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PRACTICA N 1
I. OBJETIVOS:
. Determinar la naturaleza de los txicos presentes en los alimentos mediante los Ensayos
Preliminares
. Investigar txicos voltiles y gaseosos mediante el uso de papeles sensibles
. Investigar txicos metlicos y no metlicos ,mediante el uso de lminas metlicas.
IV. PROCEDIMIENTO:
Las muestras de pallares, yuca, carne o frutas, deben ser triturados o hecho papillas para
poder realizar los anlisis
4.1 Investigacin de Txicos Voltiles y Gaseosos:
4.1.1. Investigacin de Acido Cianhdrico.-
a) Preparacin del P.S. Picrosdico:
- Cortar tiras de papel filtro
- Sumergir en una solucin de cido pcrico al 1% y escurrir el exceso.
- Luego embeber en una solucin de carbonato de sodio al 10% y escurrir el
exceso.
- Guardar en un aluna de reloj o tubo de ensayo
b) Preparacin del Papel Sensible Alcalino:
- Cortar tiras de papel filtro
- Embeber el papel de filtro con una solucin de NaOH al 10% y escurrir el exceso.
- Guardar el P.S. en una tubo o luna de reloj
c) Preparacin de la Muestra problema y Uso de los papeles Sensibles:
- Colocar la muestra (yuca o pallares) en un matraz con tapa
- Agregar agua destilada hasta cubrir la muestra (consistencia casi fluda)
- Acidificar la muestra con cido tartrico al 10%
- Colocar o suspender los P.S. inmediatamente y tapar el matraz.
- Llevar el matraz que contiene la muestra al bao mara por 30 minutos a 50-60C.
- Observar los cambios que ocurren especialmente en el papel picrosdico.
- Despus del tiempo establecido, retirar los papeles sensibles con mucho cuidado
y colocarlo sobre una luna de reloj por separado.
- Al P.S. Alcalino agregarle gotas de sulfato ferroso al 2% y gotas de HCL cc.
Observar el color formado.
4.1.2 Investigacin de Amoniaco:
a) Preparacin del P.S. Nessler:
- Cortar tiras de papel filtro
- Embeber el papel de filtro con el reactivo nessler y escurrir el exceso.
- Guardar el P.S. en un tubo de ensayo
b) Preparacin de la Muestra Problema y uso del Papel Sensible:
- Colocar la muestra de pescado (triturado) en un matraz con tapa.
- Agregar agua destilada hasta cubrir la muestra
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M(o). Cecilia M.Meja Dominguez Prcticas de laboratorio
Facultad de Bromatologa y Nutricin Curso de Toxicologa de los Alimentos
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PRACTICA N 2
I. Objetivo:
Determinar la actividad uresica residual en productos de soya
Determinar la presencia de inhibidores de tripsina en soya ,mediante el mtodo indirecto
de la actividad uresica.
Evaluar el nivel de procesamiento trmico a que han sido sometido los productos
derivados de soya.
II. Fundamentos Tericos
La soya cruda y harina de soya impropiamente procesada contienen factores antinutricionales o
antinutrientes que pueden perjudicar la performance del ser humano. Entre estos factores
antinutrientes principales tenemos: inhibidores de tripsina, hemoaglutininas y la enzima ureasa.
Se recomienda que la actividad de la ureasa en la harina de soya debe estar entre el rango de
0,05 0,2 de incrementos de pH, pero no ms alto que 0,5.La Asociacin Americana de la Soya
ha recomendado estndares especficos para diferentes harina de soya, las cuales se dan a
continuacin:
IV. Procedimiento:
Mtodo Control Soya:
Fundamento: Es una prueba cualitativa, ya que se basa en la determinacin de la intensidad de
color (rojo) que presenta la soya al ponerse en contacto con una solucin de buffer urea que
contienen indicador rojo de genol el cual reemplaza al medir el incremento de pH. As una
coloracin uniforme que abarque aproximadamente el total de la muestra (00%) ser indicador
de una soya subcalentada en virtud a mayor contenido de ureasa que reacciona con el reactivo.
Coloraciones que abarquen entre el 25-50% de l a muestra es indicador de un ptimo tratamiento.
Valore menores de 25% es ndice de sobre calentamiento.
Tcnica:
A) . En una placa petri agregar aproximadamente una cucharadita al ras de muestra y esparcir
por toda la placa
. Agregar con la ayuda de una pipeta sobre la muestra la solucin buffer rea rojo de fenol, de
tal manera que moje toda la muestra
. Luego realizar lecturas a los 5, 10 , 15 y a los 20 minutos
. Dividir imaginariamente la muestra contenida en la placa en cuatro campos de tal manera que
cada uno represente el 25% del total.
V. Resultados y discusiones
VI. Cuestionario:
6.1. Explique qu inhibidores enzimticos se pueden encontrar en el grano de soya
6.2. Qu tratamientos tecnolgicos se deben aplicar a la soya para mejorar su calidad.
6.3. Qu reportes cientficos se han publicado sobre inhibidores enzimticos y factores txicos
en la soya. Anexe 02 folletos.
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PRACTICA N 3
1. Objetivo:
. Determinar la concentracin de cido ftico en cereales y leguminosas por
complexometra indirecta con Fe III.
2. Fundamento: El mtodo est basado en la precipitacin del cido ftico con un notable exceso
de disolucin de Fe (III) en presencia de cido sulfosaliclico, tambin en exceso, con el propsito
de impedir la adsorcin por el precipitado de parte del Fe (III) gracias a la formacin de un
complejo suficientemente estable. Por otro lado, el cido sulfosaliclico sirve de indicador del
punto final en la valoracin complexomtrica del exceso de Fe (III).
3. Materiales y Reactivos.
a) Disolucin de Fe (III) 2x10 M en HCl 0,16 M
b) Disolucin de AEDT 10 M
c) Disolucin de HCL 4x 10 con 5% de NaSO
d) Disolucin de Acido sulfosalicilico al 20%
Matraces de 250 ml con tapa
Matraces de 100 ml con tapa y de 500 ml
Vasos de250 ml y 600 ml
Tubos de reflujo
Bao mara hirviente
Agitador magntico y mecnico.
4. Procedimiento:
En un matraz de 100 ml con tapa agregar 5 a 15 g de harina desecada, aadir 40 ml de
la solucin (c ) , dejar por 90 minutos agitando frecuentemente y vigorosamente.
Despus de sedimentar, colocar 20 ml del lquido sobrenadante (filtrado) en caso
necesario) en un matraz de 350 ml, agregar 20 ml de la solucin (c ) y 20 ml de la solucin
(a) .
Luego agregar al matraz 20 ml de cido sulfosaliclico ( d) al 20% en agua y cerrar con
un tubo reflujo de 30 cm de largo. calentar 15 minutos en bao mara hirviente, luego
enfriar a chorro de agua y dejar en posicin vertical.
Comprobar la existencia del precipitado de fitato frrico (precipitado blanco),y separar 20
ml del sobrenadante lmpido en un vaso de 250 ml y completar hasta 200 ml con agua
desionizada, ajustar el pH a 2,5 0,5 con glicocola o glicina (unos 0,75 g) y calentar a
70C.
Titular en caliente y con agitador magntico el exceso de Fe (III) con AEDT 10 M hasta
viraje del color rojo- marrn al amarillo claro.
5. Clculos:
% Acido Ftico = 0,66 ( 10 v)
P
Donde:
V = volumen AEDT en ml
P= peso de la muestra en gramos
6. Cuestionario
1. Qu concentraciones de cido ftico presentan los diversos granos de cereales y leguminosas.
Indique la fuente bibliogrfica
2. Porqu es importante determinar y evaluar la presencia de cido ftico en cereales.
Fundamente su respuesta.
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I. Objetivos:
-Aislar el HCN liberado por los glucsidos cianognicos.
-Reconocer el HCN por:
a) Rx. Cualitativa: Azul de Prusia (0,00002 g )
Modificacin de Chelle (0,00001 g.)
b) Rx. Microqumica.
- Determinar la concentracin de HCN liberado despus de la hidrlisis de los
glucsidos cianognicos por el mtodo Argentomtrico
II. Materiales y Reactivos
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MATERIALES
Agitador mecnico
Fotocolormetro con filtros de 440-465 mu o espectrofotmetro en banda de 440mu
Molino pulverizador
Frascos erlenmeyer 250,125 y 25 ml
Pipetas volumtricas de 1,5,10 y 50 ml
Papel filtro de retencin mediana
Bao mara
REACTIVOS:
Acetona en solucin acuosa al 70%
Anilina pura recientemente destilada
Alcohol isoproplico en solucin acuosa al 80%
MUESTRAS:
Semillas de algodn
Torta o pasta de algodn
Harina de algodn
Para semillas normales o productos que no contengan dianilina gosipol como resultado del
tratamiento.
La eleccin de la cantidad de muestra y de la alcuota que se deben tomar para el anlisis
dependen del contenido de gosipol libre que se supone contenga la semilla o harina de algodn,
la siguiente tabla nos servir de orientacin:
Procedimiento:
Pesar 1 g de muestra y colocarla en un erlenmeyer de 250 ml
Adicionar 50 ml de la solucin de acetona al 70% exactamente pipeteados, tapar el frasco
y agitarlo en un agitador mecnico por 30minutos
Filtrar en un erlenmeyer de 125 ml, descartando las primeras porciones del filtrado
procurando hacerlo rpidamente para evitar evaporacin del solvente
Pipetear alcuotas duplicadas del filtrado en las cantidades que indican las tablas y
colocarlas en fiolas de 25 ml
Una de las alcuotas designadas como (A) se llevan a la marca con el alcohol al 80%
Otra alcuota designada como se aade 1 ml de anilina pura y llevar a bao mara por
30 minutos a 95C.
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Preparar un blanco designado como (B) colocando en una fiola de 25 ml acetona al 70%
en la misma cantidad de las alcuotas tomadas, aadirle 1 ml de anilina y llevarlo a bao
mara junto con (C).
Retirar los frascos B y C, enfriar y completar a la marca con alcohol de 80% (No el A)
Leer en el fotocolormetro las soluciones (A), (B) y (C) en filtros de 440mu y proceder a
los clculos.
Ejemplo:
Peso de muestra = 1 g
Alcuota: 2 ml
A: 45 , 49 = X = 47
B =5
C = 260
Lectura Real = 260 - (47 + 5)
= 208 Leer en la tabla adjunta, en este caso es: 0,200
Reemplazando en la frmula:
% Gosipol = 0,5
Cuestionario:
1. Explique cmo se podra inactivar o eliminar el gosipol presente en la torta o harina de
algodn
2. Qu concentraciones de gosipol tienen la planta de algodn y en los productos derivados
de este.
3. Anexe 02 reportes de investigacin cientfica sobre el gosipol.
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1 Objetivo :
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Clculos:
Muestra de quinua = 1 gr
Altura de espuma = 1,3 cm
Volumen de dilucin 50 ml.
Si en 50 ml.................1 g MP
2,5 ml ................ X
X= 0,05 g
Cuestionario
1. Indique concentraciones de saponina en los diversos alimentos de origen vegetal,
indicando las fuentes bibliogrficas.
2. Anexe trabajos de investigacin sobre saponinas ,en cuanto a sus efectos, usos y otros
aspectos de inters toxicolgico.
3. Qu otros mtodos de investigacin existen para poder aislar, reconocer y cuantificar
saponinas. Describir y explicar dichos mtodos.
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III. Reactivos:
a) Solucin de HCL 1N
b) Solucin de Acido fosfrico al 25%
c) Solucin cida: Mezclar volmenes iguales de a y b
IV. Procedimiento:
1) . Preparacin del Patrn Quinina:
- Disolver 50 mg de quinina bsica pura en 20 ml de solucin cida y completar a 100 ml
con agua destilada.
- Agitar la solucin y pasar con una pipeta de 10 ml de esta cantidad a un matraz de 100
ml. Aadir 18 ml de mezcla cida y completar con agua destilada hasta el enrase.
- Esta solucin contiene 50mg/l de quinina.
2). Preparacin de la Muestra:
- Eliminar el CO2 de unos 60 ml de agua tnica (muestra problema) por calefaccin a
bao mara.
- Enfriar a temperatura ambiente y se toman 50 ml del problema en un matraz aforado de
100 ml. Se aaden 20 ml de mezcla cida y se completa y se completa con agua
destilada hasta el enrase.
- Se agita y mide la absorbancia a 347,5 nm frente a un reactivo en blanco
3). Grfica de Calibracin:
- Con una pipeta introducir 0,1 , 2 , 4 ,6 , 8, 10 ml de solucin patrn en matraces de 10
ml.
- Completar hasta el enrase con la disolucin cida y agua (1+4) y mezclar suavemente.
- Medir las absorbancias a 347,5 nm frente a un blanco.
- Representar el grfico.
4). Clculo y expresin de los resultados:
- Mediante la grfica de calibracin, calcular el contenido de quinina en la muestra
mediante la absorbancia obtenida.
- El resultado expresarlo en porcentaje
Cuestionario:
1. Cul es la frmula de la quinina
2. Indique en qu productos y/o alimentos se usa la quinina y con qu fines.
3. Cules son las dosis admisible de ingesta y los valores aceptables en bebidas .
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I. Objetivos:
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I. Objetivos:
Reconocer el in arsnico en las muestras obtenida despus de la destruccin
de la materia orgnica.
Realizar reacciones cualitativas de reconocimiento para el in arsnico
3.2 Procedimiento
1 Aislamiento del Txico
Se usa las muestras preparadas en la prctica anterior, tanto el mtodo de
calcinacin para la muestra de elche y el de oxidacin sulfontrica para la
muestra de vino.
2 Reconocimiento del Arsnico
a) Reaccin de Bougault:
El reactivo se prepara de la siguiente manera:
Hipofosfito de sodio 10g
Agua destilada 10 ml
HCl puro c.s.p 100ml
Dejar reposar y separar el ClNa por filtracin a travs de algodn
En tubo de ensayo colocar 5 ml del reactivo y calentar a ebullicin durante
medio minuto con ayuda de una pinza de madera. El reactivo debe
conservarse lmpido, tolerndose un color amarillo dbil.
Se incorpora 0,5 a 1 ml de la solucin acuoso-clorhdrica en examen y se
calienta nuevamente a ebullicin.
Para cantidades relativamente grandes aparece de inmediato un ppdo,
oscuro, mientras que para pequeas cantidades es necesario insistir en el
calentamiento y dejar enfriar a la temperatura ambiente, pudindose refrigerar
exteriormente. Antes de considerar negativo el ensayo, se aconseja observar
nuevamente el tubo despus de 24 horas. Es conveniente que la solucin a
investigar contenga exceso de de clorhdrico.
b) Reaccin de Betendorff:
El reactivo se prepara de la siguiente manera:
Cloruro estannoso 10 g
HCl puro 100 ml
Conviene preparar en el momento de su uso, la cantidad necesaria para
realizar los ensayos cualitativos
. En el tubo de ensayo se coloca unos mililitros del reactivo y luego unas
gotas de la solucin en ensayo y se calienta a ebullicin utilizando una pinza
de madera. En presencia de arsnico aparece color pardo o negro.
c) Reaccin de Gutzeit
En el caso de efectuar el reconocimiento directo en el licor sulfrico se
proceder previa dilucin conveniente.
Instalar el sistema de Gutzeit
Introducir unas granallas de zinc pursimo de uso forense en el
frasco A (ver esquema), luego incorporar unos ml de solucin de
sulfato cprico al 1%.
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V. Conclusiones
VI. Cuestionario
1. Qu mtodos o reacciones existen para reconocer arsnico en muestras
.
2. Anexe reportes de investigaciones sobre arsnico en alimentos y bebidas.
Asimismo los mtodos de cuantificacin que se aplican.
VII. Bibliografa
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