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AISLAMIENTO DEL DNA DE ORIGEN VEGETAL Y SU CARACTERIZACIÓN

ESPECTOFOTÓMETRICA. HIDRÓLISIS DE RNA Y DNA E IDENTIFICACIÓN


DE BASES PÚRICAS Y PIRIMÍDICAS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
FINA.

GASTALDI ARAIZA BRENDA

MERCADO URIOSTEGUI ALAN JOEL

3FM2 SECCIÓN: TRES

INTRODUCCIÓN

El DNA celular es el que contiene la información de los núcleos de las células para la obtención de las
genética que asegura que los organismos o células fibras de cromatina. Después se adicionó amilasa con el
puedan “duplicarse” dando lugar a otros iguales (1). La fin de purificar el DNA de polisacáridos, se mezcló e
función principal del DNA es como almacenamiento de incubó a temperatura ambiente. Se le adicionó una
la información genética completa, la biosíntesis solución saturada de NaCl y 5mL de SDS 10% el cual es
ordenada de los componentes de las células y los tejidos un detergente que separó las proteínas del DNA.
y, finalmente, en definir la individualidad de un Posteriormente se filtró y recupero en un tubo falcon,
organismo dado (2). se adicionó cloroformo: alcohol isoamílico como
disolventes. Se centrifugó a 4000 rpm para separar el
El RNA es el resultado de la copia o transcripción del
DNA (sobrenadante) de material fibroso y proteínas.
DNA genómico que sirve como molde; químicamente la
Finalmente al sobrenadante se le adicionó alcohol 96°
estructura del RNA y DNA es la misma, ya que ambas
frío para la precipitación del DNA, este último
contienen cuatro tipos de nucleótidos unidos por
haciéndose visible como una sustancia filiforme.
enlaces fosfodiéster en dirección 3´-5´ (3). Sin embargo,
hay dos diferencias principales que diferencian el DNA Posteriormente se trató de recuperar el DNA,
del RNA: la primera, El azúcar constituido del DNA es la intentando no manipularlo demasiado. Esto es con el fin
desoxirribosa, en tanto que el RNA contiene ribosa, que de evitar romper el DNA y liberar las bases nitrogenadas
a su vez contiene un grupo hidroxilo (-OH) adicional; la al medio, reduciendo así la concentración de DNA puro
segunda, el RNA no contiene la base nucleotídica obtenido.
Timina, en su lugar contiene Uracilo (3).
Posteriormente a esto se introdujo el DNA extraído en
OBJETIVOS un tupo con una solución de citrato salina diluida, la
cual empleamos para lavar el DNA debido a que es una
 Obtener DNA a partir de manzana.
manera de eliminar impurezas. Al final, se midió el
 Purificar y caracterizar DNA de manzana. espectro de absorción del DNA, el cual es necesario
 Separar las bases nitrogenadas del DNA y RNA para hacer los cálculos correspondientes en el apartado
por cromatografía en capa fina. de resultados.
Parte A= Aislamiento de DNA Parte B= Hidrólisis de RESULTADOS
DNA y RNA e identificación por cromatografía
Parte A
ANÁLISIS DE LA TÉCNICA
Gráfica y cálculos en el anexo
PARTE A
Parte B
Aislamiento de DNA de manzana.

Se colocaron 15g de manzana en un mortero, se le


adicionó 5 mL de Tris/EDTA/NaCl en la cual el Tris es un
regulador de pH ocupado para la lisis celular
manteniendo el pH estable, mientras el EDTA se unió a
cationes como el Ca2+ para la desestabilización ce la
membrana celular y con el NaCl se consiguió el estallido
Imagen 1.- Placa Cromatografíca Revelada
Parte B

Tabla 1.- Rf del cromatograma En nuestro caso, nuestra placa no se revelo como se
tenía previsto, ya que las manchas corrieron de una
Bases Carril Rf´s
manera inadecuada como se puede apreciar en la placa
Nitrogenadas
de la derecha de la imagen (ver imagen 1). La placa de
Timina 1 0.58
la izquierda corrió de mejor manera, ya que se puede
Uracilo 2 0.63
apreciar las 4 manchas que son las importantes en la
Citosina 3 0.25 práctica, la de Timina, Uracilo, DNA y RNA. Al revisar la
Adenina 4 0.33 literatura, encontramos que el DNA y el RNA contienen
Guanina 5 0.21 las mismas 3 bases nitrogenadas (Adenina, citosina,
ADN (Pooc) 6 0.59 Guanina) (2). Estructuralmente, la principal diferencia, en
ARN (Pooc) 7 0.62 cuanto a su composición química se refiere, el DNA
contiene Timina, mientras que el RNA contiene Uracilo
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
(3), por éste motivo es que las manchas que se pueden
Parte A apreciar en la placa cromatográfica de la izquierda (ver
imagen 1) nos ayudan a visualizar que efectivamente el
El espectro de absorbencia UV del DNA puro tiene un
RNA contiene Uracilo y no Timina, ya que ésta última no
máximo de absorción a una longitud de onda de 260 nm
se encuentra a la misma altura que la mancha de RNA;
correspondiente a los ácidos nucleicos y una baja a
y, en el caso del DNA, también podemos confirmar que
230nm la cual corresponde al enlace peptídico (4), en la
el DNA contiene Timina en su estructura y no Uracilo, ya
gráfica obtenida (ver anexo) el comportamiento es
que Timina fue la que corrió al mismo nivel que la
diferente ya que la absorbancia obtenida en 230nm fue
mancha de DNA (3).
de 1.148 un valor mayor a la de 0.623 correspondiente
a 260nm lo que indica la presencia de proteínas en el
DNA de manzana y se corroboró con el valor obtenido
CONCLUSIONES
de pureza de 1.14 (ver anexo).

Para el cálculo de la concentración se utilizaron tres  Obtuvimos DNA de origen vegetal (manzana)
métodos (ver anexo). El primero se basó en el uso del con una pureza de 1.14 y una concentración de
nomograma siendo un método no muy exacto ya que 2.7615x10-4 mg/ml
depende del trazo que se realizó y la escala del  La Timina sólo se encuentra en el DNA y el
nomograma, pero es un método eficiente si se necesita Uracilo sólo se encuentra en el RNA.
un resultado rápido o un indicio de cómo se va REFERENCIAS
trabajando, con este método se obtuvo la mayor
concentración que fue de 0.2 mg/ml. 1. Silvia Quesada Mora (2007). Manual de
experimentos de laboratorio para bioquímica.
El método dos es el resultado de muchas pruebas de Editorial EUNED. Páginas 50 – 56.
concentración de DNA siendo el más exacto de los tres 2. Antonio Peña (2013) Qué es el metabolismo.
aunque no tan rápido como el primero, con este Editorial Fondo de cultura Económica. Páginas
método se obtuvo la concentración más baja que fue 230 – 235.
2.7615x10-4 mg/ml. El método tres es una relación en 3. Jiménez García L.F, Merchant Larios H. (2003).
cuanto a la absorbencia de DNA puro (1) con la Biología celular y molecular. Editorial PEARSON
absorbancia obtenida experimentalmente, tomando en EDUCATION, México. Páginas 22 – 28.
cuenta que el DNA obtenido no fue 100% puro el 4. Voet, D., Voet, J. &Charlotte, W. (2009).
resultado de esta relación (0.315 mg/ml) puede no ser Fundamentos de Bioquímica. Buenos Aires:
el valor real. Finalmente el resultado del método dos se Médica Panamericana. Página 835.
considera el más factible para la concentración de DNA
de manzana obtenido experimentalmente.