Prof. Di Santo Marianela. I.S.F.

D N 54,Gentica Molecular 4 ao
Biologa

Experiencia: Extraccin de ADN vegetal

Materiales:
1 Vaso de plstico
1 licuadora o minipimer
1 cucharita plstica para medir y mezclar
2 filtros de caf N 2 (conos) o 2 servilletas de papel
250 ml de agua destilada o mineral
Shampoo transparente o detergente
1 banana
Sal de mesa
1 pipeta de transferencia plstica o 1 gotero mdico
1 tubo de ensayo sellado con 15ml de alcohol muy fro
1 conservadora con hielo para mantener fros los tubos con alcohol
1 varilla de vidrio o 1 pipeta de Pasteur

Extraccin de ADN vegetal, procedimiento:

Trozar la banana (media banana) licuar la banana con 200ml de agua (para romper las
clulas y que salga el ADN). Al ser la membrana lipdica, para poder extraer el ADN, se usa
una solucin de 4 cucharaditas de agua destilada, mineral o de la canilla, shampoo o
detergente (esto se hace en un bowl aparte) mejor si es transparente para ver como
precipita el ADN. El detergente lo que hace es arrastrar todos los lpidos y protenas
solubles en lpidos. Hay que disolver bien sin hacer espuma. Se le agrega un poco de sal (2
pizcas) al tener Na+ como es un ion positivo, favorece que las hebras de ADN se mantengan
juntas. Mezclar la solucin. A esa solucin se le agrega el licuado de banana, 4 cucharadas
o ms. Revolver aproximadamente de 5 a 10 minutos. Cunto ms revolvemos mejor. Sin
formar mucha espuma. Ya que tienen que tomar contacto con la solucin. Luego de
revolver la solucin queda homognea, se le da tiempo a que el detergente degrade los
lpidos de las membranas y que se libere el ADN de adentro de las clulas. Luego hay que
separarlas para eso hay que filtrar con filtro de caf o servilletas. Colocar en un tubo o
vado transparente, se filtran aproximadamente 5 ml de la solucin con ADN de banana si
no se tiene para medir se puede hacer con cuchara, luego se coloca el triple de alcohol una
vez filtrado.
Es ms limpio el filtrado ya que es ms acuoso donde hay ADN, protenas, iones que son
solubles en agua.
Se puede usar el volumen que queramos pensando que hay que agregar el triple de
volumen de alcohol.
Para poder separar el ADN de las otras molculas nos basamos en una caracterstica
qumica, del ADN que no tienen otras molculas y es que el ADN no es soluble en alcohol,
y si lo son el resto de las molculas. Por eso se le agrega alcohol, el ADN al no ser soluble
en alcohol va a precipitar. Lo importante del alcohol es que este lo ms fro posible varios
das antes, tiene que estar en el freezer o congelador y para transportarlo lo hacemos con
hielo.
Volcar lentamente 15ml de alcohol comn (etanol) muy fro al filtrado. La solucin
blancuzca que se observa en el fondo del tubo es el ADN. Con una pipeta de Pasteur de
vidrio pescar el ADN con suaves movimientos envolventes para transferirlo a un tubo
ms pequeo. Se puede guardar por aos. Queda el ADN ms alcohol en la heladera o
freezer.