SIKLUS SEL

A. PENJELASAN TENTANG SIKLUS SEL

Hal yang paling penting tentang fungsi siklus sel adalah membagi DNA

kromosom secara cermat dan memisahkan salinan DNA secara cermat ke dalam

sel anakan. Proses ini menggambarkan ke dua tahapan utama siklus sel, duplikasi

DNA terjadi pada fase S, yang membutuhkan waktu 10-12 jam dan separuh waktu

siklus sel di habiskan untuk fase ini pada hewan mamalia. Setelah fase S berakir,

terjadinya pemisahan organel sel dan kromosom, maka akan masuk ke tahap M,

yang memerlukan sedikit waktu(kurang dari 1 jam pada mamalia).

Kebanyakan sel membutuhkan waktu untuk tumbuh dan memperbesar

ukuran dari protein dan organel sel, yang mereka butuhkan untuk penggandaan

DNA dan membelah diri. Sebagian membutuhkan banyak waktu untuk tumbuh.

G1 antara fase M dan Fase S, fase G2 antara fase S dan mitosis. Siklus sel terdiri

dari 4 tahapan yaitu G1, S, G2 dan M. G1, S dan G2 disebut dengan interfase, di

dalam tubuh manusia yang selnya berkembang biak dibutuhkan 23 jam untuk

interfase dan 1 jam untuk fase M.

Sel membutuhkan waktu untuk memantau keadaan didalam dan diluar

sel untuk memastikan kondisi dan mempersipkan diri untuk fase S dan mitosis.

Pentingnya tahapan G1 ditentukan kondisi eksternal dan sinyal ekstraseluler dar

sel lain. Jika kondisi ektraseluler kurang mendukung contohnya keterlambatan

proses G1 dan pada saat itu akan masuk ke fase peristirahatan atau G0, disana

mereka bisa bertahan 1 hari, seminggu, atau bahkan 1 tahun sampai proliferasi

dilanjutkan kembali. Banyak sel ketika berada fase G0 mereka akan mati. Jika

kondisi ekstraseluler baik untuk tumbuh dan membelah diri, sel yang berada di G1
awal atau G0 menuju titik dekat akhir G1 yang dikenal sebagai start (Pada ragi)

atau titik restriction (pada sel mamalia). Setelah titik ini, sel akan melakukan

replikasi DNA, meskipun sinyal ektraseluler dan pertumbuhan sel akan

dihilangkan pada fase selanjutnya

Gambar 17-2. Proses mitosis dan pembagian sel (sitokinesis) secara

bersamaan termasuk kedalam fase M, fase M membutuhkan waktu
yang singkat dalam siklus sel. Berbeda dengan Fase M, pada interfase
membutuhkan waktu yang lama. Lima langkah mitosis, yang terjadi
perubahan biokimia sel dan terjadi peralihan dari metaphase ke
anaphase. Sel dapat berhenti pada metaphase sebelum titik peralihan,
tetapi ketika telah melewati titik peralihan sel terus ke akhir proses
mitosis dan sampai ke sitokinesis untuk memasuki interfase.
Replikasi DNA terjadi pada interfase. Bagian dari interfase yang
melakukan replikasi DNA disebut dengan fase S.
 Gambar 17-3. Beberapa tahapan siklus sel, sel akan tumbuh pada fase
interfase yang terdiri dari 3 tahapan: DNA replikasi terjadi fase S,
G1merupakan gap antara fase M dengan fase S, sedangkan G2 adalah
gap antara fase S dengan fase M. Pada fase M nukleus dan sitoplasma
membagi.
Sistem Kendali Siklus Sel Sama di Semua Eukariota

Beberapa hal yang perlu digaris bawahi tentang siklus sel, termasuk

membutuhkan waktu untuk penyelesaian siklus sel, antar satu sel dengan lainnya

sangat berbeda bahkan dalam organisme yang sama. Susunan dasar siklus sel dan

system pengendalinya, sama dalam setiap sel eukariotik. Protein merupakan yang

mengontrol siklus sel.

Sistem Pengendali Siklus Sel Bisa Dijelaskan Di Dalam Sel Ragi

Ragi kecil, jamur bersel tunggal yang mekanisme kontrol siklus sel

sangat mirip dengan kita. Dua spesies umumnya digunakan dalam studi

siklus sel. Pembelahan ragi Schizosaccharomyces pombe digunakan untuk

memproduksi bir afrika. Sel berbentuk batang yang tumbuh dengan perpanjangan

pada ujung-ujungnya. Pembelahan terjadi dengan pembentukan septum, atau sel

lempeng, di tengah batang (Gambar 17-4A). Tunas ragi Saccharomyces cerevisiae

digunakan oleh pembuat bir, serta oleh tukang roti sekarang. Sel oval yang

membagi dengan membentuk tunas, yang pertama kali muncul selama G1 dan

tumbuh terus sampai memisahkan dari sel induk setelah mitosis (Gambar 17-4B)
 Gambar 17-4. Perbandingan Pembelahan pada siklus sel ragi dengan tunas
ragi. (a) Pembelahan Schizosaccharomyces pombe, melalui tahapan
G1, S, G2 dan M. Mikrotubul dari benag-benang spindel terbentuk
didalam inti (hijau muda) dan menempel dengan kutup benang
spindel (hijau tua). Sel membelah membentuk sekat yang membagi
(disebut plate sel ) menjadi dua sel. Kromosom yang sudah membelah
(merah) dapat dilihat dengan jelas pada pembelahan ragi, tetapi
kurang jelas pada pembelahan tunas ragi. (B) ragi yang
perkembangannya normal pada fase G1 dan S tetapi pada fase G2
terjadi ketidak stabilan. Sebagai gantinya mikrotubul mulai
membentuk nukleus selama fase S.
Dua jenis ragi juga dimanfaatkan untuk mempelajari genetika. Mereka

bereproduksi dengan cepat seperti bakteri dan ukuran genom 1% lebih kecil dari

ukuran mamalia. Ragi ini bisa digunakan untuk manipulasi gen. dimana gen bisa

di hapus, digandakan atau diubah. Yang perlu diperhatikan gen ini tidak bisa

berkembang biak di dalam kondisi haploid, dimana hanya ada satu salinan gen

yang hadir didalam sel. Sel yang haploid, sangat mudah untuk diisolasi dan

mempelajari mutasi yang menonaktifkan gen.

Banyak penemuan tentang sistem kendali siklus sel yang dating dari

pencarian sistematik untuk mutasi ragi, menjadikan gen pengkode tidak aktif di

dalam siklus sel. Gen yang terkena mutasi disebut dengan cdcgenes (cell-division-

cycle genes). Banyak mutasi menyebabkan sel berhenti pada titik tertentu di siklus

sel, menunjukan bahwa produk dari gen normal diperlukan untuk sel melewati

titik ini.
 Gambar 17-5. Prilaku Cdc mutan pada kepekaan terhadap suhu, (A) pada
suhu rendah mutan toleran dan bisa membelah diri secara normal,
ditemukan disetiap tahapan siklus sel. (B) pada suhu tinggi,
merupakan suhu pembatas, dimana gen mutan berfungsi dengan tidak
normal, sel mutan akan lanjut berkembang sampai siklus hingga
tahapan tertentu dan sel tidak mampu menyelesaikannya, karena cdc
mutan masih melanjutkan pertumbuhan, sel mutan menjadi berukuran
yang tidak normal. Sebagai pembanding sel yang tidak mengalami
cdc, jika prosesnya tidak mencukupi perlu sepanjang siklus sel untuk
biosintesis dan pertumbuhan (seperti produksi ATP), berhenti secara
sembarangan pada tahap manapun ketika cadangan biokimia keluar
dari sel.
Pada tunas ragi, siklus sel bisa menangkap jenis ini yang terditeksi dan

dapat dilihat didalam sel, ada atau tidak adanya tunas dan ukuran tunas,

menandakan adanya mutan pada sel.

Gambar 17-6. Morfologi sel ragi yang

berkembang yang ditangkap oleh

cdc mutan, (A) Populasi normal sel
ragi yang berkembang biak, tunas
berubah ubah ukuran sesuai dengan
fase yang dilaluinya (B) cdc mutan
tumbuh dalam suhu yang
membatasi, cel menyelesaikan fase
anafase tetapi tidak selesai mitosis
dan sitokenesis, sebagai hasilnya
sel menjadi membesar
 B. KOMPONEN DARI
SISTEM KONTROL
SIKLUS SEL

Sistem Pengendalian siklus

sel pemicu utama

terjadinya Proses Siklus sel

Sebuah pusat

pengontrol memicu setiap proses dalam satu urutan rangkaian siklus sel (Gambar

17-13).

Gambar 17-13 proses yang penting di siklus sel seperti DNA Replikasi, mitosis
dan sitokinesis dicetuskan oleh system pengendali siklus sel. System pengendali
siklus sel ditunjukan pada gambar ini berada pada tengah, pengendali ini
mengawasi atau mengendalikan berputar searah jarum jam. Memicu proses yang
penting ketika mencapai titik tertentu di luar putaran.

Pada prinsipnya, seseorang dapat membayangkan bahwa sistem kontrol

yang paling dasar harus memiliki fitur berikut:

1. Sebuah jam, atau pengatur waktu yang mengarur setiap peristiwa pada

waktu tertentu, sehingga memberikan ketetapan waktu untuk

menyelesaikan setiap peristiwa atau setiap siklus.

 2. Sebuah mekanisme untuk memulai peristiwa dalam urutan yang benar,

masuk ke dalam mitosis, misalnya, selalu harus datang setelah replikasi

DNA.

3. Sebuah mekanisme untuk memastikan bahwa setiap peristiwa dipicu

hanya sekali per siklus.

4. Terdiri dari 2 bagian (on / off) tombol yang memicu peristiwa sampai

selesai, model yang permanen. Ini jelas akan menjadi bencana, misalnya,

jika peristiwa seperti pemadatan kromosom telah dimulai tetapi tidak

selesai.

5. Robustness/ketahanan adalah mekanisme cadangan untuk memastikan

bahwa siklus dapat bekerja dengan baik bahkan ketika terjadi kerusakan

sistem.

6. Kemampuan beradaptasi, sehingga perilaku sistem dapat dimodifikasi agar

sesuai dengan jenis sel tertentu atau kondisi lingkungan.

Sistem Pengontrol Dapat menghentikan Siklus sel pada pos pemeriksaan

Gambar 17-14. Checkpoint dalam

sistem kontrol siklus sel.
Informasi tentang penyelesaian
peristiwa siklus sel, serta sinyal
dari lingkungan, dapat
menyebabkan sistem kontrol
menangkap siklus tertentu di
pos-pos pemeriksaan. Pos-pos
pemeriksaan yang paling
menonjol terjadi pada lokasi
ditandai dengan kotak kuning.

Dalam kebanyakan sel ada beberapa titik dalam siklus sel, yang disebut

pos pemeriksaan, siklus dapat ditahan jika peristiwa sebelumnya belum selesai
(Gambar 17-14). Masuk ke mitosis dicegah, misalnya, ketika DNA replikasi tidak

lengkap, dan kromosom pemisahan mitosis tertunda jika beberapa kromosom

yang tidak benar melekat pada benang spindel.

Kemajuan melalui G1 dan G2 tertunda oleh mekanisme penghentian jika

DNA dalam kromosom rusak oleh radiasi atau bahan kimia. Penundaan tersebut

di pos pemeriksaan kerusakan DNA dan menyediakan waktu untuk DNA yang

rusak untuk diperbaiki, setelah sel-siklus dihentikan dan dilepaskan kembali

apabila DNA sudah diperbaiki dan menuju pada fase selanjutnya.

Pos pemeriksaan adalah titik yang sangat penting dalam siklus sel di mana

sistem kendali dapat diatur oleh sinyal ekstraseluler dari sel-sel lain. Sinyal-sinyal

yang dapat mendorong atau menghambat perkembangan sel untuk bertindak

mengatur perkembangan melalui sebuah pos pemeriksaan G1.

Pos pemeriksaan Umumnya Dioperasikan Karena Sinyal Intraseluler Negatif

Mekanisme Checkpoint seperti yang baru saja dijelaskan cenderung

bertindak karena sinyal intraseluler negative dalam penangkapan siklus sel,

daripada melalui penghapusan sinyal positif yang biasanya merangsang

perkembangan siklus sel.

Misalnya, pos pemeriksaan yang memantau penempelan kromosom ke

benang spindel. Jika sel memasuki anafase dan mulai untuk memisahkan

kromosom ke dalam sel anak terpisah sebelum semua kromosom tepat terpasang,

satu sel tidak menerima lengkap bagian kromosom, sedangkan anak lainnya

menerima dalam jumlah yang banyak. Sel mampu mendeteksi pemasangan dari

kromosom tidak terikat untuk mikrotubulus spindel. Dalam sebuah sel dengan

kromosom banyak, jika masing-masing kromosom mengirimkan sinyal positif ke

sistem control siklus sel setelah itu terpasang, lampiran dari kromosom terakhir

akan sulit untuk mendeteksi, karena akan ditandai dengan bagian perubahan

pecahan kecil dalam intensitas total sinyal “GO”. Di sisi lain, jika setiap

kromosom terikat mengirimkan negatif sinyal untuk menghambat kemajuan

melalui siklus sel, lampiran dari kromosom terakhir akan mudah terdeteksi karena

akan menyebabkan perubahan dari sinyal “stop” ke tidak ada sinyal . Argumen

yang sama akan berarti bahwa tidak terjadinya replikasi DNA menghambat

inisiasi mitosis, menciptakan sinyal berhenti untuk bertahan sampai selesainya

replikasi DNA.

Bukti paling meyakinkan bahwa pos pemeriksaan beroperasi melalui

negative sinyal berasal dari penelitian sel di mana pos pemeriksaan tidak aktif

oleh mutasi atau pengobatan kimia. Dalam sel, siklus sel terus berkembang

bahkan jika replikasi DNA atau perakitan spindel tidak lengkap, menunjukkan

bahwa pos pemeriksaan umumnya tidak penting untuk perkembangan siklus sel.

Pos pemeriksaan dilihat sebagai sistem pemberhentian, yang telah ditambahkan ke

sistem pengendalian siklus sel untuk memberikan bentuk aturan yang lebih

canggih.

Meskipun sebagian besar pos pemeriksaan tidak penting perkembangan

normal sel-siklus, pada pos pemeriksaan sering mendeteksi populasi sel dengan

penumpukan mutasi akibat kegagalan dalam replikasi DNA, Perbaikan DNA, atau

perakitan spindle.

Sistem Pengendalian siklus sel Berdasarkan Siklus yang Diaktifkan Protein

Kinase
 Pusat sistem kontrol siklus sel adalah keluarga protein kinase

dikenal sebagai cyclin-dependent kinase (Cdks). Kegiatan kinase naik dan turun

seperti perkembangan sel yang berlangsung selama siklus.

Perubahan siklus pada aktivitas Cdk dikendalikan oleh susunan kompleks

enzim dan protein lainnya. Yang paling penting dari regulator protein Cdk dikenal

sebagai cyclin. Cdks tergantung pada cyclin untuk aktivitasnya: kecuali mereka

terikat erat ke cyclin, mereka memiliki aktivitas protein kinase (Gambar 17-15).

Gambar 17-15. Dua komponen kunci dari sistem kontrol sel-siklus. A kompleks
cyclin dengan Cdk bertindak sebagai protein
kinase untuk memicu cellcycle tertentu
peristiwa. Tanpa cyclin, Cdk tidak aktif.

Siklin awalnya bernama seperti itu karena mereka menjalani siklus sintesis

dan degradasi dalam setiap siklus sel. Level Cdk konstan dalam siklus sel

sederhana. Perubahan kadar cyclin pada siklus mengakibatkan perakitan siklik

dan aktivasi cyclin-Cdk kompleks, pada akhirnya memicu aktivasi peristiwa

siklus sel (Gambar 17-16).

 Gambar 17-16. Pandangan
disederhanakan inti dari sistem kontrol
sel-siklus. Cdk rekan berturut-turut
dengan siklin yang berbeda untuk
memicu berbeda peristiwa siklus. Cdk
kegiatan biasanya diakhiri oleh degradasi
cyclin.
Untuk mempermudah, hanya
siklin yang bertindak di fase S (S-cyclin)
dan M fase (Mcyclin) ditampilkan, dan
mereka berinteraksi dengan Cdk tunggal,
seperti yang ditunjukkan, yang sehingga
cyclin-Cdk kompleks yang disebut
sebagai S-Cdk dan M-Cdk, masing.

Ada empat kelas siklin, masing-masing ditentukan oleh tahap siklus sel

pada yang mereka mengikat Cdks dan fungsi. Tiga dari kelas-kelas yang

diperlukan dalam semua eukariotik sel:

1. G1/ S-siklin mengikat Cdks pada akhir G1 dan berkomitmen sel DNA

replikasi.

2. S-siklin mengikat Cdks selama fase S dan diperlukan untuk inisiasi

DNA replikasi.

3. M-siklin mempromosikan peristiwa mitosis.

Dalam kebanyakan sel, kelas keempat siklin, G1-siklin, membantu

mempromosikan bagian melalui Start atau titik pembatasan dalam G1 akhir.

Nama-nama Cdks individu dan siklin diberikan dalam Tabel 17-1.

 Bagaimana kompleks cyclin-Cdk yang berbeda mendorong peristiwa

siklus sel? Jawabannya, tampaknya bahwa protein cyclin tidak hanya

mengaktifkan pasangan Cdk, tetapi juga mengarahkan ke protein target tertentu.

Sebagai akibatnya, masing-masing cyclin-Cdk kompleks phosphorylates substrat

protein yang berbeda. Kompleks cyclin-Cdk yang sama juga dapat menimbulkan

efek yang berbeda pada waktu yang berbeda dalam siklus, mungkin karena

aksesibilitas beberapa substrat Cdk berubah selama siklus sel. Beberapa protein

yang berfungsi dalam mitosis, misalnya, dapat menjadi tersedia untuk fosforilasi

hanya di G2.

Studi dari tiga-dimensi struktur protein Cdk dan cyclin

mengungkapkan bahwa, dengan tidak adanya cyclin, situs aktif dalam protein

Cdk, sebagian terhalang oleh lempengan protein (Gambar 17-17A). Pengikatan

Cyclin menyebabkan lempeng menjauh dari situs aktif, sehingga aktivasi sebagian

dari enzim Cdk (Gambar 17-17B). Aktivasi penuh dari cyclin-Cdk kompleks

terjadi ketika kinase yang terpisah, Cdk-activating kinase (CAK),

phosphorylates asam amino dekat pintu masuk situs Cdk aktif. Hal ini

menyebabkan perubahan konformasi kecil yang selanjutnya akan meningkatkan

aktivitas Cdk, memungkinkan kinase untuk memfosforilasi protein target secara

efektif dan dengan demikian menginduksi spesifik sel-siklus peristiwa

(Gambar 17-17C).

Gambar 17-17. Dasar struktural aktivasi Cdk. Gambar-gambar didasarkan

pada tiga-dimensi struktur manusia CDK2, sebagaimana ditentukan oleh x-ray
kristalografi. Lokasi ATP terikat ditunjukkan. Enzim ditunjukkan di tiga negara.
(A) Dalam keadaan tidak aktif, tanpa terikat cyclin, situs aktif diblokir oleh daerah
dari protein yang disebut T-loop (merah). (B) The mengikat cyclin menyebabkan
T-loop untuk keluar dari situs aktif, sehingga aktivasi parsial dari CDK2. (C)
Fosforilasi CDK2 (oleh CAK) pada residu treonin di T-loop lebih mengaktifkan
enzim dengan mengubah bentuk T-loop, meningkatkan kemampuan enzim untuk
mengikat substrat proteinnya.

Aktivitas Cdk Bisa Ditekan Oleh Foforilasi Penghambat dan Protein

Penghambat.

Naik turunnya kadar cyclin adalah penentu utama kegiatan Cdk selama

siklus sel. Beberapa mekanisme tambahan, penting untuk fine-tuning aktivitas

Cdk pada tahap tertentu dalam siklus sel. Aktivitas kompleks cyclin-Cdk dapat

dihambat oleh fosforilasi pada sepasang asam amino di atap sisi aktif. Fosforilasi

sisi ini oleh protein kinase dikenal sebagai Wee1 yang menghambat aktivitas Cdk,

sementara defosforilasi dari sisi ini oleh fosfatase dikenal sebagai Cdc25 yang

meyebabkan aktivitas Cdk meningkat (Gambar 17-18).

Kita akan lihat nanti bahwa mekanisme pengaturan ini sangat penting

dalam pengendalian akivitas M-Cdk pada awal mitosis. Kompleks Cyclin-Cdk

juga dapat diatur oleh pengikatan protein Cdk inhibitor (CKIs). Ada beberapa

protein CKI, yang terutama digunakan dalam kontrol fase G1 dan S. Struktur tiga

dimensi dari cyclin-Cdk-komplek CKI menunjukkan bahwa CKI mengikat secara

dramatis mengatur ulang struktur sisi aktif Cdk, membuatnya tidak aktif (Gambar

17-19).
Gambar 17-18. Pengaturan aktivitas Cdk oleh fosforilasi penghambatan.
Kompleks cyclin-Cdk aktif dimatikan
ketika kinase Wee1 memfosforilasi dua
sisi yang berdekatan di atas sisi aktif.
Penghapusan fosfat oleh fosfatase Cdc25
hasil aktivasi dari kompleks cyclin-Cdk.
Untuk sederhananya, hanya satu fosfat
penghambatan ditampilkan. Fosfat
pengaktif ditambahkan oleh CAK,
seperti yang ditunjukkan pada Gambar
17-17.

Gambar 17-19. CKI merupakan penghambat kompleks cyclin-Cdk. Gambar

ini didasarkan pada struktur tiga
dimensi dari kompleks cyclin
Cdk2 manusia yang terikat pada
CKI p27 sebagaimana ditentukan
oleh kristalografi x-ray. p27
mengikat cyclin dan komplek
Cdk, mendistorsi sisi aktif Cdk
tersebut. p27 juga masuk ke
dalam sisi pengikat ATP,
akhirnya menghambat aktivitas
enzim.
Sistem Kontrol Siklus Sel Tergantung Pada Proteolisis
Kontrol siklus sel sangat bergantung pada setidaknya dua kompleks enzim

yang berbeda yang bertindak pada waktu yang berbeda dalam siklus untuk

menyebabkan proteolisis protein kunci dari sistem kontrol siklus sel, sehingga

menonaktifkan mereka. Terutama, komplek cyclin-Cdk yang tidak aktif oleh

proteolisis yang diregulasi siklin pada tahap siklus sel tertentu. Kerusakan cyclin

ini terjadi oleh mekanisme yang bergantung pada ubiquitin, seperti yang terlibat

dalam proteolisis banyak protein intraseluler lainnya. Sebuah kompleks enzim

diaktifkan untuk mengenali urutan spesifik asam amino pada siklin dan

melekatkan beberapa salinan ubiquitin, menandai protein tersebut untuk

penghancuran lengkap di proteasomes.

 Pembatasan laju dalam tahap kehancuran cyclin adalah reaksi akhir

transfer ubiquitin yang dikatalisis oleh enzim yang dikenal sebagai ligases

ubiquitin (lihat Gambar 6-87B). Dua ligases ubiquitin penting dalam

penghancuran siklin dan regulator siklus sel lainnya. Dalam G1 dan fase S,

sebuah kompleks enzim yang disebut SCF bertanggung jawab atas ubiquitylation

dan perusakan G1/S-cyclins dan beberapa protein CKI yang mengontrol inisisai

fase S. Dalam fase M, anaphase promoting complex (APC) bertanggung jawab

atas ubiquitylation dan proteolisis dari M-cyclin dan regulator mitosis lainnya.

Kedua kompleks multisubunit besar mengandung beberapa komponen

terkait, tetapi mereka diatur dengan cara yang berbeda. Aktivitas SCF konstan

selama siklus sel. Ubiquitylation oleh SCF dikendalikan oleh perubahan keadaan

fosforilasi protein target: hanya fosforilasi protein khusus yang dikenali,

diubiquity, dan dihancurkan (Gambar 17-20A). Aktivitas APC, sebaliknya,

berubah pada berbagai tahap siklus sel. APC dihidupkan terutama oleh

penambahan subunit pengaktif ke (Gambar 17-20B) kompleks. Kita akan

membahas fungsi SCF dan APC dengan lebih rinci nanti.

Gambar 17-20. Pengendalian proteolisis oleh SCF dan APC selama siklus sel.
(A) fosforilasi protein target, seperti ditampilkan yaitu CKI,
memungkinkan protein yang akan dikenali oleh SCF, yang secara
konstitutif aktif. Dengan bantuan dari dua protein tambahan yang
disebut E1 dan E2, SCF berfungsi sebagai ligase ubiquitin yang
mentransfer beberapa molekul ubiquitin ke protein CKI. Protein CKI
ubiquitylated kemudian segera dikenali dan terdegradasi dalam
proteasome. (B) M-cyclin ubiquitylation dilakukan oleh APC, yang
diaktifkan dalam mitosis akhir dengan penambahan suatu subunit
pengaktivasi ke kompleks. Kedua SCF dan APC berisi situs pengikat
yang mengenali sekuens asam amino tertentu dari protein target.

Kontrol Siklus Sel juga Tergantung Pada Pengaturan Transkripsi

Kontrol siklus sel bergantung secara eksklusif pada mekanisme pasca-

transkripsi yang melibatkan regulasi aktivitas Cdk oleh fosforilasi dan pengikatan
protein pengaturan seperti siklin, yang dengan sendirinya diatur oleh proteolisis.

Dalam siklus sel lebih kompleks, kontrol transkripsi memberikan tambahan

tingkat regulasi. Kadar cyclin di sebagian besar sel dikendalikan tidak hanya oleh

perubahan degradasi cyclin tetapi juga oleh perubahan transkripsi gen cyclin dan

sintesis cyclin.

C. KONTROL INTRASELULER DARI PERISTIWA SIKLUS SEL

S-Phase cyclin-Cdk Kompleks (S-Cdks) Memulai Replikasi DNA Sekali Per

Siklus
Sebuah sel harus memecahkan beberapa masalah dalam mengendalikan

inisiasi dan penyelesaian replikasi DNA. Tidak hanya harus replikasi terjadi

dengan akurasi ekstrim untuk meminimalkan risiko mutasi pada generasi sel

berikutnya, tapi setiap nukleotida dalam genom harus disalin sekali, dan hanya

sekali, untuk mencegah efek merusak dari amplifikasi gen.

Sistem kontrol siklus sel memulai proses replikasi dan pada saat yang

sama mencegah hal itu terjadi lebih dari sekali per siklus. Petunjuk awal tentang

pengaturan fase S berasal dari studi di mana sel-sel manusia di berbagai tahapa

siklus sel yang bergabung untuk membentuk sel tunggal dengan dua inti.

Percobaan ini menunjukkan bahwa ketika sel G1 menyatu dengan sel Sphase,

replikasi DNA terjadi di dalam inti G1 (mungkin dipicu oleh S-Cdk aktivitas di

sel S-fase). Perpaduan dari sel G2 dengan sel S-fase, bagaimanapun, tidak

menyebabkan sintesis DNA dalam inti G2 (Gambar 17-21).

Gambar 17-21. Bukti dari eksperimen fusi sel untuk menghalangi
rereplication. Percobaan ini dilakukan pada tahun 1970 dalam kultur sel
mamalia. (A) Hasil penelitian menunjukkan bahwa S-fase sitoplasma
mengandung faktor yang mendorong inti G1 langsung ke sintesis DNA.
(B) Sebuah inti G2, setelah direplikasi DNA-nya, refrakter terhadap
faktor-faktor. (C) Penggabungan dari sel G2 dengan sel G1 tidak
mendorong inti G1 ke sintesis DNA, menunjukkan bahwa faktor
sitoplasma yang ada untuk replikasi DNA dalam sel fase S hilang ketika
sel bergerak dari fase S ke G2. (Diadaptasi dari RT dan Johnson, PN Rao,
Nature 226:717 722 1970.)

Studi ini memberikan petunjuk yang jelas bahwa sel-sel G1 hanya

kompeten untuk memulai replikasi DNA dan sel-sel yang telah menyelesaikan

fase S (yaitu G2 sel) tidak mampu rereplicate DNA mereka, bahkan ketika

dilengkapi dengan S-Cdk aktivitas. Ternyata, perjalanan melalui mitosis

diperlukan untuk sel untuk memperoleh kembali kemampuan untuk menjalani

fase S.

Replikasi DNA dimulai pada origin of replication, yang tersebar di

berbagai lokasi di kromosom. Asal replikasi sederhana dan didefinisikan dengan

baik pada tunas jamur S. cerevisiae, dan sebagian besar pemahaman kita tentang

mesin inisiasi berasal dari studi organisme ini. Analisis protein yang mengikat

replikasi origin jamur telah diidentifikasi yaitu sebuah kompleks multiprotein

besar yang dikenal sebagai origin recognition complex (ORC). Kompleks ini
berikatan dengan replikasi origin sepanjang siklus sel dan berfungsi sebagai

landasan pendaratan untuk beberapa protein pengaturan tambahan.

Salah satu dari protein pengaturan ini adalah Cdc6. Cdc6 hadir pada

tingkat rendah selama sebagian besar dari siklus sel tetapi meningkatkan secara

sementara di G1 awal. Cdc6 berikatan dengan ORC pada asal replikasi di G1

awal, dimana diperlukan untuk pengikatan kompleks yang terdiri dari suatu

kelompok protein yang terkait erat, protein Mcm. Kompleks protein yang

dihasilkan besar, dibentuk pada origin yang dikenal sebagai prereplicative

compleks, atau pra-RC (Gambar 17-22).

Gambar 17-22. Inisiasi replikasi DNA sekali per siklus sel. ORC tetap
berhubungan dengan replikasi origin sepanjang siklus sel. Pada G1 awal,
Cdc6 berasosiasi dengan ORC. Dibantu oleh Cdc6, kompleks cincin Mcm
 kemudian berikatan dengan DNA yang berdekatan, sehingga terjadi
pembentukan kompleks prereplicative. S-Cdk (dengan bantuan dari
protein kinase lain, tidak ditampilkan) kemudian memicu penembakan
origin, perakitan polimerase DNA dan replikasi protein lainnya dan
mengaktifkan cincin protein Mcm untuk bermigrasi sepanjang untai DNA
sebagai helicases DNA. S-Cdk juga menghalangi rereplication dengan
menyebabkan pemisahan Cdc6 dari origin, mendegradasi, dan mengekspor
semua kelebihan Mcm keluar inti. Cdc6 dan Mcm tidak dapat melanjutkan
kembali replikasi DNA sampai M-Cdk telah dinonaktifkan pada akhir
mitosis (lihat teks).

Setelah pra-RC dirakit di G1, replikasi origin siap untuk tembakan.

Aktivasi S-Cdk di G1 akhir menarik pemicu dan memulai replikasi DNA. Inisiasi

replikasi juga membutuhkan aktivitas protein kinase kedua, yang bekerja sama

dengan S-Cdk menyebabkan fosforilasi ORC. S-Cdk tidak hanya memulai

menembakkan origin, tetapi juga membantu mencegah rereplication dalam

beberapa cara. Pertama, hal itu menyebabkan protein Cdc6 untuk memisahkan

dari ORC setelah origin ditembakkan. Ini hasil dari pembongkaran pra-RC, yang

mencegah replikasi terjadi lagi di origin yang sama. Kedua, mencegah protein

Cdc6 dan Mcm merangkai kembali pada origin lainnya. Fosforilasi Cdc6, memicu

ubiquitylation Cdc6 oleh kompleks enzim SCF. Akibatnya, setiap protein Cdc6

yang tidak terikat dengan origin akan terdegradasi dalam proteasomes. S-Cdk juga

memfosforilasi protein Mcm tertentu, yang memicu ekspor mereka dari inti,

selanjutnya memastikan bahwa kompleks protein Mcm tidak dapat mengikat

replikasi origin (lihat Gambar 17-22).

Aktivitas S-Cdk tetap tinggi selama G2 dan awal mitosis, mencegah

rereplication yang terjadi setelah selesainya fase S. M-Cdk juga membantu

memastikan rereplication yang tidak terjadi selama mitosis dengan memfosforilasi

protein Cdc6 dan Mcm. G1/S-Cdks membantu juga, dengan menginduksi ekspor
Mcm dari inti, memastikan bahwa kelebihan protein Mcm yang belum terikat ke

origin di G1 akhir dibawa keluar dari aktivitas sebelum replikasi dimulai. Dengan

demikian, beberapa kompleks cyclin-Cdk bekerja sama untuk menahan perakitan

pra-RC dan mencegah rereplication DNA setelah fase S.

Sistem kontrol siklus sel terulang kembali untuk memungkinkan replikasi

terjadi dalam siklus sel berikutnya karena pada akhir mitosis, semua aktivitas Cdk

dalam sel dikurangi menjadi nol. Hasil dari defosforilasi Cdc6 dan protein Mcm

memungkinkan perakitan pra-RC terjadi sekali lagi, menyiapkan kromosom untuk

putaran baru dari replikasi.

Aktivasi dari M-Phase cyclin-Cdk Komplexs (MCdks) Memicu Masuk ke

Mitosis
Peristiwa mitosis yang dipicu oleh M-Cdk, yang diaktifkan setelah fase S

selesai. Aktivasi M-Cdk dimulai dengan akumulasi M-cyclin (cyclin B dalam sel

vertebrata, lihat Tabel 17-1). Dalam siklus sel embrio, sintesis M-cyclin konstan

sepanjang siklus sel, dan hasil akumulasi M-cyclin berasal dari penurunan

degradasi.

Pada kebanyakan jenis sel, sintesis Mcyclin meningkat selama G2 dan M,

terutama untuk peningkatan M-cyclin transkripsi gen. Peningkatan protein M-

cyclin mengarah ke akumulasi bertahap dari M-Cdk (kompleks Cdk1 dan M-

cyclin) sebagai pendekatan sel mitosis. Meskipun Cdk dalam kompleks

difosforilasi pada sisi aktif oleh enzim CAK, itu terjadi pada keadaan yang tidak

aktif oleh fosforilasi hambat di dua sisi tetangga oleh protein kinase Wee1 (lihat

Gambar 17-18). Dengan demikian, pada saat sel mencapai akhir G2, berisi

persediaan melimpah dari M-Cdk yang prima dan siap untuk bertindak, namun
aktivitas M-Cdk ini ditekan oleh kehadiran dua kelompok fosfat yang memblokir

situs aktif dari kinase.

Peristiwa yang sangat penting adalah aktivasi pada akhir G2 dari fosfatase,

protein Cdc25 yang menghilangkan fosfat penghambatan yang menahan M-Cdk

(Gambar 17-23). Pada saat yang sama, aktivitas inhibisi kinase Wee1 juga

ditekan, selanjutnya memastikan bahwa aktivitas M-Cdk meningkat secara tiba-

tiba. Dua protein kinase mengaktifkan Cdc25. Satu, yang dikenal sebagai Polo

kinase, phosphorylates Cdc25 pada satu set sisi. Kinase pengaktif lainnya adalah

M-Cdk sendiri, yang memfosforilasi sisi yang berbeda di Cdc25. M-Cdk juga

memfosforilasi dan menghambat Wee1. Kemampuan M-Cdk untuk mengaktifkan

aktivatornya sendiri (Cdc25) dan menghambat inhibitor sendiri (Wee1)

menunjukkan bahwa aktivasi M-Cdk dalam mitosis melibatkan umpan balik yang

positif (lihat Gambar 17-23).

Gambar 17-23. Aktivasi M-Cdk. Cdk1 berasosiasi dengan M-cyclin sehingga

kadar M-cyclin perlahan naik. Kompleks M-Cdk yang dihasilkan
terfosforilasi pada sisi aktif oleh kinase pengaktif Cdk (CAK) dan
sepasang situs penghambatan oleh kinase Wee1. Kompleks M-Cdk tidak
aktif yang dihasilkan kemudian diaktifkan pada akhir G2 oleh fosfatase
Cdc25. Cdc25 dirangsang sebagian oleh Polo kinase. CDC25 selanjutnya
dirangsang oleh aktif M-Cdk, menghasilkan umpan balik positif. Umpan
balik ini ditingkatkan oleh kemampuan M-Cdk untuk menghambat WeeI
Masuk ke Mitosis Dihambat oleh Replikasi DNA yang tidak lengkap:
Checkpoint Replikasi DNA
Jika sel didorong ke mitosis sebelum selesai mereplikasi DNAnya, ia akan

mewariskan set rusak atau kromosom yang tidak lengkap ke sel anaknya. Bencana

ini dihindari di sebagian besar sel dengan mekanisme checkpoint replikasi DNA,

yang menjamin bahwa inisiasi mitosis tidak dapat terjadi sampai nukleotida

terakhir di genom telah disalin. Sensor mekanisme, molekul alami yang tidak

diketahui, mendeteksi dengan baik DNA yang belum direplikasi dan mengirim

sinyal negatif ke sistem kontrol siklus sel, menghalangi aktivasi M-Cdk.

Dengan demikian, sel-sel normal diobati dengan inhibitor kimia sintesis

DNA, seperti hidroksiurea, tidak beranjak ke mitosis. Jika mekanisme checkpoint

rusak, seperti dalam sel ragi dengan mutasi tertentu atau dalam sel mamalia

diobati dengan dosis tinggi kafein, sel terjun ke dalam mitosis bunuh diri

meskipun gagal untuk menyelesaikan replikasi DNA (Gambar 17-24). Sasaran

akhir dari sinyal checkpoint negatif adalah enzim yang mengontrol aktivasi M-

Cdk. Sinyal negatif mengaktifkan protein kinase yang menghambat protein

fosfatase Cdc25 (lihat Gambar 17-18 dan 17-23). Akibatnya, MCdk tetap

terfosforilasi dan aktif sampai replikasi DNA selesai.

Gambar 17-24. Pos pemeriksaan replikasi DNA. Dalam percobaan yang

digambarkan sini, sel-sel mamalia dalam kultur diobati dengan kafein dan
 hidroksiurea, baik sendiri atau dalam kombinasi. Hydroxyurea
menghalangi sintesis DNA. Penghambatan ini mengaktifkan mekanisme
checkpoint yang penahanan sel dalam fase S, mitosis tertunda. tetapi jika
kafein dan hidroksiurea ditambahkan, mekanisme checkpoint gagal, dan
sel melanjutkan ke mitosis sesuai dengan jadwal normal mereka, dengan
replikasi DNA yang tidak sempurna. Akibatnya, sel-sel mati.

M-Cdk Mempersiapkan Penggandaan Kromosom untuk Pembelahan

Salah satu karakteristik yang paling luar biasa dari kontrol siklus sel

adalah protein kinase tunggal, M-Cdk, yang mampu membawa semua penyusun

ulang beragam dan kompleks yang terjadi pada tahap awal mitosis. M-Cdk harus

mendorong perakitan spindel mitosis dan memastikan bahwa kromosom yang

bereplikasi menempel pada spindel. Pada kebanyakan organisme, M-Cdk juga

memicu kondensasi kromosom, kerusakan membran inti, penataan ulang aktin

sitoskeleton, dan reorganisasi aparatus Golgi dan retikulum endoplasma. Masing-

masing kejadian diduga dipicu ketika M-Cdk memfosforilasi struktur tertentu

atau protein regulasi yang terlibat dalam kegiatan tersebut, meskipun sebagian

besar dari protein ini belum diidentifikasi.

Kerusakan dari membran inti, misalnya, memerlukan pembongkaran

lapisan dasar lamina inti yaitu filamen Lamin terpolimerisasi yang memberikan

struktur kaku membran inti. Fosforilasi langsung protein Lamin oleh M-Cdk hasil

depolimerisasinya, merupakan langkah awal yang penting dalam pembongkaran

membran (lihat Gambar 12-21).

Kondensasi kromosom juga tampaknya menjadi konsekuensi langsung

dari fosforilasi oleh M-Cdk. Sebuah kompleks lima protein, yang dikenal sebagai

kompleks condensin, diperlukan untuk kondensasi kromosom pada embrio

Xenopus. Setelah M-Cdk difosforilasi beberapa subunit pada kompleks, dua dari

subunit mampu mengubah struktur melingkar molekul DNA dalam tabung reaksi.
Diperkirakan bahwa kegiatan melingkar (coiling) penting untuk kondensasi

kromosom selama mitosis.

Fosforilasi oleh M-Cdk juga memicu penyusunan ulang mikrotubulus

kompleks dan peristiwa lain yang menyebabkan perakitan gelendong mitosis.

Seperti dibahas dalam Bab 18, M-Cdk diketahui memfosforilasi sejumlah protein

yang mengatur sifat mikrotubulus, menyebabkan peningkatan ketidakstabilan

mikrotubulus yang diperlukan untuk perakitan spindel.

Pemisahan Sister Kromatid dipicu oleh Proteolysis.

Setelah M-Cdk memicu penyusunan ulang kompleks yang terjadi pada

mitosis awal, siklus sel mencapai puncaknya dengan pemisahan sister kromatid

pada transisi metafase-ke-anafase. Meskipun aktivitas M-Cdk menyiapkan tahap

untuk peristiwa ini, sebuah kompleks enzim yang berbeda yakni anaphase-

promoting complex (APC) yang memulai pemisahan sister kromatid. APC

sangat diatur ligase ubiquitin yang mendorong penghancuran beberapa regulasi

protein mitosis (lihat Gambar 17-20B).

Keterikatan dari dua sister kromatid ke kutub yang berlawanan oleh

gelendong mitotik hasil mitosis awal dalam kekuatan cenderung menarik dua

kromatid terpisah. Kekuatan menarik ini pada awalnya menolak karena sister

kromatid terikat erat bersama-sama, baik di sentromer dan sepanjang lengan

mereka. Kohesi sister-kromatid tergantung pada kompleks protein, kompleks

kohesi, yang disimpan di sepanjang kromosom ketika digandakan dalam fase S.

Protein cohesin (cohesins) berkaitan erat dengan protein kompleks condensin

terlibat dalam kondensasi kromosom, menyarankan asal evolusi yang sama untuk

dua proses.
 Anafase dimulai dengan gangguan tiba-tiba pada kohesi antara sister

kromatid, yang memungkinkan mereka untuk pemisahan dan pindah ke kutub

yang berlawanan dari poros. Proses ini dimulai oleh kaskade penanda dari

peristiwa sinyal. Pemisahan sister kromatid membutuhkan aktivasi enzim

kompleks APC, mendorong proteolisis yang merupakan pusat proses (Gambar 17-

25). Target yang relevan dari APC adalah protein securin. Sebelum anafase,

mengamankan ikatan dan menghambat aktivitas protease disebut separase.

Penghancuran securin pada akhir metafase melepaskan separase, yang kemudian

bebas untuk membelah salah satu subunit dari kompleks cohesin. Dalam sekejap,

kompleks kohesi menjauh dari kromosom, dan sister kromatid terpisah (Gambar

17-26).

Gambar 17-25: Dua percobaan yang menunjukkan kebutuhan akan

degradasi protein untuk keluar dari mitosis. (A) Sebuah inhibitor
APC telah ditambahkan ke ekstrak telur katak menjalani mitosis in vitro
(lihat Gambar 17-9). Inhibitor mitosis ditangkap di metafase,
menunjukkan proteolitik yang diperlukan untuk pemisahan sister
kromatid pada transisi metafase-ke-anafase. Sebuah penangkapan yang
sama terjadi pada ragi kuncup dengan mutasi pada komponen APC. (B)
Suatu bentuk mutan nondegradable dari M-cyclin telah ditambahkan ke
ekstrak telur mitosis katak. Selain ini ditangkap mitosis setelah
pemisahan sister kromatid, menunjukkan bahwa penghancuran M-
cyclin tidak diperlukan untuk pemisahan sister kromatid, melainkan
diperlukan untuk keluar dari mitosis berikutnya. (Berdasarkan SL
Holloway et al, sel 73:1393 1402., 1993).
Aktivasi APC membutuhkan Cdc20 protein, yang mengikat dan

mengaktifkan APC di mitosis (lihat Gambar 17-26 dan 17-20B). Setidaknya dua
proses yang mengatur Cdc20 dan ini berhubungan dengan APC. Pertama,

meningkatkan sintesis Cdc20 sebagai sel pendekatan mitosis, karena peningkatan

transkripsi gen. Kedua, fosforilasi APC membantu Cdc20 mengikat APC,

sehingga membantu untuk menciptakan sebuah kompleks yang aktif.

Gambar 17-26. Pemisahan sister kromatid dipicu oleh APC. Aktivasi APC
oleh Cdc20 mengarah ke ubiquitylation dan penghancuran securin, yang
biasanya menahan separase dalam keadaan tidak aktif. Kehancuran
securin memungkinkan separase untuk membelah subunit kompleks
cohesin yang mengikat sister kromatid. Kekuatan menarik dari
gelendong mitosis kemudian menarik kromatid kakak terpisah. Dalam
kuncup ragi setidaknya, pembelahan cohesin oleh separase difasilitasi
oleh fosforilasi kompleks cohesin yang berdekatan dengan tempat
pembelahan, tepat sebelum anafase dimulai. Fosforilasi ini dimediasi
oleh Polo kinase dan memberikan kontrol tambahan pada waktu transisi
metafase-ke-anafase.
Kromosom yang lepas menghalangi pemisahan sister kromatid: Checkpoint
spindle.
Sel tidak mempersiapkan dirinya untuk peristiwa anafase sebelum

sepenuhnya siap. Pada kebanyakan sel, mekanisme pemeriksaan spindle

beroperasi untuk memastikan bahwa semua kromosom benar melekat pada

poros/spindle sebelum pemisahan sister kromatid terjadi. Checkpoint tergantung

pada mekanisme sensor yang memantau keadaan kinetokor, wilayah khusus dari

kromosom yang melekat ke mikrotubulus pada spindle. Setiap kinetokor yang

tidak benar melekat pada spindle mengirimkan sinyal negatif ke sistem kontrol

siklus sel, memblokir aktivasi Cdc20-APC dan pemisahan sister kromatid.

Gambar 17-27. Protein Mad2 pada kinetochores yang tidak terikat.

Mikrograf fluoresensi ini menunjukkan sel mamalia di prometaphase, dengan
gelendong mitosis di hijau dan sister kromatid dengan warna biru. Salah satu
pasangan sister kromatid belum melekat pada spindle. Kehadiran Mad2 pada
kinetokor dari kromosom tidak terikat dijelaskan dengan pengikatan antibodi
anti-Mad2 (red dot, ditunjukkan oleh panah merah). Kromosom lain baru saja
melekat pada spindle, dan kinetokor yang memiliki tingkat rendah Mad2
masih terhubung dengan itu (Titik pucat, ditunjukkan oleh panah putih). (Dari
JC Waters et al, J. sel Biol.., 141:1181 1.191 1.998 © The Rockefeller
University Press..)

Sifat alami dari sinyal yang dihasilkan oleh kinetokor yang tidak terikat

tidak jelas, meskipun beberapa protein, termasuk Mad2, yang direkrut untuk

kinetochores tak terikat dan diperlukan untuk pos pemeriksaan spindle supaya

berfungsi. Bahkan kinetokor tunggal tidak terikat dalam sel hasil pengikatan

Mad2 dan penghambatan aktivitas Cdc20-APC dan penghancuran Securin

(Gambar 17-27). Jadi, pemisahan sister kromatid tidak dapat terjadi sampai

kinetokor terakhir melekat.

Keluar dari Mitosis Membutuhkan Inaktivasi M-Cdk

Setelah kromosom telah dipisahkan ke kutub, sel harus membalikkan

perubahan kompleks mitosis awal. Spindle harus dibongkar, kromosom

didecondensasi, dan membran nukleus direformasi. Karena dari fosforilasi

berbagai protein bertanggung jawab untuk menempatkan sel-sel dalam mitosis

pada awalnya, tidak mengherankan bahwa defosforilasi protein yang sama

diperlukan untuk membuat mereka keluar. Pada prinsipnya, ini

dephosphorylations dan keluar dari mitosis bisa dipicu oleh inaktivasi M-Cdk,

aktivasi fosfatase, atau keduanya. Bukti menunjukkan bahwa inaktivasi M-Cdk

yang utama bertanggung jawab.

Inaktivasi M-Cdk terutama terjadi oleh ubiquitin-tergantung proteolisis

dari M-cyclins. Ubiquitylation dari cyclin biasanya dipicu oleh kompleks Cdc20-

APC yang sama yang mempromosikan kehancuran Securin pada transisi

metafase-to anaphase (lihat Gambar 17-20B). Dengan demikian, aktivasi

kompleks Cdc20-APC mengarah tidak hanya untuk anafase, tetapi juga untuk

Inaktivasi M-Cdk yang pada gilirannya menyebabkan semua peristiwa lain

sehingga sel keluar dari mitosis

Tahap G1 merupakan keadaan Ketidakaktifan Cdk Stabil

Dalam embrio hewan awal, inaktivasi M-Cdk di akhir mitosis karena

hampir seluruhnya aksi dari Cdc20-APC. Dengan demikian, penghancuran

Mcyclin di akhir mitosis segera mengarah ke inaktivasi semua aktivitas APC

dalam sel embrio. Ini adalah pengaturan yang berguna dalam siklus sel embrio

yang cepat, seperti inaktivasi APC segera setelah mitosis memungkinkan sel

untuk cepat mulai mengumpulkan M-cyclin baru untuk siklus berikutnya (Gambar

17-28A).
Gambar 17-28. Variasi dari fase G1 dengan menghambat Cdk stabil setelah
mitosis. (A) Pada awal siklus sel embrio, aktivitas Cdc20-APC meningkat
pada akhir metafase, memicu penghancuran M-cycli. Karena aktivitas M-
Cdk merangsang merangsang Cdc20-APC, hilangnya M-cyclin
menyebabkan inaktivasi APC setelah mitosis, yang memungkinkan M-
cyclin mulai digumpulkan lagi. (B) Dalam sel yang mengandung fase G1,
penurunan aktivitas M-Cdk pada mitosis akhir mengarah pada aktivasi
Hct1-APC (serta akumulasi protein CKI, tidak ditampilkan). Hal ini
memastikan penekanan terus aktivitas Cdk setelah mitosis, seperti yang
diperlukan untuk fase G1
Akumulasi cyclin yang cepat, segera setelah mitosis tidak berguna, dalam

siklus sel yang berisi fase G1. Dalam siklus ini, perkembangan ke tahap

berikutnya S tertunda di G1 untuk memungkinkan pertumbuhan sel dan siklus

yang akan diatur oleh sinyal ekstraseluler. Dengan demikian, kebanyakan sel

melakukan beberapa mekanisme untuk memastikan bahwa reaktivasi Cdk dicegah

setelah mitosis. Salah satu mekanisme memanfaatkan protein lain yang

mengaktifkan APC disebut Hct1, kerabat dekat dari Cdc20.

Meskipun kedua Hct1 dan Cdc20 mengikat dan mengaktifkan APC,

mereka berbeda dalam satu hal penting. Kompleks Cdc20-APC diaktifkan oleh

M-Cdk, kompleks Hct1-APC dihambat oleh M-Cdk, yang secara langsung

memphosphorylates Hct1. Sebagai hasil dari hubungan ini, peningkatan aktivitas

Hct1-APC di akhir mitosis setelah kompleks Cdc20-APC memulai penghancuran

M-cyclin. Kehancuran M-cyclin akan berlanjut setelah mitosis: meskipun

aktivitas Cdc20-APC telah menurun, aktivitas Hct1-APC tinggi (Gambar 17-

28B).

Mekanisme kedua yang menekan aktivitas Cdk di G1 tergantung pada

peningkatan produksi CKIs, protein penghambat Cdk dibahas sebelumnya.

Pengikatan sel ragi, di mana mekanisme ini paling baik dipahami, mengandung

protein yang disebut CKI Sic1, yang mengikat dan menonaktivkan M-Cdk di

akhir mitosis dan G1. Seperti Hct1, Sic1 dihambat oleh M-Cdk, yang

memphosphorylasi Sic1 selama mitosis. M-Cdk juga phosphorylates dan

menghambat protein regulasi gen yang diperlukan untuk sintesis Sic1, sehingga

produksi Sic1 menurun. Dengan demikian, Sic1 dan M-Cdk, seperti Hct1 dan M-

Cdk, saling menghambat satu sama lain. Akibatnya, penurunan aktivitas M-Cdk

yang terjadi pada akhir mitosis memicu akumulasi cepat protein Sic1, dan CKI

membantu memastikan bahwa aktivitas M-Cdk yang stabil terhambat setelah

mitosis.

Pada kebanyakan sel, inaktivasi M-Cdk dalam mitosis akhir juga hasil

dari penurunan transkripsi gen M-cyclin. Dalam tunas ragi, misalnya, M-Cdk

mempromosikan ekspresi gen, sehingga menghasilkan umpan balik yang positif.

Loop ini dimatikan sel keluar dari mitosis: inaktivasi M-Cdk oleh Hct1 dan Sic1

mengarah pada penurunan transkripsi gen M-cyclin dan dengan demikian

menurun sintesis M-cyclin.

Singkatnya aktivitas Hct1-APC, akumulasi CKI, dan penurunan produksi

cyclin bertindak bersama-sama untuk memastikan bahwa awal fase G1 adalah saat

ketika semua aktivitas Cdk ditekan. Seperti di banyak aspek lain dari kontrol

siklus sel, penggunaan bebarapa mekanisme pengaturan membuat sistem menekan

dengan kuat, sehingga masih beroperasi dengan efisiensi yang wajar bahkan jika

salah satu mekanisme gagal.

Bagaimana sel lepas dari keadaan stabil G1 untuk memulai fase S? Seperti

yang kita uraikan nanti, lepas biasanya terjadi melalui akumulasi G1-siklin. Pada

tunas ragi, misalnya, siklin ini tidak menjadi sasaran perusakan oleh Hct1-APC

dan tidak dihambat oleh Sic1. Akibatnya, akumulasi G1 cyclin menyebabkan

peningkatan unopposed pada aktivitas G1-Cdk (Gambar 17-29). Pada sel-sel

hewan, akumulasi G1-siklin dirangsang oleh sinyal ekstraseluler yang mendorong

proliferasi sel, seperti yang kita bahas nanti.

Gambar 17-29. Pengendalian perkembangan G1 oleh aktivitas Cdk dalam

kuncup ragi. Sel-sel keluar dari mitosis dan menonaktifkan M-Cdk,
menghasilkan peningkatan Hct1 dan aktivitas Sic1 hasil dari inaktivasi Cdk stabil
selama G1. Ketika kondisi yang tepat untuk memasuki siklus sel baru,
peningkatan G1-Cdk dan G1/S-Cdk menyebabkan penghambatan Sic1 dan Hct1
oleh fosforilasi, memungkinkan aktivitas S-Cdk meningkat.
Pada tunas ragi, aktivitas G1-Cdk memicu transkripsi gen G1/S-cyclin,

menyebabkan peningkatan sintesis G1/S-cyclins dan pembentukan kompleks G1 /

S-Cdk, yang juga tahan terhadap Hct1-APC dan Sic1 . Aktivitas G1/S-Cdk

meningkat memulai peristiwa persiapan sel untuk memasuki fase S. Ini

merangsang transkripsi gen cyclin-S, yang mengarah ke sintesis S-siklin dan

pembentukan kompleks S-Cdk. Kompleks ini dihambat oleh Sic1, tapi fosforilasi

G1/S-Cdk dan inaktivasi Sic, menyebabkan aktivai S-Cdk. G1/S-Cdk dan S-Cdk

juga memfosforilasi dan menonaktifkan Hct1-APC. Dengan demikian, loop

umpan balik yang sama yang memicu dengan cepat inaktivasi M-Cdk dalam

mitosis akhir sekarang bekerja secara terbalik pada akhir G1 untuk memastikan

aktivasi cepat dan lengkap dari aktivitas S-Cdk.

The Protein Rb Berfungsi sebagai rem dalam G1 Sel Mamalia

 Pengendalian perkembangan G1 dan inisiasi S-fase sering terganggu

dalam sel kanker, menyebabkan tidak terkendalinya siklus sel masuk dan

proliferasi sel.

Sel hewan menekan aktivitas Cdk di G1 oleh tiga mekanisme yang sama

disebutkan sebelumnya untuk ragi budding: aktivasi Hct1, akumulasi dari protein

CKI (p27 dalam sel mamalia), dan penghambatan transkripsi gen cyclin.

Seperti dalam ragi, aktivasi kompleks G1-Cdk membalikkan semua tiga

mekanisme penghambatan di akhir G1. Efek terbaik dipahami dari aktivitas G1-

Cdk dalam sel-sel hewan yang dimediasi oleh protein regulasi gen yang disebut

E2f. Ini terikat pada urutan spesifik DNA dalam promotor dari banyak gen yang

menyandi protein yang diperlukan untuk masuk S-fase, termasuk G1/S-cyclins

dan S-siklin. Fungsi utama E2f dikendalikan oleh interaksi dengan protein

retinoblastoma (Rb), penghambat perkembangan siklus sel. Selama G1, Rb

mengikat E2f dan menghambat transkripsi gen fase S. Ketika sel-sel dirangsang

untuk memisah oleh sinyal ekstraseluler, G1-Cdk aktif menumpuk dan

phosphorylates Rb, mengurangi afinitas untuk E2f. Rb kemudian berdisosiasi,

memungkinkan untuk E2f mengaktifkan ekspresi gen Sfase (Gambar 17-30).

Gambar 17-30. Mekanisme pengendalian inisiasi fase S pada sel hewan.

Aktivitas G1-Cdk (cyclin D-CDK4) memulai fosforilasi Rb. Inactivates
Rb ini, membebaskan E2f untuk mengaktifkan transkripsi gen fase S,
termasuk gen untuk G1/S-cyclin (cyclin E) dan S-cyclin (cyclin A).
Tampilan yang dihasilkan dari kegiatan G1/S-Cdk dan S-Cdk lebih
 meningkatkan fosforilasi Rb, membentuk sebuah loop umpan balik positif.
E2f bertindak kembali untuk merangsang transkripsi gen sendiri,
membentuk satu lingkaran umpan balik positif.
Sistem kontrol transkripsi ini, seperti begitu banyak sistem kontrol lain

yang mengatur siklus sel, termasuk loop umpan balik yang mempertajam transisi

G1 / S (lihat Gambar 17-30):

 E2f dibebaskan meningkatkan transkripsi gennya sendiri.

 E2f-tergantung transkripsi dari gen G1/S-cyclin dan S-cyclin mengarah ke

peningkatan aktivitas G1/S-Cdk dan S-Cdk, yang pada akhirnya

meningkatkan fosforilasi Rb dan mendorong rilis E2f lanjut.

 Peningkatan kegiatan G1/S-Cdk dan S-Cdk meningkatkan fosforilasi Hct1

dan p27, menyebabkan inaktivasi atau perusakan.

Seperti dalam sel ragi, hasil dari semua interaksi adalah aktivasi cepat dan

lengkap dari S-Cdk kompleks yang diperlukan untuk inisisasi fase S.

Protein Rb awalnya diidentifikasi melalui studi dari bentuk warisan kanker

mata pada anak-anak, yang dikenal sebagai retinoblastoma (dibahas dalam Bab

23). Hilangnya kedua salinan gen Rb menyebabkan proliferasi sel yang berlebihan

dalam retina yang belum matang, menunjukkan bahwa protein Rb sangat penting

untuk menahan laju pembelahan sel dalam retina berkembang. Kehilangan Rb

secara tidak langsung menyebabkan peningkatan proliferasi tipe sel lainnya,

sebagian karena Hct1 dan p27 memberikan bantuan dalam kontrol G1, dan

sebagian karena tipe sel lainnya mengandung protein Rb yang memberikan

dukungan cadangan dalam ketiadaan Rb. Hal ini juga mungkin karena protein

lain, yang tidak terkait dengan Rb, membantu mengatur aktivitas E2f

Perkembangan Siklus Sel Terkoordinasi Dengan Pertumbuhan sel

 Sel berproliferasi untuk mempertahankan ukuran konstan, panjang siklus

sel harus sesuai dengan waktu yang dibutuhkan sel untuk menggandakan ukuran.

Jika waktu siklus yang lebih pendek dari ini, sel-sel akan semakin kecil dengan

masing-masing bagian, jika itu lebih panjang, sel-sel akan lebih besar dengan

masing-masing bagiannya. Karena pertumbuhan sel tergantung pada nutrisi dan

sinyal pertumbuhan di lingkungan, lamanya siklus sel harus mampu

menyesuaikan diri dengan kondisi lingkungan yang bervariasi (Gambar 17-31).

Gambar 17-31. Kontrol ukuran sel melalui kontrol siklus sel dalam ragi.
Grafik ini menunjukkan hubungan antara tingkat pertumbuhan, ukuran sel,
dan waktu siklus sel. (A) Jika pembelahan sel berlanjut pada tingkatan yang
tidak berubah ketika sel-sel kekurangan gizi dan berhenti tumbuh, sel anak
yang dihasilkan pada masing-masing divisi akan menjadi semakin kecil.
(B) sel Ragi menanggapi beberapa bentuk kekurangan gizi dengan
memperlambat laju peningkatan melalui siklus sel sehingga sel-sel
memiliki lebih banyak waktu untuk tumbuh. Akibatnya, ukuran sel tetap
tidak berubah atau berkurang sedikit. (Sebuah unit waktu adalah waktu
siklus diamati ketika nutrisi yang berlebihan.
Ada bukti bahwa kuncup ragi mengkoordinasikan pertumbuhan dan

perkembangan siklus sel dengan memantau jumlah total dari cyclin G1 disebut

Cln3. Karena Cln3 disintesis secara paralel dengan pertumbuhan sel, konsentrasi

tetap konstan sedangkan jumlah total meningkat sebagai sel tumbuh. Jika jumlah

Cln3 secara artifisial meningkat, sel-sel membelah dengan ukuran yang lebih kecil

dari normal, sedangkan jika artifisial menurun, sel-sel membelah dengan ukuran

yang lebih besar dari biasanya. Percobaan ini konsisten dengan pendapat bahwa
sel mempersiapkan untuk membelah ketika jumlah total Cln3 mencapai ambang

batas.

Gambar 17-32. Sebuah model hipotetis tentang bagaimana sel tunas ragi
mungkin mengkoordinasikan pertumbuhan sel dengan kemajuan siklus
sel. Sel berisi sejumlah tetap protein (merah) yang terikat pada DNA dan
mengikat dan menghambat Cln3 molekul (hijau). Sebagai sel tumbuh, jumlah
total molekul Cln3meningkat secara paralel dengan total protein sel. Ketika
sel berukuran kecil (kiri), semua Cln3 tidak aktif karena kelebihan protein
pengikat Cln3. Bagaimanapun, sebagai sel tumbuh, mencapai ukuran ambang
di mana jumlah Cln3 molekul sama dengan jumlah protein pengikat Cln3
(tengah). Ketika sel melebihi ukuran ini, Cln3 bebas dapat mengikat Cdk,
yang dapat memicu siklus sel berikutnya (kanan).
Perkembangan Siklus Sel yang Diblokir oleh Kerusakan DNA dan p53:
Checkpoints Kerusakan DNA

Ketika kromosom mengalami kerusakan, karena dapat terjadi setelah

terpapar radiasi atau bahan kimia tertentu, penting bahwa mereka harus diperbaiki

sebelum sel mencoba untuk menduplikasi atau memisahkan diri. Sistem kontrol

siklus sel dengan mudah dapat mendeteksi kerusakan DNA dan menghentikan

proses siklus di checkpoint kerusakan DNA. Kebanyakan sel memiliki minimal

dua pos pemeriksaan satu di G1 akhir, yang mencegah masuk ke fase S, dan satu

di G2 akhir, yang mencegah masuk ke mitosis.

Pos pemeriksaan G2 tergantung pada mekanisme yang serupa dengan

yang dibahas sebelumnya bahwa penundaan masuk ke mitosis dalam menanggapi

replikasi DNA yang tidak lengkap. Ketika sel-sel di G2 terkena radiasi merusak,

misalnya, DNA yang rusak mengirimkan sinyal ke rangkaian protein kinase yang

memfosforilasi dan menonaktifkan fosfatase Cdc25. Blok ini defosforilasi dan

mengaktivasi M-Cdk, sehingga menghalangi masuk ke mitosis. Ketika kerusakan

DNA diperbaiki, sinyal hambat dimatikan, dan perkembangan siklus sel

dilanjutkan kembali.

Blok checkpoint G1 perkembangan menuju fase S dengan menghambat

aktivasi kompleks G1/S-Cdk dan S-Cdk. Pada sel mamalia, misalnya, kerusakan

DNA menyebabkan aktivasi dari gen protein regulator p53, yang merangsang

transkripsi beberapa gen. Salah satu gen mengkode CKIprotein disebut p21, yang

mengikat G1/S-Cdk dan S-Cdk dan menghambat aktivitas mereka, sehingga

membantu untuk memblokir masuk ke fase S.

Kerusakan DNA mengaktifkan p53 dengan mekanisme tidak langsung.

Dalam sel-sel rusak, p53 sangat tidak stabil dan hadir pada konsentrasi yang

sangat rendah. Hal ini karena berinteraksi dengan protein lain, MDM2, yang

bertindak sebagai ligase ubiquitin yang menargetkan p53 perusakan oleh

proteasomes. Kerusakan DNA mengaktivasi protein kinase yang memfosforilasi

p53 dan dengan demikian mengurangi ikatan dengan Mdm2. Hal ini mengurangi

degradasi p53, yang menghasilkan peningkatan yang ditandai dalam konsentrasi

p53 dalam sel. Selain itu, penurunan ikatan dengan Mdm2 meningkatkan

kemampuan p53 untuk merangsang transkripsi gen (Gambar 17-33).

Gambar 17-33. Bagaimana kerusakan DNA menahan siklus sel di G. Ketika
DNA rusak, protein kinase yang memfosforilasi p53 diaktifkan. Mdm2
biasanya mengikat p53 dan promotes ubiquitylation dan menghancuran
proteasomes. Fosforilasi blok p53 terikat ke Mdm2, sebagai akibatnya, p53
terakumulasi ke tingkat tinggi dan menstimulasi transkripsi gen yang
mengkode protein CKI, p21. P21 mengikat dan inactivates kompleks G1/S-
Cdk dan S-Cdk, menahan sel di G1. Dalam beberapa kasus, kerusakan DNA
juga menginduksi fosforilasi Mdm2 atau penurunan produksi Mdm2, yang
menyebabkan peningkatan p53 (tidak ditampilkan).
Seperti pos pemeriksaan lain, checkpoint kerusakan DNA tidak diperlukan

untuk pembelahan sel normal jika kondisi lingkungan ideal. Kondisi jarang yang

ideal, namun: rendahnya tingkat kerusakan DNA terjadi dalam kehidupan normal

sel apapun, dan kerusakan ini terakumulasi dalam sel anakan jika pos pemeriksaan

kerusakan tidak berfungsi. Dalam jangka panjang, akumulasi kerusakan genetik

dalam sel kurang pos pemeriksaan mengarah ke peningkatan frekuensi kanker

hasil mutasi. Memang, mutasi pada gen p53 terjadi pada setidaknya setengah dari

semua kanker pada manusia. Hilangnya fungsi p53 memungkinkan sel kanker

untuk mengakumulasi mutasi lebih mudah. Demikian pula, penyakit genetik

langka yang dikenal sebagai Ataksia telangiectasia disebabkan oleh cacat di salah

satu kinase protein yang memfosforilasi dan mengaktifkan p53 dalam menanggapi

kerusakan DNA yang diinduksi sinar-X, pasien dengan penyakit ini sangat sensitif
terhadap sinar-X karena hilangnya checkpoint kerusakan DNA, dan akibatnya

mereka menderita peningkatan kanker.

Bagaimana jika kerusakan DNA begitu parah sehingga perbaikan tidak

dimungkinkan lagi? Dalam hal ini, respon berbeda pada organisme yang berbeda.

Organisme uniseluler seperti ragi kuncup transiently menangkap siklus sel mereka

untuk memperbaiki kerusakan. Jika perbaikan tidak dapat diselesaikan, siklus

dilanjutkan meskipun kerusakan kecil. Untuk organisme bersel tunggal, hidup

dengan mutasi tampaknya lebih baik daripada tidak hidup sama sekali.

Pada organisme multiseluler, bagaimanapun kesehatan organisme lebih

diutamakan daripada kehidupan sel individu. Sel yang membelah dengan

kerusakan DNA yang parah mengancam kehidupan organisme, karena kerusakan

genetik sering dapat menyebabkan kanker dan cacat mematikan lainnya. Dengan

demikian, sel hewan dengan kerusakan DNA yang parah tidak mencoba

melanjutkan divisi, melainkan bunuh diri dengan menjalani kematian sel

terprogram, atau apoptosis, seperti yang kita bahas dalam bagian berikutnya.

Keputusan untuk mati dengan cara ini juga tergantung pada aktivasi p53, dan

inilah fungsi p53 yang tampaknya paling penting dalam melindungi kita terhadap

kanker.

Sebagai review, protein regulasi utama siklus sel dirangkum dalam Tabel

17-2, dengan struktur umum dari sistem kontrol sel-siklus yang ditunjukkan pada

Gambar 17-34.
Gambar 17-34. Gambaran dari sistem kontrol siklus sel. Inti dari sistem
kontrol siklus sel terdiri dari serangkaian kompleks cyclin-Cdk (kuning).
Kegiatan setiap kompleks juga dipengaruhi oleh berbagai mekanisme
penghambatan checkpoint yang memberikan informasi tentang lingkungan
ekstraselular, kerusakan sel, dan peristiwa siklus sel yang tidak lengkap (atas).
Mekanisme ini tidak hadir di semua jenis sel, misalnya banyak yang hilang
pada awal siklus sel embrio.
Table 17-2. Summary of the Major Cell-cycle Regulatory Proteins

GENERAL NAME FUNCTIONS AND COMMENTS

Protein kinase dan
protein fosfatase
yang memodifikasi
Cdk
Cdk-activating kinase phosphorylates sisi aktif Cdks
(CAK)
Wee1 kinase phosphorylates situs penghambatan dalam Cdks;
terutama yang terlibat dalam pengendali masuk ke
mitosis
Cdc25 phosphatase menghilangkan penghambat fosfat dari Cdks, tiga
anggota (Cdc25A, B, C) pada mamalia, Cdc25C adalah
aktivator Cdk1 pada awal mitosis
Protein Penghambat
Cdk (CKI)
Sic1 (budding yeast) menekan aktivitas Cdk di G1; fosforilasi oleh Cdk1
memicu kehancuran
p27 (mammals) menekan aktivitas G1/S-Cdk dan S-Cdk di G1,
membantu sel untuk menarik diri dari siklus sel
ketika mereka akhirnya terpisah; fosforilasi oleh
CDK2 memicu ubiquitylation oleh SCF
p21 (mammals) menekan aktivitas G1/S-Cdk dan S-Cdk menyusul
 kerusakan DNA di G1; transcripsi diaktifkan oleh p53
p16 (mammals) menekan aktivitas G1-Cdk di G1, seringkali tidak aktif
pada kanker

Ubiquitin ligases dan

aktivatornya
SCF mengkatalisis ubiquitylation dari protein regulasi
yang terlibat dalam kontrol G1, termasuk CKIs (Sic1
dalam ragi budding, p27 pada mamalia); fosforilasi
protein target biasanya diperlukan untuk kegiatan ini
APC mengkatalisis ubiquitylation protein regulasi yang
terutama terlibat ketika keluar dari mitosis, termasuk
Securin dan M-siklin; diatur oleh asosiasi dengan
subunit aktivasi
Cdc20 APC-pengaktif subunit di semua sel; pemicu
awal aktivasi APC di metafase-anafase untuk
transisi, dirangsang oleh aktivitas M-Cdk
Hct1 mempertahankan aktivitas APC setelah anafase dan
seluruh G1, dihambat oleh aktivitas Cdk
Protein pengatur
gen
E2F mendorong transkripsi gen yang dibutuhkan untuk
perkembangan G1/S, termasuk gen penyandi G1/S
siklin, S-siklin, dan protein yang dibutuhkan untuk
sintesis DNA, dirangsang ketika G1-Cdk
memfosforilasi Rb dalam menanggapi mitogens
ekstraseluler
p53 mendorong transkripsi gen yang menginduksi
penghentian siklus sel (terutama p21) atau apoptosis
dalam menanggapi kerusakan DNA atau stres sel lain,
diatur oleh asosiasi dengan Mdm2, yang mendorong
penurunan p53