MICROPROPAGACION Y CULTIVOS IN VITRO

Departamento de Biología Vegetal y Ecología

Profesora: Trinidad Angosto Trillo

Programa de clases teóricas

Tema 1. Introducción y Generalidades. Historia. Bases celulares de la propagación:

Meiosis y reproducción sexual; Mitosis y reproducción asexual. Totipotencia: Diferenciación y
desdiferenciación. Regeneración y Morfogénesis: Organogénesis y Embriogénesis somática.
Tipos de cultivos de tejidos.

Tema 2. Variabilidad. Fenotipo y genotipo. Cambios fisiológicos. Variación epigenética.

Mutación. Causas de la variación genética. Heterogeneidad debida al explante. Variación
somaclonal. Variación inducida por los métodos de micropropagación. Quimeras. Cambio
genético dirigido.

Tema 3. Equipamiento y características. Instalaciones y equipo. Oficina y almacén. Area

de preparación de medios. Espacio de limpieza. Area de aislamiento y transferencia de
cultivos. Cámaras de crecimiento. Tipos de contenedores.

Tema 4. Factores que afectan al crecimiento y morfogénesis I. Genotipo. Efecto del

substrato. Efecto de la atmósfera. Temperatura. Humedad. Luz.

Tema 5. Factores que afectan al crecimiento y morfogénesis II. Expresión epigenética y

determinación celular. Estado de la planta madre. Edad y naturaleza del explante. Método de
cultivo. Competencia. Herida.

Tema 6. Componentes del medio de cultivo I. Macronutrientes. Micronutrientes. Efecto del

pH. Agentes quelantes. Suplementos. Ácidos orgánicos. Azúcares. Tipos de medios.

Tema 7. Componentes del medio de cultivo II. Composición del medio. Medios de cultivo
más utilizados. Aplicaciones. Elección de un medio apropiado. Preparación. Esterilización.

Tema 8. Reguladores del crecimiento. Auxinas. Antiauxinas. Citoquininas. Fenilureas.

Interacción auxina-citoquinina. Giberelinas. Retardantes. Ácido abscísico. Etileno.
Poliaminas. Otros reguladores. Carbón activo. Habituación. Duración de los tratamientos.

Tema 9. Preparación del material vegetal. Descontaminación. Esterilización. Métodos de

tratamiento. Reducción de la contaminación. Técnicas asépticas de aislamiento y
transferencia. Hongos y bacterias. Detección de la infección. Eliminación. Virus in vitro.
Eliminación. Catalogación de plantas libres de virus.

Tema 10. Métodos de micropropagación. Técnicas. Fases de micropropagación. Cultivo de

explantes. Cultivo de ápices. Cultivo de segmentos nodales. Cultivo de meristemos. Cultivo
de callos. Cultivo de células aisladas. Cultivo de protoplastos. Cultivo de anteras y
microsporas. Cultivo de óvulos. Cultivo de embriones y semillas. Microinjerto.
Tema 11. Iniciación de un cultivo. Preparación del material. Cultivo de meristemos. Cultivo
de ápices. Formación directa de ápices. Organogénesis indirecta. Embriogénesis.

Tema 12. Establecimiento de un cultivo. Elongación del ápice. Enraizamiento.

Endurecimiento. Aclimatación. Germinación de embriones somáticos.

Tema 13. Problemas en la iniciación y mantenimiento de cultivos. Oscurecimiento o

bronceado. Disminución del vigor. Necrosis. Vitrificación.

Tema 14. Almacenamiento y distribución del material clonal. Desecación de embriones.

Técnicas de crecimiento mínimo. Almacenamiento del germoplasma. Crioconservación.

Tema 15. Fenotipo del material micropropagado. Órganos malformados. Anormalidades

en ápices y plántulas. Efectos de las condiciones de cultivo. Cambios semi-permanentes.

Programa de clases prácticas

Práctica 1. Cultivo de semillas y embriones.
Practica 2. Efecto del medio sobre la organogénesis. Cultivo de explantes.
Práctica 3. Producción de plantas haploides. Cultivo de anteras.
Práctica 4. Trabajo experimental. Obtención de resultados, discusión y conclusiones.

Bibliografía
-DEBERGH, PC y ZIMMERMAN, RH (Eds.) (1991). Micropropagation. Technology and Application.
Kluwer Academic Publishers. Dordrecht.
-GAMBORG, OL y PHILLIPS, GC (Eds.) (1995). Plant Cell, Tissue and Organ Culture. Fundamental
Methods. Springer Lab Manual, Berlin.
-GEORGE, EF (1993). Plant Propagation by Tissue Culture. Part 1 The Technology. Exegetics Limited.
-GEORGE, EF (1996). Plant Propagation by Tissue Culture. Part 2 In Practice. Exegetics Limited.
- KYTE, L y KLEYN, J (1996). Plants from test tubes: an introduction to micropropagation. Timber
Press, USA.
-HARTMANN HT, KESTER DE, DAVIES FT Jr. y GENEVE RL (2002). Plant Propagation. Principles
and Practicas. 7ª Edición. Prentice Hall. USA.
-MARGARA, J (1988). Multiplicación vegetativa y cultivo in vitro. Mundi Prensa, Madrid.
- PANIAGUA, R (1997). Citología e Histología Vegetal y Animal. Interamericana, McGraw-Hill, Madrid.
- PIERIK, RLM (1990). Cultivo in vitro de las plantas superiores. Mundi Prensa, Madrid.
- ROCA, WM y MROGINSKI, LA (1990). Cultivos de Tejidos en la Agricultura. Fundamentos y
Aplicaciones. CIAT. Cali, Colombia.

Revistas

The Plant Science

Plant Growth Regulation
Plant Cell Report
Plant Cell, Tissue and Organ Culture
Molecular Breeding
Nature Biotechnology
Plant Biotechnology Journal
In Vitro Cellular and Developmental Biology- Plant
J. American Society Horticultural Science
HortScience