MARCO TEÓRICO

La digestión de proteínas de la dieta comienza en el estómago. La ingesta de proteínas estimula la síntesis de

la hormona gastrina que estimula la liberación de pepsinógeno, forma inactiva de la pépsina, una endopeptida
gástrica que produce fragmentos peptídicos. El proceso continua en el intestino delgado por acción de las
peptidasas pancreáticas: quimotripsina y tripsina y otras enteropeptidasas. Los AA se absorben en los
enterocitos del intestino y se distribuyen por la sangre hasta los órganos y tejidos. La degradación de AA
excedentes supone que el grupo α-amino se convierta en urea para su excreción, mientras que los esqueletos
carbonados se transformen a Acetil-CoA, piruvato o intermediarios del ciclo del Ácido Cítrico y la energía
consiguiente de su oxidación. La cadena carbonada de los AA podrá transformarse finalmente en cuerpos
cetónicos (AA cetogénicos) o glucosa (AA glucogénicos).

Las reacciones generales de aminoacidos: transaminacion,

desaminacion y descarboxilacion. Estos son los tres tipos de
reacciones más generales de los AA. El fosfato de piridoxal, un
derivado de la vitamina B6, actúa como coenzima en dos de esas
reacciones.
Transaminaciones: Son reacciones donde se traspasa el grupo amino desde un α-aminoácido a un α-
cetoácido, convirtiéndose el 1º en α-cetoácido, y el 2º en un α-aminoácido. Las enzimas que catalizan estas
reacciones son las transaminasas y necesitan el piridoxal fosfato (PLP) como coenzima.

Cuando predomina la degradación, la mayoría de los aminoácidos cederán su grupo amino al α-cetoglutarato
que se transforma en glutamato (GLU), pasando ellos al α-cetoácido correspondiente. Hay dos transaminasas,
GOT y GPT, cuyos niveles en suero tienen un importante significado en el diagnóstico clínico. Estas enzimas,
abundantes en corazón e hígado, son liberadas cuando los tejidos sufren una lesión, por lo tanto sus niveles
altos en suero pueden ser indicativos de infarto de miocardio, hepatitis infecciosa, u otros daños orgánicos.
El método UV es un método estándar optimizado según las concertaciones recomendadas de la IFCC. Se
utiliza para el análisis cuantitativo in vitro de aspartato aminotransferasas AST en suero y plasma.
Las aminotransferasas son un grupo de enzimas que catalizan las inter conversiones de los aminoácidos y α-
oxoácidos por medio de la transferencia de grupos amino. La GOT (aspartato aminotransferasas de
oxaloacetato glutamato) se ha encontrado en el citoplasma y mitocondrias de las células estudiadas. En caso
de un ligero daño del tejido como por ejemplo; el hígado, la forma predominante de la GOT en suero es la del
citoplasma con una cantidad más pequeña proveniente de las mitocondrias. Un daño más severo del tejido dará
como resultado una mayor liberación de enzimas mitocondrial. Los niveles elevados de AST pueden ser una
señal de infarto de miocardio, enfermedad hepática, distrofia muscular y daño de órganos.
Los músculos del corazón son los que muestran más actividad de esta enzima, sin embargo también se ha
encontrado en el cerebro, hígado, mucosa gástrica, tejido adiposo y riñones humanos.
La IFCC recomienda actualmente (1980) procedimientos estandarizados de las concentraciones de substrato.

 Optimización de las concentraciones de sustrato.

 Empleo de tampones Tris (en lugar de fosfato, inhibe la recombinación de la apoenzima con el fosfato
piridoxal).
 Preincubación de suero y tampón combinado para permitir que tengan lugar reacciones con NADH.
 Substrato de inicio α-oxoácidos.
 Activación de fosfato piridoxal opcional
 El α-oxoácidos reacciona con la L-aspartato en presencia de GOT para formar L-glutamato más
oxaloacetato.
 L reacción indicadora utiliza el oxaloacetato para la determinación cinética del consumo de NADH.
La alaninoaminotransferasa (gpt/alt): principalmente se encuentra en hepatocitos. Al expresarse en muy
pequeña cantidad en otros tejidos, se considera hepatoespecifica. La función fundamental de la gpt es el
transporte de grupos amino desde los tejidos hasta el hígado para la síntesis de la urea.
La l-alanina es uno de los 20 aminoácidos más ampliamente usados en biosíntesis de proteína, detrás de
la leucina, encontrándose en un 7,8 % de las estructuras primarias, en una muestra de 1.150 proteínas.
Transfiere su grupo amino al piruvato. debido a las reacciones de transaminación a través de la enzima alanina
transaminasa (ec 2.6.1.2), la cual es rápidamente reversible, la alanina puede fácilmente biosintetizarse del
piruvato, por lo que está presente en los ciclos metabólicos de la glicólisis, gluconeogénesis, y en el ciclo del
ácido cítrico.
El grupo metil de la alanina es muy poco reactivo, por lo que no es común verlo en la función proteica. Sin
embargo, puede desempeñar un papel en el reconocimiento del sustrato o especificidad, particularmente en
interacciones con otros átomos no reactivos como el carbono. Interviene en el metabolismo de la glucosa.

ALT
Valores de normalidad en suero
25°C 30°C 37°C
Hombres Hasta 22 U/l Hasta 29U/l Hasta 40 U/l
Mujeres Hasta 17 U/l Hasta 22 U/l Hasta 31U/l

AST
Valores de normalidad en suero
 25°C 30°C 37°C
Hombres Hasta 18 U/l Hasta 25 U/l Hasta 37 U/l
Mujeres Hasta 15 U/l Hasta 21 U/l Hasta 31U/l

MATERIALES Y REACTIVOS

Material Reactivos
 Centrífuga Kit para determinar GOT(AST), el cual incluye:
 Jeringa de 3 mL  R1: TRIS pH 7.5 (80mmol/L)
 Guantes de látex  L- Aspartato (240 mmol/L)
 Dos tubos de ensaye Enzima/Coenzima/Oxoglutarato
 Micropipetas de 100 y 1000 L  Α-oxoglutarato 12 mmol/l
 Termobaño  MDH
 Espectrofotómetro  LD ≥1.2U/ml
Celdas  NADH 0.18 mmol/l
Kit para determinar GPT(ALT), el cual incluye:
 R1: TRIS pH 7.5 (100mmol/L)
 L-Alanina (0.6 mol/l)
Enzima/Coenzima/Oxoglutarato
 Α-oxoglutarato 15 mmol/l
 MDH
 LD ≥1.2U/ml
 NADH 0.18 mmol/l
Heparina
Solución de Cloruro de Sodio 0.9%

TOXICOLOGÍA

Reactivo Propiedades Fisicoquímicas Rombo de seguridad

 Estado físico: Sólido
 Color: Blanco
 Olor: Inodoro
 Valor pH
L- Aspartato
 (solución acuosa 2%) 4.5 – 5.5
 Punto de fusión: aprox. 105 – 145 º C
 Solubilidad en
 Agua (20 º C) Soluble
  Etanol Ligeramente soluble
 Cloroformo Ligeramente soluble
 Éter Prácticamente insoluble
 Aspecto:
 Forma: Sólido
 Color: Amarillento
 Olor: Característico
 Umbral olfativo: No determinado.
 valor pH a 20 °C: 5,5-6,5
L-Alanina
 Cambio de estado
 Punto de fusión /campo de fusión: 295-297 °C
 Densidad a 20 °C: 1,4 g/cm³
 Densidad a granel a 20 °C: 660 kg/m³
 Solubilidad en / miscibilidad con
 agua a 25 °C: 166,5 g/l
 Aspecto:
 Forma: Sólido
 Color: Blanquecino
Heparina
 Olor: Inodoro
 Umbral olfativo: No determinado.
 Valor pH: 5,5-8
 Estado físico: Sólido cristalino
 Color: Blanco.
 Olor: Inodoro.
 pH: 6,7 - 7,3 (solución acuosa)
Cloruro de Sodio  Punto de fusión: 801°C (1473°F)
 Punto de ebullición: 1465°C (2669°F)
 Densidad (20°C): 2,165 g/cm³
 Solubilidad (20°C): 36 g / 100 ml, en agua.
 Soluble en glicerol; muy poco soluble en alcohol.

Inhalación causa irritación de ojos nariz y tráquea.

Ingestión: Causa irritación gástrica, dolor y vómito.
Síntomas Contacto con la piel: en contacto prolongado provoca resequedad, agrietamiento y
dermatitis.
Contacto con los ojos: irrita causando lagrimeo y fluido nasal.
Inhalación: Trasladar a la persona al aire libre
Ingestión: Beber agua abundante.
Primeros Contacto con la piel: Quitarse las ropas contaminadas. En caso de ser ácidos y bases
Auxilios fuertes, enjuagar con abundante agua.
Contacto con los ojos: Lavar con abundante agua (mínimo durante 10 minutos).

PROCEDIMIENTO
 Se produce la El coágulo,
La sangre se deja reposar en
Extraer 2 a 3 ml constituido por las
el tubo durante unos minutos coagulación de
de sangre células
la muestra
venosa y
Paso 1

El líquido excluido del

coágulo denominado suero

Nota: El suero se diferencia del plasma porque carece de fibrinógeno (que ha sido convertido en la fibrina del coágulo),
INICIO protrombina y otros factores de la coagulación consumidos durante dicho proceso, y por contener además, en baja
concentración, sustancias de importancia fisiológica liberadas por las plaquetas durante la coagulación, por ejemplo, el
factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF).

Reconstituir el reactivo Preparar la muestra

Paso 2

Centrifugar 15 directamente en la
del Kit con 2mL de la
minutos a 2000 rpm celda
solución buffer

Plasma 100 µL
Leer la absorbancia inicial en el Incubar exactamente
Reactivo 1000 µL
espectrofotómetro a 340nm. un minuto a 30°C

Diluir 0.1 ml de
Al cabo de 1, 2 y 3 minutos leer Observar si la variación
suero con 0.9 ml
nuevamente de la absorbancia por
de NaCl 0.9%
minuto es menor a 0.16

Repetir la prueba.
RESULTADOS

1. Aplicar la siguiente fórmula para calcular la actividad de la ALT:

U/L = 1746 x ∆A 340 nm

En donde ∆A es el promedio de la diferencia de las absorbancias. Usar solo los valores obtenidos durante los
2 primeros minutos.

2. Aplicar la siguiente fórmula para calcular la actividad de la AST:

U/L = 1746 x ∆A 340 nm

En caso de haber diluido el suero, multiplicar el resultado por 10.

3. La unidad internacional (U) es la cantidad de enzima que convierte 1µmol de substrato por minuto en
condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L)

4. Reportar

Resultados

Resultados
 Nombre del paciente
 Sexo
 Valores de Alanina Aminotransferasa (ALT) obtenidos
 Valores de Aspartato Aminotransferasa (AST) obtenidos
 Referencia de valores normales a 30°C

Nota: La marca del kit puede cambiar, así que es necesario verificar el
FACTOR por el que se debe multiplicar ∆A en el inserto del mismo

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS

 Inactivar con Hipoclorito de Sodio y desechar en la tarja.