Facultad de Ciencias Pecuarias

Carrera de Ingeniería en Industrias

Pecuarias
CÁTEDRA: BIOTECNOLOGÍA I

DOCENTE: Ing. Iván Salgado

TEMA: INFORME #1 ELABORACIÓN DE LA

CERVESA ARTESANAL

REALIZADO POR:

Nelson Urbina

NIVEL: Quinto “B”

Fecha de la práctica: 02/Mayo/2017

Fecha de entrega: 04/ Mayo/2017

 I. TEMA: Extracción de ADN en los vegetales (Cebolla, tomate, espinaca).

II. INTRODUCCIÓN

ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el

material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los
cromosomas y el material del que los genes están formados.
La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar,
tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al
núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el
ADN. Por último, hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para
aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando
se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua.
Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes
celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las
proteínas al ADN.

III. OBJETIVOS

3.1. General
 Realizar la extracción de ADN de tejidos vegetales (Espinaca, cebolla,
tomate).
3.2.Específicos

 Observar la estructura fibrilar del ADN.

 Conocer cuáles son los reactivos que permiten la ruptura celular y así la
extracción del ADN en los vegetales.
 Cual es l finalidad de utilizar el alcohol etílico en el proceso de obtención
del ADN.

IV. REVISIÓN DE LITERATURA

ADN
Es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el material
genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el
material del que los genes están formados.
El ADN Vegetal
Se encuentra en el núcleo celular, específicamente dentro de los cromosomas, pero
también se encuentra en los cloroplastos, ya que este organelo presenta una molécula de
ADN circular y arrolada de tipo procarionte y eso le da cierta autonomía parcial con
respecto al Núcleo, es decir puede realizar sus propias síntesis de Proteínas.
La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar,
tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al
núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el
ADN. Por último, hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para
aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol.
Soluciones tampón.
Denominadas también soluciones buffer, son aquéllas que ante la adición de un ácido o
base son capaces de reaccionar oponiendo la parte de componente básica o ácida para
mantener fijo el pH.
Tampón químico
Un tampón o buffer es una o varias sustancias químicas que afectan a la concentración de
los iones de hidrógeno (o hidronios) en el agua. Siendo que pH no significa otra cosa que
potencial de hidrogeniones (o peso de hidrógeno), un buffer (o "amortiguador") lo que
hace es regular el pH.
Cuando un buffer es añadido al agua, el primer cambio que se produce es que el pH del
agua se vuelve constante. De esta manera, ácidos o bases (álcalis = bases) adicionales no
podrán tener efecto alguno sobre el agua, ya que esta siempre se estabilizará de inmediato.

La solución Tris: o tri (hidroximetil) aminometano, es una solución buffer biológica

común que se utiliza en todo el proceso de extracción de ADN ya que este es sensible al
pH de cualquier tipo de fuente durante dicho proceso. La solución Tris se utiliza durante
la lisis celular, la eliminación y la precipitación de componentes celulares no deseados
para mantener un pH estable. Además, desempeña un papel particularmente importante
en la lisis celular.

Lisis de las células

La lisis, o ruptura de las células, es el primer paso para la extracción del ADN. Esto se
logra mediante el uso de una solución buffer que contenga solución Tris y EDTA (Ácido
Etilendiaminotetraacético). El EDTA se une a cationes divalentes tales como el calcio y
el magnesio. Dado que estos iones ayudan a mantener la integridad de la membrana
celular, la eliminación de estos con EDTA desestabiliza la membrana. La solución Tris
es el principal componente buffer; su función principal es la de mantener el pH del buffer
en un punto estable, por lo general 8,0. Además, la solución Tris interactúa con el LPS
(lipopolisacárido) de la membrana, lo cual sirve para desestabilizar la membrana aún más.

Lisis alcalino

Los lisis alcalinos son una técnica común para purificar plásmidos de bacterias. Este
método involucra tres soluciones. La primera contiene glucosa, una solución tris-HCL,
EDTA y ARNasas. La glucosa crea una alta concentración de soluto fuera de la bacteria,
para que se vuelvan un poco blandas, lo que hará que sea más fácil que se separen; la
función del EDTA y el tris-HCL ya fue descrita, mientras que las ARNasas captarán
cualquier célula de ARN para apartarla del camino. La segunda solución es en realidad la
que separa las celulas. Esta contiene detergente SDS y NaOH, el cual aumenta el pH hasta
12 o más, desnaturalizando las proteínas dentro de la célula y causando que el ADN se
separe en hilos individuales. La tercera solución contiene acetato de potasio para regresar
el pH a un nivel más natural, de modo que los hilos del ADN plásmido puedan volver a
unirse. Mientras tanto, las proteínas desnaturalizadas se unirán y decantarán, mientras que
los iones de dodecil-sulfato se unirán con los iones de potasio para formar un compuesto
insoluble, el cual también decantará de la solución.

La solución Tris Protege al ADN de los cambios en el pH

Cuando las células se rompen, su ADN y contenido se vierten en el buffer. A menudo se
incluyen además, la ARN asa (destruye el ARN), las proteasas (destruye las proteínas), y
el SDS (dodecilsulfato sódico, solubiliza los fragmentos de membrana). En conjunto, este
caldo de contenido celular y fragmentos de ARN y proteínas puede tener un gran impacto
en el pH de la solución. Debido a que el ADN es sensible al pH, es importante que la
solución Tris regule el caldo y mantenga el pH en un valor fijo.

Cloruro de Sodio (Nacl).- En disolución actúa disminuyendo la solubilidad de las

proteínas, lo que hace que precipiten y se separen más fácilmente del ADN.

El detergente. -Tiene como función destruir las membranas celulares, el detergente

disuelve. Al romperse las membranas celulares se permite la salida del ADN al exterior.
La licuadora.- La licuadora ayuda en la rotura de membranas celulares y cubiertas
nucleares, permitiendo la separación del ADN. Rompe las células y expone las paredes
celulares y membranas a la acción del detergente.

Precipitación del ADN

En la etapa final de la extracción de ADN, se extrae el propio ADN de la solución. En

este punto, el ADN es soluble en el buffer. Para extraer el ADN de la solución, este se
hace insoluble mediante la adición de etanol o isopropanol (alcohol isopropílico). Al
hacer esto, el ADN se hace visible en la solución como una sustancia blanca filiforme. A
pesar de que cuando el ADN es insoluble se lo puede aislar de los componentes celulares
restantes, no es "utilizable". Después de aislarlo, se elimina el alcohol, y el ADN debe ser
devuelto a una solución buffer biológica, tal como la solución Tris, para ser utilizado.

Leer más: http://www.monografias.com/trabajos82/solucion-tampon/solucion-

tampon.shtml#ixzz4zYqcdbbr

Leer más: http://www.monografias.com/trabajos82/solucion-tampon/solucion-

tampon.shtml#ixzz4zYpb1DTk

V. MATERIALES Y EQUIPOS

5.1. MATERIALES E INSUMOS

MATERIAL BIOLÓGICO

 Tomate
 Cebolla
 Espinaca
MATERIAL
 Colador
 Vaso precipitado
 Tubo de ensayo
  Varilla fina
REACTIVOS
 Agua (destilada o mineral)
 Sal de mesa
 Bicarbonato sódico
 Detergente líquido o champú
 Alcohol isoamílico a 0°C

EQUIPOS
 Agitador magnético.
 Licuadora.

VI. PROCEDIMIENTO

6.1. TÉCNICA

 Preparar la solución tampón (Nacl) 1.5 gr, (H2O) 120ml, (NaHCO3) 5 gr,
jabón líquido.
 Homogenizar la solución
 Coloca los pedazos pequeños ya sea del (tomate, cebolla, o espinaca en la
licuadora, o en un mortero en caso de no poseer una, con el fin de romper
las membranas celulares de los vegetales.
 Licua a alta velocidad por 30 segundos
 Vierte el concentrado de células a través de un colador en un vaso de
precipitado
 Separamos 10 ml de el vegetal filtrado en un vaso de precipitado, y 20 de
la solución tampón
 Homogenizamos la solución.
 Vierte en un tubo de ensayo 5 ml de la solución y agítelo suavemente.
 Con una pipeta coloque 10 ml de alcohol etílico en el tubo de ensayo que
contiene la solución.
 Observar el proceso de separación de ADN, esencias, y solutos.
 Extraemos con una pipeta pasteur el ADN. La muestra obtenida la
depositamos en un portaobjetos, y la cubrimos con un cubreobjetos.
 Observar en el microscopio.
6.3.OBSERVACIONES TÉCNICAS (Defectos en el producto etc)

Podemos definir como tema de discusión los siguientes aspectos a tener en cuenta
ya que tras la realización de la practica en la extracción del ADN en los tres tipos
de vegetales mediante el cual se pudo apreciar que la muestra de las espinacas
tenían más moléculas de ADN que los otros, esto se pudo producir, debido a que
a unos se les agrego más o menos cantidad de enzimas que a otros, esto se pudo
dar al momento de extracción del vegetal o en el momento de filtrado en el
colador. Estas actúan como un catalizador aumentando la velocidad de reacción
en los tubos de ensayo a los que se le agregó mayor cantidad y por esta razón el
ADN se observara a menor tiempo que en los demás.
VII. RESULTADOS

Los resultados fueron interpretados de acuerdo a las siguientes características

forma, y apariencia del ADN en los diferentes vegetales, este criterio es
establecido de acuerdo a lo observado en la práctica.

• El ADN de la • El ADN de la
• Las moléculas
Tomate :

 Espinaca :

Cebolla:
espinaca es cebolla quedo
de ADN aquel que se
pudieron ser un poco
pudo observar destruido, por
percibidas, con mas
observándose exceso de
claridad ya agitación de la
como pelusas que poseia una
rojas en el mezcla, pero
estructura mas la
alcohol. estable.
• Estructura no identificación
muy estable de este es
clara.

Obtuvimos una mezcla heterogénea de dos fases como lo podemos observar, en la cual la
capa de encima representa el ADN y la inferior la separación de solutos. Esto se debe a
que al no ser soluble el ADN en alcohol, se separan en la interfase las cadenas blancas de
ADN, formadas por miles de moléculas de ADN unidas, a veces formando grumos.
Además, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales permanecen
en la solución acuosa.
 Tras la observación bajo el microscopio las estructuras de ADN de la espinaca y el tomate
se pudo observar con facilidad y claridad mientras que el de la cebolla no debido que su
estructura estaba un poco destruida.

VIII. CONCLUSIONES

 Se realizo los diferentes procedimientos para la extracción del ADN vegetal en

los se pudo diferenciar una estructura mas formada en el ADN de la espinaca y
tomate, mientras que en el de la cebolla, quedo un poco destruido, por exceso de
agitación de la mezcla, pero la identificación de este es clara.
 El proceso de obtención del ADN se da mediante la utilización de reactivos como
el detergente y el Nacl. Primero rompen las (membranas celulares, luego las
membranas plasmáticas, y por último la pared nuclear) como resultado de estos
procesos permite la salida del ADN al exterior.
 Al agregar alcohol a la mezcla se logró que las cadenas de ADN subieran a la
superficie, ya que este no es soluble en alcohol. Las moléculas de ADN pudieron
ser percibidas, observándose como pelusas en el alcohol. En general produce una
separación de la solución tampón de lisis y el ADN.

RECOMENDACIONES

 La adición de alcohol es la parte más delicada, ha de hacerse lentamente y

por las paredes del recipiente.
 Contar con todos los equipos y utensilios para la realización de dicha
práctica.

IX. BIBLIOGRAFÍA

 Paul M. Dewick (2009). Medicinal natural products: a biosynthetic approach.

John Wiley and Sons.
 http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Martínez%20Ma
rtín2015_4_19P21_19.pdf
 http://www.ehowenespanol.com/funcion-solucion-buffer-tris-extraccion-adn-
sobre_43396/
 https://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20070128051602AAY
Wohhttp://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_desoxirribonucleicohttps://es.ans
wers.yahoo.com/question/index?qid=20080407084655AAmSjge
 http://www.academia.edu/9292687/1practica_extraccion_del_ADN_de_la_cebol
la_y_chicharo
ANEXOS