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Enzimas amiloliticas microbianas Fausto Arellano-Carbajal y Jorge Olmos-Soto Introduccién Elmereado mundial de enzioasalean26 en 1992 8 délares y ef estimad en 1995 fue alrededor de 1000 millones de délares. Las enzimas produc das por microorganismos representan aproxima: damence el 90% del total de las enzimas producidas en la industeia, De estas, el 75% son de accion hidrolitica y son utilizadas para la depolimerizacisn de sustancias naturales. Den- tro de exe mercado, las carbohidrasas ocupan el segundo sitlo en produccion (Goafiey y West, 1996), empleandose principalmente en la depolimerizacisn del almmidén y la colulosa Tl almidn y a celulesa som las dos fuentes de ‘carbone mis distribuidas en la naturaleza, Estos polimesos estin compuestos de unidades de ghs ‘cos, presentando diferentes conformaciones ancias le aproximadamente 800 millones de anoméricas de tal manera que diferentes sistemas ‘enzimaticos son necesiatdos para degradatlos. Las ‘enzimas que son capaces de hidrolizar los enla- ‘Area de Botecnalogs Marna, Laboratorio de Mirobilo ‘a Molecular Cerro de inestigacon Clete y de Fcicac Superior de Ensenad, Ensenada, BC farolneiocere mc jelmotiscese mc ces r-glucosidicos del almidén son llamadas enzimas amioliticas 0 @-glucanasas y los susteatos son desigaados acglucanos (Vihinen y Mincsils, 1989). Algunos animales, plantas y microorga- pismos tienen lt capaeidad de produc enzimas ‘que hidrolizen el almidén. Las Fuentes de @-glu- canasas son numerosas y las propiedades de estas enzimas difleren mucho. Los organismos vustialmente tienen varias enzimas relacionadas 418 bidrSlisis del almid6n, Los microonganismos se han empleado ampliamente para Ia produc cida y estudio de glucanasas y de las estructu- ras de los materiales almidonales (Vihinen y Manisala, 1989) En esta revision se enfatiza sobre enzimas degracadoras de alin y sus derivados, El sustrato y las enzimas El material deserito como almiden es abundante ‘en el mundo natural (fig, 1). Es un carbohidrato ‘que se almacena y es al energia por las plantas, animales y humanos (Bentley y Williams, 1996). Fl almickin naturales insoluble y esti presen- te en las células de las plantas en grinulos mi ‘croscépicos que son desarrollados como rad come fuente de BIGTRCNOLOGIA 115. 1999 vol 403 oP Palabras clave onzinas amioitices, lid, bidréisis macromokéculas de dos polimeros de glucosas amilosa y amilopectina (Bentley y Williams, 1996), 1a amilosa, ef componente menor del almidén (20-30%), es un polisacirido flexible, principalmente lineal, formado por residuos de ‘-D-glucosa unidos por enlaces 1,4 y por unos pocos puntos ramificados @-1,6. La amilopectina es una estructura altamente eamificada en la que las cadenas lineales de los residuos de a-D-glucosa unidos por enlaces a Af estin interunidos por enlaces «1,6 _nlucosidicos, La amilosa tiene una longitud pro- medio de 100 a 1000 unidades de glucoss, mientras el perfil de'a cadena de amilopectina uusualmente tlene una distibucién bimodal con cadenas largas y coras teniendo longitudes promedio de 40-60 y 11-25 residuos de D-glu- cosil, respectivamente (Vihinen y Maatsiila, 1989). La proporcisa de las ramificaciones o- 1.6 es una propiedad importante del almidn, ya que enzimas amiloliticas hidiolizan con d= ferente especificidad segsin la extensién de la ‘la fecha se encuentran reportacas siete Cla- ses de enzimas amilolitieas de origen micobianc (Pretorius ot al, 1991), a-amilasas, Bramilasas, alucoamilasas Camilogiucosidasas 0 ymilasas), ciclodextrinasas, a-glucosidasas y enzimas deseamifieadoras (Vihinen y Mantsil, 1989). EL ppululano es un sustrata imporante para la iden- tifieacién de un grupo de enzimas desra- mmificadoras, denominadas pululanasas. De éstas se han deserito cuatro tipos: glucoamilasas; igopululanasas, neopululanasas € isoamilasas (anse etal, 1993). la degradacion enzimitica del almion a gi cosa involucra dos process: licuefacekin (por a y B-amilasas) y sacarificacion (por slucoamilasas y enzimas desramificadorss). Las cenzimas amiloiticas han sido muy estudiaclas en. bacterias y hongos. Estudios sobre @ y Be amilasas realizados principalmente en el gene ro Bacillus han tenido una importante panicipacién en el desarrollo de procesos con aplicacién industrial, Por otro lado, la mayor pane del tabajo sobre enzimas cestamificadoras se ha llevado a cabo con la pululanasa de Klobstela pneumoniae, In wnica producida co _mercialmente (Pretorius etal, 1991), Fore imi. Los hexsignorrpresentan vidas ce ucoea Representa sequemdtics dena melécula de ccAmilasas Las ocamilasas son enzimas que eatalizan ta endobidrisis de los enlaces t-1,4-glucosicicos de polisiearidos con ms de tes unidacles de D slucosa unidas por un enlace a-1;4 (Godlrey, 1996) y se encuentran amplismente distribuidas entre los microorganismos (fig. 2). Son ‘encloamilasas que liberan cadenas de poli y bligosaciridos de longitudes variables. Las apli- ‘eaciones comerciales de @- amiss son numero sas; probablemente el volumen mis sacl para Ia disminucion del almidén en el pro- ccevo de licuefacei6n en las incustias del azicar alcohol y cerveza. Las é-amilasas son también usa- ‘das en i industria panadera, en la prodceion de adhesives, farmacéuticos, detengentes, en el tt tamicato de aguas residuales y en alimento ani- smal (Vitinen y Mantsali, 1989. stuclios genéticas de las eramilasas se han llevado a cabo peincipalmente en el género Bacillus, especialmente en Bacillus subilis, ta ccamilasa fixe una de las primeras proteinas usa ande ©s das para estudios de biologi molecular por va- tias razones: existen ensayos de busqueda sencillos, cepas ammilasa-negativa disponibles y procesos de produccién bien establecidos (Vihinen y Meinesa, 1989), EI pH opdimo de kas aeamilasus vari de 2.0 a 10.5, loque es un indicativo de adaptabilidad evo- Iuiva Ins clferentes cicunstancias ambientales, 1 pH optimo de crecimiento de las microrganismos due las producen también es muy variable. Ade- ‘mis, Ia temperatura Optima de reaccién de las cenzimas la de crecimiento de los microorganismos festin relacionadas. El peso molecular de las a amilasas varia de aproximadamente 10000 a 139000 (Vihinen y Mantsili, 1989), BIGIBCNOLOGIA 16 1999 rot. doN03 Las ocamilasas hidrolizan ala amilosa al azar produciendo finalmente maltosa y maltoliosa, sobre la amilopectina, su actividad! esti restrin- ‘gida por los puntos ramificacos 1,6 y sus pro- ductos son glucosa, maltosa y a-dextrinas Gouliey, 1996). Como se mencioné anteriormente las a amilasas son enzimas hidroliticas que despolimerizan al almidn como parte del met bolismo celular b sico para obtener glucosa, lo cual sugiere que esta actividad apareci6 en late ra antes de la dliferenciacién de lasespecies, ace mds de 700 millones de anos. Esta actividad hoy en dia es utilizada en diversas procesos bjotecnologicos, por lo que su estudio avudaria A corender la historia evolutiva de estas enzimas;, y también puede contribuir en mejorar algunos de los procesos en los que se utllizan (Del Rio et a. ee® eooe oe Figua2- Rapreseracicn esquemitic de moles c= slider y pati de actividad de a aaa Loe enliceshicrolzacos 2on indiados con hexdgoroe B- Amis as B-amilasas se presentan cominmente en plan tasy reports de so ecurrencia en microorganismes son ras (Vihinen y Mins, 1989), Su acckin es x0 ¢ hidrolizan el extremo no reducido de asc denas y los productos son makoss y dextrin (Goateey, 1996) (Fig. 3) 1a Bamilasa bidroliza el penditimo enlace-1,4 en los extremos no recive dos dela eaclema, Gausindo iaversicn de la conf _guracién anomerica de la maliosaliberada ab yno puede cortar los enlaces a-,6-_lucossdico del sustrato nimifieado, Ta parte no degradach del ‘sustato es llamada P-descrina. Indusrias limentie Gas cerveceras emplean estas enzimas para con- verti el almidén en soluciones de maltosa (Viinen y Mintsal4, 1989). Las ranulasas en ‘general son enzimas extracelulaes, pero se ha reportado la existencia de B-am#lasas intracelulares. Son producicas peincipalmente por organismos meséfilos. Tienen pesos rmoleculares entre 51600 y 160000, conde el va lor salto podria deberse a la formacién de un

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