Prácticas Análisis Químico

PRACTICA 11
ANÁLISIS QUÍMICO
LABORATORIO 11. CROMATOGRAFÍA
OBJETIVOS
a) Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, (C.C.D.), sus características y los
factores que en ella intervienen.
b) Determinar el solvente adecuado para separar una mezcla.
c) Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionarlo a la selección
adecuada del eluyente y deducir la relación que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
c) Aplicar la técnica de cromatografÍa en capa fina como criterio de pureza e
identificación de sustancias.

ANTECEDENTES
La cromatografía se define como la técnica de separación de una mezcla de dos o
más compuestos en base a la diferencia de retención de dichos compuestos y por
distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil.
Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos
fases involucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), líquido-líquido y gases-
líquido (fase vapor).

Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes

de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa, que
transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra,
denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la
estacionaria puede ser un sólido o un líquido.

La retención o la permanencia de los componentes de la mezcla en las fases, se debe

a diferentes fenómenos tales como adsorción, reparto, intercambio iónico, entre otros.

Adsorción: Es la fijación de una sustancia en la superficie de un sólido, debido a

fuerzas de interacción físicas (fisisorción) o a fuerzas de interacción químicas
(quimisorción). La primera ocurre por atracción de las sustancias hacia la superficie del
sólido por medio de fuerzas de van der Waals y/o campos eléctricos o magnéticos
generados por imperfecciones cristalinas del sólido y la segunda ocurre por formación
de enlaces reversibles, tipo puente de hidrógeno, sin que haya desplazamiento de
iones u otra entidad química.

Reparto: es la distribución de una sustancia (soluto) entre dos fases líquidas inmiscibles
entre sí. La relación entre las cantidades de soluto disuelto en cada una de las dos fases
se denomina coeficiente de reparto de ese soluto en esa fase y se determina
corrientemente por la relación de las concentraciones de la sustancia en las dos fases.
K = CA / CB
CA = Concentración del soluto en fase A.
CB = Concentración del soluto en fase B.

Intercambio iónico: Es el desplazamiento de un ión desde una matriz, por otro que
puede ser retenido más fuertemente. La matriz está formada por una resina insoluble
que puede tener grupos cargados negativamente (intercambia cationes) o cargada
positivamente (intercambia aniones).

Las técnicas cromatográficas se clasifican según el fenómeno de separación, el estado

físico de las fases y según la forma como se desarrolla la cromatografía.
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1. Según el fenómeno de separación:

a) Cromatografía de adsorción
b) Cromatografía de reparto
c) Cromatografía de intercambio iónico
d) Cromatografía de permeación o filtración en gel

2. Según el estado físico de las fases:

F. estacionaria F. móvil
a) Cromatografía Sólido - Líquido (S-L)
b) Cromatografía Sólido - Gas (S-G)
c) Cromatografía Líquido - Líquido (L-L)
d) Cromatografía Líquido - Gas (L-G)

3. Según la forma como se desarrolle la cromatografía:

a) Cromatografía en papel (C.P.)
b) Cromatografía en capa delgada o capa fina (C.C.F. ó C.C.D.)
c) Cromatografía en columna (C.C.)

En esta sesión de laboratorio de Análisis Químico nos involucraremos con la

Cromatografía de capa fina o capa delgada (C.C.F. ó C.C.D.), también llamada T.L.C.
por su nombre en inglés Thin Layer Chromatography. En la C.C.D. la fase estacionaria
es una capa delgada de un adsorbente depositado sobre un soporte, a este conjunto
se le llama placa. Generalmente, las placas están formadas por gel de sílice u otro
material con propiedades adsorbente como; oxido de aluminio o alúmina (Al2O3), oxido
de magnesio (MgO), carbonato de calcio, carbón vegetal, celulosa, poliamidas entre
otros. Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la
identificación de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos,
se requerirán otras técnicas de revelado.

La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolvente, llamada eluyente, que se

mueve por la fase estacionaria por capilaridad, y compite por la sustancia retenida en
la fase estacionaria en base a la solubilidad de ella. Si la sustancia es retenida por
adsorción, entonces el solvente debe tener la capacidad de des-asorberla de la fase
estacionaria; esto ocurre si la fuerza de atracción hacia el solvente es mayor que la
fuerza de atracción hacia la fase estacionaria.

Eluyentes más comunes para cromatografía en capa fina:

- éter de petróleo - cloruro de metileno

- n-hexano - acetato de etilo
- ciclohexano - acetona
- tolueno - iso-propanol
- dietil-éter - etanol
- t-butil-éter - metanol
- cloroformo - ácido acético

La utilización acertada de esta serie, permite la selección de un buen solvente para la

cromatografía.
Reveladores más comunes para cromatografa en capa fina.
Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras
pueden revelarse mediante:
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a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria
impregnada con un indicador fluorescente (F 254 ó F366), el número que aparece como
subíndice nos muestra Ia longitud de onda de excitación del indicador utilizado.
b) La introducción de la placa en vapores de yodo
c) El rocío con una solución de agua/H2SO4 a 1:1 (dentro de un compartimiento
especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases). Después
calentar intensamente, por ejemplo, con una plancha de calentamiento hasta que
aparezcan los colores de las manchas de los compuestos en la placa.
d) Vainillina en ácido sulfúrico concentrado al 5% m/v.
e) Cloruro férrico (FeCl3) en ácido sulfúrico concentrado al 5% m/v

La distancia recorrida por un componente sobre la distancia recorrida por el solvente

se denomina relación de frente (Rf) y depende de las características propias del
componente, de la fase estacionaria, del solvente y de las condiciones en que se hace
la cromatografía.

Materiales y reactivos:

 Capilares alargados
 Vaso de precipitado de 50 mL.
 Probeta de 10 mL.
 7 placas de tamaño portaobjeto preparada con sílica gel (SiO 2) /grupo
 3 cámaras de saturación con tapa.
  Mezcla de colorantes lipofílicos.
 Solventes (éter de petróleo, benceno, tolueno, cloroformo y etanol, acetato de
etilo)
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Procedimiento

Selección del solvente. Siguiendo las indicaciones del profesor, cada grupo coloca
en una placa de cinco gotas separadas de la mezcla de colorantes con un capilar y
luego sobre cada mancha agrega con otro capilar un solvente diferente de manera
continua. El solvente que permita una mejor separación de los componentes de la
mezcla se selecciona como el solvente adecuado.

Desarrollo de la cromatografía. Conociendo el solvente adecuado se coloca en otra

placa aproximadamente a 1.0 cm del borde inferior una gota de la mezcla a separar.
Se introduce la placa en la cámara previamente saturada con el eluyente y se tapa
para que este se desplace verticalmente aproximadamente hasta un centímetro del
borde superior de la placa. Después de introducir la placa la cámara no se debe mover
ni destapar. Cuando llegue al borde se saca la placa, se marca la distancia donde
llegó el eluyente y se bordean las diferentes manchas de la mezcla. Luego se mide el
Rf de cada mancha. Este no debe ser mayor de 1 ni inferior a 0.

Efecto de la concentración. En otra placa, se aplican tres manchas de la mezcla a

separar de la siguiente manera: aplicación 1 = 1 vez el capilar de la mezcla, aplicación
2 = 3 veces el capilar de la mezcla y aplicación 3 = 8 veces el capilar de la mezcla.
Luego se pone en la cámara previamente saturada para su desarrollo hasta un
centímetro debajo del borde superior y observar el efecto de las diferentes
concentraciones.

Efecto de la fase móvil. En una placa, aplique la mezcla de colorantes entregada por
el profesor y desarrolle la cromtografía con una fase móvil mixta (mezcla de dos
solventes) indicada por su profesor.

Se reportan en una tabla, los diferentes solventes utilizados y los valores de Rf de cada
mancha. Igualmente el efecto observado al aumentar la concentración en los diferentes
compuestos a separar de la mezcla y se diagraman las cromatoplacas. Igualmente debe
discutir el comportamiento de las diferentes manchas relacionado con los tipos de
eluyentes o fases móviles. Sus conclusiones deben nacer de lo observado.

BIBLIOGRAFIA

  Manual “Introducción al análisis químico moderno”, Torrenegra Rubén,

Departamento de Química. Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad
 Javeriana.
 depa.pquim.unam.mx/~fercor/dqo/manuales/1311/p7.pdf
 organica1.org/1311/1311_6.pdf