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BIOACTIVIDAD IN VITRO.
INTRODUCCIÓN
El término biomaterial designa a aquellos materiales, naturales (de origen animal o humano) o
artificiales (hechos por el hombre), utilizados en la fabricación de dispositivos que interactúan con
los sistemas biológicos y que se aplican en diversas especialidades de la medicina ya sea para
aumentar o reemplazar un tejido, órgano o una función del organismo. [1]
Características
Las características más importantes que influyen en un biomaterial dado son:
Biocompatibilidad
Requisitos físicos
Requisitos químicos.
Hidroxapatita
Se utilizan varias vías mayores para la preparación de las apatitas: la precipitación en vía acuosa, la
reacción sólido-sólido (vía seca), la reacción en sales fundidas, el procedimiento sol-gel y la vía de
los cementos. [5]
Reacciones en fase acuosa
La síntesis por reacción sólido-sólido consiste en calentar una mezcla reactiva que consta de
diversas sales de cationes y de aniones, en una relación Me/XO4 igual a 1.67. Esta mezcla debe ser
perfectamente homogénea para permitir una reacción total. Un ejemplo sería la síntesis de
fluorapatitafosfocálcica a partir de fosfato tricálcico y de fluoruro de calcio. [7]
Este método permite acercarse a las condiciones de síntesis de algunas apatitas naturales. De esta
manera se han preparado fosfatos metálicos de estructura apatítica. Se obtuvieron así cristales
mezclados la mayor parte del tiempo con el exceso de reactivos de inicio.
Reacciones sol-gel
Los cementos fosfocálcicos son cementos hidráulicos minerales que fraguan gracias a reacciones
ácido-básicas entre fosfatos de calcio de tipo ácido y fosfatos de calcio de tipo básico para dar una
hidroxiapatitafosfocálcica en fase única.
Corrosión
Objetivos específicos
Realizar fluido corporal simulado para pruebas de bioactividad en un material compuesto in vitro.
Metodología
A partir de ácido fosfórico H3PO4, hidroxilo de calcio Ca (OH)2 y agua desionizada. Se calcularon
cantidades estequiometricas de acuerdo a la reacción [9]:
Para obtener 5 gramos de hidroxiapatita, se prepara una solución de 3.687 gramos de Ca(OH)2 en un
volumen de 50 mililitros de agua desionizada y una solución de 4 mililitros de H3PO4 al 85% de
concentración en 58.75 mililitros de agua desionizada que se muestra en la figura 1.
Figura 1. a) Muestra las dos soluciones ya preparadas, b) Síntesis por precipitación para obtener
hidroxiapatita.
La segunda solución se coloca en una bureta y se gotea sobre de la primera como se muestra en la
figura 1, de 30 a 35 gotas por minuto de manera constante.
Se registra el pH obtenido inicialmente y se deja envejecer por el tiempo necesario para alcanzar un
pH de 8.5, o bien se deja en agitación constante por 20 horas. Una vez que se alcanza el pH o
termina el periodo de agitación se obtiene hidroxiapatita.
Un microscopio electrónico de transmisión (TEM, por sus siglas en inglés, o MET, en español) es
un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia
amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la longitud de onda de la luz visible. Lo
característico de este microscopio es el uso de una muestra ultra fina y que la imagen se obtenga de
los electrones que atraviesan la muestra.
Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.
[10, 11]
Estructura
Debido a que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz visible,
pueden mostrar estructuras mucho más pequeñas.
En el microscopio electrónico de barrido la muestra es recubierta con una capa de carbón o una
capa delgada de un metal como el oro para darle propiedades conductoras a la muestra.
Posteriormente es barrida con los electrones acelerados que viajan a través del cañón. Un detector
mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz
de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV o una imagen digital. Su
resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio. [12,13]
Espectroscopia infrarroja
Espectroscopia infrarroja (Espectroscopia IR) es la rama de la espectroscopia que trata con la parte
infrarroja del espectro electromagnético. Esta cubre un conjunto de técnicas, siendo la más común
una forma de espectroscopia de absorción. Así como otras técnicas espectroscópicas, puede usarse
para identificar un compuesto e investigar la composición de una muestra.
Para medir una muestra, un rayo de luz infrarroja atraviesa la muestra, y se registra la cantidad de
energía absorbida en cada longitud de onda. Esto puede lograrse escaneando el espectro con un rayo
monocromático, el cual cambia de longitud de onda a través del tiempo, o usando una transformada
de Fourier para medir todas las longitudes de onda a la vez. A partir de esto, se puede trazar un
espectro de transmitancia o absorbancia, el cual muestra a cuales longitudes de onda la muestra
absorbe el IR, y permite una interpretación de cuales enlaces están presentes. [15, 14]
Difracción de rayos X
La identificación de fases cristalinas constituye uno de los campos de aplicación más importantes
del método de polvo cristalino.[16, 17]
Para poder llevar a cabo la difracción de rayos X se empleó un difractómetroSiemens D500, voltaje
de 30 kV, de 15 a 55 ° y una velocidad de barrido de 0.6 grado/min, para preparar la muestra, Lo
obtenido de la síntesis se molió con un mortero y pistilo, se utilizó un porta muestras de alúmina
mostrado en la figura 2.
Figura 2 .a) Muestra lista para meter al equipo para su análisis y b) muestra dentro del equipo.
Para comprobar la bioactividad sobre el material compuesto se utilizó una estrategia biomimética,
que consiste en preparar una solución semejante al del plasma del cuerpo humano, esta solución
salina se denomina Fluido Fisiológico Simulado (FFS) y se mantiene a una temperatura de 37°C y
un pH de 7.4 (condiciones semejantes al del cuerpo humano). Para preparar el FFS se mezcla los
reactivos de la tabla 2 en la cual se muestra en orden y las cantidades requeridas en 700 ml de agua
desionizada, se debe tener en cuenta que no deben mezclarse los reactivos de manera simultánea ya
que se provocara precipitación.Ya adicionado todos los reactivos del 1 al 6 se adiciona el número 7
en el cual se debe dejar agitar el tiempo necesario para su adecuada disolución, se agrega el
siguiente; al legar al tris se debe agregar hasta tener un pH de 7.42 y agregar nuevamente hasta un
pH de 7.45 y bajar a 7.42 con la solución de HCl al 1 M y de manera sucesiva hasta que se termine
el tris a una temperatura de 36.5 °C exactamente se debe ajustar el pH hasta 7.40, el proceso se
ilustra en la figura 3.La solución obtenida se completa hasta un litro y se deja enfriar.[18]
Figura 4. Muestra el material de forma horizontal dentro del fluido fisiológico simulado.
La aplicación del fluido fisiológico simulado se realizó a baño maría y dentro de la mufla eléctrica
a una temperatura similar a la del cuerpo humano aproximadamente a 37 °C como se muestra en las
figuras 5 y 6.
Figura 6. Muestra la aplicación del fluido corporal simulado dentro de la mufla eléctrica a 37 °C.
Corrosión de acero
Técnica potenciodinámica
Polarización
Una vez establecido el hecho de que habrá regiones con distinto potencial, se debe comprender qué
tendencia seguirán dichos potenciales cuando se establece un circuito cerrado entre ellos. Pues bien,
igual que cuando mezclamos en un recipiente agua a distinta temperatura el sistema tiende a
homogeneizar la temperatura del agua a una que será intermedia, cuando dos regiones con distinto
potencial consiguen un medio (electrólito) para intercambiar sus iones, cierran un circuito a través
del cual el sistema acabará teniendo un potencial común intermedio a los valores previos. La
representación de los potenciales normales de ánodo y cátodo, junto que el valor final de corrosión,
frente a la corriente es conocida como diagrama de Evans que se muestra en la Figura 7.
Figura 7. Diagrama de Evans.
La curva de Tafel
El proceso de polarización que sigue un metal es de difícil caracterización. Una técnica sencilla que
aporta bastante información, es la potenciodinámica. En ella, trazamos una curva en la que
representamos potencial (E) frente a corriente en escala logarítmica (log I) (Figura 8).
Esta técnica consiste en esperar a que el metal estabilice, es decir, que alcance un potencial
constante en el que las semirreacciones anódica y catódica están compensadas, para aplicarle
después unos pocos milivoltios que le alejen del potencial de equilibrio y registrar la respuesta en
corriente. La figura que obtenemos es la llamada curva de Tafel, que muestra de una forma bastante
clara los procesos de intercambio de electrones que se producen en las inmediaciones del metal.
Esta polarización pasa por tres fases por activación, resistencia y concentración.
Polarización de activación
Referente al número de electrones que son capaces de abandonar la superficie anódica, superando la
energía de activación, y generando a su vez cationes metálicos. En la curva de Tafel aparece
representada como una línea casi recta en las proximidades al potencial de corrosión. Trazando una
tangente a cada una de estas secciones, se consiguen las rectas con las que luego se obtendrá la
corriente de corrosión.
Polarización de resistencia
Se origina como consecuencia de cualquier caída óhmica en la inmediata vecindad del electrodo.
Polarización de concentración
Figura 9. (A) Configuración típica de dos electrodos para la medición de impedancia (B) Circuito
equivalentesimplificado para un sistema de dos electrodos. Cdl - Impedancia del electrodo; Rs - Resistencia
del electrodo. (C) Curva de impedancia vs. Frecuencia.20
Conclusiones
Figura 10.Difractograma obtenido con difracción de rayos x donde se aprecia la presencia de la fase
hidroxiapatita.
Figura 11. Muestra el crecimiento de hidroxiapatita sobre el material compuesto y los elementos
existentes sobre la superficie.