AISLAMIENTO DEL DNA DE ORIGEN VEGETAL Y SU CARACTERIZACIÓN

ESPECTOFOTÓMETRICA. HIDRÓLISIS DE RNA Y DNA E IDENTIFICACIÓN

DE BASES PÚRICAS Y PIRIMÍDICAS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
FINA.

GASTALDI ARAIZA BRENDA

MERCADO URIOSTEGUI ALAN JOEL

3FM2 SECCIÓN: TRES

INTRODUCCIÓN

El DNA celular es el que contiene la información
genética que asegura que los organismos o células
puedan “duplicarse” dando lugar a otros iguales (1). La
función principal del DNA es como almacenamiento de
la información genética completa, la biosíntesis
ordenada de los componentes de las células y los tejidos
y, finalmente, en definir la individualidad de un
organismo dado (2).
El RNA es el resultado de la copia o transcripción del
DNA genómico que sirve como molde; químicamente la
estructura del RNA y DNA es la misma, ya que ambas
contienen cuatro tipos de nucleótidos unidos por
enlaces fosfodiéster en dirección 3´-5´ (3). Sin embargo,
hay dos diferencias principales que diferencian el DNA
del RNA: la primera, El azúcar constituido del DNA es la
desoxirribosa, en tanto que el RNA contiene ribosa, que
a su vez contiene un grupo hidroxilo (-OH) adicional; la
segunda, el RNA no contiene la base nucleotídica
Timina, en su lugar contiene Uracilo (3).
OBJETIVOS
 Obtener DNA a partir de manzana.
 Purificar y caracterizar DNA de manzana.
 Separar las bases nitrogenadas del DNA y RNA
por cromatografía en capa fina.
Parte A= Aislamiento de DNA Parte B= Hidrólisis de
DNA y RNA e identificación por cromatografía
ANÁLISIS DE LA TÉCNICA
PARTE A
Aislamiento de DNA de manzana.
de los núcleos de las células para la obtención de las
fibras de cromatina. Después se adicionó amilasa con el
fin de purificar el DNA de polisacáridos, se mezcló e
incubó a temperatura ambiente. Se le adicionó una
solución saturada de NaCl y 5mL de SDS 10% el cual es
un detergente que separó las proteínas del DNA.
Posteriormente se filtró y recupero en un tubo falcon,
se adicionó cloroformo: alcohol isoamílico como
disolventes. Se centrifugó a 4000 rpm para separar el
DNA (sobrenadante) de material fibroso y proteínas.
Finalmente al sobrenadante se le adicionó alcohol 96°
frío para la precipitación del DNA, este último
haciéndose visible como una sustancia filiforme.
Posteriormente se trató de recuperar el DNA,
intentando no manipularlo demasiado. Esto es con el fin
de evitar romper el DNA y liberar las bases nitrogenadas
al medio, reduciendo así la concentración de DNA puro
obtenido.
Posteriormente a esto se introdujo el DNA extraído en
un tupo con una solución de citrato salina diluida, la
cual empleamos para lavar el DNA debido a que es una
manera de eliminar impurezas. Al final, se midió el
espectro de absorción del DNA, el cual es necesario
para hacer los cálculos correspondientes en el apartado
de resultados.
RESULTADOS
Parte A
Gráfica y cálculos en el anexo
Parte B

Se colocaron 15g de manzana en un mortero, se le

adicionó 5 mL de Tris/EDTA/NaCl en la cual el Tris es un
regulador de pH ocupado para la lisis celular
manteniendo el pH estable, mientras el EDTA se unió a
cationes como el Ca2+ para la desestabilización ce la
membrana celular y con el NaCl se consiguió el estallido
Imagen 1.- Placa Cromatografíca Revelada

Tabla 1.- Rf del cromatograma
Bases Carril Rf´s
Nitrogenadas
Timina 1 0.58
Uracilo 2 0.63
Citosina 3 0.25
Adenina 4 0.33
Guanina 5 0.21
ADN (Pooc) 6 0.59
ARN (Pooc) 7 0.62
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Parte A
El espectro de absorbencia UV del DNA puro tiene un
máximo de absorción a una longitud de onda de 260 nm
correspondiente a los ácidos nucleicos y una baja a
230nm la cual corresponde al enlace peptídico (4), en la
gráfica obtenida (ver anexo) el comportamiento es
diferente ya que la absorbancia obtenida en 230nm fue
de 1.148 un valor mayor a la de 0.623 correspondiente
a 260nm lo que indica la presencia de proteínas en el
DNA de manzana y se corroboró con el valor obtenido
de pureza de 1.14 (ver anexo).
Para el cálculo de la concentración se utilizaron tres
métodos (ver anexo). El primero se basó en el uso del
nomograma siendo un método no muy exacto ya que
depende del trazo que se realizó y la escala del
nomograma, pero es un método eficiente si se necesita
un resultado rápido o un indicio de cómo se va
trabajando, con este método se obtuvo la mayor
concentración que fue de 0.2 mg/ml.
El método dos es el resultado de muchas pruebas de
concentración de DNA siendo el más exacto de los tres
aunque no tan rápido como el primero, con este
método se obtuvo la concentración más baja que fue
2.7615x10-4 mg/ml. El método tres es una relación en
cuanto a la absorbencia de DNA puro (1) con la
absorbancia obtenida experimentalmente, tomando en
cuenta que el DNA obtenido no fue 100% puro el
resultado de esta relación (0.315 mg/ml) puede no ser
el valor real. Finalmente el resultado del método dos se
considera el más factible para la concentración de DNA
de manzana obtenido experimentalmente.
Parte B
En nuestro caso, nuestra placa no se revelo como se
tenía previsto, ya que las manchas corrieron de una
manera inadecuada como se puede apreciar en la placa
de la derecha de la imagen (ver imagen 1). La placa de
la izquierda corrió de mejor manera, ya que se puede
apreciar las 4 manchas que son las importantes en la
práctica, la de Timina, Uracilo, DNA y RNA. Al revisar la
literatura, encontramos que el DNA y el RNA contienen
las mismas 3 bases nitrogenadas (Adenina, citosina,
Guanina) (2). Estructuralmente, la principal diferencia, en
cuanto a su composición química se refiere, el DNA
contiene Timina, mientras que el RNA contiene Uracilo
(3), por éste motivo es que las manchas que se pueden
apreciar en la placa cromatográfica de la izquierda (ver
imagen 1) nos ayudan a visualizar que efectivamente el
RNA contiene Uracilo y no Timina, ya que ésta última no
se encuentra a la misma altura que la mancha de RNA;
y, en el caso del DNA, también podemos confirmar que
el DNA contiene Timina en su estructura y no Uracilo, ya
que Timina fue la que corrió al mismo nivel que la
mancha de DNA (3).
CONCLUSIONES
 Obtuvimos DNA de origen vegetal (manzana)
con una pureza de 1.14 y una concentración de
2.7615x10-4 mg/ml
 La Timina sólo se encuentra en el DNA y el
Uracilo sólo se encuentra en el RNA.
REFERENCIAS
1. Silvia Quesada Mora (2007). Manual de
experimentos de laboratorio para bioquímica.
Editorial EUNED. Páginas 50 – 56.
2. Antonio Peña (2013) Qué es el metabolismo.
Editorial Fondo de cultura Económica. Páginas
230 – 235.
3. Jiménez García L.F, Merchant Larios H. (2003).
Biología celular y molecular. Editorial PEARSON
EDUCATION, México. Páginas 22 – 28.
4. Voet, D., Voet, J. &Charlotte, W. (2009).
Fundamentos de Bioquímica. Buenos Aires:
Médica Panamericana. Página 835.