INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA

1. Materia: LABORATORIO DE MTODOS DE ANLISIS

2. Prctica: SEPARACIN DE GRUPOS USANDO

CROMATOGRAFA POR EXCLUSIN

3. Alumna: ARIAS GAMARRA CITLALI YOLOTZIN

4. Colaborador: COBOS RODRGUEZ HCMAR ADRIN

5. Grupo: 5QV1

6. Seccin: III

7. Profesor: ARTURO RIVAS FARAS

8. Fecha de realizacin: 18 y 23 de Octubre de 2017

9. Fecha de entrega: 30 de Octubre de 2017

10. Situacin escolar: INSCRITO

SEPARACIN DE GRUPOS USANDO CROMATOGRAFA POR EXCLUSIN
OBJETIVOS EXTRA: No hay
DATOS EXPERIMENTALES E INFORME
Determinacin del volumen vaco (Vo) de la columna
Tabla 1. Datos obtenidos para la determinacin del volumen vaco de la columna
Volumen de elucin
No. de tubo A615 observada A615 corregida
(mL)
1 3 -0.006 0.003
2 6 -0.007 0.002
3 9 -0.008 0.001
4 12 -0.009 0
5 15 -0.008 0.001
6 18 -0.005 0.004
7 21 -0.005 0.004
8 24 -0.005 0.004
9 27 0.031 0.040
10 30 0.956 0.965
11 33 0.515 0.524
12 36 0.039 0.048
13 39 0.010 0.019
14 42 0.006 0.015
15 45 0 0.009

0.8

0.6
A615nm

0.4

0.2

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
Volumen de elucin (mL)

Fig. 1 Perfil de elucin de la dextrana azul 2000, obtenido mediante cromatografa por exclusin, para la
determinacin del Vo
 a) Cul fue el volumen total de la columna (VT)?
VT= 79.90mL

b) Cul fue el volumen vaco (Vo) de la columna? Qu importancia tiene

determinarlo?
Vo= 30mL

c) Determine el volumen que ocupa en la columna el lquido que se encuentra

en el interior de la estructura del gel (Vi) y el volumen del gel solo (Vg).
 Separacin del sulfato de amonio y la albmina
Tabla 2. Datos obtenidos de la separacin del sulfato de amonio y la albmina. Estos tubos no contenan precipitado. *No se
pudo llevar a cabo la determinacin de la masa del tubo con precipitado seco, debido a que el tubo se rompi.
Vol. Masa del tubo
Masa del
No. de Elucin A280nm A280nm con (NH4)2SO4
tubo vaco
tubo (mL) observada corregida precipitado (mg)
(g)
seco (g)
1 3 0.003 0.024 6.4562 -- --
2 6 -0.004 0.017 8.5639 -- --
3 9 -0.013 0.008 8.6077 -- --
4 12 -0.009 0.012 6.5411 -- --
5 15 -0.021 0 8.1436 -- --
6 18 0.005 0.026 8.5661 -- --
7 21 0.003 0.024 6.5661 -- --
8 24 0.003 0.024 8.5167 -- --
9 27 0.021 0.042 8.5823 -- --
10 30 0.238 0.259 8.6186 -- --
11 33 0.334 0.355 9.0240 -- --
12 36 0.216 0.237 8.5768 -- --
13 39 0.127 0.148 8.5829 -- --
14 42 0.040 0.061 7.9754 -- --
15 45 0.014 0.035 8.5588 -- --
16 48 0.011 0.032 8.5614 -- --
17 51 0.013 0.034 7.5191 -- --
18 54 0.025 0.046 8.6285 -- --
19 57 0.030 0.051 8.5750 8.5932 0.0182
20 60 0.029 0.050 8.6254 8.6464 0.0210
21 63 0.031 0.052 6.7268 6.7554 0.0286
22 66 0.022 0.043 8.6118 8.6623 0.0505
23 69 0.022 0.043 8.5103 8.5677 0.0574
24 72 0.022 0.043 8.6184 8.6523 0.0339
25 75 0.026 0.047 8.6972 * *
 0.4 0.07

0.35 0.06

0.3
0.05

(NH4)2SO4 (mg)
0.25
0.04
A280nm

0.2
0.03
0.15

0.02
0.1

0.05 0.01

0 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Volumen de elucin (mL)

Fig. 2