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TRABAJO DE GRADO
GAMETOGENESIS Y DESARROLLO
EMBRIONARIO DE CHICOREUS BREVIFRONS
(CAENOGASTROPODA, MURICIDAE).
Por
Mayo 2017
ii
Mayo 2017.
iii
iv
v
RESUMEN
Chicoreus brevifrons es un gasterópodo que forma parte de la pesca incidental resultante de la pesca
de arrastre artesanal de la pepitona Arca zebra en el oriente del país, así como también es un recurso
pescado selectivamente en zonas aledañas. Existe poca información sobre su reproducción y
composición nutricional, pero debido a la gran abundancia de individuos en estas zonas, y del
consumo local, es una especie de interés biológico y económico. El objetivo principal del presente
trabajo fue estudiar el desarrollo gametogénico y desarrollo embrionario de Chicoreus brevifrons
(Caenogastropoda, Muricidae) en la localidad pesquera de Chacopata, Edo. Sucre, Venezuela.
Mediante análisis histológicos de sus gónadas se realizó la determinación de la talla mínima de
madurez sexual y el ciclo gametogénico en grupos provenientes de la pesca de arrastre y de pesca
selectiva. Para la descripción del desarrollo embrionario, se estudió el desarrollo y sobrevivencia de
los embriones a diferentes temperaturas (24ºC o control, 26°C y 30°C). Como información
adicional se realizó un análisis proximal de su contenido nutricional donde se determinó su
composición proteica, lipídica, de humedad y cantidad de minerales del tejido del pie (crudo y
cocido). La talla mínima de madurez fue de 79,1 y 57,7 mm para hembras y machos
respectivamente en la pesca de arrastre y L50 de 82,34mm para las hembras, mientras que en el
grupo proveniente de la pesca selectiva, la talla mínima fue de 73,44 y 60,43 mm y el L50 de 74,45
y 67,24 mm para hembras y machos respectivamente. Los embriones pasan por varias fases de
velígeras intracapsulares antes de eclosionar como juveniles reptantes con un tiempo de desarrollo
de 7 a 11 semanas aproximadamente. A mayor temperatura, la sobrevivencia de los embriones se
vio afectada (30°C 10%). El tejido del pie de C. brevifrons contiene un 85,21 + 5 y 76,51 + 8 % de
proteínas, 4,26 + 1 y 4,94 % de grasas, 74,23 + 2 y 73,57 + 2 % humedad, 86,82 y 78,86 %
digestibilidad en tejido crudo y cocido respectivamente; debido a su alto contenido nutricional es un
alimento apto para la dieta diaria. En conclusión, C. brevifrons posee valor alimenticio, puede
desarrollarse con relativa facilidad en condiciones de laboratorio, cuidando el hecho de que es
sensible al aumento de temperatura del agua. En términos regulatorios pesqueros, se recomienda
una talla mínima de captura de 85 mm.
DEDICATORIA
A mí
(Como recordatorio de la fuerza y el poder que habita
en mí de la mano de mi fé y mi Dios)
vii
AGRADECIMIENTOS
Quiero agradecer a Dios, por darme salud, fuerza, la valentía y el coraje para luchar y
alcanzar mis metas y ser testimonio de su palabra durante el proceso
Agradezco a mis padres, mi hermana, mi familia y mi novio, por el apoyo brindado durante
estos años, por su paciencia, por el entendimiento y sobre todo por el apoyo que me dieron.
Mis más sinceras gracias a mi tutora y mi co-tutora por ser ejemplo tanto en el ámbito
académico como en el personal, por ayudarme a lograr esta meta y por su paciencia y
empuje cuando más me hizo falta.
Además quiero agradecer al equipo que conforma el Lab de Biología Marina y el Lab de
Sensores Remotos, por cualquier ayuda brindada durante estos largos años, por la amistad,
por el cariño. Muchas Gracias!
Muchas gracias a mi Alma Mater Universidad Simón Bolívar, por recibirme de nuevo con
los brazos abiertos y permitirme crecer en una etapa diferente de mi vida.
Gracias a los pescadores de la pepitona Arca zebra del pueblo de Guayacán, por los
individuos capturados y cedidos a este trabajo de grado.
También quiero agradecer a Julia Alvarez, Laura Milano, Jorge Díaz, Carlos Mora, Gloria
Mariño, Solei Henriquez, Emanuel Valero y Daniela Betancourt, quienes en algún momento
fueron voluntarios en mis salidas de campo, permitiéndome lograr este objetivo.
Y finalmente pero no menos importante, gracias a mis amigos por sus palabras de aliento,
por sus consejos y por su amistad, los cuales me dieron apoyo y ánimo para salir adelante y
alcanzar esta meta.
INDICE GENERAL
RESUMEN..............................................................................................................................v
DEDICATORIA.....................................................................................................................vi
AGRADECIMIENTOS........................................................................................................vii
INDICE GENERAL............................................................................................................viii
INDICE DE TABLAS.............................................................................................................x
INDICE DE FIGURAS..........................................................................................................xi
INTRODUCCION GENERAL...............................................................................................1
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA................................................................................7
OBJETIVOS...........................................................................................................................9
Objetivo General.....................................................................................................................9
Objetivos específicos..............................................................................................................9
MATERIALES Y MÉTODOS..............................................................................................10
Área De Estudio....................................................................................................................10
En campo:..............................................................................................................................11
CAPITULO I: GAMETOGENESIS Y TALLA MINIMA DE MADUREZ SEXUAL........12
1.1 Introducción....................................................................................................................12
1.2 Metodología....................................................................................................................13
1.2.1 Colecta de organismos.................................................................................................13
1.2.2 Procesamiento de Datos...............................................................................................14
1.3.2.1 En el Laboratorio.......................................................................................................14
1.2.3 Análisis de Datos..........................................................................................................15
1.3 Resultados.......................................................................................................................16
1.3.1 Descripción del desarrollo gametogénico de C. brevifrons..........................................16
1.3.1.1.Oogénesis..................................................................................................................16
1.3.1.2 Espermatogénesis......................................................................................................20
1.3.2 Estadíos de maduración gonadal para machos y hembras de C. brevifrons.................23
1.3.3 Talla mínima de madurez sexual..................................................................................26
1.4 Discusión.........................................................................................................................28
1.4.1. Descripción del desarrollo gametogénico de C. brevifrons.........................................28
1.4.2. Estadíos de maduración gonadal en C. brevifrons......................................................30
1.4.3. Talla mínima de madurez sexual.................................................................................30
1.5 Conclusiones...................................................................................................................32
CAPITULO II: DESARROLLO EMBRIONARIO..............................................................33
2.1 Introducción....................................................................................................................33
2.2 Metodología...................................................................................................................35
2.2.1 Colecta de Puestas........................................................................................................35
2.2.2 Procesamiento de las muestras.....................................................................................35
2.2.3 Análisis de Datos..........................................................................................................36
2.3 Resultados.......................................................................................................................36
2.4 Discusión.........................................................................................................................47
2.5 Conclusiones..................................................................................................................53
ix
CONCLUSIONES GENERALES........................................................................................54
INFORMACIÓN ADICIONAL:..........................................................................................55
ANÁLISIS PROXIMAL DEL CONTENIDO NUTRICIONAL.........................................55
3.1 Introducción....................................................................................................................55
3.2 Metodología....................................................................................................................56
3.2.1 Procesamiento de datos................................................................................................56
3.2.1.1 En Campo..................................................................................................................56
3.2.1.2 En Laboratorio..........................................................................................................57
3.3 Resultados.......................................................................................................................61
3.3.1 Determinación de la Humedad.....................................................................................61
3.3.2 Actividad del Agua.......................................................................................................61
3.3.3 Análisis proximal del tejido del pie de C. brevifrons...................................................62
3.3.4 Minerales......................................................................................................................62
3.3.5 Digestibilidad “in vitro”...............................................................................................63
3.4 Discusión.........................................................................................................................64
3.5 Conclusiones..................................................................................................................69
BIBLIOGRAFÍA...................................................................................................................70
ANEXOS...............................................................................................................................84
Anexo 1.................................................................................................................................84
x
INDICE DE TABLAS
INDICE DE FIGURAS
laboratorio....................................................................................….....................................42
Figura. 2.6. Cápsula de una puesta de C. brevifrons.............................................................43
Figura 2.7 Comparación de embrión vivo con embriones con mal desarrollo o
atrofiados..............................................................................................................................45
“Porque ninguna cosa es imposible para
Dios”
Lc 1.37
1
INTRODUCCION GENERAL
Los moluscos gasterópodos son un grupo muy diverso, con un estimado de 13.000
géneros y 150.000 especies en la clase (Bieler, 1992; Arrighetti, 2009), de las cuales 35.800
especies son marinas (Gofas, 2009). Dentro del phylum Mollusca, los gasterópodos son el
único grupo que se ha podido adaptar a los tres ambientes: marino, dulceacuícola y terrestre
(García-Cubas y Reguero, 2004). La característica más notable en los gasterópodos es el
proceso de torsión, en donde, al desarrollarse el embrión, la masa visceral rota 180º, de
modo que la cavidad del manto y el ano quedan encima de la cabeza (Campbell y Reece,
2007). El plan general de los gasterópodos está representado por ojos, tentáculos, un
sistema nervioso y un sistema anatómico con un pie muscular bastante desarrollado (Sutty,
1990). La morfología de la concha es un cono enrollado de manera helicoidal, con
crecimiento en espiral y no simétrico (Abbott, 1974). El plan corporal de la concha de la
mayoría de los gasterópodos comienza en el ápice, también denominado protoconcha, hasta
el canal sifonal, separándose en dos grandes partes: la espira y la vuelta corporal o última
vuelta (García-Cubas y Reguero, 2004).
Phylum: MOLLUSCA
Clase: Gastropoda Cuvier, 1798
Subclase: Caenogastropoda Cox, 1960
Orden: Neogastropoda Wenz, 1938
Superfamilia: Muricoidea Refinesque, 1815
Familia: Muricidae Refinesque, 1815
Género: Chicoreus Montfort, 1810
Especie: Chicoreus brevifrons Lamarck, 1822
2
Figura 1. Distribución mundial de la familia Muricidae. Datos obtenidos mediante OBIS (2016). Mapa
construido con QGIS.
tamaño que varía entre 74,2 a 145,0 mm aproximadamente (Flores, 1978). A nivel mundial
se encuentra ampliamente distribuido en el Atlántico desde el sur de Florida, hasta la costa
norte de Brasil (Ablanque y Barrero 1995, Gómez 1999). En Venezuela, está presente en
abundancia en toda la zona centro-oriental (Prieto et al., 2001 y 2005) y en la zona
occidental del país (OBIS, 2016 Fig. 3).
Figura 2. Chicoreus brevifrons (Lamarck, 1822)(Foto tomada por: María Gabriela Nieves).
5
Figura. 3. Distribución de C. brevifrons en Venezuela. Datos tomados de OBIS (2016), mapa construído con
QGIS.
encuentra bajo fuerte presión pesquera, debido a que forma parte de la fauna acompañante
de la pepitona (Arca zebra), la cual se pesca artesanalmente por arrastre en la zona oriental
objeto de pesca selectiva en pequeñas localidades aledañas a los bancos del bivalvo Arca
zebra, y a pesar de la práctica regular de este tipo de explotación, los datos que se conocen
hay hasta la fecha estudios que describan su ciclo gametogénico, por lo cual se pretende
estudiar estos aspectos en la especie, para sugerir una talla mínima de captura en ambas
Dados los escenarios que se plantean en el año 2021 con respecto al cambio
8
en la respuesta ante el estrés térmico de esta especie, sobre todo en las primeras etapas de
su ciclo de vida (donde la especie es más susceptible), y el rol biológico que desempeña en
desarrollo embrionario, por lo cual el presente trabajo explora los estadíos embrionarios a
OBJETIVOS
Objetivo General
Objetivos específicos
MATERIALES Y MÉTODOS
Área De Estudio
El área de muestreo está conformada por dos zonas (Fig. 4). La primera corresponde
al banco de pepitona (Arca zebra) sobre el cual se realiza tradicionalmente la pesca
artesanal de arrastre. Esta primera zona se localiza al norte del pueblo de Chacopata, en la
Península de Araya, Estado Sucre, entre el sur de la Isla de Margarita y el este de la Isla de
Coche (10.729044, -63.850110, como coordenadas referenciales de un área de
aproximadamente 1000 km2 de extensión.). La segunda zona corresponde a un pequeño
banco ubicado al norte de Guayacán, cerca de Isla Caribe (10.667645, -63.845453,
coordenada referencial), donde organismos de C. brevifrons son extraídos selectivamente
por algunos pescadores de la zona, con un equipo de buceo ligero, y cuya extensión es de
200 km2 aproximadamente. Ambas zonas presentan profundidades variables entre 4 y 8 m,
y dado el fenómeno de surgencia, el agua presenta cambios de temperatura que oscilan de
23-26 ºC entre diciembre y marzo, y de 27-30ºC en abril (Miloslavich y Klein 2008).
En campo:
El segundo grupo, se obtuvo mediante buceo con snorkel, en conjunto con uno de
los pescadores de la zona, que extrae individuos de C. brevifrons por pesca selectiva, en la
faena de pesca del 24 de Octubre del 2013.
1.1 Introducción
El siguiente capitulo tiene como finalidad la determinación de los estadíos del ciclo
gametogénico en C. brevifrons, y la determinación de la talla mínima de madurez sexual en
la especie, proveniente de dos zonas sometidas a diferentes tipos de pesca.
1.2 Metodología
1.3.2.1 En el Laboratorio
Deshidratación
Las muestras pasaron por una concentración creciente de alcoholes de la
siguiente manera:
Aclaramiento
Se sumergió en Xilol durante 30 min.
Infiltración
Los organismos colectados en la zona Nº1 se infiltraron utilizando el protocolo del kit de
resina epóxica SPI-Chem™Araldite® 6005 DDSA (Ver anexo 1). Mientras que los de la
zona Nº 2 se infiltraron siguiendo este mismo protocolo, pero usando una resina comercial
denominada Americana Gemelos®.
Tinción
Se empleó el método de tinción Hematoxilina – Eosina (Howard y Smith, 1983)
posterior a esto, las muestras fueron observadas y fotografiadas en Microscopio óptico Zeis
10-63X.
cual los organismos son considerados maduros (debido a que el 50% de individuos se
encuentran maduros en esta talla; Vazzoler, 1996).
1.3 Resultados
1.3.1.1.Oogénesis
Los folículos presentaron dos tipos de forma: en algunos casos se observaron con
forma ovoide alargada y en otras la forma fue más redondeada. El diámetro medio del
folículo fue de 222,44 + 38 µm. En su interior se observan de 3 a 4 oocitos separados por
una fina membrana. En el borde del folículo (Fig. 1.1A) se observan las células de la pared
del folículo, con formas alargadas y cuboidales, un núcleo definido de cromatina dispersa y
coloreado con un azul-morado intenso (Fig. 1.1B).
Las oogonias
Son células con forma ovoide donde el núcleo ocupa casi toda la célula y la
17
Figura 1.1. Corte histológico de la gónada femenina de C. brevifrons. A: Detalle del folículo de hembra
madura. F. Folículo. Cp. Células de la pared del folículo. Nótese la forma y tamaño de los folículos que se
encuentran delimitados por las células de la pared. B: Detalle de las Células de la Pared. N. Núcleo. cit.
Citoplasma. C: Oogonias de C. brevifrons. OvII. Oocito vitelogénico II. Oo. Oogonia. Cp. Células de la
pared.
Vitelogénesis
Cuando el oocito entra en proceso de vitelogénesis, comienza a aumentar su
tamaño, y el citoplasma de la célula, presenta gránulos de vitelo de diferente tamaño.
Existen diferentes tipos de oocitos vitelogénicos, de acuerdo al grado de vitelogénesis.
19
Oocito vitelogénico I
Este tipo de oocito presenta un tamaño promedio de 71,48 + 11 µm, contiene
gránulos de vitelo de pequeño tamaño (X= 6 + 2 µm) los cuales están en baja proporción
en el citoplasma. El núcleo y nucléolo son perfectamente visibles (Fig. 1.2C). A partir de
esta etapa el oocito se considera maduro.
Oocito vitelogénico II
Esta célula presenta una gran cantidad de gránulos de vitelo dispersos en el
citoplasma. Se observan gránulos de vitelo de pequeño tamaño (como los observados en la
etapa anterior) y adicional, gránulos de vitelo de gran tamaño (X= 20 + 3 µm). El tamaño
promedio del oocito observado en esta etapa fue de 102,43 + 20 µm. (Fig. 1.2D).
20
1.3.1.2 Espermatogénesis
Las espermatogonias
Están dispuestas desde la periferia del túbulo o folículo en contacto con la
membrana basal, hasta el centro del lumen. Contienen la cromatina dispersa y están
constituidas por finos gránulos que se tiñen intensamente. El núcleo es esférico y ocupa la
mayor parte de la célula por lo cual se observa poco citoplasma. Presentan un tamaño
promedio de 4,22 + 1 µm. (Fig 1.4).
Los espermatocitos
Presentan un núcleo esférico y mayor citoplasma que las espermatogonias. La
cromatina se encuentra condensada en diferentes grados, por lo cual se observa en algunos
casos cromatina condensada en parches. Se encuentran presentes entre todos los estadíos
22
celulares, desde la periferia del túbulo hasta el lumen del mismo (Fig. 1.4).
Las espermátidas
Presentan un núcleo de menor tamaño en comparación a los estadios anteriores. Se
presentan en dos tipos, de acuerdo a la condensación de la cromatina y la forma del núcleo:
Tipo I, también denominadas espermátidas en anillo (por la forma de media luna o anillo
que presenta el núcleo, donde la cromatina de la periferia se encuentra más condensada que
la central) y las Tipo II, en las cuales el núcleo se observa más alargado y la condensación
de la cromatina es más homogénea. Es común encontrar las espermátidas dispuestas en la
región del lumen; en raros caso se pueden observan entre las espermatogonias (Fig. 1.4)
Los Espermatozoides
Los espermatozoides presentan un núcleo alargado con un único y largo flagelo. El
citoplasma es reducido. La forma observada es filiforme. Se observan agrupados con las
cabezas orientadas hacia la pared del túbulo y los flagelos hacia el centro del lumen. (Fig.
1.4).
medio del folículo hacia el haz de luz se observan los espermatozoides (Fig.
1.6).
Figura 1.5. Etapas del ciclo de madurez gonadal de hembras de C. brevifrons. A: Hembra
inmadura de C. brevifrons. Cp. Células de la pared. Eh. Espacio hialino. B: Hembra pre-
madura. C: Hembra en estado maduro. Nótese que los folículos se encuentran llenos de oocitos
vitelogénicos de tipo I y II.
25
Tabla I.III. Talla mínima de madurez sexual de individuos de C. brevifrons capturados con
dos tipos de arte de pesca distintos. Pesca de Arrastre de pepitona y Pesca de Buceo
Selectiva.
Talla mínima Min – Max
Arte de Pesca Sexo N
(mm) (mm)
Figura 1.7. Porcentaje de Hembras maduras de C. brevifrons extraídas por dos diferentes tipos
de arte de pesca (selectiva y de arrastre artesanal) en el norte del Edo. Sucre- Venezuela. La
línea punteada indica el punto de intersección y la longitud a la cual el 50% son hembras
maduras (SL50).
Figura 1.8. Porcentaje de Machos maduros de C. brevifrons extraídos por dos diferentes tipos de arte
de pesca (selectiva y de arrastre artesanal) en el norte del Edo. Sucre- Venezuela. La línea punteada
indica la intersección y la longitud a la cual el 50% son machos maduros (SL 50). Nótese que los
machos extraídos por pesca de arrastre son todos individuos maduros (puntos de color azul).
28
1.4 Discusión
los cuales servirán de alimento a los embriones una vez realizado el proceso de fecundación
de los óvulos (Gilbert y Raunio, 1997). Este proceso se observa a través de los estadíos
celulares: oogonias, oocito previtelogénico, oocito vitelogénico I (también denominado
oocito en vitelogénesis temprana), y oocito vitelogénico II (oocito en vitelogénesis tardía),
los cuales se encuentra presentes en otros murícidos como Trophon geversianus (De la
Barra et al., 2014).
Los organismos evaluados en este estudio fueron extraídos de dos zonas aledañas
bajo diferentes artes de pesca. Sin embargo, dada la cercanía de las zonas, podría tratarse de
la misma población explotada de diferentes maneras.
31
La talla del inicio de la maduración sexual es variable entre especies e incluso puede
variar entre las poblaciones de la misma especie, dado que está sujeta a condiciones
reproductivas del organismo en el momento de la evaluación, a la estructura de tallas y
factores ambientales (Rabi et al., 1996; Ortiz-Galarza et al., 2011, Elhasni et al., 2013).
De todos los individuos colectados en ambos tipos de pesca, se observa que los
machos presentan menor talla de madurez que las hembras. Estos resultados concuerdan
con estudios realizados en otros gasterópodos, en los cuales los machos presentaron menor
talla de madurez que las hembras (Zetina et al., 1998; Peralta, 2012; Elhasni et al., 2010,
2013). Algunos autores como Gímenez & Penchazadeh (2003) y Averbuj (2010) atribuyen
esta desigualdad en la madurez a la inversión reproductiva que deben hacer las hembras en
estructuras como la cápsula de la glándula y los caracteres secundarios que se derivan de
ella.
32
1.5 Conclusiones
Se recomienda que la talla mínima de captura para esta especie en la zona oriental
de Venezuela sea mayor a 85mm.
33
2.1 Introducción
organismo. Los primeros estadíos, son muy susceptibles a los cambios ambientales, por lo
que la sobrevivencia de los individuos en estas primeras etapas, se encuentra en alto riesgo
(Hoegh-Guldberg y Pearse, 1995; Vidal et al., 2002). De las variables ambientales con
mayor influencia, se considera que la temperatura es la que ejerce un mayor efecto sobre el
desarrollo (Spight (1975). En peces, la temperatura controla el tiempo de incubación de los
huevos y determina la sobrevivencia de embriones y larvas. Cuando los organismos están
sometidos a temperaturas que no son las óptimas para la especie, el desarrollo embrionario
puede acelerarse o retardarse, produciendo embriones y larvas deformes, bajos porcentajes
de eclosión y elevada mortalidad (Abdo-de la Parra et al 2012; Azócar et al., 2014).
2.2 Metodología
2.3 Resultados
Tabla II.I. Descripción de los estadíos embrionarios de C. brevifrons bajo tres temperaturas (24ºC, 26ºC y 30ºC). X: Promedio + Desviación
estándar, (Mínimo-Máximo), N: Número de individuos, en el caso de los embriones por cápsula N es el número de Cápsulas, NP: No está
presente.
CC T1 T2 CC T1 T2
X: X: X: X: X: X:
Huevo/ Presentan forma redondeada y de color blanco-amarillento. No se 261 + 22 252 + 10 250 + 3 624 + 280 643 + :217 503 + 345
Gástrula observa núcleo. (219 -375) (219-313) (219- 250) (242-1269) (101-946) (45- 1032)
N: 302 N: 392 N: 300 N: 10 N: 13 N: 10
X:
El embrión presenta una concha calcificada de un color pardo 5
2375 + 153
Preeclosión amarillo, el velo se encuentra reabsorbido y se comienza a notar NP NP (5) NP NP
(2188-2500)
los tentáculos y el sifón N: 1
N:4
X X:
Individuo eclosionado. El organismo es reptante y su concha 3063 X: X:
2545 + 385 2271 + 787 1
Juvenil presenta un color marrón o naranja, se diferencia la protoconcha, (3063) 6+7 3+1
(1750-3438) (1375-3375) (1)
el pie y opérculo de color claro. N: 1 (1-19) (2-4)
N: 36 N:6
39
Figura 2.5. Estadíos embrionarios de C. brevifrons en el tiempo (semanas) en los diferentes tratamientos de temperatura: 24ºC o Control, 26ºC o T1 y 30ºC o T2. Datos
representados en Rojo corresponden al Control, Azul a T1 y Verde a T2. Los porcentajes expresados se refieren al porcentaje del estadío con respecto al número inicial
de huevos de cada tratamiento. La línea punteada corresponde a datos no observados pero esperados.
43
En las 8 semanas que duró el seguimiento de las ovicápsulas, sólo las dos puestas
del tratamiento control llegaron a eclosionar a partir de la semana 7. Sin embargo, se
observó la eclosión de otras puestas en las siguientes semanas. De las ovicápsulas del
tratamiento de temperatura a 26ºC (T1), sólo eclosionó un acuario a la semana 11, y a 30ºC
(T2) lograron eclosionar dos acuarios en la semana 10. En las últimas semanas del
experimento la mayoría de las ovicápsulas presentaron un color rosado y todos los
embriones dentro de estas se encontraban muertos y en algunos casos deshechos. De los
tratamientos de temperatura alta (26ºC y 30ºC) muy pocos embriones lograron eclosionar
(Tabla II. II).
A lo largo de las semanas que duró el experimento, se observan todas las etapas de
desarrollo embrionario en el tratamiento control (24ºC), las cuales transcurrieron en un
tiempo de 7 semanas. E el tratamiento T1 (26ºC), si bien se observó un individuo juvenil
eclosionado en la semana 11, en la mayoría de las semanas se observa el estadío de velígera
temprana, lo cual ocurre también en el tratamiento T2 (30ºC)(Fig. 2.5).
45
Figura 2.7 Comparación de embrión vivo con embriones con mal desarrollo o atrofiados. A.
Embrión normal en estadío velígera temprana. B. Embrión con mal formación. C. Embrión de poco
tamaño y mucho vitelo, no consumió la cantidad suficiente de huevos nutritivos para su buen
desarrollo.
Figura 2.9. Curvas de probabilidad de sobrevivencia de los embriones en el tiempo (medido en semanas)
en los diferentes tratamientos de temperatura (CC: 24ºC; T1: 26ºC y T2: 30ºC) a los cuales fueron
sometidas las ovicápsulas de C. brevifrons en condiciones de laboratorio.
2.4 Discusión
El desarrollo embrionario de C. brevifrons pasa por diversas etapas las cuales se van
diferenciando por una serie de cambios morfológicos y de talla, que permiten categorizarlo
en siete (7) estadíos embrionarios: Huevo/Gástrula, Trocófora, Velígera Temprana
(Prevelígera), Velígera Tardía, Pedivelígera, Pre-eclosión y Juvenil. En la última etapa el
individuo es un juvenil reptante lo cual concuerda con un tipo de desarrollo directo.
planteadas, entre las cuales están: i) Esperma no viable fertiliza estos huevos, por lo cual el
proceso de desarrollo no es viable (Hyman,1935). ii) La determinación de esta condición de
huevos nutritivos viene dada por factores genéticos intrínsecos del huevo (Staiger, 1951).
iv) Son huevos no fertilizados (West, 1979). v) La determinación de huevos nutritivos
ocurre en la cápsula (Hadfield,1989).
Tabla II.III Parámetros reproductivos de algunas especies de Gasterópodos. X: Promedio + desviación estándar; (Min-Max); ND:
Dato no disponible en el estudio; *: Medida original reportada en semanas.
Temperatura Tiempo de Nº de Diámetro
Tamaño de la cápsula Tipo de
Especie Localización de Desarrollo Desarrollo huevos por del huevo Referencia
(mm) Desarrollo
(ºC) (Días) cápsula (µm)
Largo Ancho
Buccinum Southampton Smith y Thatje
undatum Water UK 6 135-150* 5-10.5 ND (475-2639) 200-260 Directo 2013
Bahia de San X: 18.63 + X: 16.6 +
Zidona Antonio. 2.12 (14.52- 1.76 (13.32-
dufresnei Argentina ND 35 23.72) 21.54) X: 260 Directo Roche, 2013
Laguna X:4.91 + X: 358.57 +
Hexaplex Bizerta, 0.77 (3.7- X: 4.73 + 102.45 Lahbib et al.,
trunculus Tunisia 18-23 49* 6.7) 0.64 (3.5-6.7) (225-544) ND ND 2010
Laguna de la
Restinga, Isla
Chicoreus de Margarita, Maldonado et
brevifrons Venezuela 27 45 ND ND ND ND Directo al., 2016
Norte de X: 260,55 +
Chacopata, X: 624 + 22 µm
Chicoreus Edo Sucre. X: 7.13 + 280 (242- (218,8-375
brevifrons Venezuela 24 49 X: 8.34 + 1 0.62 1269) N=10 N =302) Directo Este estudio
X: 252,15 +
Norte de 10 µm
Chacopata, X: 643 + (218,75-
Chicoreus Edo Sucre. X: 8.63 + X: 7.31 + 217 (101- 312,5; N
brevifrons Venezuela 26 77 1.22 0.72 946) N=13 =392) Directo Este estudio
X: 249,79 +
Norte de 3 µm
Chacopata, X: 503 + (218,75-
Chicoreus Edo Sucre. X: 8.42 + X: 7.42 + 345 (45- 312,5; N
brevifrons Venezuela 30 70 0.85 0.88 1032) N=10 =300) Directo Este estudio
53
2.5 Conclusiones
CONCLUSIONES GENERALES
La talla mínima de madurez determinada, permite sugerir una talla de captura por
encima de los 85mm, de manera de asegurar la madurez sexual de los individuos
capturados y permitir la recuperación de la población .
INFORMACIÓN ADICIONAL:
3.1 Introducción
Restos fósiles de moluscos han sido encontrados y vinculados al ser humano como
recurso alimenticio, instrumento de trabajo y como material de ornamentación, aunque su
análisis e interpretación social y cultural, a través de la historia, no ha sido descrito con
detalle (Jover y Lujan, 2010). Estas evidencias nos demuestran que desde tiempos
anteriores, los moluscos han formado parte de la dieta alimenticia del ser humano
(Mohammad y Mohamed, 2016).
3.2 Metodología
3.2.1.1 En Campo
3.2.1.2 En Laboratorio
Determinación de Humedad
Se determinó el contenido de humedad según el procedimiento descrito por la
AOAC (No 950.46. 2005). Se pesaron entre 2 - 5 g de muestra liofilizada, deshidratada
previamente en estufa de presión atmosférica, a 100 ° C durante 4 horas y luego a
intervalos de 1 hora hasta obtener peso constante. Los resultados son expresados en g/100g.
Se realizó este procedimiento por triplicado. Se calculó el porcentaje de humedad mediante
la siguiente fórmula:
Determinación de Proteínas
Se determinó por el método de micro-Kjeldhal, descrito por la AOAC (No 940.25.
2005), aplicando el factor de conversión 6,25. Se pesó entre 20 y 40 mg de muestra en
papel encerado, a la cual se le añadieron 0,5 g de catalizador (sulfato de potasio), 3 piedras
de carborundum y 1 ml de ácido sulfúrico concentrado. Luego, se calentó en un
microdigestor hasta la completa carbonización de la muestra. Después en la destilación,
fueron agregados en el erlenmeyer recibidor del destilado, 10 ml de ácido bórico al 2% y
gotas del indicador de proteínas. El producto de la digestión que se encuentra en el balón
digestor se trasvasó al embudo de alimentación donde se le añadieron 10 ml de NaOH al
40%, el equipo se encendió y se recogió 50 ml del destilado (amoníaco) aproximadamente
en 10 min. Seguidamente, se procedió con la titulación de todo el nitrógeno atrapado en la
solución de ácido bórico con ácido clorhídrico 0,01 N (estandarizado) hasta obtener una
coloración gris pálida. Los resultados se expresan en g/100g de muestra. Para calcular el
porcentaje de nitrógeno, se empleó la siguiente ecuación y posterior conversión del
nitrógeno a proteína mediante el factor seleccionado.
Donde:
VHCLm: Es el Volumen de la muestra desplazado hasta donde ocurre el cambio de color en
la titulación.
VHCLb: Es el Volumen del blanco desplazado donde ocurre el cambio de color en la
titulación.
N HCL: Normalidad del HCL utilizado en la titulación.
59
Determinación de Grasas
Se estimó utilizando el método de extracción clorofórmica (extracción líquido-
líquido), donde se pesaron 2gr del tejido del músculo del pie, se colocó en un tubo de
ensayo (con tapa) de capacidad 60mL, en el cual fueron agregados 20 mL de cloroformo,
10 mL de etanol y 8 mL de agua. Se tapó el tubo y se agitó mecánicamente por 10 min.
Luego de esto se añadieron nuevamente 10 mL de cloroformo y 10 mL de agua, se agitó
fuertemente y se procedió a dejar en reposo por 30 min (donde se observó la completa
separación de las capas clorofórmica, metanólica y acuosa). La solución se filtró por papel
Whatman Nº1 y el filtrado fue recogido en un cilindro graduado con escala menor a 10mL.
Luego de recoger todo el filtrado, se procedió a medir la capa clorofórmica. Con una pipeta
Pasteur al vacío se extrajo la capa superior (capa metanólica) y se agregaron 0,5 g. de
Sulfato de sodio anhidro. La mezcla anterior fue filtrada por un papel Whatman Nº1, de
este filtrado se extrajeron 5 mL que fueron colocados en un beaker de capacidad 50 mL
(pesado y tarado previamente). Estos beakers fueron colocados en estufa convencional a
100 ºC, por un periodo de 10min aprox. Se enfriaron y se pesaron hasta llegar a peso
constante. El porcentaje de grasa fue calculado en base al volumen total de capa
clorofórmica, al volumen de cloroformo colocado en el beaker y a los gramos de grasa
usando la siguiente fórmula.
Determinación de Cenizas
Se realizó mediante incineración en mufla a 500 – 550°C pesando el residuo según
el procedimiento descrito por la AOAC (N O 938.08.2005). Para ello se pesó alrededor de 1
g de muestra en la cual fue destruida la materia orgánica contenida en éstas por
carbonización gradual, seguido de la incineración a 550 °C en la mufla. De esta manera se
60
g Cenizas/100 g = Peso (crisol + cenizas) – peso de crisol vacío (g) x 100 (3.4)
Peso demuestra (g)
Determinación de Minerales
La detección de calcio, potasio, magnesio, zinc, cobre, manganeso y hierro se
realizó por emisión atómica ICP (Espectrofotómetro acoplado a Plasma Inducido), según el
método descrito por la AOAC (N O 999.11. 2005). Para las distintas determinaciones se
tomó la muestra proveniente de la determinación de cenizas. Se le añadieron 5 ml de HCl:
(1:1) y se calentó hasta sequedad (Aproximadamente 2 horas). Nuevamente fueron
añadidos 5 ml de HCl: (1:1) y se calentó suavemente durante 30 min. La solución restante
fue filtrada a través de papel Whatman N° 41, en un balón aforado de 100 ml. Por otra
parte, se prepararon soluciones estándar para cada mineral. Las concentraciones (mg/L) de
todas las soluciones de cenizas y de los patrones fueron leídas en el equipo, variando la
longitud de onda de acuerdo a cada uno de los minerales determinados. Los resultados son
expresados en mg/100g de muestra.
Digestibilidad in vitro
Se determinó siguiendo el método de Hsu et al., (1977). Para ello se prepararon
soluciones acuosas de 10 mL de concentrado de proteína del tejido muscular del pie de C.
brevifrons con concentración de 6,21 mg de proteína/mL y se ajustó el pH a 8 con HCl 0,1
N con agitación en baño de agua a 37°C. Se preparó 1 mL de una solución multienzimática
que contenía una mezcla de 1.6 mg/mL tripsina (tipo IX Sigma T-8642, USA), 3.1 mg/mL
-quimiotripsima (tipo II Sigma C-7762, USA) y 1.3 mg/mL de peptidasa (grado III Sigma
P-8642, USA) y se ajustó a pH 8. Esta solución se mantuvo en un baño de hielo. Una vez
efectuado lo anterior, se añadieron 10 mL de la suspensión proteica y se mantuvo en
agitación a 37°C con el mL de la solución multienzimática midiéndose la caída del pH con
61
Donde:
Y= % de digestibilidad in vitro.
X= pH de la suspensión proteica inmediatamente después de 10 minutos de digestión con la
solución multienzimática.
3.3 Resultados
Tabla III.I. Actividad del agua (AW) del músculo del pie de C. brevifrons.
Actividad de agua (AW)
Crudo 0,60
Cocido 0,45
Tabla III.II. Análisis proximal del músculo del pie de C. brevifrons en estado crudo y
cocido.
Crudo Cocido
Composición
X + DE (%) X + DE (%)
Proteínas 85,21 + 5 76,51 + 8
Grasas 4,26 + 1 4,94*
Cenizas 9,71 + 0,42 9,68 + 0,02
*Una sola determinación; Valores expresados en base seca (g/100g proteína)
3.3.4 Minerales
El Potasio es el mineral con mayor cantidad de mg. presente en el músculo del pie
de C. brevifrons, seguido por el Calcio y posteriormente el Magnesio. Un total de 7
minerales se encontraron presentes en ambos tipos de tejido (Tabla III.III).
63
El porcentaje de digestibilidad en el tejido crudo resultó ser mayor que el del tejido
cocido. Ambos tejidos poseen un porcentaje elevado, cercano al presentado por la enzima
caseína, empleada en este estudio como referencia. (Tabla III.IV).
Tabla III.IV Porcentaje de digestibilidad “in vitro” del músculo del pie de C. brevifrons y de
la enzima Caseína.
% de Digestibilidad “in vitro”
Crudo 86,82%
Cocido 78,86%
Caseína 91,35%
64
3.4 Discusión
Los análisis proximales son pruebas bioquímicas que se le realizan a los alimentos
de manera de conocer su composición nutricional y establecer parámetros de calidad para el
consumo humano (FAO, 2014). Son importantes desde el punto de vista nutricional de los
seres humanos (Srilatha et al., 2013), y en el desarrollo, crecimiento y buen funcionamiento
del organismo (Babu et al., 2010). Principalmente, los análisis proximales evalúan el
contenido de proteínas, carbohidratos, lípidos y cenizas (FAO, 2014), los cuales pueden
variar de acuerdo a la especie, talla del animal, estado de maduración, temperatura del
ambiente, disponibilidad, calidad del alimento y del tejido estudiado (Giese y Hart, 1967).
Los minerales forman parte importante de la dieta alimentaria del ser humano, están
presentes en las hormonas, enzimas y otros activadores enzimáticos de gran importancia
(Srilatha et al., 2013). Las deficiencias en uno o más minerales pueden ocasionar diversas
patologías, y daños estructurales a nivel celular (CECOPESCA, 2012).
68
El segundo mineral presente en grandes cantidades fue el Calcio (Ca). Este mineral
(Macromineral también) es el catión más abundante en el organismo (Gil-Hernández, 2010)
y presenta funciones importantes en la coagulación sanguínea normal, el metabolismo
energético, el proceso de división y diferenciación celular, mantenimientos de los huesos,
etc. (CECOPESCA, 2012). Los niveles recomendados de consumo diario de calcio según
Latham (2002) son 400 a 500 mg en adultos, 400 a 700 mg en niños y 800 a 1 000 mg en
mujeres embarazadas y madres lactantes. Dado el contenido de Ca en el pie de C.
brevifrons, el consumo regular de este alimento podría cumplir con estos requerimientos si
se le ingresa a nuestra dieta humana.
El resto de minerales presente en C. brevifrons (Fe, Zn, Mn, Cu), son considerados
microminerales, ya que no se necesitan grandes cantidades en la dieta diaria, sin embargo,
69
3.5 Conclusiones
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ANEXOS
Anexo 1