DEFINICIÓN

La fotosíntesis toma su nombre de sus raíces griegas foto (luz) y síntesis (unión).

Su definición más sencilla es la formación de oxígeno y glucosa a partir de CO2 un

donador de hidrógeno y energía luminosa. Esta reacción en eucariontes puede ser

resumida en la siguiente sencilla ecuación:

CO2 + H2O + Energía luminosa C6H12O6 + O2

Cabe mencionar que la definición no refleja el complicado proceso que soporta

toda la vida en la Tierra como la conocemos.

Durante los millones de años de existencia de la Tierra en algún momento de la

evolución celular aparecieron organismos procariontes capaces de utilizar energía

solar captándola con moléculas capaces de utilizar moléculas sencillas como agua

y bióxido de carbono para elaborar compuestos orgánicos más complejos como

los carbohidratos. Esta aparición cambio paulatinamente nuestra atmósfera y las

condiciones de vida de los primeros organismos, haciendo necesaria su

adaptación a la presencia de O2 en ella. Actualmente los organismos que no

tenemos la capacidad de captar la energía solar y producir glucosa somos

heterótrofos pues requerimos de los autótrofos (los que producen su propio

alimento) para vivir. Más aún los humanos necesitamos no solo del alimento sino

de la energía acumulada por estos organismos en combustibles como el petróleo y

la madera para fabricar satisfactores de nuestras necesidades.

1
Para la evolución biológica la presencia de estos organismos que sintetizan

alimento es la base de todos los ecosistemas terrestres y marinos y sus

mutaciones o modificaciones tendrán un impacto en la diversidad vegetal y animal

que conocemos hasta ahora y que dejaremos a las futuras generaciones.

Por otro lado, en la actualidad el hombre está en posibilidad de manipular

genéticamente a estos organismos para obtener ventajas en la producción de

alimentos y beneficiarse de ello, pero a su vez esta intervención pudiera tener

consecuencias no solo biológicas, sino políticas, culturales y económicas.

2
DATOS HISTÓRICOS

Desde principios del siglo XVIII (1727) se documenta el hecho de que los

vegetales se nutren al menos parcialmente de algo contenido en la atmósfera,

para fines del siglo Joseph Priestley descubre el oxígeno y describe que las

plantas lo producen y los animales lo consumen. Cerca de la mitad del siglo XIX

Henri Dutrochet encuentra que la clorofila es necesaria para la producción de

oxígeno por las plantas y Julius von Sachs prueba que las plantas producen

almidón en un proceso que depende de la luz (fotosíntesis) y que utiliza clorofila.

En 1882 Theodor Englemann, utilizando un aparato modificado por Carl Zeiss para

proyectar un espectro de luz separado por un prisma sobre una placa

microscópica, describió que la luz roja es la más eficiente para que ocurra la

fotosíntesis. En 1883 A. Meyer describe detalles de la estructura del cloroplasto y

A. Schimper describió su replicación y que son similares a algunas bacterias

fotosintéticas.

En los primeros años del siglo XX, Einstein sugirió que la luz y otras radiaciones

del espectro electromagnético viajan en paquetes discretos llamados fotones que

al interactuar con la materia se aniquilan de forma completa, nunca en partes.

Según su teoría fotoeléctrica se necesita un fotón para desprender un electrón.

M.S. Cvet (1906) separo mediante cromatografía los pigmentos de las hojas de las

plantas; en 1913 R. Willsttäter y Stoll aislaron la clorofila que después

caracterizarían. Hevesy en 1923 fué el primer investigador en usar isotopos

radiactivos como técnica de seguimiento en fisiología vegetal. Un adelanto

importante en el estudio de la fotosíntesis se dio en el año de 1927 cuando

Warburg y Negelein desarrollaron la espectrofotometría y K. Lohmann describe el

ATP.

3
En 1935 por primera vez se enuncia un modelo de membrana que incluye no solo

lípidos sino también proteínas (Danielli y Davson) y en 1936 Wood y Werkman

describen dos fases de la fotosíntesis, una requiere luz y otra no, dos años

después Robert Hill aisla cloroplastos y descubre que desprender oxígeno al ser

iluminados siempre y cuando tengan un aceptor de electrones. En 1941, Ruben,

Randall, Kamen y Hyde muestran que el oxígeno desprendido en la fotosíntesis

proviene del agua, hecho muy importante debido a que antes se tenía la idea que

el oxígeno desprendido era lo que quedaba del CO2 al incorporarse el carbono en

la glucosa y en este mismo año F. Lippmann y H. Kalckar definen la función

general en el metabolismo del ATP. Calvin y Benson en 1948 informaron que el

fosfoglicerato es uno de los primeros productos de fijación del CO2, principio de la

descripción completa del destino del carbono que conforma el Ciclo de Calvin-

Benson que les diera el premio Nobel en 1961.

En 1951, Robert Hill confirmó que la fotoproducción de oxígeno por los

cloroplastos es independiente del uso del CO2 y que el oxígeno se produce por la

presencia de sustancias solubles de la planta o de reactivos que puedan aceptar

hidrógeno, lo que hasta ahora se conoce como la reacción de Hill.

En 1956, R. Emerson y sus colaboradores encontraron que dos haces de luz

provocaban mas producción de oxígeno por fotón que la suma de del producido

por cada haz de forma independiente, a lo que se le llamo Efecto Emerson.

Kortschak et al., además de Hatch y Slack (1965/66) describieron un mecanismo

sumamente eficiente usado por las plantas tropicales para unir CO2 (Plantas C4).

En 1970, L. Margulis presenta su teoría de la endosimbiosis donde propone que

los cloroplastos son descendientes de bacterias fotosintéticas que vivían dentro de

otras células y en 1971 Vernon resume el concepto de que los pigmentos se

4
ensamblan en las membranas de los tilacoides de los cloroplastos formando un

centro de reacción de moléculas de clorofila y pigmentos accesorios. En 1972, con

la ayuda de la novedosa técnica de congelación-fractura para microscopía

electrónica de barrido, Singer y Nicholson presentan el modelo del mosaico fluído

para las membranas celulares en donde se propone más claramente la interacción

de lípidos y proteínas en distintas zonas.

En 1988 se presentó un fuerte avance en el estudio de la fotosíntesis, la

cristalización del centro de reacción de una bacteria fotosintética y su resolución

por cristalografía de Rayos X, trabajo por el cual Deisenhofer, Huber y Michel

recibieron el premio Nobel.

En la actualidad, además de cada vez mejores descripciones por cristalografía de

rayos X de las diferentes moléculas involucradas, se ha dado una sucesión de

investigaciones basadas en mutaciones de genes que codifican diferentes

proteínas para analizar su participación en el proceso fotosintético; asimismo la

utilización de técnicas de transferencia genética para fortalecer el rendimiento en

la producción de carbohidratos.

5
ASPECTOS INTRODUCTORIOS

Es importante introducir algunos conceptos que nos ayudarán a comprender mejor

el proceso de la fotosíntesis y sus formas de evaluación o demostración

experimental.

Radiación electromagnética. La radiación electromagnética es una forma de

energía radiante que es de naturaleza dual pues presenta propiedades tanto de

onda como de partícula. Entre sus propiedades de onda posee una componente

eléctrica y una componente magnética, que son perpendiculares, pero sólo la

componente eléctrica interacciona comúnmente con la materia. Uno de sus

parámetros es la frecuencia que se define como el número de ondas que pasan

por un punto fijo en la unidad de tiempo, se puede expresar la frecuencia de otra

forma como número de unidades de longitud de onda en 1 cm y se llama número

de onda. Entre sus propiedades de partícula encontramos que las ondas viajan en

paquetes discretos llamados fotones y que cuando interactúa con la materia lo

hace mediante la aniquilación de fotones completos.

La radiación electromagnética puede considerarse como constituida por ondas de

energía. En cada una de estas ondas, la distancia entre dos crestas (o valles)
consecutivas es la longitud de onda. La radiación sólo se absorbe o emite en

unidades definidas llamadas fotones. La energía de los fotones es proporcional a

la frecuencia de la radiación.

La intensidad de un haz de radiación está caracterizada por su poder de radiación,

que es proporcional al número de fotones por segundo que se propagan en el haz

que transporte radiación de una sola longitud de onda o sea monocromático; un

haz policromático contiene radiación de diversas longitudes de onda.

6
La gama completa de radiaciones del espectro electromagnético comprende

diferentes longitudes de onda que de acuerdo a su tamaño poseen más o menos

energía (Fig. 1). Las longitudes de onda correspondientes al espectro de luz

visible (luz solar) es entre 400 y 700 nm aproximadamente, por debajo de 400 nm

se encuentra la radiación ultravioleta y por encima de 700 nm la radiación

infrarrojo.

Fig. 1. Radiaciones electromagnéticas. Es importante apreciar que entre mayor sea la longitud de

onda, menor es la frecuencia y la energía.

Cuando una molécula, por ejemplo un pigmento fotosintético, absorbe un fotón de

luz está absorbiendo un cuanto de energía y pueden suceder varias cosas:

– que la molécula la absorba y posteriormente la reemita como un

fotón de longitud de onda mayor, al regresar a su estado

fundamental,

7
 – que produzca cambios y transiciones electrónicos, vibracionales y

rotacionales, manifestados como calor o cambios en la molécula

como puede ser la emisión de un electrón.

– que se disperse

– que se refleje

Uniones entre moléculas. Brevemente mencionaremos que pueden ser fuertes o

débiles. Las uniones fuertes en este espacio se consideraran como sinónimo de

enlaces covalentes. Un enlace covalente es una unión en que dos moléculas se

unen compartiendo uno o más pares de electrones para estabilizarse y la energía

requerida esta aproximadamente entre 30 y 110 KCal/Mol.

Entre las uniones débiles encontramos aquellas que requieren muy pocas

kilocalorías por lo que se rompen relativamente fácil, proceso muy importante en

los sistemas biológicos pues permiten cambios conformacionales rápidos que

favorecen diferentes funciones de los organismos, ejemplos de ellas son los

enlaces iónicos, los puentes de hidrógeno, las uniones hidrofóbicas y las uniones

de corto alcance como lo son las fuerzas de Van der Walls.

Reacciones oxido-reducción. Una oxidación es la remoción de uno o más

electrones de un átomo o de una molécula y una reducción es el proceso

contrario, la adición de electrones. La oxidación requiere un aceptor y la reducción

un donador de electrones y debido a que estas especies no se encuentran libres,

siempre que haya una oxidación habrá una reducción asociada, a lo que se le

llama reacción de óxido reducción o redox y las sustancias o átomos involucrados

se llaman par redox. En los sistemas biológicos existen muchos ejemplos de este

tipo de reacciones, muchas oxidaciones se llevan a cabo sustrayendo el mismo

número de protones que de electrones, forma en la cual la carga neta no varía al

8
oxidarse, a este tipo de oxidaciones se les llama deshidrogenaciones y al proceso

de reducción hidrogenación. Es importante mencionar que existen un pequeño

grupo de moléculas llamadas transportadores biológicos que pueden ser oxidados

en un lugar y reducidos en otro, siendo capaces de transportar electrones de un

lado a otro a través del citoplasma, un ejemplo es el NADP+.

9
ESTRUCTURAS CELULARES Y MOLECULARES PARTICIPANTES

Plantas superiores. Aunque la fotosíntesis se lleva a cabo no solo en plantas

superiores sino también en algas eucariontes unicelulares y procariontes como

bacterias y algas verde-azules, es importante mencionar la compleja estructura de

las hojas de las plantas. De manera sencilla las hojas de las plantas han

evolucionado de acuerdo al medio ambiente en el que viven, siendo triunfadoras

en la selección natural aquellas con características que les permitan un

funcionamiento idóneo. Las hojas e la mayoría de las plantas son de apenas unas

cuantas células de espesor lo que permite que se expongan en una mayor

extensión a la energía radiante del sol. En la superficie superior e inferior tienen

una delgada capa de células que forman la epidermis y ambas capas están

recubiertas por una cutícula que es una protección más fuerte de contiene

ceramidas que les da cierta impermeabilidad y resistencia a la pérdida de la

humedad. En la epidermis existen unos poros de apertura regulable llamados

estomas que permiten la entrada de CO2, en el tiempo necesario y que

convenientemente poseen cloroplastos. Dentro de la hoja existe una capa

intermedia de células llamada mesófilo, las cuales contienen la casi totalidad de

los cloroplastos por lo que la fotosíntesis se realiza en este lugar. Además, las

hojas contienen una vascularización que suministra agua y sales minerales y

transportan los carbohidratos a otras partes de las células. En las plantas que

efectúan una vía alterna para la fotosíntesis, llamadas C4, existen unas células

llamadas del parénquima vascular que poseen un tipo diferente de cloroplastos

llamados dimórficos.

Cloroplastos. Las plantas superiores contienen una gran variedad de plástidos en

donde se realizan funciones muy importantes, estos organelos derivan de un

ancestro común, aunque después de su desarrollo presentan una variedad de

10
tamaños, formas y funciones; este desarrollo está dirigido por genes de las células

que los contienen.

De inicio fueron clasificados solo por su color en cloroplastos (verdes),

cromoplastos (amarillos o rojos) y leucoplastos (blancos); en la actualidad se

reconocen los cloroplastos (con gran proporción de clorofila), amiloplastos

(reserva e almidón), cromoplastos (carotenos), oleinoplastos (aceites),

proteinoplastos (proteínas), proplástidos (pequeños y no diferenciados,

fundamentalmente en raíces) y etioplastos (plastos de las plantas que crecen en la

oscuridad). Todos ellos poseen un genoma propio capaz de codificar un pequeño

número de genes, por lo que muchas de sus proteínas son codificadas por el

núcleo de la célula y las proteínas son importadas al plástido. Es importante

recordar que la presencia de material genético y de una doble membrana son las

bases de la teoría endosimbiótica que postula que estos plástidos y las

mitocondrias entraron como organismos simbioticos en otra célula, los organismo

procariontes más parecidos en la actualidad a los plástidos serían las algas verde-

azules o cianobacterias.

En plantas superiores, los cloroplastos son cuerpos discoidales o elipsoidales que

miden entre 2 y 10µm de diámetro y 1µm de grosor. En algas pueden ser más

grandes y de forma más complicada. En plantas superiores puede haber docenas

de cloroplastos en el citoplasma de cada célula verde, mientras que en

organismos eucariontes unicelulares solo puede haber uno o dos.

11
Se han distinguido dos tipos de cloroplastos: el lamelar, característico de algas, y

el formado por grana, característico de plantas superiores; esta rodeado por dos

membranas, cada una de aproximadamente 5 nm de grosor con un espacio de

aproximadamente 10 nm entre ellas. Aparentemente cada una presenta la

estructura de una unidad de membrana, es decir, una bicapa de fosfolípidos entre

dos de proteína. Las membranas tienen permeabilidad diferencial, lo cual favorece

que entre materia prima para la fotosíntesis y después salgan los productos de

ésta.

12
Dentro del cloroplasto hay un material semifluido incoloro que contiene proteínas

DNA, RNA y ribosomas que participan en la síntesis de varias proteínas del

cloroplasto; muy similar a la matriz mitocondrial llamado estroma. Aquí es donde

se localiza la mayoría de las enzimas requeridas en las reacciones de la fase

oscura.

La membrana interna se invagina formando dobleces apareados llamados

lamelas. A ciertos intervalos las lamelas se ensanchan y forman bolsas o sacos

planos llamados tilacoides, y éstos se acomodan uno sobre otro para formar los

grana.

Según el modelo de Hodge, la clorofila se encuentra dentro de los tilacoides entre

capas de moléculas de proteína y fosfolípidos. Se cree que los transportadores

de electrones y enzimas fosforiladoras de los fotosistemas I y II están en la

membrana de los tilacoides.

13
Pigmentos fotosínteticos. La clorofila es el pigmento responsable del color verde

de las plantas. Sin embargo, una planta no verde no siempre carece de clorofila; a

menudo ésta se encuentra enmascarada por los pigmentos accesorios no verdes.

Todas las células fotosintéticas que producen oxigeno contienen 2 tipos de

clorofila, una de las cuales siempre es la a. La otra puede ser clorofila b (plantas

verdes), clorofila c (algas pardas, diatomeas, dinoflagelados), o clorofila d (algas

rojas). Los organismos fotosintéticos que no producen oxigeno –bacterias

fotosintéticas- nunca tienen clorofila a; contienen tipos sencillos de clorofila, que

pueden ser bacterioclorofila o clorobium-clorofila o ambos tipos.

Cualquier forma de clorofila contiene la estructura porfirina consistente en 4 anillos

pirrólicos unidos por sus átomos de nitrógeno a un átomo de magnesio. Cada

clorofila tiene un quinto anillo con solo átomos de carbono. Exceptuando a la

clorofila c, todas las clorofilas tienen una larga cadena fitol. La diferencia entre

clorofilas es la estructura de las cadena laterales ligadas a los anillos pirrólicos.

Por ejemplo, la clorofila a tiene un grupo metilo en el anillo 3, mientras que la

clorofila b tiene un grupo aldehído en ese lugar.

Un análisis de la estructura de la clorofila y de su disposición en el cloroplasto

muestra que están muy relacionadas con la función que desempeña. Por una

parte, la molécula necesita poseer electrones que se exciten fácilmente, pero a la

vez que no la inestabilicen lo suficiente como para buscar combinarse

rápidamente con alguna sustancia inadecuada. La estructura de los anillos

pirrólicos, con sus enlaces conjugados, tiene precisamente estas propiedades.

Cualquier sistema conjugado posee electrones particularmente móviles que se

excitan con poca cantidad de energía, como la que conforma la luz visible.

Asimismo, la clorofila es muy estable, aunque fácilmente excitable, porque en su

14
estructura de anillos cerrados en círculo los electrones exteriores no pertenecen a

un átomo o enlace individual, sino al complejo alrededor del cual oscilan.

Cuando la clorofila recibe la estimulación por los fotones, desprende electrones

que reducen el NADP+ por lo sería de esperarse que la eficiencia de la fotosíntesis

acompañara los cambios realizados por la diferente absorción de la clorofila en

distintas longitudes de onda; sin embargo, esto no sucede debido a que existen

otros pigmentos capaces de absorber energía radiante en otros rangos de longitud

de onda lo que hace a la fotosíntesis un proceso muy eficiente absorbiendo

energía prácticamente en cualquier rango del espectro visible.

Aunque la energía es asimilada en un amplio espectro, parte de ella se pierde al

transferirla de una molécula a otra hasta llegar al pigmento que absorbe a la

mayor longitud de onda en el visible o sea, la de menor energía. Por lo anterior, es

importante realizar la transferencia de energía de una molécula de clorofila a otras

y de los pigmentos accesorios a la clorofila a con eficiencia. Esto se logra gracias

a la disposición molecular de la clorofila en los cloroplastos. Puesto que la cadena

fitol es soluble en lípidos y el resto es soluble en proteína, se crea un acomodo

muy compacto de las moléculas, lo que les da cercanía física. Cuando una de las

moléculas es excitada, rápidamente pasa su energía a la molécula vecina por

resonancia.

Consecuentemente, debe existir algún sitio que acumule o guarde la energía de

excitación para que no circule demasiado tiempo y se pierda como calor; esta

trampa de energía debe absorber luz de la menor energía posible, esto es 700 nm

en el espectro visible, lo que hace eficientemente la clorofila a, con distintas

subfracciones que absorben desde 660 hasta cerca de 700, formando una unidad

cooperativa, parte de un sistema de pigmentos o fotosistema llamado P700. P700

15
absorbe a mayor longitud de onda, y por tanto menor energía, que las moléculas

que lo rodean. Entonces ellas le pueden pasar energía a P700 pero no viceversa,

por lo que hay un flujo unidireccional.

Por último, el mecanismo de asimilación de energía mencionado no es suficiente

para explicar el hecho de que luz monocromática de 700 es ineficiente para

producir la fotosíntesis en cloroplastos y que la adición de un segundo haz de luz

de longitud de onda menor (650) aumenta de forma sinérgica la eficiencia global.

Este efecto de luz doble conocido como efecto Emerson llevo a postular la idea de

que al menos existen dos trampas diferentes, a esta segunda se le conoce como

P690. Resumiendo, los pigmentos en los cloroplastos parecen estar agrupados en

dos partes o sistemas de pigmentos llamados sistema de pigmentos I o

fotosistema I (PSI) y sistema de pigmentos II o fotosistema II (PSII). El mismo

grupo del Dr. Emerson describió que ambos sistemas están acoplados

químicamente, más que a través de la sola transferencia de energía, este

acoplamiento comprende varias reacciones de oxidación-reducción similares a la

cadena de transporte de electrones en mitocondrias. Al parecer los electrones que

se sustraen del agua se transfieren a la cadena de transporte de electrones

mediante PSII y de la cadena al NADP+ por el PSI.

16
REACCIONES DE FASE LUMINOSA

Consiste en la captura de fotones, cuya energía es utilizada finalmente para la

producción por una parte de una molécula transportadora llamada, nicotinamida-

adenin-dinucleótido fosfato reducida (NADPred) y por otra de energía química

almacenada, adenosin-trifosfato (ATP). El reductor se produce cuando la clorofila

atrapa fotones, los cuales excitan las moléculas de NADP de esta manera

provocan el ascenso de electrones a un nivel de energía superior. Los electrones

no regresan a la molécula de clorofila porque reducen moléculas de NADP+ a

NADPH.

Por otra parte, la energía química almacenada se produce cuando la clorofila

atrapa fotones que excitan las moléculas de NADP, con lo que provocan el

ascenso de electrones a un nivel de energía superior, del que si regresan,

mediante la liberación gradual del exceso de energía. Dicha energía se utiliza para

acoplar fosfato inorgánico (Pi) con adenosin bifosfato (ADP) para producir ATP.

La molécula que recibe definitivamente al electrón excitado de la clorofila a y que

por tanto queda reducida por el, es el NADPox. La clorofila no reduce al NADPox

cuando su potencial es positivo, sino cuando, gracias a la absorción de la energía

de un fotón, ha adquirido un potencial mas bajo que el del NADPox. La energía

luminosa (fotones) captada por la clorofila “se utiliza” para disminuir el potencial

redox de la clorofila, de tal manera que ésta pueda ser un agente reductor del

NADPox.

Un fotón incide sobre un conjunto de moléculas del pigmento clorofila a

transmitiéndole su energía, actuando como catalizador fotoquímico. Se cree que

entre dichas moléculas hay una especializada en recibir y ceder electrones

excitados, llamada P700 que es parte del PSI. P700 cede su electrón excitado y

17
queda con una deficiencia electrónica. El electrón es recibido por una proteína

transportadora de electrones que contiene azufre y hierro llamada ferredoxina. A

su vez la ferredoxina cede el electrón a la ferredoxina- NADPox. El proceso

continua con acumulación de NADPred hasta que se agota el NADPox. Dado que

los electrones no regresan a la clorofila a, a este proceso se le ha llamado flujo de

electrones no cíclico.

El mecanismo mediante el cual se regeneran las moléculas de clorofila a es igual

a aquel mediante el que se produce el NADPred: la excitación de moléculas

pigmentarias cuyos electrones pasan por varios compuestos hasta llegar a un

aceptor final. El recorrido del electrón que regenera a la clorofila a es el siguiente:

un fotón incide sobre un conjunto de moléculas del pigmento clorofila b y le

trasmite su energía. Una molécula cede su electrón excitado a un aceptor aun no

identificado Q, que queda de esta manera con una deficiencia electrónica. Q

transfiere el electrón a una sustancia llamada plastoquinona. De la plastoquinona

el electrón pasa al citocromo b599, compuesto que tiene fierro. De este citocromo

el electrón pasa al citocromo f o c555 y de éste a la plastocianina, una proteína que

tiene cobre. Es la plastocianina la que cede el electrón a la molécula P700 de

clorofila a.

La clorofila b, al igual que la a, simplemente cede electrones temporalmente, y por

tanto es un catalizador. Los electrones que corrigen las deficiencias electrónicas

de la clorofila b provienen del agua y éste es el verdadero agente reductor del

NADPox, pues se acumula en forma oxidada como O2

El flujo no cíclico de electrones es una reacción de óxido-reducción en la que el

agua es el agente reductor y el NADPox es el agente oxidante; se acumulan el O2

como compuesto oxidado y el NADPred como compuesto reducido. Pero dado

18
que es una oxido-reducción que ocurre en el sentido contrario al espontáneo

requiere de una entrada de energía. Es la energía solar la que invierte el sentido

natural de la reacción. La ecuación es:

nhv + 2 Pi + 2ADP + H2O + NADP NADPH + ½ O2 + 2ATP + 2H2

el flujo de electrones no cíclico es la combinación de dos métodos opuestos pero

complementarios, para relacionar compuestos de diferente potencial redox: un

método “brusco”, la excitación de electrones por absorción de energía luminosa, y

un método gradual, la liberación de pequeñas cantidades de energía por la oxido-

reducción de una serie de compuestos de potencial muy cercano entre si. Podría

considerarse una falta de precisión del sistema que la excitación llevara al electrón

a un potencial redox menor que el necesario para reducir al NADPox o a la

clorofila a y después liberar el excedo de energía hasta llegar a un potencia

adecuado. Sin embargo, el exceso de energía no se desperdicia, pues en sitios

determinados se usa para acoplar ADP con Pi dando ATP, una forma más de

energía química potencial, en otras palabras, hay una fosforilación no cíclica. Cuya

principal función es la de producir un compuesto rico en energía y fuertemente

donador de hidrogeno, como es el NADPred. Sin embargo, si hay un proceso

dentro de las reacciones luminosas cuya única función es la producción de un

compuesto que no es reductor pero si rico en energía, el ATP.

Al iluminar cloroplastos aislados se ha observado que en ausencia total de

donadores o aceptores de electrones se forma ATP a partir de ADP y Pi, sin

acumulación de un compuesto reducido. También se ha observado que la

formación de ATP depende directamente de la intensidad y duración de la

19
iluminación; entre más tiempo se iluminen los cloroplastos y mayor sea la

intensidad, mas ATP se forma. Dado que no se detecta un producto reducido, se

supone que no hay una transferencia neta de electrones. Sin embargo, la

acumulación de un compuesto con un enlace de alta energía donde no lo había

indica que aun cuando los electrones no están produciendo una reducción neta, si

están fluyendo. Se supone que lo que sucede es que hay oxidación y reducción

del mismo compuesto, a saber, la clorofila P700. Puesto que la única fuente

posible de energía para unir Pi y ADP es la energía radiante dada a los

cloroplastos, se supone que dicha energía genera electrones con un alto nivel

energético. Esos electrones regresan a la clorofila a partir de la ferredoxina – vía

citocromo b6 - en vez de continuar hacia el NADP a llenar las deficiencias

electrónicas que ellos mismos dejaron. Si están presentes el ADP y el Pi, ocurre

formación de ATP, es decir, una fosforilacion; si no están presentes el ADP y el Pi,

la energía se pierde como fluorescencia y calor. La ecuación general del flujo

cíclico de electrones es:

nhv + Pi + ADP ATP + H20

Las reacciones luminosas las llevan a cabo ambos fotosistemas conectados en

serie.

Los dos sistemas y el complejo citocromo están incluidos en la membrana

tilacoide. Los electrones captados del agua en el fotosistema II se transfieren al

fotosistema I a través de las quinonas (Q), el complejo citocromo b6f y la

plastocianina (PC). En el fotosistema I, los electrones se excitan de nuevo por la

luz, para su transferencia a través de una serie de intermediarios a la ferredoxina.

La ferredoxina reducida reduce el NADP+.

20
En cada uno de los dos centros de reacción, P680 y P700, los electrones suben a un

estado excitado mediante la absorción de fotones. En cada fotosistema, los

electrones excitados pasan por una cadena de transporte electrónico, que impulsa

el bombeo de iones hidrogeno al interior de la luz del tilacoide. El modo de

conección de los dos fotosistemas se denomina a veces esquema Z, debido al

patrón de cambios energéticos que se ha descrito.

Imagen simplificada de la fotosíntesis. Principales proteínas de la membrana tilacoides qur

soportan el flujo lineal de electrones. (a) Organización transmembranal de las proteínas de los

principales complejos fotosintéticos en su estado de oligomerización nativo, resuelto por

cristalografía de rayos X (Daniel Picot). (b) Representación esquemática de la vía del flujo lineal de

electrones y de la translocación de protones a través de grandes complejos de proteínas cuya

estructura atómica se muestra en parte a. Los electrones son extraídos del agua en el lado lumenal

de las membranas y trasladado a NADP en el lado del estroma. La transferencia de electrones es

impulsada por el centro de reacción de dos distintos fotosistemas -PSII y PSI- que constituyen el

centro de separación de cargas inducida por la luz, entre la clorofila fotosensible y una

21
molécula receptora. El intersistema de acarreadores electrónicos consiste en un conjunto de

moléculas de plastoquinona disueltas dentro de la bicapa lipídica, un complejo de proteínas

transmembranal -complejo de citocromos b6f- que comprende un grupo de Fe-S y cuatro grupos

hemo, una pequeña proteína que contiene llamada plastocianina, que esta disuelta en el lumen de

los tilacoides y que es sustituida por un citocromo soluble, C6, en algunos organismos

fotosintéticos. Los protones translocados a través de la membrana durante el flujo lineal de

electrones son utilizados por la ATP sintasa transmembranal para impulsar la síntesis de ATP.

Tomada de Eberhard, Finazzi, y Wollman.

Es importante mencionar que los electrones captados por el agua mencionados

antes, son solo un caso especial del esquema general de la fotosíntesis, en 1937,

Robert Hill descubrió que al iluminar cloroplastos que carecen de CO2 en

presencia de un aceptor de electrones artificial, el ferricianuro [Fe(CN) 63-], se

produce O2 con la reducción concomitante del aceptor. Demuestra que el CO2 no

participa directamente en la reacción de producción de O2.

En 1941, cuando se pudo disponer del isótopo 18O, Samuel Ruben y Martin

Kamen demostraron que la fuente del O2 que se forma en la fotosíntesis es el

H2O:

H218O + CO2 (CH2O) + 18O2

En el caso de las bacterias sulfurosas purpúreas se utiliza sulfuro de hidrogeno

con la siguiente ecuación:

H2S + CO2 S + 2H2 + 2e-

Resumiendo la contribución de Hill a la ecuación general de la fotosíntesis es el

esclarecimiento del origen del O2 enunciando la ecuación general:

CO2 + H2A C6H12O6 + 2A + H2O

22
23
REACCIONES DE FASE OSCURA

Las síntesis del proceso fotosintético se llevan a cabo independientemente de la

presencia o ausencia de luz. Mediante estas reacciones lo que ocurre son dos

eventos: la fijación del CO2 y el ciclo de reducción del carbono.

La fijación del CO2 implica que su carbono se integra a otras moléculas con

carbono para la construcción de cadenas más largas.

H2O + CO2 + Ribulosa-1,5-difosfato 2 ácido 3-difosfoglicérico

Ya que se ha fijado el CO2, relacionaremos los productos de la fase luminosa con

las reacciones de la fase oscura integrando cada reacción hacia la síntesis de

carbohidratos:

Acido 3-fosfoglicérico + ATP acido difosfoglicérico + ADP + Pi

Acido difosfoglicerico + NADPH fosfogliceraldehído + NADP

El fosfogliceraldehído (PGA) es un compuesto importante porque puede seguir en

el ciclo de reducción del carbono o puede salir y seguir reduciéndose hasta

producir carbohidratos sencillos o complejos, etc. Uno de los caminos que puede

seguir es el siguiente:

2 PGA hexosa fosfatada (un carbohidrato) + Pi

24
Otro papel muy importante del PGA es la reintegración de la ribulosa-1,5-difosfato

y de esta manera evitar que se detenga la fijación de carbono por falta de un

aceptor inicial. La manera en que esto se lleva a cabo es cíclica, pues las

moléculas de PGA (C3, de tres carbonos) producen moléculas de ribosa-5-fosfato

(de cinco carbonos), que con ATP se transforman en ribulosa-1,5-difosfato (cinco

carbonos) la cual tras fijar CO2 vuelve a producir dos moléculas de PGA para

volver a comenzar el ciclo.

Podemos caracterizar a las reacciones de la fase oscura como un proceso de

oxido-reducción en la que el NADPH es el agente reductor y el CO2 el agente

oxidante; se acumula NADP como compuesto oxidado y un carbohidrato como

compuesto reducido. Esta reacción, al igual que las de los flujos cíclicos y no

cíclico de electrones, ocurre en contra del sentido espontáneo, por lo que también

requiere una entrada de energía. Pero en este caso no es la energía de un fotón

la que invierte el sentido de la reacción, sino el ATP producido durante las

reacciones luminosas.

En el ciclo descrito por Calvin-Benson entran 3 moléculas de ribulosa-1,5-

difosfato, las cuales aceptan una molécula de CO2 cada una, o sea, 3 en total. Al

reaccionar la ribulosa-1,5-difosfato y el CO2 se forman 3 moléculas de un

compuesto de 6 carbonos, de estructura desconocida. Dicho compuesto,

rápidamente se rompe en dos moléculas iguales de ácido 3-fosfoglicérico. Las 6

moléculas de acido 3-fosfoglicérico son reducidas por el NADPH y el ATP de las

reacciones luminosas, lo que da como resultado 6 moléculas de

fosfogliceraldehído. Cinco de ellas vuelven a entrar al ciclo para regenerar la

25
ribulosa-1,5-difosfato y la sexta representa la ganancia del ciclo, que puede

oxidarse en las mitocondrias o seguir reduciéndose. La fórmula general es:

6-ribulosa-1,5-difosfato + 6CO2 + 18ATP + 12NADPH

6-ribulosa-1,5-difosfato + hexosa + 16Pi + 18ADP + 12NADP+

La ribulosa-1,5-difosfato aparece a ambos lados de la ecuación solo para mostrar

que es un componente necesario que se regenera al final del ciclo.

Alrededor de 1960, se describió un proceso llamado fotorrespiración que sucede

en plantas que se encuentran sumamente iluminadas que en lugar de producir

oxígeno, lo utilizan; de hecho, cuando el CO2 esta escaso y el O2 abunda el

proceso de fororrespiración puede superar al de la fijación de CO2 en la

fotosíntesis. La explicación resulto algo paradójico, la enzima que fija el CO2 en la

ribulosa-1,5-difosfato no tiene una afinidad específica por el CO2, puede también

captar O2 cuando éste se encuentra en abundancia, de hecho la enzima

encargada que en un inicio se creyó que solo era carboxilasa ahora se renombro y

se conoce como ribulosa-1,5 difosfato carboxilasa-oxigenasa o Rubisco.

En su acción como oxigenasa, la Rubisco cataliza la formación de 3- fosfoglicerato

y 2-fosfoglicolato, éste último es hidrolizado a glicolato, por la glicolato fosfatasa,

que es oxidado parcialmente formando CO2 a través de reacciones realizadas en

peroxisomas especializados en las plantas llamados glioxisomas. Aunque la

fotorrespiración aparentemente es un proceso que desperdicia el realizado por la

fotosíntesis, parece ser que apareció cuando en la atmósfera primitiva había muy

poco oxígeno y no causaba problema alguno; sin embargo, en la actualidad

26
pudiera haber sobrevivido el proceso evolutivo al ser un mecanismo de protección

del aparato fotosintético contra la foto-oxidación cuando no exista suficiente CO2

para disipar la energía absorbida.

Precisamente, en 1966 Hatch y Slack describieron otra vía para la fijación del

carbono que utilizan plantas de climas calurosos y secos que evitan la

fotorrespiración. Estas plantas poseen una anatomía característica en la cual sus

finas venas están rodeadas por una capa muy fina de células de la vaina del haz

que a su vez están rodeadas por células del mesófilo. Estas plantas poseen otro

tipo de cloroplastos llamados dimórficos. En esta vía, el CO2 es captado por las
células del mesófilo que no contienen cloroplastos, por lo que éste se condensa

con el fosfoenolpiruvato (PEP) para formar oxaloacetato (OA) que es un

compuesto de cuatro carbonos por lo que esta vía también se conoce como C4. El

OA es reducido por el NADPH y convertido a malato que es transportado a

cloroplastos comunes para por una descarboxilación convertirse en piruvato y

liberar CO2 que entra al ciclo de Calvin o C3 y el piruvato regresa a las células del

mesófilo para ser fosforilado y de nuevo formar PEP. El resultado de este proceso

es la concentración de CO2 en las células de la vaina del haz a expensas de ATP,

que aunque parezca más ineficiente que el proceso normal o C3, en realidad es

una estrategia muy eficiente para adaptarse a las condiciones climáticas en las

cuales abrir los estomas durante el día para captar CO2 podría ser fatal por la

deshidratación causada por la temperatura.

27
Figura de flujo de carbono. Un aspecto general del flujo de carbono y equivalentes de reducción los

cloroplastos de la vaina, que ilustra las conexiones entre NDH dependientes e independientes

del flujo de electrones cíclico, oxidasa alternativa (PTox), CCMs postuladas como NDH- dependientes y el

flujo primario de carbono. Las proteínas mostradas en rojo están enriquecidos los cloroplastos de la vaina. El

transporte malato-piruvato importa malato a los cloroplastos de las células de la vaina, donde se descarboxila

por ME, liberando CO2 y reduciendo de NADP+ en NADPH. En condiciones favorables, el CO2 es utilizado

por la Rubisco en el ciclo de Calvin. El NADPH se utiliza en el ciclo de Calvin y también puede usarse para

conducir un flujo cíclico de electrones, el cual se asimila al complejo de NDH o a las proteínas PGR5 y

PGRL1 del PSI. El flujo cíclico de electrones ayuda a construir el gradiente de protones a través de la

membrana del tilacoides y sirve para producir ATP por la ATP sintasa tipo f. Para la fotosíntesis C4 el CO2 se

concentra alrededor de la Rubisco de los cloroplastos de la vaina, por lo que el ciclo C4 es más rápido que el

ciclo C3. La mayor resistencia a la fuga de los cloroplastos aumentará la concentración de carbono inorgánico

en torno a la Rubisco. Para reducir las fugas, el CO2 se puede convertir en

bicarbonato (HCO3+) lo que es una reacción lenta y espontánea (debido a que la anhidrasa carbónica está

ausente en los cloroplastos de la vaina), además está conversión podría verse favorecida por un complejo

NDH en forma de U que funciona en forma similar a los complejos de cianobacterias. Las proteínas asociadas

a NDH en la cadena de aceptores de electrones (marcadas en líneas punteadas) son desconocidas en los

28
cloroplastos de maíz y otras especies como A. thaliana. La oxidasa alternativa de los tilacoides

(PTox) puede servir para reducir el oxígeno molecular directamente y así evitar el exceso de reducción de la

cadena de transporte de electrones. Cuatro proteínas del lumen se asocian con el complejo NDH. PGR5 y

PGRL1 proporcionan una vía cíclica de flujo de electrones NDH independiente.

Abreviaturas: FNR, ferredoxina reductasa, PC, plastocianina, PQ (H2), plastoquinona o plastoquinol. Tomada

de Majeran y van Wijk.

Micrografías electrónicas de células del mesófilo de hojas de plantas de maiz. BS: célula de la vaina, M: célula

del mesófilo, Cp: cloroplasto. La escala representa 10 mm (a) y 1 mm (b). Imágenes de Turgeon, Medville y

Jung. Tomadas de Majeran y van Wijk.

29
Figura comparativa C3 y C4. La distribución de las vías fotosintéticas, así como de los transportadores entre la

vaina y las células del mesófilo. La característica clave de la fotosíntesis C4 es que la fijación primaria del

carbono es llevada a cabo por PEPC (PEP citosólico) usando bicarbonato en lugar de CO2 como sustrato.

Además, el producto resultante de la fijación de carbono es OA, un ácido C4, en lugar de 3-PGA, un ácido C3.

OAAse reduce en el cloroplasto mesófilo por la malato deshidrogenasa (MDH) de malato (MA), que luego se

exporta a las células de la vaina, donde se descarboxila formando piruvato, CO2 y NADPH. El piruvato se

regenera en PEP en los cloroplastos de las células del mesófilo por fosfopiruvato ortofosfato dicinasa (PPDK).

Dentro del ciclo de Calvin, la fase reductiva se indica mediante una línea discontinua para subrayar que esto

ocurre principalmente en los cloroplastos del mesófilo. Una cantidad citosólica de bicarbonato y de CO2 se

mantienen en equilibrio por la expresión específica de la anhidrasa carbónica (AC) del cloroplasto (CPCA),

como lo demuestran estudios proteómicos y de actividad. La actividad de PPDK es

regulada por proteínas bifuncionales cinasa / fosfatasa PPDK (PPDK-RP), la proteómica sugiere una

interacción estable entre PPDK y PPDK-RP en varios complejos de alto peso molecular. El análisis

proteómico comparativo mostró que enzimas específicas del ciclo de Calvin como Rubisco, Rubisco activasa,

fructosabisfosfto aldolasa (FBA), fosforilribulokinase (PRK), sedoheptulosa-1 ,7-bisfosfatasa (PAS) y proteínas

del cloroplasto de 12 kDa (CP12), están implicadas en el ensamblaje del supercomplejo y en la (in) activación

30
de la PRK y de la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) en los cloroplastos C3; tienen muy altos

radios de expresión células de la vaina:mesófilo. Enzimas del Ciclo de Calvin implicadas en la reducción de la

triosafosfato (fosfoglicerato cinasa [PGK], GAPDH-A y B y la isomerasa triosafosfato [TPI]) se localizan

preferentemente en mesófilo o se distribuyen equitativamente entre la vaina y el mesófilo. Enzimas de la

biosíntesis de almidón (almidón sintasa y subunidades de ADPglucosa pirofosforilasa) tienen niveles más

altos de acumulación en el paquete de células de la vaina que en las del mesófilo. Se indican diversos

transportadores en el interior del cloroplasto (MEP1-4, MEX1, DIT1, DIT2, PPT, PPT*, TPT, AATP1 y ANTR2).

PPT* es probablemente una proteína PPT adaptada al metabolismo C4. Los signos de interrogación (para

MEP1-4 y PPT *) indican asignaciones provisionales. Las enzimas y las vías enriquecidas en las células del

mesófilo se muestran en color azul, mientras que aquellas de las células de la vaina se muestran en rojo.

Abreviaturas: FBP, fructosa 1,6-bisfosfatasa, RCA, Rubisco activase; EPR, ribulosa-fosfato 3-epimerasa, RPI,

ribosa-5P-isomerasa; TKL, transcetolasa. Tomadas de Majeran y van Wijk.

31
FOTOSINTESIS EN PROCARIONTES

La fotosíntesis también es realizada por organismos procariontes, bacterias y

algas verde-azules. Existen grandes diferencias en el proceso fotosintético

realizado por ambos tipos de procariontes. Las algas verde-azules cuentan con un

doble sistema de pigmentos muy parecido al de los cloroplastos de plantas

superiores, donde sus pigmentos son ficoeritrobilina o ficocianobilina (por eso su

color) mientras que las bacterias solo utilizan un fotosistema (parecido al PSII) y

sus pigmentos (P870 o P960) son diferentes. Comúnmente las bacterias utilizan otra

fuente de electrones distinta al agua, como metano, monóxido de carbono, o

donadores inorgánicos como azufre o hidrógeno.

Comparación de los diferentes tipos generales de centros de reacción para procariontes con los

fotosistemas, según su análisis por cristalografía de rayos X. Tomado Heinnickel y Golbeck.

32
ASPECTOS IMPORTANTES PARA LA EVALUACIÓN DE LA FOTOSÍNTESIS

Finalmente, después de describir ampliamente el proceso fotosintético, es

importante señalar cuales de estos elementos podrían ser útiles para evaluarlo de

forma experimental. De forma sencilla podríamos decir que habría dos formas

generales: Evaluar los elementos de entrada a la reacción como son la luz y el

CO2 o los de salida como son la producción de carbohidratos o de oxígeno en el

caso de plantas superiores. La forma más sencilla usada por muchos años es la

gasometría para evaluar el consumo de CO2 o la liberación de O2, también la

obtención y cuantificación de los carbohidratos. Para estudios más detallados

comenzaron a usarse reacciones que detecten los cambios oxido-reducción en

diferentes pasos con cloroplastos o complejos enzimáticos y proteicos aislados.

Además se han aislado y caracterizado muchos de las moléculas participantes y

con las nuevas técnicas de biología molecular se han logrado mutaciones sitio-

específicas que nos han ayudado al mejor entendimiento del proceso. En la

actualidad muchos esfuerzos se están realizando especialmente en la

transferencia genética o tecnología transgénica para mejorar el rendimiento y

calidad de productos en cultivos comerciales.

33
BIBLIOGRAFIA

Jiménez L., Merchant H. 2003. Biología Celular y Molecular. 1ª Edición. Ed.

Pearson Educación. México.

Mathews R., vanHolde K. Bioquímica. 3ra. Edición. Ed. Pearson.

Voet D., Voet J. 2006. Biochemistry. Third edition. Ed. John Wiley & Sons, Inc.

ARTÍCULOS

Telma E. Scarpeci T., Zanor M., Carrillo N., Roeber B., Valle E .2008. Generation
of superoxide anion in chloroplasts of Arabidopsis thaliana during active
photosynthesis: a focus on rapidly induced genes. Plant Mol Biol 66: 361–378.

Piazza G., Gibbs M .1983. Influence of Adenosine Phosphates and Magnesium on

Photosynthesis in Chloroplasts from Peas, Sedum, and Spinach. Plant Physiol 71:
680-687.

Fouad W., Altpeter F .2009. Transplastomic expression of bacterial L-aspartatea-

decarboxylase enhances photosynthesis and biomass production in response to
high temperature stress. Transgenic Res 18:707–718.

Shuvalov V .2008. New look on the formation and interaction of elementary

particles in atoms and molecules including photoreaction centers. Photosynth Res
98: 219–227.

Bjorn L., Papageorgiou G., Blankenship R., Govindjee . 2009. A viewpoint: Why
chlorophyll a?. Photosynth Res 99: 85–98.

Hand E. When Earth greened over. Nature 4609: 161.

Manning D., Chen T., Campbell A., Tolbert N., Smith E. 1984. Effects of Chemical
Treatments upon Photosynthetic Parameters in Soybean Seedlings Plant Physiol.
76, 1055-1059.

34
Miller S., Wingard C., Castenholz R. 1998. Effects of Visible Light and UV
Radiation on Photosynthesis in a Population of a Hot Spring Cyanobacterium,a
Synechococcus sp., Subjected to High-Temperature Stress Applied and
Environmental Microbiology 64: 3893–3899.

McLean S., Hunter C. 2009. An enzyme-coupled continuous spectrophotometric

assay for magnesium protoporphyrin IX methyltransferases. Analytical
Biochemistry: In press.

Mederski H., Streeter J. 1977. Continuous, Automated Acetilene Reduction Assays

Using Intact Plants. Plant Physiol 59: 1076-1081.

Chen T., Brown R., Black C .1971. Related to Photosynthesis in Bermudagrass

and Other Plants. Photosynthetic 14CO2 Fixation Products and Activities of
Enzymes. Plant Physiol 47: 199-203.

Carpentier R., Larue B., Leblanc R. 1984. Photoacoustic Spectroscopy of

Anacystis nidulans. III. Detection of Photosynthetic Activities. Archives of
Biochemistry and Biophysics 228: 534-543.

Arigita L., Gonzalez A., Tame´s R. 2002. Influence of CO2 and sucrose on
photosynthesis and transpiration of Actinidia deliciosa explants cultured in vitro.
Physiologia Plantarum 115: 166–173.

Amunts A., Nelson N. 2009. Plant Photosystem I Design in the Light of Evolution.
Structure 17: 637-650.

Fry K. 1970. Some Factors Affecting the Hill Reaction Activity in Cotton
Chloroplasts. Plant Physiol 45: 465-469.

Arnon D. 1971. The Light Reactions of Photosynthesis Proc. Nat. Acad. Sci 68:
2883-2892.

35
Medina M. 2009. Structural and mechanistic aspects of flavoproteins:
photosynthetic electron transfer from photosystem I to NADP+. FEBS Journal 276:
3942–3958.

Majeran W. van Wijk K. Cell-type-specific differentiation of chloroplasts in C4

plants. Trends in Plant Science 14: 100-109.

Heinnickel M., Golbeck J.2007. Heliobacterial photosynthesis. Photosynth Res

92:35–53.

Ohashi S., Miyashita H., Okada N., Lemura T., Watanabe T., Kobayash M. 2008.
Unique photosystems in Acaryochloris marina. Photosynth Res 98:141–149.

Charles S., Halliwell B. 1981. Light activation of fructose bisphosphatase in

photosynthetically competent pea chloroplasts. Biochem J 200: 357-363.

Hillmer P., Gest H. 1977. H2 Metabolism in the Photosynthetic Bacterium

Rhodopseudomonas capsulata: Production and Utilization of H2 by Resting Cells.
Journal of Bacteriology 129: 732-739.

Zeinalov Y. 2006. A brief history of the investigations on photosynthesis in

Bulgaria. Photosynth Res 88: 195–204.

Knauth L., Kennedy M. 2009. The late Precambrian greening of the Earth. Nature
460: 728-732.

Anderson J., Chow W., De Las Rivas J. 2008. Dynamic flexibility in the structure
and function of photosystem II in higher plant thylakoid membranes: the grana
enigma. Photosynth Res 98:575–587.

Monson R., Stidham M., Williams III G., Edwards G., Uribe E. 1982. Temperature
Dependence of Photosynthesis in Agropyron smithii Rydb. Factors affecting net
CO2 uptake in intact leaves and contribution from ribulose 1,5-bisphosphate
carboxylase measured in vivo and in vitro. Plant physiol 69: 921-928.

36
Roughan P., Holland R., Slack R. 1979. On the Control of Long-Chain-Fatty Acid
Synthesis in Isolated Intact Spinach (Spinacia oleracea) Chloroplasts. Biochem. J
184: 193-202.

Schlodder E. 2009. Introduction to optical methods in photosynthesis. Photosynth

Res 101: 93–104.

Crawford N., Yee B., Hutcheson S., Wolosiuk R., Buchanan B. 1986. Enzyme
Regulation in C4 Photosynthesis: Purification, Properties, and Activities of
Thioredoxins from C4 and C3 Plants. Archives of biochemistry and biophysics
244: l-15.

Murata N. 2009. The discovery of state transitions in photosynthesis 40 years ago.

Photosynth Res 99: 155–160.

Gest H. 2002. Definition of photosynthesis History of the word photosynthesis and

evolution of its definition. Photosynthesis Research 73: 7–10.

37