24-­‐03-­‐15

GENÉTICA Y BIOTECNOLOGÍA MARINA

Profesores
Beatriz Camara (UTFSM)
José Gallardo (PUCV)

Doctorado en Biotecnología
I Semestre 2015

ESTUDIO DE CASO: EVOLUCION BIOMASA TOTAL Y CRISIS VIRUS ISA

CONSORCIO DE PATOGENOS EN SALMONICULTURA

Colapso virus ISA PERDIDAS POR

US$5.000.000.000

Fuente: Sernapesca, 2103

Fuente: Sernapesca, 2103

1  
 24-­‐03-­‐15  

MORTALIDAD ASOCIADA A PISCIRICKETTSIA SALMONIS USO DE ANTIPARASITARIOS PARA EL CONTROL DE CALIGUS

4500
4000
3500

Antiparasitarios (Kg)
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
P. salmonis es una bacteria intracelular PERDIDAS POR 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
altamente agresiva.
MUS$100 - 200 x AÑO Deltametrina Benzoato de Emamectina Cipermetrina Diflubenzurón

PERDIDAS POR
Fuente: Sernapesca, 2103 Fuente: Sernapesca, 2103
MUS$100 - 200 x AÑO

CONCEPTOS: PROBLEMA 1:
TOLERANCIA Y RESISTENCIA A PATOGENOS ¿CÓMO EVALUO LA RESISTENCIA A PATOGENOS?

Tolerancia   Mejorar   la   tolerancia   reduce   el  

  impacto   de   la   infección   en   el  
Es   la   habilidad   del   animal   para   individuo,   pero   Eene   poco  
soportar   los   efectos   perjudiciales   efecto   en   la   transmisión   de   la  
a s o c i a d o s   a   l a   i n f e c c i ó n   infección  a  nivel  poblacional.    
(enfermedad).  

Resistencia  
  Mejorar   la   resistencia   reduce   la  
Es  la  capacidad  de  los  animales   transmisión   de   la   infección   y   por   lo  
para  moderar  el  ciclo  de  vida  de  un   tanto  la  severidad  de  la  enfermedad  a  
patógeno.   nivel  poblacional.    

2  
 24-­‐03-­‐15  

MORTALIDAD COMO RASGO BINARIO? MORTALIDAD COMO TIEMPO EN MORIR?

100% 100%

Mortalidad  acumulada
80%
75%
Mortalidad

60%

40% 50%

20%
25%
0%
1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43 46 49 52 55 58 61 64 67 70 73 76 79 82
0%
Familias
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

Dias  post  inoculación

Mortalidad individual = Vivo (0) – Muerto (1).

Mortalidad individual = Días en morir.

CARGA DE PATOGENOS? CONSORCIO DE PATOGENOS = COINFECCION

Piojos de mar con …

MICROSPORIDIO AMEBA VIRUS ISA

160 Loma salmonae Neoparamoeba perurans
140
Infestación (N° parásitos)

120
100
80
60
40
Mustafa et al. 2000 Nowak et al. 2010
20 Bustos et al. 2011
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Peces Valdes-Donoso et al.
Infestación individual: Nº parásitos por pez
(2013)

3  
 24-­‐03-­‐15  

PROBLEMA 2: ¿DÓNDE EVALUO LA RESISTENCIA? PROBLEMA 1: ¿DÓNDE EVALUO LA RESISTENCIA?

LABORATORIO CENTRO DE CULTIVO Item h2 Laboratorio h2 Campo

Exposición a la Completa Parcial
infección
Diagnóstico Completo Sub-obtimo
incomplete exposure to infection, or suboptimal
Control de diagnosesCompleto Limitada
variables
ambientales

Fuente: Bishop SC, Woolliams JA (2010)

PATOGENOS SUSCEPTIBLES DE SER

EVIDENCIAS DE RESISTENCIA GENETICA A PATOGENOS CONTROLADOS POR SELECCION
VIRUS BACTERIAS PARASITOS
45
Bacterias (N°=143)
Mediana Mediana
40 Parásitos (N°=36) IPN: SRS: Sea lice
0,15 0,29
0,16 Virus (N°=68) Infectious pancreatic necrosis Piscirickettsia salmonis (Caligus rogercresseyi)
35
Vibriosis:
Frecuencia (%)

30 V. salmonicida,
ISA: V. ordalii, AGD:
25
Infectious salmon anemia V. anguillarum Amoebis gill disease
20
VHS: Furunculosis:
15 Haemorrhagic septicaemia Aeromonas salmonicida
10
5 IHNV:
Infectious hematopoietic BKD:
0 0,0_0,10 0,11_0,20 0,21_0,30 0,31_0,40 0,41_0,50 0,51_0,60 0,61_0,70 0,71_0,80 0,81_0,90 0,91_1,00
necrosis Bacterial kidney disease
Heredabilidad (h2)
SPDV:
Salmon pancreas disease virus

4  
 24-­‐03-­‐15  

Genetic
Patógeno h2 Laboratorio h2 Terreno Trait 1
Trait 2
correlation
Autor
Año

L. salmonis 0,26 0,06 Furunculosis
ISA
0.25
Gjerde et al.
2009

Furunculosis
ISA
0.07
Kjoglum et al.
2008

IPN virus 0,28 0,15
ISA
IPN
(-) 0.10
Kjoglum et al.
2008

Furunculosis 0,34 0,23
Furunculosis
IPN
(-) 0.11
Kjoglum et al.
2008

Lice Body weight 0.37
Kolstad et al.
2005

PD
Smolt weight
0.30
Norris et al.
2008

Furunculosis
Body weight
0.09
Gjerde et al.
2009

PD
Early madurity
(-) 0.002
Norris et al.
2008

Patógeno rg Fuente ISA
Body weight
(-) 0.03
Gjerde et al.
2009

L. salmonis 0,88 ± 0,17 Kolstad. 2005 PD
Fillet (%)
(-) 0.16
Norris et al.
2008

Furunculosis 0,95 Gjoen et al., 1997 PD
Color
(-) 0.35
Norris et al.
2008

IPN 0,78 - 0,83 Storset et al., 2007

CUANTIFICACION FENOTIPO DE RESISTENCIA:

NUMERO DE PARASITOS POR PEZ
160
Susceptibles
Resistentes
Infestación (N° parásitos)

140
120
100
80
60
40
20
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Peces

5  
 24-­‐03-­‐15  

DESAFIO CONTRA CALIGUS

ESTIMACION PARAMETROS GENETICOS DE RESISTENCIA:
NUMERO DE PARASITOS POR PEZ

Días  post  infestación   Heredabilidad  (h2  +  EE)  

Peso  cuerpo   Sin  Peso  

como  covariable   como  covariable  
4  días     0,340  ±  0,07  **   0,417  ±  0,08  **  

14  días   0,056  ±  0,06  ns   0,175  ±  0,08  ns  

Aquaculture research 2012. 43: 1904-1908.

RESISTENCIA GENETICA P. SALMONIS

Mortalidad como rasgo binario

100%
Susceptibles h2 (Pobl. 1) = 0,08 ns

80%
h2 (Pobl. 2) = 0,19 *

Mortalidad

60%
Resistentes
40%

20%

0%
1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43 46 49 52 55 58 61 64 67 70 73 76 79 82

Familias

6  
 24-­‐03-­‐15  

CUANTIFICACION FENOTIPO
RESISTENCIA P. SALMONIS CUANTIFICACION PARAMETROS GENETICOS
RESISTENCIA P. SALMONIS

Población h2 Fuente
2007 0,08 ± 0,04

Lhorente et al.,
2008 0,19 ± 0,23
2102

2010 0,11 – 0,41

Yañez et al., 2103

Tiempo a la muerte (d).

Fuente: Yañez et al., 2103

HIPOTESIS 1 / METODOS
¿C. rogercresseyi reduce la resistencia a P. salmonis?

Simple infección Coinfección Coinfección

P. Salmonis P. Salmonis
P. salmonis
+ 30 Caligus x pez + 60 Caligus x pez

7  
 24-­‐03-­‐15  

HIPOTESIS 2 / METODOS HIPOTESIS 3 / METODOS

¿Peces resistentes a P. Salmonis son resistentes a la coinfección?
¿La resistencia a la coinfección es un rasgo heredable?
P. salmonis
Modelo umbral (binario) Modelo lineal (continuo) Full sib
Full sib P. Salmonis + 30 caligus
Full sib
P. Salmonis + 60 caligus
S R
R=0 S=1

15 full-sib = 1.634 peces genealogizados

RESULTADOS RESULTADOS / DISCUSION

EFECTO DE CALIGUS SOBRE RESISTENCIA A P. SALMONIS RESISTENCIA A LA COINFECCION ES HEREDABLE

Heredabilidad   Heredabilidad  
Nº  
Trat.   Resistencia   Resistencia  
EFECTO CALIGUS  
(umbral)   (conQnuo)  
CALIGUS
T1   0   0,23  ±  0,07   0,32  ±  0,12  

T2   30   0,24  ±  0,07   0,37  ±  0,14  

T3   60   0,17  ±  0,08   0,37  ±  0,14  

P. salmonis
+

8  
 24-­‐03-­‐15  

RESULTADOS / DISCUSION RESULTADOS / DISCUSION

AUSENCIA DE CORRELACION CALIGUS CAMBIA EL RANKING DE SELECCION A P.
RESISTENCIA SIMPLE - COINFECCION SALMONIS
Tratamiento   T1  (0  Sea  lice)   T2  (30  sea  lice)   RANKING RESISTENCIA
T1  (0  sea  lice)   -­‐   -­‐   P. SALMONIS
T2  (30  sea  lice)   -­‐0,14  ±  0,33ns   -­‐  
T3  (60  sea  lice)   0,32  ±  0,34ns   0,99  ±  0,01**  

SIN CON
CALIGUS CALIGUS

MECANISMOS DE RESISTENCIA A PATOGENOS

• El animal puede tener atributos morfológicos

que hacen que dificultan la infección del
patógeno.

• El animal puede tener atributos de comportamiento

que le permite evitar la infección.

• El animal puede tener genes de respuesta no inmunes que

impiden la infección o la limitan en los órganos diana.

• El animal puede tener una respuesta inmune adecuada dirigida contra el

patógeno. Esto puede permitir que el animal combata con éxito la infección o
evite los efectos patogénicos de la enfermedad.

9  
 24-­‐03-­‐15  

CUANTIFICACION FENOTIPO DE RESISTENCIA: ESTIMACION PARAMETROS GENETICOS DE RESISTENCIA:

MARCADORES INMUNOLOGICOS MARCADORES INMUNOLOGICOS

Rasgo Heredabilidad h2 + EE
Peso cuerpo (Cov) Sin peso cuerpo (Cov)
Rasgo N MEAN (ng/ul)
Conteo parásitos 4 dpi 0,34 ± 0,07 0,42 ± 0,08
IL8 (tej. 1) 238 3,02 ± 1,13
Conteo parásitos 14 dpi 0,05 ± 0,06 0,17 ± 0,08
IL8 (tej. 2) 217 3,69 ± 1,39

TNF alpha (tej. 3) 229 0,36 ± 1,39 IL8 (tej. 1) 0,52 ± 0,17 0,52 ± 0,17

IL8 (tej. 2) 0,43 ± 0,16 0,43 ± 0,16

TNF alpha (tej. 4) 230 1,41 ± 1,33
TNF alpha (tej. 3) 0,51 ± 0,17 0,52 ± 0,17
NKEF (tej. 5) 235 0,01 ± 0,01
TNF alpha (tej. 4) 1,00 ± 0,00 1,00 ± 0,00
NKEF (tej. 6) 233 0,06 ± 0,030
NKEF (tej. 5) 0,60 ± 0,17 0,63 ± 0,17

NKEF (tej. 6) 0,96 ± 0,18 0,94 ± 0,18

ESTIMACION CORRELACION GENETICA

MARCADORES INMUNOLOGICOS

Peso Parásitos
Rasgo cuerpo sésiles

Peso cuerpo - 0,34 ± 0,03

Parásitos sésiles 0,63 ± 0,10 -
1 tejido B -0,40 ± 0,23 - 0,49 ± 0,22
1 tejido P 0,26 ± 0,26 0,24 ± 0,25
2 tejido B - 0,32 ± 0,24 - 0,39 ± 0,22
2 tejido P 0,00 ± 0,06 0,16 ± 0,16
3 tejido B 0,71 ± 0,15 0,79 ± 0,26
3 tejido P 0,06 ± 0,07 0,82 ± 0,11

10