MTODOS DE AISLAMIENTO MICROBIANO
Mtodo de siembra por estra en placa
Mtodos de vertido en placa y
extensin en placa
Estra en cuadrantes
Usado para obtener cultivos axnicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una
muestra de la poblacin mixta y a continuacin se hacen estras sobre la superficie de
un medio slido preparado en una placa Petri.
Conforme se van haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando
en la superficie del medio menos microorganismos.
En estos mtodos, las suspensiones de clulas microbianas se diluyen antes de su
siembra en placa. Se siguen estas tcnicas cuando la muestra contiene tantos
microorganismos, que la dilucin no se puede realizar en una sola etapa. Por ejemplo,
una suspensin con mil millones de clulas por mililitro debe ser diluida 10 veces para
obtener una suspensin con un centenar de clulas por mililitro, Por tanto, se realizan
diluciones seriadas (en varias etapas), normalmente de diez en diez, pero a veces de
cien en cien.
A. Dividir cada una de las cajas Petri por la parte de atrs en cuatro cuadrantes.
Esterilizar el asa con calor en el mechero.
B. Dejar enfriar el asa y tomar la muestra de una colonia.
C. Inocular la muestra haciendo 4 o 5 estras simples muy juntas de lado a lado sobre el
primer cuadrante de la caja, cerrar la caja. Flamear el asa de inoculacin y hacer girar la
caja Petri un cuarto de vuelta.
D. Abrir nuevamente la caja y con el asa de siembra esterilizada y fra, tocar la superficie
del de estras recin hechas en un punto alejado del inicio. Hacer un segundo grupo de
estras como en el caso anterior. Realizar el mismo procedimiento en el tercer cuadrante
y en el ltimo cuadrante, sin flamear el asa de siembra har una estra ms abierta
(simple).
E. Las cajas con la base hacia arriba se incuban a 35C durante 24-48 horas.
 Medios lquidos Se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodn o tapones
especiales. Un cultivo lquido puede ser transferido mediante un asa microbiolgica, un
hisopo, pipeta o pipeta pasteur; el inculo se deposita dentro del caldo o medio lquido.
En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo particular que se
manifiesta en la superficie o a travs de todo el lquido. Una de las ventajas que presenta
este tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando la velocidad de
microorganismos anaerobios, por otra parte, en este tipo de cultivos, las poblaciones se
encuentran suspendidas y es fcil homogenizarlas, lo que permite estandarizar la
concentracin del inculo. La desventaja que presentan, es que en ellos es difcil detectar
contaminacin a simple vista.

Medios semislidos Se preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o pipeta pasteur; en
este ltimo caso es necesario calentar el medio y cuando se encuentra en estado lquido
y a una temperatura de aproximadamente 42C se agrega el inculo, se homogeniza y
se deja solidificar. Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de los
microorganismos y para favorecer la separacin de microorganismos con diferentes
requerimientos de oxgeno.

Se preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad o de las necesidades,

despus de esterilizarlos, estos se inclinan o vierten en cajas de petri. La siembra se
Medio slido realiza con el asa, inoculando la superficie del agar con mucha suavidad; en estos
medios, los microorganismos al multiplicarse forman agregados que se hacen visibles a
simple vista; a estos agregados se les denominan colonias, las que presentan
caractersticas que varan con el tipo de microorganismo cultivado y el medio de cultivo
empleado.
La desventaja que tienen es que estos aparatos funcionan con are seco, lo que
determina la deshidratacin de los medios de cultivo. Por lo tanto, el crecimiento de
cualquier cultivo experimental que se realice en incubadora no debe prolongare por ms
de nueve das.

Con relacin a las necesidades gaseosas, no todos los microorganismo crecen en

presencia de oxgeno atmosfrico; los que slo crecen en presencia de are se llaman
aerobios obligados; los que slo crecen en ausencia de oxgeno se denominan
anaerobios obligados o estrictos, un tercer grupo se adapta a las dos condiciones y
se le conoce como facultativos. Existe una cuarta categora que comprende bacterias
que requieren oxgeno, pero slo lo utilizan cuando ste existe en concentraciones
reducidas; a estos se les llama microaeroflicos.
 TIPOS DE TINCIONES

Cristian Gram fue quien invento la

tincin para diferencias bacterias.

Gram (-)

Bacterias resistentes a gram Tienen pared celular doble, espacio

intermembranal doble.
Mycobacterium, virus, E.coli.
Color rojo.

TINCIN DE GRAM

Ramas de estudio:
Gram (-)
Bacterias, bacteriologa.
Tienen pared celular doble, espacio
Microbios en general, microbiologa. intermembranal sencillo.
Colorante primario: Cristal violeta
Micobacterias, micologa. Color morado
Colorante secundario: Zafranina
Decolorante: Alcohol-acetona
Mordiente: Luegol
 La envuelta de la endospora es mas
compleja e impermeable que la
envuelta de las clulas vegetativas en
las que se forma. Solo se puede teir el
contenido de la espora alterando
su envuelta. La impermeabilidad de
las cubiertas dificulta que las
endosporas se decoloren una vez
teidas.
Colorante primario: Verde de
El verde de malaquita es un colorante
malaquita.
dbilmente bsico (tiene una carga
Colorante secundario: Zafranina positiva dbil) y por tanto, se une
dbilmente a la bacteria. Penetra en
Decolorante: Agua
las clulas vegetativa . Cuando se
Mordiente: Calor calienta la preparacin tambin
Tincin de esporas penetra las endosporas.

Shaeffer-Ffulton

Durante el lavado con agua, el verde

Esporas teidas de verde y clulas de malaquita se elimina de las clulas
vegetativas teidas de rosa. vegetativas, pero no de la endospora.

El colorante de contraste (la safranina)

solo puede teir a las clulas
vegetativas (decoloradas por el agua)

Fue descrita por primera vez por dos
mdicos alemanes, Franz Ziehl, un
bacterilogo y Friedrich Neelsen, un
patlogo.
Colorante primario: Fucsina bsica.
Colorante secundario: Azul de
metileno
Decolorante: HCl-etanol
Mordiente: Calor
Distingue entre las micobacterias
(cido-alcohol resistentes) y el resto de
las bacterias.
La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el
colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras.
TINCIN DE ZIEHL-
NEELSEN
Las bacterias que resisten la
decoloracin son de color rojo y la que
no se ven de color azul, ya que se
Los BAAR poseen una pared celular utiliza azul de metileno como tincin
rica en lpidos y cidos carboxlicos de contraste
(cido miclico) que tienen la
propiedad de unirse
excepcionalmente fuerte al colorante
1rio.
 TINCIONES
TINCIN EN FRESCO
Las preparaciones en fresco se utilizan
para observar microorganismos vivos.
Consiste en colocar una gota de lquido con los
microorganismos sobre un portaobjetos y a
continuacin cubrirla con un cubreobjetos. Una
preparacin en gota pendiente se realiza colocando
una gota del material en un cubreobjetos y
cubrindolo con un portaobjetos (invertido) con una
excavacin central (portaobjetos excavado)
TINCIN SIMPLE
Un colorante; proporciona contraste
para observar mejor un organismo
completo
Se tine con un colorante bsico (azul
de metileno, cristal violeta, o fucsina
bsica) durante unos 5 minutos.
Aclarar brevemente con agua. Se tien
casi todas las bacterias; la mayora de
los tejidos no se tien.
 CONTROL DE MICROORGANISMOS
Esterilizacin
Proceso mediante el cual son destruidas
o eliminadas todas las formas de vida
microscpicas de un objeto o hbitat.
Calor Radiacin
UV: Campana de flujo
laminal, daa al ADN, por lo
que impide que se
reproduzcan.
Calor Hmedo
Autoclave, 121C por 15
minutos, material de vidrio:
Tubos, matraz, etc.
CONTROL DE MICROORGANISMOS
Desinfeccin
Inhibicin o eliminacin de microorganismos de
objetos inanimados que pueden causar
enfermedad, esto se lleva a cabo
principalmente con agentes qumicos llamados
desinfectantes (esterilizan)
Hipoclorito
Calor seco
Horno: 180C, de 15 a 90
minutos.
Saneamiento
Reduccin de la poblacin microbiana
que se consideran seguros segn las
normas de salud pblica.
Antisepsia
Control de microorganismos en tejidos
vivos con agentes qumicos para prevenir
una infeccin o sepsis, esto se lleva a cabo
con los antispticos que son agentes.
qumicos que destruyen o inhiben el
crecimiento de agentes patgenos.
 RESUMEN DEL
ARTCULO
METODOS DE
IDENTIFICACIN
BACTERIANA Y SUS
APLICACIONES EN LA
INVESTIGACIN
ODONTOLGICA
EJERCICIO EN

EQUIPO

ESTERILIZACIN

DE MATERIALES
 TAXONOMA
Actualmente se conocen casi 2 millones de especies de seres vivos.
Se estima que el nmero total puede ser siete veces superior.
Por ello es preciso una clasificacin que facilite su estudio.
Taxonoma:
Ciencia que se ocupa de clasificar los seres vivos en grupos dispuestos jerrquicamente
Taxn o categora taxonmica: cada uno de los grupos o niveles de una clasificacin jerarquizada.
La unidad fundamental de la que parte toda clasificacin es la especie.

CLASIFICACIN DE SISTEMTICA DE SISTEMA DE CLASIFICACIN DE CLASIFICACIN DE CLASIFICACIN DE

ARISTTELES (S. IV A.C) HAECKEL (1894) COPELAND (1956) WHITTAKER (1969) MARGULLIS (1988) WOESE (1990)

Define dos reinos: Define tres reinos: Define cuatro reinos: Define cinco reinos: Define dos dominios y cinco Define tres dominios y seis
reinos: reinos:
Reino animal Reino protista Reino moneras Reino monera
Dominios: Dominios:
Reino plantas Reino animal Reino protista Reino protista
Domino Procariota: Reino Dominio
Reino vegetal Reino animal Reino fung monera. Arqueobacteria: Reino
Arqueobacterias
Reino vegetal Reino animal Dominio Eucariota: Reino
Protista Dominio Bacteria: Reino
Reino plantas Bacterias
Reinos:
Dominio Eucariota: Reino
Reino monera Protoctista

Reino protista Reinos

Reino fingi Reino Arqueobacterias

Reino animal Reino Bacterias

Reino vegetal Reino Protoctista

Reino Fungi

Reino Animal

Reino Vegetal
 REFERENCIAS

file:///C:/Users/gateway/Downloads/335-1-812-1-10-20131219.pdf
http://paginas.facmed.unam.mx/deptos/cirugia/images/ensenanza/ManualQx.pdf
http://www.hispano-americano.cl/descargas/central_apuntes/ciencias/la_taxonomia.pdf
http://www.hispano-americano.cl/descargas/central_apuntes/ciencias/la_taxonomia.pdf
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap304.htm