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LIMA-PERÚ
2016
SEMINARIO: ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LAS PROTEÍNAS. PROTEÍNAS
ESTRUCTURALES: QUERATINA Y FIBROÍNA; COLÁGENO Y ELASTINA.
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE ENZIMAS: LISOZIMA Y QUIMOTRIPSINA.
1. PROTEÍNAS ESTRUCTURALES:
1.1 QUERATINA
ESTRUCTURA
La queratina es una proteína de estructura secundaria, en otras palabras la
estructura primera de esta proteína se pliega sobre sí misma, dando una
estructura de tres dimensiones. Esta estructura se mantiene estable por
puentes de hidrógeno entre los grupos NH y CO de la cadena principal,
además de las fuerzas hidrofóbicas. Dandole una dureza característica.
Las subunidades básicas de la queratina se dividen en dos grupos: Las
queratinas ácidas y las básicas. Las subunidades básicas están constituidas
por una sola proteína, en su mayoría de forma espiral y con abundante
cantidad del aminoácido cisteína.
FORMACIÓN
En la formación de la queratina, primero se unen los monómeros de
queratina entre si para formar dímeros. La unión para la formación de
dímeros es realiza de una manera concreta en el cual una subunidad ácida
se unirá a una subunidad básica . De este modo la macromolécula formada
tendrá la misma proporción de subunidades básicas y ácidas. Luego de esto,
los dimeros formados se unirán entre si para dar el paso a la formación de
tetrámeros. La unión de muchos tetrámeros consecutivos dan los
protofilamentos.
El conjunto de cuatro protofilamentos da la formación de protofibrillas y
cuatro protofibrillas entrelazadas dan como resultado una hebra de
queratina. La presencia de filagrina actúa como puente entre los precursores
de la queratina.
TIPOS
Las queratinas constituyen dos grandes grupos de proteínas que son
evolutivamente distintas las α-queratinas y las β-queratinas cuya estructura
y localización son muy distintas.
α-queratina
La α-queratina se
encuentra en el
sustrato superior
de la epidermis
como en el pelo y
las uñas. Existen
más de 20 tipos
distintos de
queratina en el
epitelio humano,
además de al
menos otros ocho tipos de queratinas específicas del pelo y uñas. La
estructura de α-queratina es en su mayoría α-helicoidal, presentando una
zona central en esencia de α-hélice dextrógira flanqueada por dominios N-
y C- terminales no helicoidales las cuales tienen una longitud y composición
variables.
Existen dos tipos de α-queratina:
Tipo I (ácidas)
Tipo 2 (neutras/básicas)
Solo los heterodímeros formados por α-queratinas de tipo I y tipo II pueden
formar filamentos, pero no si son del mismo tipo.
La presencia de restos de aminoácidos de Cisteína en sus cadenas, producen
puentes disulfuros denominándose a esto grupo cistina. Estos puentes
disulfuros le proporcionan rigidez y resistencia.
β-queratina
Las β-queratina poseen una estructura en lámina plegada en conformación
β y amonoácidos con cadenas laterales pequeñas. Debido a esto son ricas en
glicina, alanina y
serina; carece de
cisteína motivo por
el cual contiene
pocos
entrecruzamientos
ntramoleculares a
través de puentes
disulfuro. El hecho
de que las lámnas u
hojas β estén tan
próximas es debido
al tamaño pequeño de las cadenas laterales. Las láminas-β permancen
unidas por medio de enlaces intractenarios por puentes de hidrógeno y por
interacciones de Van der Waals.
Las β-queratina se encuentran en fibras de seda, escamas, picos de aves o
plumas.
FUNCIÓN
Una función importante de las queratinas es mejorar la capacidad de las
células para soportar los traumatismos. Esta función estructural de soporte
se puede dar por medio de las propiedades mecánicas que exhibe.
DEFECTOS EN LA SÍNSTESIS DE QUERATINA
La función de soporte estructural se ve facilitada por la unión de los
filamentos intermedios a los complejos de adhesión y a la actina y
microtúbulos. Una pérdida parcial o completa de esta función subyace a una
amplia variedad de enfermedades poco frecuentes, como las que veremos
a continuación:
Paquioniquia:
Nevus blanco
INTRODUCCIÓN:
La fibroína es una proteína fibrosa de estructura secundaria que
encontramos principalmente en la seda de insectos y arácnidos, siendo el
más representativo Bombyx morí o gusano de la seda. Por su composición
química alta en glicina esta proteína logra ser bastante compacta, resistente
a la par que flexible. Por estas mismas propiedades es que la seda tiene
bastante interés comercial en la industrial textil y biomédica.
COMPOSICIÓN MOLECULAR:
La fibroína posee la característica de tener una gran cantidad, en ocasiones
hasta el 80% de glicina como aminoácido principal, este se alternara con
serinas y alaninas. Los 3 aminoácidos mencionados tienen grupos radicales
pequeños lo que permitirá que las cadenas estén compactas, esto se
reforzara con la cantidad alta de puentes de hidrogeno que se forman. La
secuencia de aminoácidos que se encuentra en Bombyx mori y que
seguiremos como patrón para comprender en primera instancia a la fibrina
es la siguiente:
(Gly-ser-Gly-Ala-Gly-Ala-)n
También
podemos encontrar Tyrosina, valina, arginina y asparagina eso dependerá
del tipo de animal y de la zona de la proteína de que se hable.
ESTRUCTURA:
La fibroína tiene una estructura de hoja plegada β, es
decir que se une entre si con la gran cantidad de
puentes de hidrogeno que se pueden forman entre
ellos, esto forma una lámina de péptidos compactas
entre ellos.
Teóricamente, para tener una hoja plegada β, el ángulo
que se debería formar entre el carbono principal y el
carbono del grupo carboxi (Ψ) y el ángulo que se forma
entre el carbono principal y el nitrógeno del grupo
amino (θ) deberían de ser de 180°, si fuera así la distancia entre carbonos
principales de dos aminoácidos seria de 0.72nm.
Sin embargo la fibroína posee un grado de rotación de -40° en el ángulo θ y
45° en el ángulo Ψ, esto genera que entre carbonos principales haya una
distancia óptima de 0.70nm.
La unión entre los péptidos que se generan a la misma altura laminar es por
uniones de Van der Walls entre el oxígeno del grupo C=O y el hidrogeno del
grupo N-H.
Cuando una lámina se adhiere a otra se da por uniones por fuerzas de Van
Der Walls entre los grupos alanina o serina de ambas laminas o bien por lo
grupos glicina. Esto se debe a una característica remarcable de las cadenas
de fibroína, Los grupos radicales de la glicina se dispondrán hacia un lado de
la cadena, mientras los grupos radicales de la alanina o seria se dispondrán
al lado contrario.
La distancia será de 3.5A entre laminas cuando las uniones se dan por glicina
y de 7.5ª cuando las uniones se dan por alanina.
FUNCIONES:
Las aplicaciones de la seda de los gusanos vienen desde tiempo ancestrales
en la cual se usaba para fabricar prendas textiles, ahora sus aplicaciones se
usan junto a la biotecnología para lograr avances médicos, esto se debe a la
gran compatibilidad de la proteína fibroína:
Por ejemplo, se usa fibras de proteína para soportar y darle protección a
células madres hasta darle el suficiente tamaño para que se sustenten por si
solas. Es uno de los mejores biomateriales ya que es muy resistente,
reabsorbible y biocompatible.
También se trata de desarrollar corneas artificiales con la fibroína, ya que
tiene una estructura química similar a la una cornea real.
También se trata de usar a la fibroína como un transportador de drogas, ya
que su nanopartículas puede trasladar a células malignas antitumorales,
antinflamatorios evitando efectos secundarios de corticoides.
También se colocan células madre en andamos de fibroína y esponjas
porosas, ya que de esta manera es más fácil que se diferencien en
osteoblastos,
1.3 COLÁGENO
El colágeno es una molécula proteica o proteína que forma fibras, las fibras
colágenas. Estas se encuentran en todos los animales. Son secretadas por
las células del tejido conjuntivo como los fibroblastos, así como por otros
tipos celulares. Es el componente más abundante de la piel y de los huesos,
cubriendo un 25 % de la masa total de proteínas en los mamíferos.
Se caracteriza principalmente por su notable resistencia: una fibra de 1mm
de diámetro puede soportar una carga de 10 a 40 kg. El colágeno está
constituido por un conjunto de tres cadenas polipeptídicas (1000
aminoácidos por cadena), agrupadas en una estructura helicoidal.
Comportamiento mecánico
Las fibras de colágeno confieren una resistencia mayor a los tejidos que las
contienen, a diferencia de la elastina que forma una red isótropa las fibras
de colágenos dan lugar a un comportamiento mecánico anisótropo con
mayor rigidez en la dirección de las fibras de colágeno. Muchas estructuras
multicapa como las arterias, el esófago, o la piel, contienen diversas capas de
colágeno, en las cuales la dirección preferente de las fibras en cada capa es
diferente, eso da una respuesta estructural complicada.
ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL
El colágeno posee una estructura secundaria tridimensional consistente en
una "cadena α" (no confundir con α hélice), es una hélice levógira con
alrededor de 3 residuos por vuelta. En cuanto a la estructura terciaria, tres
cadenas α superenrolladas forman una triple hélice dextrógira. Hélice
levógira más compacta que la alfa hélice. Superhélice dextrógira formada por
enrrollamiento de 3 hélices (tropocolágeno).
Glicina (Gli), alanina (Ala), 4 hidroxiprolina (4-OH-Pro), 5 hidroxilicina (5-OH-
Lys) muy abundantes.
El tripéptido Gly-X-Pro aparece repetido numerosas veces a lo largo de la
cadena de colágeno.
FUNCIÓN Y TIPOS:
Las fibras de colágeno forman estructuras que resisten las fuerzas de
tracción. Su diámetro en los diferentes tejidos es muy variable y su
organización también; en la piel de los mamíferos está organizadas como
cestos de mimbre, lo que permite la oposición a las tracciones ejercidas
desde múltiples direcciones. En los tendones lo están en haces paralelos que
se alinean a lo largo del eje principal de tracción. En el tejido óseo adulto y
en la córnea se disponen en láminas delgadas y superpuestas, paralelas entre
sí, mientras las fibras forman ángulo recto con las de las capas adyacentes.
Las células interactúan con la matriz extracelular tanto mecánica como
químicamente, lo que produce notables efectos sobre la arquitectura tisular.
Así, distintas fuerzas actúan sobre las fibrillas de colágeno que se han
secretado, ejerciendo tracciones y desplazamientos sobre ellas, lo que
provoca su compactación y su estiramiento.
TIPOS DE COLÁGENO:
El colágeno en lugar de ser una proteína única, se considera una familia de
moléculas estrechamente relacionadas pero genéticamente distintas. Se
describen varios tipos de colágeno:
Colágeno tipo IV: Es el colágeno que forma la lámina basal que subyace a
los epitelios. Es un colágeno que no se polimeriza en fibrillas, sino que forma
un fieltro de moléculas orientadas al azar, asociadas a proteoglicanos y con
las proteínas estructurales laminina y fibronectina. Es sintetizado por
las células epiteliales y endoteliales. Su función principal es la de sostén y
filtración.
Colágeno tipo XI: Se encuentra en el cartílago. Interactúa con los tipos II y IX.
Colágeno tipo XII: Presente en tejidos sometidos a altas tensiones, como los
tendones y ligamentos. Interactúa con los tipos I y III.
1.4 ELASTINA
La elastina es una proteína del tejido conjuntivo con funciones estructurales
que, a diferencia del colágeno que proporciona principalmente resistencia,
esta confiere elasticidad a los tejidos.
Se trata de un polímero con un peso molecular de 70kDa con gran capacidad
de expansión que recuerda ligeramente a una goma elástica.
La elastina es importante también en la capacidad de los cuerpos de los
vertebrados para soportar esfuerzos y aparece en mayores concentraciones
donde requiere almacenar energía elástica.
Usualmente se considera que es un material elástico incomprensible e
isótropo. En el ser humano el gen que codifica la fabricación de la elastina es
el gen ELN.
SU BIOSÍNTESIS:
Sigue la misma ruta que
el colágeno, va desde el
retículo
endoplasmatico, se
dirige al aparato de
Golgi y de ahí hasta las
vesículas secretoras. No
sufre tantas
modificaciones
postraduccionales
como el colágeno, sin
embargo, en la matriz
extracelular se da un
cambio importante. Allí
es captada por los
micros fibrillas que se
encuentran asociadas a
la lisil-oxidasa.
Esta enzima se
encargara de hidroxilar
la lisina a alisina permitiendo así el enlace entre los dominios alfa de la
proteína. Las redes de fibras de elastina se encuentran inicialmente en un
estado ¨caótico¨. La tendencia a aumentar la entropía hará que, al aplicar
fuerza sobre ellas, se dé un ordenamiento de dichas fibras alcanzando un
Síndrome de Williams:
El síndrome de Williams es una condición poco común que cuya proporción
es de aproximadamente uno por cada 20.000 nacimientos vivos. Todo
apunta a que el síndrome se produce a causa de una alteración en el
cromosoma número 7, que es el encargado de aportar la
elastina. Actualmente es muy difícil detectar el síndrome antes del
nacimiento. Sin embargo, existe una prueba de microgenética por la que
después del parto se puede detectar el síndrome en un 90% de los niños
afectados.
Todavía se desconoce bastante sobre el cuadro clínico. La investigación
actual va encaminada fundamentalmente a descubrir cuáles son los genes
afectados por la pérdida.
Actualmente, ya se han caracterizado varios genes afectados por la pérdida:
ELN se refiere al gen que codifica la proteína elastina, principal componerte
de las fibras elásticas que existen en la piel, las articulaciones, la pared de los
vasos sanguíneos y otros tejidos, y que confieren la propiedad de
distenderse. Las alteraciones cardiovasculares del síndrome son debidas a la
pérdida de una copia del gen ELN. La falta parcial de elastina condiciona una
menor elasticidad y mayor rigidez de la pared de los vasos sanguíneos sobre
todo en las zonas sometidas a mayor presión, a la salida del corazón. Los
problemas articulares, las hernias y la voz ronca pueden deberse también en
parte a la disminución de elastina.
El Cutis Laxo:
El cutis laxo describe un grupo de transtornos que comparten una piel
redundante laxa como característica. A causa de las anomalías histológicas
en la cantidad o la estructura de la elastina prácticamente en todas las
formas de cutis laxo, las investigaciones sobre la patogenia molecular se han
centrado en las mutaciones genéticas que conducen a alteraciones en la
estructura y el procesamiento de la elastina en la matriz extracelular. La
heterogeneidad genética del cutis laxo refleja el hecho de que se necesitan
varios genes para la biosíntesis y la función de la elastina normal.
El síndrome Marfan:
Se asocia al gen FBN1 del cromosoma 15. El FBN1 codifica
una proteína llamada fibrilina, que es esencial para la formación de fibras
elásticas del tejido conectivo. Además, las microfibrillas poseen un almacén
de factores de crecimiento que son liberados en momentos específicos con
el fin de controlar el crecimiento y reparar los tejidos y órganos del cuerpo.
Una mutación en el gen FBN1 puede reducir la cantidad de funciones de la
proteína fibrilina. Como consecuencia de estas mutaciones la elasticidad en
algunos tejidos se reduce provocando un enorme crecimiento e
inestabilidad en los tejidos.
2.1 LISOZIMA
La lisozima, también conocida como muramidasa (N- Acetil
muramidaglicano hidrolasa, E. C. 3. 2.1. 17), Fue descubierta en 1922 por
Alexander Fleming. Es la primera proteína de la que se dispuso de su
secuencia por cristalografía de rayos-X, además la primera enzima de la que
se determinó su mecanismo enzimático gracias a David Phillips en 1966.
Desde su descubrimiento esta proteína ha jugado un papel muy importante
en los modelos enzimáticos, y en muchos aspectos de la biología moderna,
incluyendo la química de proteínas, cristalografía, resonancia magnética
nuclear (NMR), inmunología y plegamiento de proteínas. La lisozima se
encuentra en muchos organismos como virus, insectos, anfibios, reptiles,
aves y mamíferos, produciéndose en multitud de tejidos y fluidos,
incluyendo huevos de aves, leche humana, lágrimas, saliva y es además
secretada por leucocitos polimorfonucleares.
De todas las lisozimas existentes, la lisozima de huevo de gallina ha sido la
más estudiada, por encontrarse en alta concentración (1-3 g/L de clara de
huevo), su fácil manejo y la posibilidad de purificación por cristalización en
NaCl al 5% a pH 9,5. La lisozima de huevo es una proteína que puede
representar cerca del 3,4% de las proteínas de la clara de huevo. Su masa
molecular es 14.307 Da y está compuesta por una secuencia de 129 residuos
de aminoácidos.
ESTRUCTURA
Los dos pasos se explican por la reacción del residuo nucleófilo de serina
con el sustrato, para formar el intermedio enzima-sustrato enlazado
covalentemente.
En primer lugar, el grupo hidroxilo de la serina 195 sumamente reactiva
ataca al grupo carbonilo del sustrato para formar el intermediario acil-
enzima y se libera el alcohol p-nitrofenol (o una amina si el sustrato es una
amida en vez de un éster). En segundo lugar, el intermediario acil-enzima
se hidroliza para liberar el componente ácido carboxílico del sustrato y
regenerar la enzima libre. Así, añadir sustrato el p-nitrofelato se produce
rápidamente cuando se forma el intermedio acil-enzima, pero necesita
más tiempo para que la enzima pueda reiniciar un ciclo nuevo catalítico,
para lo cual requiere la hidrólisis del intermediario acil-enzima.
El análisis estructural reveló las bases químicas de la especial reactividad
de la serina 195. La cadena lateral de la serina 195 forma un puente de
hidrógeno con el anillo imidazol de la histidina 57. El grupo –NH de este
anillo de imidazol se encuentra, a su vez, formando un puente de
hidrógeno con el grupo carboxilato del aspartato 102. Sta constelación de
residuos se denomina tríada catalítica.