concentraciones de etanol
alcanzadas en el medio de 20
Etanol (kgm-3)
fermentacin.
En la TablaII se reportan Ciclo I
los valores de rendimiento de 15 Ciclo II
etanol para cada concentracin Ciclo I
Ciclo III
de lactosa estudiada. El coefi-
10
ciente de rendimiento y la pro-
ductividad aumenta ligeramen-
te cuando aumenta la concen- 5
tracin de lactosa en el medio
de fermentacin.
El mayor rendimiento del 0
proceso se obtuvo en la fer- 0 5 10 15 20 25 30 35
mentacin con suero concentra- Tiempo (h)
do, siendo de 0,383 0,0086kg
etanol kg lactosa. A travs de -3
)
un test de significacin t-stu- Suero Concentrado (101,251 kg.m-3)
dent (= 0,05) se determin
que los rendimientos de suero Figura4. Produccin de etanol.
significativamente. En la
TablaII tambin se puede ob- TABLAII
servar que un aumento en la RENDIMIENTO DE PRODUCTO (Y P) Y
concentracin inicial del subs- PRODUCTIVIDAD (P) DEL ETANOL
trato muestra una alta producti-
vidad de etanol en el proceso Lactosa (kgm-3) Yp (kg etanol/ kg lactosa) P (gl-1h-1)
de fermentacin, la cual fue de 60,947 0,353 0,0095 a 1,135 0,019 a
1,774gl-1h-1. El comportamiento 101,251 0,383 0,0086 a 1,774 0,030 b
del rendimiento y productividad Letras diferentes indican diferencias significativas (=0,05).
309
obtenido es similar al reportado
por Padn y Daz (2006),
Ozmihci y Kargi (2007) y
Gabardo etal. (2014).
Conclusiones
Los valores mximos de
concentracin de etanol obteni-
dos con el suero ultrafiltrado y
concentrado fueron significati-
vamente diferentes. La mayor
concentracin de biomasa, de
78,15 0,112kgm3, y la mxi- Castao Pelez H, Meja Gmez C,
ma concentracin de etanol, de
31,392 0,104kgm 3, se obtu-
vieron cuando se utiliz suero
concentrado durante el ciclo II
de la fermentacin. El biopro-
ceso con suero concentrado
utilizando cultivo por lote ali-
mentado con ciclos repetidos
arroja valores de rendimiento
y productividad de etanol su-
perior a los reportados en pro-
cesos por carga y continuo.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al
Consejo Cientfico y Huma-
nstico de la Universidad del
Zulia (CONDES) por el finan-
ciamiento que permiti el de-
sarrollo de esta investigacin.
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